CN108929331A - 莫能菌素钠的制备方法、莫能菌素钠及其产品 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种莫能菌素钠的制备方法、莫能菌素钠及其产品，涉及制药工程技术领域。该方法将生产莫能菌素的菌体的发酵液依次进行预处理、有机溶剂浸提、浓缩、表面活性剂除杂和干燥，得到莫能菌素钠；预处理包括如下步骤：将NaOH溶液加入生产莫能霉素的菌体的发酵液中，得到原料液，分离得到含莫能菌素钠的固体原料。该莫能菌素钠的制备方法缓解了现有技术制备莫能菌素钠纯度低，工艺繁琐，工艺成本高的技术问题。此外，本发明还提供了莫能菌素钠的制备方法制备得到的莫能菌素钠和包含上述莫能菌素钠的药品或饲料添加剂。

Description

莫能菌素钠的制备方法、莫能菌素钠及其产品
技术领域
本发明涉及制药工程技术领域，具体而言，涉及一种莫能菌素钠的制备方法、莫能菌素钠及其产品。
背景技术
莫能菌素是一种单价聚醚类离子载体型抗球虫药，具有广谱抗球虫作用，对鸡的毒害、柔嫩、巨型、变位、堆型、布氏等艾美耳球虫，火鸡的腺艾美耳球虫和火鸡艾美耳球虫，鹌鹑的分散和莱泰艾美耳球虫以及羔羊的雅氏和阿撒地艾美耳球虫均有效。其药品一般制成莫能菌素钠制剂。莫能菌素的杀球虫作用机理是通过干扰球虫细胞内K+、Na+的正常渗透，使大量的Na+进入细胞内，为了平衡渗透压，大量的水分进入球虫细胞，引起肿胀而死亡。莫能菌素的作用峰期是在球虫生活周期的最初2日，对子孢子及第一代裂殖体都有抑制作用，在球虫感染第2天用药效果最好。此外，莫能菌素对金黄色葡萄球菌、链球菌、产气荚膜梭菌等革兰氏阳性菌亦有较强的抗菌作用，并能促进动物生长发育，增加体重和提高饲料利用率。因此，莫能菌素钠在动物医药领域中应用广泛。
目前，市场上莫能菌素钠产品的主要应用剂型为预混剂，主要是通过生物发酵法，利用豆油、葡萄糖、豆饼粉及硫酸铵、磷酸二氢钾等粮食化工类原材料，通过生产菌的次级代谢作用合成，代谢合成后，由于莫能菌素不溶于水，莫能菌素一般是存在于生产菌的菌丝中，与菌丝体、残存培养基等混合在一起，产品中含有大量杂质，造成产品安全性不好，莫能菌素钠纯度低。此外，现有技术还有将莫能菌素发酵液结晶得到莫能菌素晶体，然后加入碱使其盐化得到莫能菌素钠盐。但是，该工艺制成的莫能菌素钠杂质含量较高，纯度低，需要进行较多步骤才能较好地去除杂质，工艺繁琐，造成工艺成本较高。
因此，为适应市场对高纯度莫能菌素钠产品的需求在保证莫能菌素钠产品较高纯度的同时，简化工艺，降低成本具有重要意义。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的目的之一在于提供一种莫能菌素钠的制备方法，该方法将生产莫能菌素的菌体的发酵液依次进行预处理、有机溶剂浸提、浓缩、表面活性剂除杂和干燥，得到莫能菌素钠；预处理包括如下步骤：将NaOH溶液加入生产莫能霉素的菌体的发酵液中，得到原料液，分离得到含莫能菌素钠的固体原料。该方法缓解了现有技术制备的莫能菌素钠产品纯度低，工艺繁琐，工艺成本高的技术问题。
本发明目的之二在于提供上述莫能菌素钠的制备方法制备得到的莫能菌素钠，该莫能菌素钠纯度高。
本发明目的之三在于提供一种包含上述莫能菌素钠的制备方法制备得到的莫能菌素钠的药品或饲料添加剂。
为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
一种莫能菌素钠的制备方法，方法包括如下步骤：将生产莫能菌素的菌体的发酵液依次进行预处理、有机溶剂浸提、浓缩、表面活性剂除杂和干燥，得到莫能菌素钠；
预处理包括如下步骤：将NaOH溶液加入生产莫能霉素的菌体的发酵液中，得到原料液，分离得到含莫能菌素钠的固体原料。
优选地，在本发明方案基础上，生产莫能菌素的菌体的发酵液的莫能菌素效价为35000-42000u/mL；生产莫能菌素的菌体为肉桂地链霉菌。
优选地，在本发明方案基础上，预处理包括如下步骤：
将NaOH溶液加入生产莫能霉素的菌体的发酵液中，调节生产莫能霉素的菌体的发酵液的pH至10-11，得到原料液，从得到的原料液中分离固体得到含莫能菌素钠的固体原料；
优选地，调节pH至10.5，得到原料液；
优选地，方法还包括分离后进行洗涤得到含莫能菌素钠的固体原料的步骤；
优选地，分离方法为过滤，优选为板框过滤；
优选地，NaOH溶液的质量分数为20-30％。
优选地，在本发明方案基础上，有机溶剂浸提包括如下步骤：
将有机溶剂与预处理得到的含莫能菌素钠的固体原料混合，混合时间为10-100min，分离得到浸提液和经浸提的含莫能菌素钠的固体原料；
优选地，混合时间为30-60min；
优选地，有机溶剂的加入量为4-8m3/吨预处理得到的莫能菌素钠固体原料，优选为4-6m3/吨预处理得到的莫能菌素钠固体原料，进一步优选为4.8m3/吨预处理得到的莫能菌素钠固体原料；
优选地，对莫能菌素钠含量＞300u/mg的经浸提的莫能菌素钠固体原料重复浸提，待莫能菌素钠含量≤300u/mg时停止浸提；将每次浸提分离的液体混合得到浸提液用于浓缩；
优选地，最末次重复浸提分离得到的浸提液作为有机溶剂再利用；
优选地，有机溶剂包括羧酸类、酚类、醇类、酮类或醚类中的一种或几种；
优选地，有机溶剂为醇类和/或酮类，优选为醇类，进一步优选为甲醇。
优选地，在本发明方案基础上，浓缩包括如下步骤：
将有机溶剂浸提得到的浸提液在温度为40-70℃，真空度≥0.03MPa下浓缩至有结晶的莫能菌素钠析出，停止浓缩，得到浓缩液；
优选地，浓缩步骤的温度为55-65℃，真空度≥0.03MPa。
优选地，在本发明方案基础上，表面活性剂除杂包括如下步骤：向浓缩得到的浓缩液中加入0.1-0.3％的表面活性剂，然后待浓缩液冷却至0-25℃，然后在0-25℃条件下静置5-12h，分离得到莫能菌素钠湿精品；
优选地，分离方法为离心；
优选地，表面活性剂包括离子型表面活性剂和/或非离子型表面活性剂，优选为非离子型表面活性剂；
优选地，非离子型表面活性剂包括脂肪酸甘油酯、多元醇类、聚氧乙烯类或聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物中的一种或几种，优选为多元醇类表面活性剂，多元醇类表面活性剂包括蔗糖脂肪酸酯、脂肪酸山梨坦或聚山梨酯中的一种或几种，优选为聚山梨酯，聚山梨酯包括吐温20、吐温40、吐温60或吐温80中的一种或几种，优选为吐温80。
优选地，在本发明方案基础上，干燥包括如下步骤：
将表面活性剂除杂后得到的莫能菌素钠湿精品于温度为50-70℃，真空度≥0.06MPa下干燥，得到莫能菌素钠；
优选地，干燥时间为5-10h，优选为6-9h，进一步优选为6-8h；
优选地，干燥的温度为55-65℃，优选为58-62℃。
优选地，在本发明方案基础上，包括如下步骤：
(a)将质量分数为20-30％的NaOH溶液加入莫能菌素钠效价为35000-42000u/mL的生产莫能霉素的菌体的发酵液中，调节pH为10.5，得到原料液，对原料液进行板框过滤分离固体、洗涤得到含莫能菌素钠的固体原料；
(b)以甲醇加入量为4.8m3/吨预处理得到的含莫能菌素钠的固体原料的量加入甲醇并混合30-60min，分离浸提液和经浸提的含莫能菌素钠的固体原料，对经浸提的含莫能菌素钠的固体原料以4.8m3/吨预处理得到的含莫能菌素钠的固体原料的量再加入甲醇重复浸提1-5次，待莫能菌素含量≤300u/mg时停止浸提；最末次重复浸提得到的浸提液作为有机溶剂再利用；
(c)将浸提液在温度为55-65℃，真空度≥0.03MPa下浓缩至有结晶的莫能菌素钠析出，停止浓缩得到浓缩液；
(d)向得到的浓缩液中加入0.1-0.3％的吐温80，冷却至0-25℃，在0-25℃下静置5-12h，离心得到莫能菌素钠湿精品(e)将莫能菌素钠湿精品于温度为58-62℃，真空度≥0.06MPa下干燥6-8h，得到莫能菌素钠。
第二方面，提供了上述莫能菌素钠的制备方法制备得到的莫能菌素钠。
第三方面，提供了包含上述莫能菌素钠的药品或饲料添加剂。
与已有技术相比，本发明具有如下有益效果：
(1)本发明的一种莫能菌素钠的制备方法，该方法以生产莫能菌素的菌体的发酵液为初始原料，在生产莫能菌素的菌体的发酵液中，具有大量生产莫能菌素的菌体、菌体培养基和培养基内的菌体代谢产物，在生产莫能菌素的菌体内部含有大量的莫能菌素，首先进行预处理，使菌体内部的莫能菌素转变为莫能菌素钠，这时得到了原料液，然后从原料液中分离得到含莫能菌素钠的固体原料，主要为内部含有莫能菌素钠的菌体，这个过程中去除了残存的培养基、水及水溶性的杂质；然后进行有机溶剂浸提，有机溶剂浸提过程，有效地使莫能菌素钠从菌体当中被浸提出来，分散到浸提液中，得到浸提液；然后进入浓缩过程，是对浸提液进行浓缩，提高了浸提液中莫能菌素钠的浓度；再进行表面活性剂除杂，表面活性剂能高效去除油性物质，除杂工艺更简单，如培养基中的脂类或有机溶剂等，结晶过程析出莫能菌素钠晶体，有效去除残留的培养基杂质和部分有机溶剂，提高了莫能菌素钠的纯度；最后干燥，进一步去除了残留的有机溶剂，提高纯度，得到莫能菌素钠。由于上述过程中对培养基、有机溶剂及一些溶解于培养基中的菌体代谢产物杂质均做了有效去除，因此该方法制备的莫能菌素钠产品纯度高，制备工艺简单，制备得到的莫能菌素钠安全性好，工艺简单，成本低。
(2)本发明的莫能菌素钠的制备方法制备得到的莫能菌素钠，纯度高，成本较低，同时兼具安全性好的优势。此外，本发明还提供了包含上述莫能菌素钠的药品或饲料添加剂。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。
根据本发明的第一个方面，提供了一种莫能菌素钠的制备方法，方法包括如下步骤：将生产莫能菌素的菌体的发酵液依次进行预处理、有机溶剂浸提、浓缩、表面活性剂除杂和干燥，得到莫能菌素钠；预处理包括如下步骤：将NaOH溶液加入生产莫能霉素的菌体的发酵液中，得到原料液，分离得到含莫能菌素钠的固体原料。
莫能菌素是一种单价聚醚类离子载体型抗球虫药，具有广谱抗球虫作用；对鸡的毒害、柔嫩、巨型、变位、堆型、布氏等艾美耳球虫，火鸡的腺艾美耳球虫和火鸡艾美耳球虫，鹌鹑的分散和莱泰艾美耳球虫以及羔羊的雅氏和阿撒地艾美耳球虫均有效。莫能菌素的药品一般为莫能菌素钠剂。莫能菌素及莫能菌素钠的杀球虫作用机理是通过干扰球虫细胞内K+、Na+的正常渗透，使大量的Na+进入细胞内，为了平衡渗透压，大量的水分进入球虫细胞，引起肿胀而死亡。
发酵液，指的是液体培养基接入微生物菌种，经过一段时间培养后，微生物利用培养基中的营养成分合成菌体及分泌产物，这种经微生物代谢后的液体叫发酵液，发酵液中包含微生物菌体也包含培养基以及菌体代谢产物。
生产莫能菌素的菌体，即利用培养基中的营养物质在菌体新陈代谢过程中产生莫能菌素的菌体。
有机溶剂是常温下呈液态的有机化合物，一般具有一定的挥发性。
浸提，是将可溶物转移到适宜溶剂中的过程，上述可溶物只要可以溶解于适宜的溶剂即可，即上述可溶物可以是不溶于水的。
浓缩，是使物质浓度增大的过程。
表面活性剂除杂是去除目的产物以外的杂质的过程。
干燥，是去除液体，得到干物质的过程。
在生产莫能菌素的菌体的发酵液中，具有大量生产莫能菌素的菌体、菌体培养基和培养基内的菌体代谢产物，在生产莫能菌素的菌体内部含有大量的莫能菌素。首先进行预处理，使菌体内部的莫能菌素转变为莫能菌素钠，这时得到了原料液，然后从原料液中分离得到含莫能菌素钠的固体原料，主要为内部含有莫能菌素钠的菌体，这个过程中去除了培养基及其内部的杂质；然后进行有机溶剂浸提，有机溶剂浸提过程，有效地使莫能菌素钠从菌体当中被浸提出来，分散到浸提液中，得到浸提液；然后进入浓缩过程，浓缩步骤是对浸提液进行浓缩，提高了浸提液中莫能菌素钠的浓度；再进行表面活性剂除杂，表面活性剂能高效去除残留的培养基中一些油溶性物质，无需传统工艺中的反复除杂操作，工艺更简单，结晶使莫能菌素钠析出，进一步去除残留的培养基杂质和部分有机溶剂，提高了莫能菌素钠的纯度；最后干燥，去除了残留的有机溶剂，进一步提高纯度，得到莫能菌素钠。由于上述过程中对培养基、有机溶剂及一些溶解于培养基中的菌体代谢产物杂质均做了有效去除，因此该方法制备的莫能菌素钠产品纯度高，制备得到的莫能菌素钠安全性好，此外，由于制备过程中没有应用水作为浸提溶剂，因此节约水资源。
在一种优选的实施方式中，生产莫能菌素的菌体的发酵液的莫能菌素效价为35000-42000u/mL；生产莫能菌素的菌体为肉桂地链霉菌。
对生产莫能菌素的菌体的发酵液的莫能菌素效价进行优选，能够更高效地制备莫能菌素钠并节约工艺成本；如果发酵液中莫能菌素钠效价过低，采用相同的工艺不仅浪费有机溶剂，也浪费人力物力。肉桂地链霉菌的外形孢子丝长，柔曲，顶端带钩，但无真正螺旋。肉桂地链霉菌在代谢过程中能够产生莫能霉素，因此，以其发酵液为原料生产莫能霉素钠。肉桂地链霉菌有多种菌株，典型但非限制性的肉桂地链霉菌菌株例如为：Streptomycescinnamonensis，BNCC217977或Streptomyces cinnamonensis，BNCC217978等。
在一种优选的实施方式中，预处理包括如下步骤：
将NaOH溶液加入生产莫能霉素的菌体的发酵液中，调节生产莫能霉素的菌体的发酵液的pH至10-11，得到原料液，从得到的原料液中分离固体得到含莫能菌素钠的固体原料。
将NaOH溶液加入产莫能霉素菌体的发酵液后，待pH为10-11时，通常能够使绝大多数莫能菌素转变为莫能菌素钠，而且使用的NaOH不多，有效地避免了浪费，在保证反应充分的情况下，不会导致体系碱性过大，后续进行固液分离时候，不会因为液体碱性过强而破坏固液分离的应用的装置；常用的固液分离装置例如板框压滤装置，滤网、离心机或离心管等。进行固液分离得到的含莫能菌素钠的固体原料，主要为生产莫能菌素的菌体，其内部具有生成的莫能霉素钠；被分离弃掉的液体中大部分是培养基，还有少量的菌体代谢产物或菌体破碎以后的内溶物，只有极少量的莫能霉素钠，因此将分离的液体去除，除掉培养基以及菌体代谢产物等杂质，具有初步提纯的效果。
优选地，调节pH至10.5，得到原料液。
优选pH为10.5时分离固体是由于pH为10.5通常能够保证绝大多数莫能霉素转化为莫能霉素钠，而pH低于10.5在莫能菌素基础含量较高时，不能保证其充分转化为莫能菌素钠，另外在pH高于10.5时，往往会造成NaOH加入过量，造成浪费或者由于处理后的原料液pH过大损伤后续工艺过程使用的固液分离装置。
优选地，方法还包括分离后进行洗涤得到含莫能菌素钠的固体原料的步骤。
对得到的固体进行洗涤，进一步去除了残留的培养基及一些菌体代谢产物，生产上应用水进行洗涤，工业上洗涤常用深井水进行洗涤。
优选地，分离方法为过滤，优选为板框过滤。
板框过滤容易得到滤饼状的含莫能菌素钠的固体原料，能够更好地去除原料液中的液体。另外，板框过滤还有操作简单、运行成本低、适宜大规模生产等优点。
优选地，NaOH溶液的质量分数为20-30％。
NaOH的质量分数在20-30％碱性不强，对菌体破坏性小，能够温和地提供钠离子，钠离子进入到菌体内部使莫能霉素转化为莫能霉素钠，莫能菌素钠停留在菌体内部，在后续进行固液分离时，莫能菌素钠不随培养基被分离而损失掉。
在一种优选的实施方式中，有机溶剂浸提包括如下步骤：
将有机溶剂与预处理得到的含莫能菌素钠的固体原料混合，混合时间为10-100min，分离得到浸提液和经浸提的含莫能菌素钠的固体原料。
预处理得到的含莫能菌素钠的固体原料主要为菌体，菌体与有机溶剂混合，有机溶剂可透过菌体的细胞膜进入菌体内部，溶解菌体内的莫能霉素钠，并在浸提过程中，将莫能霉素钠逐渐分散到菌体的细胞外，获得包含莫能霉素钠的浸提液，固液分离的过程中有效去除了菌体，得到包含莫能菌素钠的浸提液。混合时间为10-100min，给予充分的时间能让莫能霉素钠充分溶解，并扩散到细胞外，典型但非限制性的混合时间例如为：10min、20min、30min、40min、50min、60min、70min、80min、90min或100min等。
优选地，混合时间为30-60min。
优选混合30-60min是由于30-60min内，通常能够保证莫能霉素钠的充分溶解和扩散至胞外，又不浪费时间。
优选地，有机溶剂的加入量为4-8m3/吨预处理得到的莫能菌素钠固体原料，优选为4-6m3/吨预处理得到的莫能菌素钠固体原料，进一步优选为4.8m3/吨预处理得到的莫能菌素钠固体原料。
优选有机溶剂与含莫能菌素钠的固体原料的混合比例，是由于充分的有机溶剂能够保证莫能霉素钠的充分溶解，有机溶剂过少浸提率低，造成莫能霉素钠在菌体内部残留。因此优选有机溶剂与预处理得到的固体的混合比例。典型但非限制性的混合比例例如为：4m3/吨、5m3/吨、6m3/吨、7m3/吨或8m3/吨等。
优选地，对莫能菌素钠含量＞300u/mg的经浸提的莫能菌素钠固体原料重复浸提，待莫能菌素钠含量≤300u/mg时停止浸提；将每次浸提分离的液体混合得到浸提液用于浓缩。
经浸提的含莫能菌素钠的固体原料，首次浸提后如果溶液达到饱和，可能会残留莫能菌素钠在菌体内部，为了提高浸提率，避免残留，通常对经浸提的固体进行重复浸提，重复浸提的有机溶剂使用量与首次浸提使用量通常一致，但本发明不限于使用相同量的有机溶剂。重复浸提进一步使菌体内部的莫能菌素钠充分溶解到胞外；将每次浸提得到的浸提液混合到一起，混合的浸提液中具有更大量的莫能霉素钠，后续浓缩干燥获得的莫能霉素钠量较大，浸提较为充分。莫能菌素钠含量≤300u/mg时停止浸提，是由于含量过低浸提率低，浪费工艺成本，却难以浸提得到大量的莫能霉素钠。因此，为省时省力，待含量过低时，停止浸提。
优选地，最末次重复浸提分离得到的浸提液作为有机溶剂再利用。
经末次重复浸提的原料，末次浸提后获得的浸提液，通常目的产物莫能霉素钠的浓度较低，因此通常在浸提下一批原料过程中，或后续浸提新的一批含莫能菌素钠的固体原料过程中，可以用来替代有机溶剂再利用，进而减少莫能菌素钠的损失。
优选地，有机溶剂包括羧酸类、酚类、醇类、酮类或醚类中的一种或几种。
羧酸类、酚类、醇类、酮类或醚类都是工业或实验室常用有机溶剂，成本较低，而且对莫能菌素钠的浸出效果较好。
优选地，有机溶剂为醇类和/或酮类，优选为醇类，进一步优选为甲醇。
优选醇类和/或酮类，是由于莫能菌素钠在醇类或酮类的溶解性相对其它有机溶剂要更好，典型但非限制性的醇类例如为：甲醇、乙醇、乙二醇、丙醇、丙二醇、丙三醇或丁醇等。优选甲醇，是由于甲醇成本较低，而且浸提效果非常好。
在一种优选的实施方式中，浓缩包括如下步骤：
将有机溶剂浸提得到的浸提液在温度为40-70℃，真空度≥0.03MPa下浓缩至有结晶的莫能菌素钠析出，停止浓缩，得到浓缩液。
将有机溶剂浸提得到的浸提液在温度为40-70℃，真空度≥0.03MPa下浓缩至有结晶的莫能菌素钠析出，停止浓缩，得到浓缩液。
浓缩过程中，对浓缩温度进行优化，真空条件下浸提液中的甲醇更容易挥发出来，在温度和真空度进行优化的情况下，甲醇快速挥发，提高了工艺效率，缩短了工艺时间。典型但非限制性的浓缩过程中的温度例如为：40℃、50℃、60℃或70℃等。
优选地，浓缩步骤的温度为55-65℃，真空度≥0.03MPa。
优选浓缩步骤的温度和真空度，是为了在实际操作中更便于调节。
在一种优选的实施方式中，表面活性剂除杂包括如下步骤：向浓缩得到的浓缩液中加入0.1-0.3％的表面活性剂，然后待浓缩液冷却至0-25℃，然后在0-25℃条件下静置5-12h，分离得到莫能菌素钠湿精品。
表面活性剂是加入少量能使其溶液体系的界面状态发生明显变化的物质。具有固定的亲水亲油基团，在溶液的表面能定向排列。表面活性剂的分子结构具有两亲性：一端为亲水基团，另一端为疏水基团。典型但非限制性的表面活性剂的加入量例如为：0.1％、0.2％或0.3％等。向得到的浓缩液中加入表面活性剂，有利于去除残留的培养基中不溶于水的物质，例如生产莫能菌素钠的菌体培养基中的一些油类或脂类物质残留，同时还能够去除由浸提过程引入的有机溶剂的残留，因此，加入表面活性剂起到进一步纯化的作用，具有去除杂质的作用；在0-25℃条件下静置一段时间，有利于莫能菌素钠的充分结晶及杂质去除的充分性。
优选地，分离方法为离心。
优选用离心的方法分离，更简便快捷。
优选地，表面活性剂包括离子型表面活性剂和/或非离子型表面活性剂，优选为非离子型表面活性剂。
本发明的表面活性剂可以是离子型表面活性剂和/或非离子型表面活性剂，均能够起到去除残留的培养基中的油脂的作用。优选非离子型表面活性剂是由于非离子型表面活性剂在工业上应用较广泛，成本较低。
优选地，非离子型表面活性剂包括脂肪酸甘油酯、多元醇类、聚氧乙烯类或聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物中的一种或几种，优选为多元醇类表面活性剂，多元醇类表面活性剂包括蔗糖脂肪酸酯、脂肪酸山梨坦或聚山梨酯中的一种或几种，优选为聚山梨酯，聚山梨酯包括吐温20、吐温40、吐温60或吐温80中的一种或几种，优选为吐温80。
吐温80的成本较低，而且是常用的表面活性剂，去除有机溶剂的效果好。
在一种优选的实施方式中，干燥包括如下步骤：
将表面活性剂除杂后得到的莫能菌素钠湿精品于温度为50-70℃，真空度≥0.06MPa下干燥，得到莫能菌素钠。
优选在真空下干燥，是由于真空条件下，有机溶剂更容易挥发，干燥较为迅速。
优选地，干燥时间为5-10h，优选为6-9h，进一步优选为6-8h。
优选干燥时间是由于在优选的时间范围内，通常能够达到充分干燥，尽除有机溶剂的效果。
优选地，干燥的温度为55-65℃，优选为58-62℃。
优选干燥温度是由于，干燥温度过高容易破坏莫能菌素钠，干燥温度过低，会造成干燥时间延长。
在一种优选的实施方式中，包括如下步骤：
(a)将质量分数为20-30％的NaOH溶液加入莫能菌素钠效价为35000-42000u/mL的生产莫能霉素的菌体的发酵液中，调节pH为10.5，得到原料液，对原料液进行板框过滤分离固体、洗涤得到含莫能菌素钠的固体原料；
(b)以甲醇加入量为4.8m3/吨预处理得到的含莫能菌素钠的固体原料的量加入甲醇并混合30-60min，分离浸提液和经浸提的含莫能菌素钠的固体原料，对经浸提的含莫能菌素钠的固体原料以4.8m3/吨预处理得到的含莫能菌素钠的固体原料的量再加入甲醇重复浸提1-5次，待莫能菌素含量≤300u/mg时停止浸提；最末次重复浸提得到的浸提液作为有机溶剂再利用；
(c)将浸提液在温度为55-65℃，真空度≥0.03MPa下浓缩至有结晶的莫能菌素钠析出，停止浓缩得到浓缩液；
(d)向得到的浓缩液中加入0.1-0.3％的吐温80，冷却至0-25℃，在0-25℃下静置5-12h，离心得到莫能菌素钠湿精品；
(e)将莫能菌素钠湿精品于温度为58-62℃，真空度≥0.06MPa下干燥6-8h，得到莫能菌素钠。
抗生素是一种生理活性物质，它对生命现象很敏感，可以用抗生素的生物效能表示它的效价，其最小效价单元就叫做“单位”(U)，是根据国家抗生素标准品测定出来的，是衡量药物有效成份的一种尺度。抗生素的剂量常用重量和效价来表示。生物合成的抗生素以效价表示。效价是以抗菌效能(活性部分)作为衡量的标准，因此，效价的高低是衡量抗生素质量的相对标准。在步骤(a)中对发酵液的莫能菌素化学效价进行优选，进一步保证同样的工艺过程中能提取到更多的具有生物活性的莫能菌素钠，相对地降低工艺成本。同时对于NaOH质量分数和加入NaOH后原料液的pH进行优选，能够较温和地使莫能菌素转化为莫能菌素钠，加入水洗步骤进一步去除发酵液培养基及其内部残留的水溶性杂质，减少后续工艺的除杂负担，使得到的含莫能菌素钠的固体原料中莫能菌素钠的纯度更高，杂质含量更低；在此基础上，又在步骤(b)中优选了特定的有机溶剂甲醇并且优选了甲醇与含莫能菌素钠的固体原料的配比，能够更高效率地浸出莫能菌素钠，重复浸提避免了菌体内部的莫能菌素钠残留，提高了莫能菌素钠的浸出率，重复浸提到莫能菌素钠含量低于300u/mg时停止浸提，进一步保证了浸提的充分性，降低损失率。最末次浸提得到的浸提液直接作为下一批浸提时的有机溶剂使用不再浓缩避免了浪费，也避免了一些莫能菌素钠的损失；然后在步骤(c)中进一步优化了干燥的温度和真空度，进一步提高了干燥过程的效率，并且能够保证较好的干燥效果；接下来在步骤(d)中优选了特定种类的表面活性剂和添加比例，能够高效去除杂质的同时，又节省了成本降低了用量，冷却条件和静置时间进一步保证了油性杂质的充分去除，提高了产物的纯度；最后优选特定的干燥温度和真空度，在保证干燥效果的同时，缩短干燥时间。
第二方面，提供了上述莫能菌素钠的制备方法制备得到的莫能菌素钠。
上述莫能菌素钠的制备方法制备得到的莫能菌素钠纯度高，安全性好。
第三方面，提供了包含上述莫能菌素钠的药品或饲料添加剂。
上述莫能菌素钠可以制成药品，用于治疗球虫病等；也可以制成饲料添加剂，用于促进动物生长发育，增加体重和提高饲料利用率。
下面通过具体的实施例和对比例进一步说明本发明，但是，应当理解为，这些实施例仅仅是用于更详细地说明之用，而不应理解为用于以任何形式限制本发明。
实施例1
一种莫能菌素钠制备方法，包括如下步骤：
预处理：收集42000u/mL莫能菌素的Streptomyces cinnamonensis，BNCC217977发酵液20吨，向发酵液中加入质量分数为25％的NaOH溶液，至发酵液pH值至10.5，用装有滤布的板框过滤上述pH为10.5的发酵液，进行固液分离，得到含有莫能菌素钠的固体滤饼3.3吨，然后用深井水洗涤滤饼至出口水澄清。
浸提：将甲醇与预处理得到的固体以4.8m3甲醇/吨莫能菌素钠滤饼的比例向浸提罐中加入甲醇，将洗涤后得到的滤饼3.3吨投入甲醇中，搅拌60min，过滤，收集浸提液；再向浸提罐中加入等体积的甲醇溶液，浸提40min，过滤，收集浸提液，与第一次甲醇浸提液混合，用于后续浓缩步骤；用同体积的甲醇溶液再浸提滤饼一次，检测滤饼中莫能菌素含量低于300u/mg，停止浸提，得到的浸提液用于处理下一批预处理得到的固体。
浓缩：将前两次浸提得到的浸提液在温度60℃，真空度为0.03MPa下浓缩至有结晶析出时，停止浓缩，得到浓缩液。
表面活性剂除杂：向浓缩液中按0.15％的比例加入吐温80，冷却至20℃，静置6h，离心得到莫能菌素钠的湿精品。
干燥：将莫能菌素钠湿品于60℃，真空度≥0.06MPa的烘箱中烘干7h,得到莫能菌素钠。
实施例2
一种莫能菌素钠的制备方法，包括如下步骤：
预处理：收集37500u/mL莫能菌素的Streptomyces cinnamonensis，BNCC217977发酵液22.5吨，向发酵液中加入质量分数为25％的NaOH溶液，至发酵液pH值至10.3，用装有滤布的板框过滤上述pH为10.3的发酵液，进行固液分离，得到含有莫能菌素钠的滤饼3.6吨；然后用深井水洗涤滤饼至出口水澄清。
浸提：将甲醇与预处理得到的固体以5.1m3甲醇/吨莫能菌素钠滤饼的比例向浸提罐中加入甲醇，将洗涤后得到的滤饼3.6吨投入甲醇中，搅拌50min，过滤，收集浸提液，再向浸提罐中加入等体积的甲醇溶液，浸提30分钟，过滤，收集浸提液，与第一次甲醇浸提液混合，用于后续浓缩；用同体积的甲醇溶液再浸提滤饼一次，检测滤饼中莫能菌素含量低于300u/mg，停止浸提，得到的浸提液用于处理下一批预处理得到的固体。
浓缩：将前两次浸提得到的浸提液在温度62℃，真空度为0.03MPa下浓缩至有结晶析出时，停止浓缩，得到浓缩液。
表面活性剂除杂：向浓缩液中按0.21％的比例加入吐温80，冷却至25℃，静置7h，离心得到莫能菌素钠的湿精品。
干燥：将莫能菌素钠湿品于58℃，真空度≥0.06MPa的烘箱中烘干7h,得到莫能菌素钠。
实施例3
实施例3与实施例1的区别仅在于，浸提溶剂用乙醇替代甲醇。
实施例4
实施例4与实施例1的区别仅在于，浸提溶剂用丙酮替代甲醇。
实施例5
实施例5与实施例1的区别仅在于，第一次浸提混合时间为10min。
实施例6
实施例6与实施例1的区别仅在于，用吐温20替代吐温80。
试验例
按照莫能菌素钠产品现行的中国兽药典标准(2015)及美国USP标准检测莫能菌素钠的纯度，检测结果见下表1。
表1实施例与对比例制得的莫能菌素钠的纯度检测结果
实施例 莫能菌素钠纯度(％)
实施例1 91.1
实施例2 91.9
实施例3 90.7
实施例4 90.3
实施例5 90.4
实施例6 89.9
由表1中实施例1-6的检测结果可见，在本发明的莫能菌素钠的制备方法中调整各环节的参数，制得的莫能菌素钠均能达到较高的纯度。
由表1中实施例1与实施例3的检测结果对比可见，用乙醇替代甲醇作为溶剂进行浸提，能够达到相似的浸提效果，制备的莫能菌素钠产品纯度较好，与甲醇浸提效果相似。
由表1中实施例1与实施例4的检测结果对比可见，用丙酮替代甲醇也能够达到相似的浸提效果。
由表1中实施例1与实施例5的检测结果对比可见，第一次浸提混合时间较为重要，混合时间略长一些，能够更好地保证菌体内部的莫能菌素钠被有效浸出，从而达到更高的浸出率，再经后续的工艺，得到的莫能菌素钠纯度更高。
由表1中实施例1与实施例6的检测结果对比可见，在表面活性剂除杂过程中用吐温20替代吐温80，能够达到相似的除杂效果，对培养基残留物和有机溶剂的残留能够进行高效去除。
由表1中实施例1-6的产品纯度数据可见，本发明方法能够制备纯度较高的莫能菌素钠。此外，由实施例1-6的操作步骤可见，本发明方法相比工艺较为简单，步骤少，省时省力，降低工艺成本。
尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明，然而应意识到，在不背离本发明的精神和范围的情况下可以做出许多其它的更改和修改。因此，这意味着在所附权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些变化和修改。

Claims (10)

1.一种莫能菌素钠的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：将生产莫能菌素的菌体的发酵液依次进行预处理、有机溶剂浸提、浓缩、表面活性剂除杂和干燥，得到莫能菌素钠；
所述预处理包括如下步骤：将NaOH溶液加入生产莫能霉素的菌体的发酵液中，得到原料液，分离得到含莫能菌素钠的固体原料。
2.按照权利要求1所述的莫能菌素钠的制备方法，其特征在于，所述生产莫能菌素的菌体的发酵液的莫能菌素效价为35000-42000u/mL；所述生产莫能菌素的菌体为肉桂地链霉菌。
3.按照权利要求1所述的莫能菌素钠的制备方法，其特征在于，所述预处理包括如下步骤：
将NaOH溶液加入生产莫能霉素的菌体的发酵液中，调节生产莫能霉素的菌体的发酵液的pH至10-11，得到原料液，从得到的原料液中分离固体得到含莫能菌素钠的固体原料；
优选地，调节pH至10.5，得到原料液；
优选地，所述方法还包括分离后进行洗涤得到含莫能菌素钠的固体原料的步骤；
优选地，所述分离方法为过滤，优选为板框过滤；
优选地，所述NaOH溶液的质量分数为20-30％。
4.按照权利要求1或2所述的莫能菌素钠的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂浸提包括如下步骤：
将有机溶剂与预处理得到的含莫能菌素钠的固体原料混合，混合时间为10-100min，分离得到浸提液和经浸提的含莫能菌素钠的固体原料；
优选地，混合时间为30-60min；
优选地，有机溶剂的加入量为4-8m3/吨预处理得到的莫能菌素钠固体原料，优选为4-6m3/吨预处理得到的莫能菌素钠固体原料，进一步优选为4.8m3/吨预处理得到的莫能菌素钠固体原料；
优选地，对莫能菌素钠含量＞300u/mg的经浸提的莫能菌素钠固体原料重复浸提，待莫能菌素钠含量≤300u/mg时停止浸提；将每次浸提分离的液体混合得到浸提液用于浓缩；
优选地，最末次重复浸提分离得到的浸提液作为有机溶剂再利用；
优选地，所述有机溶剂包括羧酸类、酚类、醇类、酮类或醚类中的一种或几种；
优选地，所述有机溶剂为醇类和/或酮类，优选为醇类，进一步优选为甲醇。
5.按照权利要求1或2所述的莫能菌素钠的制备方法，其特征在于，所述浓缩包括如下步骤：
将有机溶剂浸提得到的浸提液在温度为40-70℃，真空度≥0.03MPa下浓缩至有结晶的莫能菌素钠析出，停止浓缩，得到浓缩液；
优选地，所述浓缩步骤的温度为55-65℃，真空度≥0.03MPa。
6.按照权利要求1或2所述的莫能菌素钠的制备方法，其特征在于，所述表面活性剂除杂包括如下步骤：向浓缩得到的浓缩液中加入0.1-0.3％的表面活性剂，然后待浓缩液冷却至0-25℃，然后在0-25℃条件下静置5-12h，分离得到莫能菌素钠湿精品；
优选地，所述分离方法为离心；
优选地，所述表面活性剂包括离子型表面活性剂和/或非离子型表面活性剂，优选为非离子型表面活性剂；
优选地，所述非离子型表面活性剂包括脂肪酸甘油酯、多元醇类、聚氧乙烯类或聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物中的一种或几种，优选为多元醇类表面活性剂，所述多元醇类表面活性剂包括蔗糖脂肪酸酯、脂肪酸山梨坦或聚山梨酯中的一种或几种，优选为聚山梨酯，所述聚山梨酯包括吐温20、吐温40、吐温60或吐温80中的一种或几种，优选为吐温80。
7.按照权利要求1或2所述的莫能菌素钠的制备方法，其特征在于，所述干燥包括如下步骤：
将表面活性剂除杂后得到的莫能菌素钠湿精品于温度为50-70℃，真空度≥0.06MPa下干燥，得到莫能菌素钠；
优选地，所述干燥时间为5-10h，优选为6-9h，进一步优选为6-8h；
优选地，所述干燥的温度为55-65℃，优选为58-62℃。
8.按照权利要求1或2所述的莫能菌素钠的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(a)将质量分数为20-30％的NaOH溶液加入莫能菌素钠效价为35000-42000u/mL的生产莫能霉素的菌体的发酵液中，调节pH为10.5，得到原料液，对原料液进行板框过滤分离固体、洗涤得到含莫能菌素钠的固体原料；
(b)以甲醇加入量为4.8m3/吨预处理得到的含莫能菌素钠的固体原料的量加入甲醇并混合30-60min，分离浸提液和经浸提的含莫能菌素钠的固体原料，对经浸提的含莫能菌素钠的固体原料以4.8m3/吨预处理得到的含莫能菌素钠的固体原料的量再加入甲醇重复浸提1-5次，待莫能菌素含量≤300u/mg时停止浸提；最末次重复浸提得到的浸提液作为有机溶剂再利用；
(c)将浸提液在温度为55-65℃，真空度≥0.03MPa下浓缩至有结晶的莫能菌素钠析出，停止浓缩得到浓缩液；
(d)向得到的浓缩液中加入0.1-0.3％的吐温80，冷却至0-25℃，在0-25℃下静置5-12h，离心得到莫能菌素钠湿精品；
(e)将莫能菌素钠湿精品于温度为58-62℃，真空度≥0.06MPa下干燥6-8h，得到莫能菌素钠。
9.按照权利要求1-8任一项所述的莫能菌素钠的制备方法制备得到的莫能菌素钠。
10.一种包含权利要求9所述的莫能菌素钠的药品或饲料添加剂。
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