CN106596483A - 一种赭曲霉毒素a的生物传感检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种赭曲霉毒素A的生物传感检测方法。本发明公开的赭曲霉毒素A的生物传感检测方法基于核酸适体与光纤之间的非特异性吸附能力，核酸适体的序列为序列表中序列1，核酸适体带有荧光基团，光纤为带有功能基团的石英光纤；赭曲霉毒素A的生物传感检测方法包括：利用缓冲液处理待测样品，得到待测液体或将待测样品作为待测液体；利用核酸适体与光纤间的非特异性吸附能力检测待测液体，确定待测样品中是否含有赭曲霉毒素A或确定待测样品中赭曲霉毒素A的含量。实验证明，利用本发明的方法检测待测样品中的OTA，准确率高，快速、高效、简便，人工成本低，检测成本低，具有良好的社会效益和经济效益。

Description

一种赭曲霉毒素A的生物传感检测方法
技术领域
本发明涉及环境监测领域中，一种赭曲霉毒素A的生物传感检测方法。
背景技术
环境监测作为环境保护工作中不可或缺的步骤,它可以对影响环境质量的各因素进行科学的测定。其主要的监测对象是水环境、大气、土壤、固体废料、以及生态环境。常见的环境监测方法如高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS)、气相色谱-质谱联用(GC-MS)、原子发射光谱仪(AES)、原子吸收光谱仪(AAS)、荧光光谱仪等。虽然这些方法具有较高的成熟度和精密度，但是这些监测仪器因为尺寸的局限，不能够进行原位实时检测，且价格昂贵，操作复杂，需要前过程处理。因此，环境监测领域急需研发快速简便、特异性强、可实时原位检测的监测方法。
核酸适体是通过SELEX技术从核酸分子文库里利用寡核苷酸严格的识别和亲合力而人工合成的，与配体高效、专一结合的DNA或RNA寡核苷酸。当靶物质存在时，核酸适体能与靶物质相互作用，发生适应性折叠。核酸适体能通过氢键、疏水堆积作用、范德华力，与插入或包被的靶分子形成稳定的空间结构，如发夹、茎环、口袋、假结、凸环、G-四聚体等特殊三维空间结构。
倏逝波光纤生物传感器是近几年发展很快的一种光学传感器。其原理主要是：一束光线以适当的角度进入光纤时，会以全反射方式在光纤中传播，产生一种横贯光纤的波，通过光纤与其它介质的交接处传出光纤，这种波随传播快速衰减，称为倏逝波。倏逝波光纤生物传感器利用这种性质，在倏逝波波导表面加上生物敏感元件(本方法中为核酸适体)，当倏逝波穿过生物敏感元件时，或产生光信号，或导致倏逝波与光纤内传播光线的强度、相位或频率改变。测量这些变化，即可获得生物敏感元件或者光纤变化的信息，即核酸适体与分析物相互作用的信息。
在核酸适体生物传感器的构建中，核酸适体的固定化是关键步骤，此步骤将直接影响传感器的性能。为了获得理想的传感界面，往往需要借助物理或化学方法将核酸探针有效地固定在一定的界面上。目前核酸适体的固定方法大致有吸附法、共价键合法、亲和素-生物素固定法、自组装法四类。吸附法是通过氢键、范德华力、离子键、配位键、疏水作用等将核酸适体固定在载体上，这种方法一般不需要化学试剂，对生物组分的活性影响较小。
赭曲霉毒素A(OTA)是曲霉属和青霉属等产毒菌株产生的一种次生有毒代谢产物，常见于于各种谷类食品、饲料及其他农副产品中。其具有肾脏毒性、肝脏毒性、免疫毒性、致畸变性等多种毒性，且OTA被国际癌症研究机构(IARC)认为对人类有潜在的致癌性，对动物和人体健康有很大的潜在危害。目前急需一种快速高效、可实时原位检测赭曲霉毒素A的方法。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是如何检测赭曲霉毒素A。
为解决上述技术问题，本发明首先提供了基于核酸适体与倏逝波光纤生物传感器光纤探头之间的非特异性吸附能力的赭曲霉毒素A(OTA)的生物传感检测方法。
本发明所提供的OTA的生物传感检测方法，包括利用核酸适体与光纤对OTA标准样品进行检测，确定所述待测样品中是否含有赭曲霉毒素A或所述待测样品中赭曲霉毒素A的含量。
上述OTA的生物传感检测方法中，所述核酸适体的序列可为下述A1)、A2)或A3)：
A1)序列表中序列1的核苷酸序列；
A2)与A1)限定的DNA序列具有75％或75％以上同一性的由A1)衍生的DNA序列；
A3)在严格条件下与A1)限定的DNA序列杂交的由A1)衍生的DNA序列；
和/或，所述光纤为带有功能基团的石英光纤。所述功能基团可为羟基、氨基等。
上述OTA的生物传感检测方法中，所述核酸适体带有荧光基团。所述荧光基团为Cy5.5。
上述OTA的生物传感检测方法中，所述方法可包括：利用缓冲液处理所述待测样品，得到待测液体或将所述待测样品作为待测液体；利用所述核酸适体与所述光纤检测所述待测液体，确定所述待测样品中是否含有赭曲霉毒素A或所述待测样品中赭曲霉毒素A的含量。
所述缓冲液由溶质和溶剂组成，所述溶剂为10mM Tris缓冲液，所述溶质及其浓度为200mM NaCl、5mM KCl和10mM CaCl2，pH值为6。
所述10mM Tris缓冲液由水和三羟甲基氨基甲烷(Tris)组成，三羟甲基氨基甲烷的浓度为10mM。所述缓冲液的pH值可使用HCl进行调节。
所述待测样品可为食品，也可为农产品、农副产品或由农产品或农副产品加工得到的产品，如谷类食品或饲料。所述待测样品具体可为水或饮料。进一步，所述待测样品可为农产品发酵得到的食品，如红酒或酒。
上述OTA的生物传感检测方法中，所述利用所述核酸适体与所述光纤检测所述待测液体包括：将所述待测液体与核酸适体溶液反应，得到反应液；利用所述光纤测定所述反应液中未与OTA反应的所述核酸适体的含量，确定所述待测样品中是否含有赭曲霉毒素A或所述待测样品中赭曲霉毒素A的含量；
所述核酸适体溶液为向所述缓冲液中加入所述核酸适体得到的溶液。
所述核酸适体溶液中所述核酸适体的浓度可根据具体需要进行调整。在本发明的一个实施例中，所述核酸适体溶液中所述核酸适体的浓度为50nM。所述核酸适体溶液中所述核酸适体的浓度不仅限于本发明实施例中的浓度。
所述反应的温度可为20-25℃。所述反应的时间可为30分钟。
所述反应液中未与OTA反应的所述核酸适体的含量可为吸附在所述光纤上所述核酸适体的量。更进一步，所述反应液中未与OTA反应的所述核酸适体的含量可通过吸附在所述光纤上所述核酸适体的荧光信号来体现。
在本发明中，所述确定所述待测样品中是否含有赭曲霉毒素A或所述待测样品中赭曲霉毒素A的含量可根据荧光信号或其变化进行确定。
上述OTA的生物传感检测方法中，所述方法可还包括OTA标准曲线的制备，所述OTA标准曲线的制备包括：将含有不同浓度OTA标准品的OTA标准溶液分别与所述核酸适体溶液进行反应，得到标准反应液；利用所述光纤测定所述标准反应液中未与OTA反应的所述核酸适体的含量，根据所述OTA标准溶液中OTA浓度与所述标准反应液中未与OTA反应的所述核酸适体的含量的关系建立OTA标准曲线。
所述标准反应液中未与OTA反应的所述核酸适体的含量可为吸附在所述光纤上所述核酸适体的量。更进一步，所述标准反应液中未与OTA反应的所述核酸适体的含量可通过吸附在所述光纤上所述核酸适体的荧光信号来体现。
上述OTA的生物传感检测方法中，所述利用核酸适体与光纤对待测样品进行检测为利用所述核酸适体与倏逝波全光纤生物传感器对待测样品进行检测，所述倏逝波全光纤生物传感器的探头为所述光纤或由所述光纤制备。
所述倏逝波全光纤生物传感器包括光路系统、进样系统以及信号收集与处理系统。所述光路系统包括激光发射装置。所述进样系统包括所述探头。
所述倏逝波全光纤生物传感器的激光发射装置发射的激光通过一系列转换，能够激发所述荧光物质，从而获得荧光信号。
在本发明的一个实施例中，所述倏逝波全光纤生物传感器的激光发射装置发射的激光的波长为635nm，635nm的激光能够激发Cy5.5基团发出荧光。
所述光纤可为根据不同需求带有不同修饰功能基团(如羟基或氨基)的光纤。
所述光纤的锥角角度可为220°。
为解决上述技术问题，本发明还提供了检测OTA的物质。
本发明所提供的检测OTA的物质可仅由所述核酸适体和P1组成；所述P1为所述光纤或所述倏逝波全光纤生物传感器。
所述倏逝波全光纤生物传感器可利用所述探头或所述光纤进行检测。
所述检测OTA的物质还可由所述核酸适体、所述P1与所述缓冲液组成，还可由所述核酸适体、所述P1与OTA组成，还可由所述核酸适体、所述P1、所述缓冲液与OTA组成。
为解决上述技术问题，本发明还提供了所述检测OTA的物质在检测OTA中的应用或在制备检测OTA产品中的应用。
本发明中，OTA的结构式为式1：
本发明中，所述倏逝波全光纤生物传感器具体可为北京金达清创环境科技有限公司的型号为JDEN-100的产品。
实验证明，本发明是在环境监测领域内，利用生物传感器技术、光学技术、生物材料技术提出了一种污染物质新型快速生物传感检测方法，该方法是基于核酸适体与倏逝波光纤生物传感器的光纤探头之间的非特异性吸附能力检测赭曲霉毒素A的。利用本发明的OTA生物传感检测方法检测待测样品中的OTA的准确率高：分别向红酒、白酒和饮用水中添加OTA标准品进行检测时，在OTA浓度为0.15mg/L时的回收量(即检测量)分别为0.16mg/L、0.14mg/L和0.14mg/L，回收率分别为107％、93％和93％；在OTA浓度为2.5mg/L时的回收量(即检测量)分别为2.55mg/L、2.38mg/L和2.3mg/L，回收率分别为102％、95％和92％。本发明的OTA生物传感检测方法还具有良好的特异性，能快速、高效、简便的进行检测，这种方法有利于进行原位实时监测，因此省略了环境污染物质监测中运输、保存、前处理的过程，缩短了检测时间，降低了人工成本。并且采用的材料价格低廉、消耗量少，降低了检测成本，具有良好的社会效益和经济效益。实验结果证明本发明的OTA检测方法具有良好的可实施性。
附图说明
图1为核酸适体非特异性吸附法检测OTA原理图。
图2为在10mM PBS缓冲液和10mM Tris缓冲液中核酸适体与OTA结合性能图。
图3为不同浓度OTA溶液与核酸适体反应后的实时监测结果。
图4为核酸适体非特异性吸附法检测OTA的标准曲线。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
本发明的OTA的生物传感检测方法包括：利用OTA核酸适体与光纤所制探头检测OTA。所用核酸适体中DNA片段的5’端由荧光基团Cy5.5标记，核酸适体的序列为序列表中序列1，即5’-Cy5.5-AAAAAAAAAAAATGTCCGATGCTC-3’。OTA检测反应原理如图1所示。
下面利用以氨基石英光纤(修饰了氨基功能基团的石英光纤)作为探头的倏逝波全光纤生物传感器(北京金达清创环境科技有限公司，JDEN-100)与OTA核酸适体具体阐述OTA的生物传感检测方法。所用倏逝波全光纤生物传感器包括光路系统、进样系统、信号收集与处理系统；光路系统包括激光发射装置，进样系统包括探头；激光发射装置发射的激光的波长为635nm，氨基石英光纤探头的组合型锥角角度为220°，635nm的激光能够激发Cy5.5荧光基团。
实施例1、使用核酸适体检测赭曲霉毒素A(OTA)
一、检测OTA的标准曲线的建立
(1)OTA核酸适体吸附于氨基石英光纤的吸附条件的优化
首先在10mM PBS缓冲液和10mM Tris缓冲液中选择最适于核酸适体吸附于氨基石英光纤的缓冲液。其中，10mM PBS缓冲液由溶质和溶剂组成，溶剂为水，溶质及其浓度分别为135mM NaCl、2.7mM KCl、1.5mM Na2HPO4和8mM KH2PO4，pH为7.4；10mM Tris缓冲液由水和三羟甲基氨基甲烷(Tris)组成，Tris的浓度为10mM，pH为7.4。
在选择最佳吸附缓冲液时，首先将核酸适体溶于上述各缓冲液(作为溶剂)中，得到核酸适体溶液，核酸适体溶液中核酸适体的浓度为50nM，分别利用上述各缓冲液作为溶剂、OTA标准品作为溶质制备OTA标准溶液，每种缓冲液作为溶剂时均有两种OTA浓度的溶液，OTA浓度分别为0.1mg/L和0mg/L；将溶剂相同的核酸适体溶液与OTA标准溶液等体积结合后，通入倏逝波全光纤生物传感器的样品池中持续100s，探头末端通过单多模光纤耦合器与激发光传输设备及荧光收集设备连接。在倏逝波全光纤生物传感器中，激光发射装置发出的激发光，通过单多模光纤耦合器传递到光纤探头上，会激发吸附于光纤探头上核酸适体的荧光物质，随后部分荧光会耦合回光纤探头。耦合回光纤探头上的荧光经过光电二极管转化为可测电信号，再通过信号收集与处理程序，最终得到荧光响应信号。
通过比较10mM PBS缓冲液和10mM Tris缓冲液发现(图2)，在10mM Tris缓冲液配制的50nM的OTA核酸适体，与加入0mg/L OTA的核酸适体溶液相比，加入0.1mg/L OTA的核酸适体溶液的荧光信号下降百分比为46％；10mM PBS缓冲液中，与加入0mg/LOTA的核酸适体溶液相比，加入0.1mg/LOTA的核酸适体溶液的荧光信号下降百分比为12.5％，且使用10mMPBS缓冲溶液配制的核酸适体的荧光信号约为使用10mM Tris缓冲溶液配制的核酸适体的荧光信号的50％。结果表明，核酸适体在10mM Tris缓冲液中吸附于氨基石英光纤的能力高于在10mM PBS缓冲液中吸附于氨基石英光纤的能力，且与OTA结合性能更好。
然后通过调整缓冲液中溶质(NaCl、KCl、CaCl2和MgCl2)的浓度及pH值，选择最适于核酸适体吸附于氨基石英光纤的缓冲液，各缓冲液均由溶质和溶剂组成，溶剂均为10mMTris缓冲液；10mM Tris缓冲液由水和三羟甲基氨基甲烷(Tris)组成，Tris的浓度为10mM。在选择最佳吸附条件时，NaCl的浓度在如下浓度中进行优化：100mM、200mM、250mM、500mM、1M和2M；KCl的浓度在如下浓度中进行优化：0mM和5mM；CaCl2的浓度在如下浓度中进行优化0mM和10mM；MgCl2的浓度在如下浓度中进行优化：0mM和10mM，利用HCl或NaOH调整缓冲液的pH值，各缓冲液pH值在如下数值中进行优化：1、3、5、7和9。
在选择最佳吸附条件时，首先将OTA核酸适体溶于上述各缓冲液中，得到核酸适体溶液，各核酸适体溶液中核酸适体的浓度均为50nM；然后将溶液通入倏逝波全光纤生物传感器的样品池中持续100s，探头末端通过单多模光纤耦合器与激发光传输设备及荧光收集设备连接。在倏逝波全光纤生物传感器中，激光发射装置发出的激发光，通过单多模光纤耦合器传递到光纤探头上，会激发吸附于光纤探头上核酸适体的荧光物质，随后部分荧光会耦合回光纤探头。耦合回光纤探头上的荧光经过光电二极管转化为可测电信号，再通过信号收集与处理程序，最终得到荧光响应信号。
通过对核酸适体溶液中pH值和离子类型及离子强度进行测试，确定OTA核酸适体在带有氨基的光纤上的最优吸附缓冲液：在氨基石英光纤上，核酸适体在弱酸性、阳离子浓度较强的条件下，吸附性能较好，最终确定的最优吸附缓冲液由溶质和溶剂组成，溶剂为10mM Tris缓冲液，溶质及其浓度为200mM NaCl、5mM KCl和10mM CaCl2，pH值为6。在最优吸附缓冲液中，与0mg/L的核酸适体溶液相比，核酸适体溶液核酸适体的浓度为0.1mg/L时荧光信号下降百分比最大，为46％。
制备最优核酸适体溶液：向最优吸附缓冲液中加入核酸适体，得到最优核酸适体溶液，最优核酸适体溶液中核酸适体的浓度为50nM。
制备不同OTA浓度的标准溶液：向最优吸附缓冲液中加入OTA标准品(OTA的结构式如式1所示，Pribolab，303-47-9)，分别得到OTA浓度为0mg/L、0.005mg/L、0.01mg/L、0.05mg/L、0.1mg/L、0.5mg/L、1mg/L和5mg/L的OTA标准溶液。
(2)标准曲线的建立
空白值的测定：将步骤(1)的最优吸附缓冲液通入倏逝波全光纤生物传感器的样品池，持续100s，得到背景基线值。随后抽出缓冲液，通入步骤(1)的最优核酸适体溶液与最优吸附缓冲液的等体积混合液持续300s，得到空白对比值(即OTA浓度为0的结果),随后抽出混合液，使用0.5％SDS(pH＝1.9)溶液(该溶液由溶质和溶剂组成，溶剂为水，溶质为SDS和HCl，其中SDS的质量百分比为0.5％，HCl的量满足使溶液的pH＝1.9)进行清洗400s。
标准样品的测定：将步骤(1)的最优吸附缓冲液通入倏逝波全光纤生物传感器的样品池，持续100s，得到背景基线值。随后抽出缓冲液，通入步骤(1)的最优核酸适体溶液分别与浓度为0mg/L、0.005mg/L、0.01mg/L、0.05mg/L、0.1mg/L、0.5mg/L、1mg/L和5mg/L的OTA标准溶液等体积混合液(室温20-25℃，反应30min)，然后将各反应后的溶液通入倏逝波全光纤生物传感器的样品池，检测300s，检测不同OTA浓度下的荧光信号，随后抽出混合液，使用0.5％SDS(pH＝1.9)溶液进行清洗400s(图3)。
将检测时间为400s时的空白对比值和不同OTA浓度下的荧光信号去除背景基线值后进行归一化处理，制作OTA的标准曲线(图4)。
二、实际样品的检测
利用本发明的OTA的生物传感检测方法对实际样品进行检测。实验重复三次，每次重复实验的操作步骤如下：
利用步骤一的最优吸附缓冲液分别将红酒(罗莎田园红葡萄酒，上海市罗莎酒类)和白酒(红星二锅头，北京红星股份有限公司)稀释50倍，得到稀释红酒和稀释白酒；向稀释白酒中添加OTA标准品，得到两种OTA浓度分别为0.15mg/L和2.5mg/L的OTA白酒溶液；向稀释红酒中添加OTA标准品，得到两种OTA浓度分别为0.15mg/L和2.5mg/L的OTA红酒溶液；向瓶装饮用水(农夫山泉，农夫山泉股份有限公司)中添加OTA标准品，得到两种OTA浓度分别为0.15mg/L和2.5mg/L的OTA水溶液，将这六种溶液作为待测液。
在每个样品通入前，将步骤一的最优吸附缓冲液通入倏逝波全光纤生物传感器的样品池，持续100s，得到背景基线值。分别将上述不同待测液与步骤一的最优核酸适体溶液等体积混合，室温反应30min，然后将各反应后的溶液通入倏逝波全光纤生物传感器的样品池，持续300s(将持续时间记为检测时间)，检测不同待测液的荧光信号。
将检测时间为400s时的不同待测液的荧光信号去除背景基线值后进行归一化处理，根据步骤一的OTA的标准曲线得到OTA浓度为0.15mg/L的OTA红酒溶液、OTA白酒溶液和OTA水溶液的回收量(即检测量)为0.16mg/L、0.14mg/L和0.14mg/L，回收率分别为107％、93％和93％；OTA浓度为2.5mg/L的OTA红酒溶液、OTA白酒溶液和OTA水溶液的回收量(即检测量)为2.55mg/L、2.38mg/L和2.3mg/L，回收率分别为102％、95％和92％(表1)。结果表明，使用本发明的OTA的生物传感检测方法检测实际样品中的OTA具有高回收率，即本发明的OTA的生物传感检测方法准确率高。
表1、利用非特异性吸附检测红酒、白酒、瓶装饮用水OTA加标实验结果
表1中括号内的数值表示的三次平行实验结果的变异系数。
<110> 中国人民大学
<120> 一种赭曲霉毒素A的生物传感检测方法
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223>
<400> 1
aaaaaaaaaa aatgtccgat gctc 24

Claims (10)

1.赭曲霉毒素A的生物传感检测方法，包括利用核酸适体与光纤对待测样品进行检测，确定所述待测样品中是否含有赭曲霉毒素A或所述待测样品中赭曲霉毒素A的含量。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述核酸适体的序列为下述A1)、A2)或A3)：
A1)序列表中序列1的核苷酸序列；
A2)与A1)限定的DNA序列具有75％或75％以上同一性的由A1)衍生的DNA序列；
A3)在严格条件下与A1)限定的DNA序列杂交的由A1)衍生的DNA序列。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述光纤为带有功能基团的石英光纤；
和/或，所述核酸适体带有荧光基团。
4.根据权利要求1至3中任一所述的方法，其特征在于：所述方法包括：利用缓冲液处理所述待测样品，得到待测液体或将所述待测样品作为待测液体；利用所述核酸适体与所述光纤检测所述待测液体，确定所述待测样品中是否含有赭曲霉毒素A或所述待测样品中赭曲霉毒素A的含量。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述利用所述核酸适体与所述光纤检测所述待测液体包括：将所述待测液体与所述核酸适体溶液反应，得到反应液；利用所述光纤测定所述反应液中未与赭曲霉毒素A反应的所述核酸适体的含量确定所述待测样品中是否含有赭曲霉毒素A或所述待测样品中赭曲霉毒素A的含量；
所述核酸适体溶液为向所述缓冲液中加入所述核酸适体得到的溶液。
6.根据权利要求1-5中任一所述方法，其特征在于：所述方法还包括赭曲霉毒素A标准曲线的制备，所述赭曲霉毒素A标准曲线的制备包括：将含有不同浓度赭曲霉毒素A的赭曲霉毒素A标准溶液分别与所述核酸适体溶液进行反应，得到标准反应液；利用所述光纤测定所述标准反应液中未与赭曲霉毒素A反应的所述核酸适体的含量，根据所述赭曲霉毒素A标准溶液中赭曲霉毒素A浓度与所述标准反应液中未与赭曲霉毒素A反应的所述核酸适体的含量的关系建立赭曲霉毒素A标准曲线。
7.根据权利要求1-6中任一所述方法，其特征在于：所述利用核酸适体与光纤对待测样品进行检测为利用所述核酸适体与倏逝波全光纤生物传感器对待测样品进行检测，所述倏逝波全光纤生物传感器的探头为所述光纤。
8.检测赭曲霉毒素A的物质，包括权利要求1-3中任一所述核酸适体和P1；所述P1为权利要求1或2中所述光纤或含有所述光纤的倏逝波全光纤生物传感器。
9.根据权利要求8所述的物质，其特征在于：所述物质还包括权利要求4中所述缓冲液和/或赭曲霉毒素A。
10.权利要求8或9所述物质在检测赭曲霉毒素A中的应用或在制备检测赭曲霉毒素A产品中的应用。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108956568A (zh) * 2018-07-18 2018-12-07 江南大学 一种用于检测赭曲霉毒素a的生物传感器的制备方法
CN110261361A (zh) * 2019-08-06 2019-09-20 青岛农业大学 一种检测赭曲霉毒素a的生物传感器、其制备方法与使用该传感器检测赭曲霉毒素a的方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
LIU LAN-HUA等: "Portable optical aptasensor for rapid detection of mycotoxin with a reversible ligand-grafted biosensing surface", 《BIOSENSORS AND BIOELECTRONICS》 *
RUOYU WANG等: "A reusable aptamer-based evanescent wave all-fiber biosensor for highly sensitive detection of Ochratoxin A", 《BIOSENSORS AND BIOELECTRONICS》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108956568A (zh) * 2018-07-18 2018-12-07 江南大学 一种用于检测赭曲霉毒素a的生物传感器的制备方法
CN110261361A (zh) * 2019-08-06 2019-09-20 青岛农业大学 一种检测赭曲霉毒素a的生物传感器、其制备方法与使用该传感器检测赭曲霉毒素a的方法

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