CN108893436B - 一株耐盐碱黄赭色链霉菌及其应用 - Google Patents

一株耐盐碱黄赭色链霉菌及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一株黄赭色链霉菌(Streptomyces silaceus)PAPM18，该菌株已于2018年7月4日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其生物保藏号为：CGMCC NO.16054。该菌株能在盐碱土壤中存活，对苯烯丙酸、对羟基苯甲酸、阿魏酸等植物自毒物质有较好的降解效果，可减轻其引起的连作障碍，对盐碱地栽培的棉花具有促进生长和增加产量的作用。该菌株经扩大培养后，接种于以玉米淀粉和玉米浆为主要营养源的培养基中，35‑37℃培养72‑96h，再向发酵液加入海藻糖、糖蜜和生物黄腐酸粉，然后进行喷雾干燥，即可获得活菌制剂。该菌剂制备方法科学，发酵周期短，发酵液菌浓高，喷雾干燥过程中活菌损失少，活菌制剂在保存过程中的稳定性高。

Description

一株耐盐碱黄赭色链霉菌及其应用
技术领域
本发明涉及农业微生物及生态修复技术领域，具体涉及一株耐盐碱黄赭色链霉菌及其应用。
背景技术
我国盐碱地总面积高达5亿多亩，合理的对其进行开发利用具有重要意义。常用的盐碱地改良方法包括物理、化学、水利、生物等多种措施，其中以生物改良最具生态效益和发展前景。施用生物肥料是盐碱地生物改良的常见方法，但生物肥料中的功能性微生物能否在盐碱土壤存活直接影响其使用效果。因此，针对盐碱地土壤盐分大、pH值高等特点，筛选能够耐受盐碱环境的功能性微生物，研发盐碱地专用生物肥料具有重要意义。
但盐碱地土壤中微生物数量较少，主要原因是盐碱环境不利于微生物的生存，高浓度盐离子抑制了微生物的生长，同时也降低了微生物对盐碱地的生态修复效果。菌种是采用微生物肥料对盐碱地进行生物改良的基础，目前限制微生物肥料在盐碱地生物改良中应用的瓶颈主要是功能性微生物菌种的选育问题，由于盐碱地土壤中微生物菌群种类和数量相对较少，想要分离出目的菌种不容易实现，尤其是分离出能够耐受盐碱、具有促进植物生长、降解植物自毒物质、可用于生物肥料生产的菌株。
棉花(Gossypium)是盐碱地广泛栽培经济作物之一。随着种植年限的增加，连作障碍成为影响棉花产量与品质主要制约因素之一。植物产生的自毒物质是引起连作障碍的主要原因之一，它可通过植物体淋溶、根系分泌物和植物残茬等途进入土壤，影响下茬作物生长。酚酸类物质是棉花产生的一类自毒物质，包括苯烯丙酸、对羟基苯甲酸、阿魏酸等，对棉花生长具有显著的抑制作用。采用生物学措施促进土壤中酚酸类物质的降解，可有效减轻连作障碍。
筛选对酚酸类物质降解作用强的微生物，制成活菌制剂，用于降解土壤中的酚酸类自毒物质，以减轻连作障碍，是一种很有前途的生物防治措施。据报道，虽然很多微生物均具有降解酚酸类物质的能力，包括黄孢原毛平革菌、粘质沙雷菌、生脂固氮螺菌、解淀粉芽孢杆菌等20多个种属，但分离自盐碱地棉花根际土壤、又能同时降解苯烯丙酸、对羟基苯甲酸、阿魏酸等多种酚酸类物质的耐盐黄赭色链霉菌尚未有报道。
发明内容
针对上述现有技术，本发明的目的是提供一株耐盐碱的黄赭色链霉菌(Streptomyces silaceus)PAPM18。该黄赭色链霉菌PAPM18分离自盐碱地棉花根际土壤，具有较强的耐盐碱能力，能够在盐碱土壤中繁殖，降解苯烯丙酸、对羟基苯甲酸、阿魏酸等多种酚酸类自毒物质，促进植物生长，减轻连作障碍。
具体的，本发明涉及以下技术方案：
本发明提供的耐盐碱的黄赭色链霉菌(Streptomyces silaceus)PAPM18，该菌株已于2018年7月4日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，其生物保藏号为：CGMCC NO.16054。
所述黄赭色链霉菌PAPM18菌株的菌落及菌体特征为：
在高氏1号培养基上单菌落扁平、圆形或近圆形，表面干燥。菌落初为白色，逐渐变成淡黄色。中央环状凹陷，外缘有一同心轮纹，边缘较为光滑，略呈不规则波纹状，背面观呈土黄色。基内菌丝丝无横隔，气生丝柔曲，孢子丝直或柔曲，孢子表面光滑，椭圆形。
所述高氏一号培养基配方为可溶性淀粉20g、KNO3 1g、K2HPO4 0.5g、MgSO4·7H2O0.5g、NaCl 0.5g、FeSO4·7H2O 0.01g、琼脂20g、水1000mL，pH＝7.4-7.6。
所述黄赭色链霉菌PAPM18菌株的生理生化特征为：
硝酸盐还原试验阳性、淀粉水解试验阳性、D-葡萄糖试验阳性、D-果糖试验阳性、蔗糖利用试验阳性、麦芽糖利用试验阳性、硫化氢试验阴性、L-肌醇试验阴性、D-甘露醇试验阴性、纤维素水解试验阴性、牛奶凝固与胨化试验阴性、明胶液化试验阳性。
含有所述黄赭色链霉菌PAPM18的菌剂也属于本发明的保护范围。
该菌剂除包含黄赭色链霉菌PAPM18外，还可包括辅料，如海藻糖、糖蜜、黄腐酸、草炭、动物的粪便、各类作物的秸秆、稻草、花生皮等。所述菌剂还可包括载体，所述载体可为固体载体或液体载体。所述固体载体可以选自矿物材料、植物材料或高分子化合物；所述矿物材料可以为粘土、滑石粉、高岭土、沸石和硅藻土中的一种或多种；所述植物材料可以为玉米粉、豆粉或淀粉中的至少一种；所述高分子化合物可以为聚乙烯醇。所述液体载体可以为有机溶剂、植物油或水。
所述菌剂中，黄赭色链霉菌PAPM18可以以被培养的活细胞、活细胞的发酵液、细胞培养物的滤液或细胞与滤液的混合物的形式存在。
所述菌剂的剂型可以为液剂、乳剂、悬浮剂、颗粒剂、粉剂、可湿性粉剂或水分散剂。
进一步的，本发明还提供一种黄赭色链霉菌PAPM18活菌菌剂的制备方法，包括以下步骤：
将黄赭色链霉菌PAPM18接种至发酵培养基中，35-37℃培养72-96h，得到黄赭色链霉菌PAPM18发酵液；
向黄赭色链霉菌PAPM18发酵液中加入海藻糖、糖蜜和生物黄腐酸粉，搅拌均匀，干燥，获得活菌菌剂原粉。
优选的，黄赭色链霉菌PAPM18的接种量为4-5％。
优选的，所述发酵培养基的配方为：玉米淀粉15g、玉米浆15g、KNO3 1g、K2HPO40.5g、MgSO4·7H2O 0.5g、NaCl 0.5g、FeSO4·7H2O 0.01g、邻苯二甲酸500mg、复合酶制剂2g、水1000mL，初始pH7.5；所述复合酶制剂的组成为碱性蛋白酶35％、中温α-淀粉酶65％。其中，碱性蛋白酶和中温α-淀粉酶均由泰安信得利生物科技有限公司生产，产品规格分别为20万U/g与2000U/g。碱性蛋白酶的活力单位定义与检测方法执行国家标准GB/T 23527-2009《蛋白酶制剂》，中温α-淀粉酶的酶活力单位定义与检测方法执行GB/T 24401-2009《α-淀粉酶制剂》。
所述发酵培养基的制备方法为：按照配方称取原料，溶于水中，加热至50-55℃，保温2-2.5h，然后升温至121℃，保温30min进行灭菌。
优选的，黄赭色链霉菌PAPM18发酵液中的活菌数为(2～3)×109cfu/mL。
优选的，海藻糖、糖蜜和生物黄腐酸粉的加入量分别为黄赭色链霉菌PAPM18发酵液重量的1％、5％和15％。
优选的，干燥采用的方法为喷雾干燥，进口温度为180℃，出口温度为70℃。
优选的，黄赭色链霉菌PAPM18在接种前还包括种子液制备的步骤；所述种子液制备包括：一级种子液制备和二级种子液制备；
所述一级种子液的制备方法为：将所述黄赭色链霉菌PAPM18菌株接种于高氏一号液体培养基，37℃培养72-96h，即为一级种子液；
所述二级种子液的制备方法为：将一级种子以4-5％的接种量转接入高氏一号液体培养基，37℃培养72-97h，即为二级种子液；
所述高氏一号液体培养基的配方为可溶性淀粉20g、KNO3 1g、K2HPO4 0.5g、MgSO4·7H2O 0.5g、NaCl 0.5g、FeSO4·7H2O 0.01g、水1000mL，pH＝7.4-7.6。
由于在喷雾干燥的过程中，如果生物黄腐酸加入量过多，会导致太粘稠，无法进行喷雾。因此，本发明先加入部分生物黄腐酸，制备得到黄赭色链霉菌PAPM18活菌菌剂原粉。黄赭色链霉菌PAPM18活菌菌剂原粉可以直接使用；但由于活菌菌剂原粉中的活菌含量太高，为方便使用，可以将活菌制剂原粉与生物黄腐酸粉按重量比为1：(2-4)混匀，进行稀释，即得到黄赭色链霉菌PAPM18活菌制剂。
上述制备的黄赭色链霉菌PAPM18活菌制剂中，其活菌含量优选为(2.0～3.0)×109cfu/g。
上述制备的黄赭色链霉菌PAPM18菌株活菌制剂的使用方法为：将黄赭色链霉菌PAP M18菌株活菌制剂加水稀释60～80倍，移苗时蘸根或浇水时随水冲施。
上述黄赭色链霉菌PAPM18或含有黄赭色链霉菌PAPM18的菌剂在下述1)-5)中的任一应用也属于本发明的保护范围；
1)在盐碱地土壤修复中的应用；
2)促进植物在盐胁迫环境下生长的应用；
3)在制备用于盐碱地土壤修复的生物有机肥中的应用；
4)在降解土壤中的酚酸类物质中的应用；
5)在降解盐碱地棉花产生的自毒物质、减轻连作障碍、促进棉花生长、提高棉花产量中的应用。
上述应用中，所述酚酸类物质包括：苯烯丙酸、对羟基苯甲酸和阿魏酸。
上述应用中，棉花产生的自毒物质包括：苯烯丙酸、对羟基苯甲酸和阿魏酸。
本发明的有益效果：
(1)本发明黄赭色链霉菌PAPM18耐盐碱能力较强，能在盐碱土壤中生长繁殖，促进植物生长，同时能降解苯烯丙酸、对羟基苯甲酸、阿魏酸等植物自毒物质，培养7d后，苯烯丙酸、对羟基苯甲酸、阿魏酸的降解率分别可达78％、69％、74％，其活菌制剂可用于降解盐碱地棉花产生的自毒物质，减轻连作障碍，促进棉花生长，提高棉花产量。
(2)本发明黄赭色链霉菌PAPM18活菌制剂的生产方法科学，发酵液活菌数高，生产成本低。发酵培养基中添加复合酶制剂，灭菌时在升温过程中对玉米淀粉与玉米浆等原料进行水解，可缩短延迟期，提高原料利用率，提高发酵液中的活菌数。喷雾干燥时加入对活菌具有保护作用的海藻糖与糖蜜，可以减少喷雾干燥过程中活菌数量的损失，并可提高活菌制剂在保存过程中的稳定性。
附图说明
图1：基于16S rDNA部分序列构建的系统发育树。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
正如背景技术部分所介绍的，目前限制微生物肥料在盐碱地生物改良中应用的瓶颈主要是高效菌种的选育问题，由于盐碱地土壤中微生物菌群种类数量相对较少，想要分离出目的菌种极为不容易实现，尤其是分离出能够耐受盐碱、具有促进植物生长、降解植物自毒物质、减轻连作障碍的菌株。另外，棉花作为盐碱地广泛栽培的经济作物之一，其产生的酚酸类物质造成连作障碍，进而影响棉花的产量和品质。通过筛选对酚酸类物质降解作用强的微生物可以用于减轻连作障碍，虽然现有报道的具有降解酚酸类物质能力的微生物有多种，但是，如前所述，盐碱地土壤中微生物菌群种类数量相对较少，想要分离出既能够耐受盐碱环境，能够在盐碱土壤中繁殖，同时又能够降解苯烯丙酸、对羟基苯甲酸、阿魏酸等多种酚酸类自毒物质的微生物的难度极大。
本发明从盐碱地棉花根际土壤中分离筛选得到一株耐盐碱的黄赭色链霉菌(Streptomyces silaceus)PAPM18，进一步研究发现，该黄赭色链霉菌(Streptomycessilaceus)PAPM18不仅能够在盐碱土壤中繁殖，还可同时降解苯烯丙酸、对羟基苯甲酸、阿魏酸等多种酚酸类自毒物质，促进植物生长，减轻连作障碍，具有广阔的应用前景，由此提出了本发明。
为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本申请的技术方案，以下将结合具体的实施例详细说明本申请的技术方案。如果实施例中未注明的实验具体条件，通常按照常规条件，或者按照试剂公司所推荐的条件；下述实施例中所用的试剂、耗材等，如无特殊说明，均可通过商业途径获得。
本发明实施例中用到的高氏一号培养基配方为：可溶性淀粉20g、KNO3 1g、K2HPO40.5g、MgSO4·7H2O 0.5g、NaCl 0.5g、FeSO4·7H2O 0.01g、琼脂20g、水1000mL，pH＝7.4-7.6。
高氏一号液体培养基的配方为：可溶性淀粉20g、KNO3 1g、K2HPO4 0.5g、MgSO4·7H2O 0.5g、NaCl 0.5g、FeSO4·7H2O 0.01g、水1000mL，pH＝7.4-7.6。
实施例1：菌株的分离
菌株分离自盐碱地棉花根际土壤。土壤取样于山东省东营市垦利区永安镇，为连续种植棉花5年以上的盐碱土壤。
具体分离方法为：称取混匀后的土样5g，放入100mL富集培养基中，37℃、150rpm振荡培养7d。取富集培养物1mL进行10-1～10-5系列稀释，然后取10-2、10-3、10-4三个稀释度涂布至含选择培养基的平板上，37℃培养7d。分别挑取单菌落划线至含选择培养基的平板上，37℃培养7d。挑取单菌落转接至保藏培养基试管斜面上，37℃培养7d，长满菌苔后，置于4℃冰箱中保存备用。
所述富集培养基的配方为：邻苯二甲酸800mg、KNO3 1g、K2HPO4 0.5g、MgSO4·7H2O0.5g、NaCl 0.5g、FeSO4·7H2O 0.01g、水1000mL，pH8.5。
所述选择性培养基的配方为：邻苯二甲酸1000mg、KNO3 1g、K2HPO4 0.5g、MgSO4·7H2O 0.5g、NaCl 0.5g、FeSO4·7H2O 0.01g、水1000mL，琼脂20g，pH8.5。
所述保藏培养基的配方为：对羟基苯甲酸1000mg、可溶性淀粉20g、KNO3 1g、K2HPO40.5g、MgSO4·7H2O 0.5g、NaCl 0.5g、FeSO4·7H2O 0.01g、琼脂20g、水1000mL，pH＝7.4-7.6。
将各株分离物分别转接入添加1000mg/L苯烯丙酸、1000mg/L对羟基苯甲酸或1000mg/L阿魏酸的基础培养基中，37℃、150rpm振荡培养7d后，采用高效液相色谱法测定苯烯丙酸、对羟基苯甲酸、阿魏酸的降解率，筛选出1株对三种自毒物质均具有较好降解效果的分离物，即PAPM18菌株。
所述基础培养基的配方为：可溶性淀粉20g、KNO3 1g、K2HPO4 0.5g、MgSO4·7H2O0.5g、NaCl 0.5g、FeSO4·7H2O 0.01g、琼脂20g、水1000mL、pH 8.5。
所述高效液相色谱法测定苯烯丙酸、对羟基苯甲酸、阿魏酸降解率时采用的条件为：以乙腈和水(用乙酸调节pH2.8)为流动相，流速1.0mL/min，柱温25℃，检测波长280nm。采用梯度洗脱，0-35min，乙腈从5％提高到40％，36-45min，乙腈保持40％，46-50min，乙腈从40％下降到5％。
实施例2：菌株的鉴定
1.形态与生理生化特征：
所述PAPM18菌株的形态特征为：在高氏1号培养基上单菌落扁平、圆形或近圆形，表面干燥。菌落初为白色，逐渐变成淡黄色。中央环状凹陷，外缘有一同心轮纹，边缘较为光滑，略呈不规则波纹状，背面观呈土黄色。基内菌丝丝无横隔，气生丝柔曲，孢子丝直或柔曲，孢子表面光滑，椭圆形。
所述PAPM18菌株的生理生化特征为：硝酸盐还原试验阳性、淀粉水解试验阳性、D-葡萄糖试验阳性、D-果糖试验阳性、蔗糖利用试验阳性、麦芽糖利用试验阳性、硫化氢试验阴性、L-肌醇试验阴性、D-甘露醇试验阴性、纤维素水解试验阴性、牛奶凝固与胨化试验阴性、明胶液化试验阳性。
2.16S rDNA序列分析：
将PAPM18菌株接种到高氏一号液体培养基中，37℃、150r/min摇床培养72h。收集菌体，提取总DNA，然后以其为模板，在原核生物16S rRNA基因的通用引物：F27:5′-AGA GTTTGA TCA TGG CTC AG-3′(SEQ ID NO.1)和F27:5′-AGA GTT TGA TCA TGG CTC AG-3′(SEQID NO.2)的引导下进行16S rDNA基因的PCR扩增。扩增条件为：95℃预变性3min，94℃变性1min，55℃复性1min，72℃延伸1.5min，共30个循环，72℃延伸10min。扩增产物经1％琼脂糖凝胶电泳分离后，采用胶回收试剂盒回收，交由上海生工生物技术有限公司测序，所得序列如序列表中SEQ ID NO.3所示。将所测16S rDNA序列与GenBank数据库中的序列比对，进行多序列同源性分析，并构建系统发育树，如图1所示。
基于上述对菌株的形态学鉴定和分子学鉴定结果，将分离得到的PAPM18菌株鉴定为黄赭色链霉菌(Streptomyces silaceus)，分类命名为黄赭色链霉菌Streptomycessilaceus。并对该菌株进行生物保藏，保藏信息如下：
菌种名称：黄赭色链霉菌
拉丁名：Streptomyces silaceus
保藏机构：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心
保藏机构简称：CGMCC
地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号
保藏日期：2018.07.04.
保藏中心登记入册编号：CGMCC NO.16054。
实施例3：黄赭色链霉菌PAPM18对苯烯丙酸、对羟基苯甲酸、阿魏酸的降解试验
制备含苯烯丙酸的培养基，其配方为：苯烯丙酸1000mg、可溶性淀粉20g、KNO3 1g、K2HPO4 0.5g、MgSO4·7H2O 0.5g、NaCl 6g、FeSO4·7H2O 0.01g、水1000mL，pH＝7.4-7.6。
制备含对羟基苯甲酸的培养基，其配方为：对羟基苯甲酸1000mg、可溶性淀粉20g、KNO3 1g、K2HPO4 0.5g、MgSO4·7H2O 0.5g、NaCl 6g、FeSO4·7H2O 0.01g、水1000mL，pH＝7.4-7.6。
制备含阿魏酸的培养基，其配方为：阿魏酸1000mg、可溶性淀粉20g、KNO3 1g、K2HPO4 0.5g、MgSO4·7H2O 0.5g、NaCl 6g、FeSO4·7H2O 0.01g、水1000mL，pH＝7.4-7.6。
将黄赭色链霉菌PAPM18转接入上述三种培养基中，37℃、150rpm振荡培养7d。取培养液15mL，4500r/min离心15min，弃沉淀，上清液采用15mL二氯甲烷萃取。萃取相采用真空旋转蒸发仪蒸干，残留物用1mL甲醇溶解，备用。
采用高效液相色谱法测定对苯烯丙酸、对羟基苯甲酸、阿魏酸降解率时采用的条件为：以乙腈和水(用乙酸调节pH2.8)为流动相，流速1.0mL/min，柱温25℃，检测波长280nm。采用梯度洗脱，0-35min，乙腈从5％提高到40％，36-45min，乙腈保持40％，46-50min，乙腈从40％下降到5％。
高效液相色谱法检测结果表明，在高盐环境条件下，黄赭色链霉菌PAPM18培养7天，对自毒物质苯烯丙酸、对羟基苯甲酸、阿魏酸的降解率分别为78％、69％、74％。
实施例4：黄赭色链霉菌PAPM18菌株活菌菌剂的制备
(1)菌种活化：将黄赭色链霉菌PAPM18转接入高氏一号培养基试管斜面，于37℃培养72-96h进行活化。
(2)三角瓶种子制备：用接种环刮取活化后的黄赭色链霉菌PAPM18菌苔，接种于高氏一号液体培养基中，37℃培养72-96h。
(3)种子罐菌种制备：将三角瓶种子以4-5％(体积百分比)的接种量转接入装有7L高氏一号液体培养基的10L种子罐中，于37℃培养72-96h，全程搅拌转速150rpm，0-48h通风量为3.5L/min，49-96h通风比为7L/min。
(4)发酵培养：将种子罐菌种以4-5％(体积百分比)的接种量转接入500L的发酵罐。发酵罐内装发酵培养基中400L，37℃培养72-96h，即为黄赭色链霉菌PAPM18的发酵液。全程搅拌转速为150rpm，0-48h通风量为200L/min，49-96h通风量为400L/min。发酵结束后，发酵液中黄赭色链霉菌PAPM18的活菌数为(2～3)×109cfu/mL。
发酵培养基的配方为：玉米淀粉15g、玉米浆15g、KNO3 1g、K2HPO4 0.5g、MgSO4·7H2O 0.5g、NaCl 0.5g、FeSO4·7H2O 0.01g、邻苯二甲酸500mg、复合酶制剂2g、水1000mL，初始pH7.5。所述复合酶制剂的组成为碱性蛋白酶35％、中温α-淀粉酶65％。碱性蛋白酶和中温α-淀粉酶均由泰安信得利生物科技有限公司生产，产品规格分别为20万U/g与2000U/g。碱性蛋白酶的活力单位定义与检测方法执行国家标准GB/T 23527-2009《蛋白酶制剂》，中温α-淀粉酶的酶活力单位定义与检测方法执行GB/T 24401-2009《α-淀粉酶制剂》。
发酵培养基的制备方法为：按照配方称取原料，溶于水中，加热至50-55℃，保温2-2.5h，然后升温至121℃，保温30min进行灭菌。
(5)发酵结束后，向发酵液中加入海藻糖1％(w/w)、糖蜜5％(w/w)、生物黄腐酸粉15％(w/w)，搅拌均匀，然后于进口温度180℃，出口温度70℃的条件下进行喷雾干燥，获得活菌制剂原粉。所述生物黄腐酸粉由山东泉林嘉有肥料有限责任公司生产，其黄腐酸含量为40％。
(6)将黄赭色链霉菌PAPM18活菌制剂原粉与生物黄腐酸粉按1：3的比例混匀，即得黄赭色链霉菌PAPM18菌株活菌菌剂，其活菌含量为(2.0～3.0)×109cfu/g。
使用方法：黄赭色链霉菌PAPM18活菌菌剂加水稀释60～80倍，移苗时蘸根或浇水时随水冲施。
实施例5：黄赭色链霉菌PAPM18菌剂对盐碱地棉花的促生作用
试验地位于山东省东营市垦利区，土壤类型为滨海盐渍土。耕层土壤pH8.06，全盐含量2.43‰，有机质含量7.5g/kg，全氮含量837mg/kg，速效氮含量57.6mg/kg，速效磷含量23.17mg/g，速效钾含量80.65mg/g。棉花品种采用鲁棉研28，播种日期为2017年4月18日。试验设2个处理：T1：施尿素300kg/hm2，过磷酸钙500kg/hm2，硫酸钾200kg/hm2，有机肥3000kg/hm2，经灭菌处理的黄赭色链霉菌PAPM18菌剂15kg/hm2；T2：施尿素300kg/hm2，过磷酸钙500kg/hm2，硫酸钾200kg/hm2，有机肥3000kg/hm2，黄赭色链霉菌PAPM18活菌制剂15kg/hm2。全部肥料均为基施。各处理均3次重复，随机区组设计，小区面积90m2，小区间设1.5m宽间道。
试验结果见表1。
表1黄赭色链霉菌PAPM18活菌菌剂对棉花的促生与增产作用
Figure BDA0001751690470000091
由表1可以看出，施用黄赭色链霉菌PAPM18活菌菌剂的处理T2棉花株高增加8.25％，籽棉产量增加10.94％。由此可见，黄赭色链霉菌PAPM18活菌菌剂对盐碱地棉花具有促生与增产作用。
以上所述仅为本申请的优选实施例而已，并不用于限制本申请，对于本领域的技术人员来说，本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。
SEQUENCE LISTING
<110> 山东农业大学
<120> 一株耐盐碱黄赭色链霉菌及其应用
<130> 2018
<160> 3
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
agagtttgat catggctcag 20
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
agagtttgat catggctcag 20
<210> 3
<211> 1287
<212> DNA
<213> 黄赭色链霉菌（Streptomyces silaceus）PAPM18
<400> 3
cggtgtgtac tttgcccggg aacgtattca cggcatcaat gctgatctgc gattactagc 60
gactccgact tcatggggtc gagttgcaga ccccaatccg aactgagacc ggctttttga 120
gattcgctcc acctcgcggt atcgcagctc attgtaccgg ccattgtagc acgtgtgcag 180
cccaagacat aaggggcatg aagacttgac gtcgtcccca ccttcctccg agttgacccc 240
ggcggtctcc cgtgagtccc caacaccccc gaaggggctt gctggcaaca cgggacaagg 300
gttgcgctcg ttgcgggact taacccaaca tctcacgaca cgagctgacg acagccatgc 360
accacctgta caccgaccac aaggggggca ccatctctga tgctttccgg tgtatgtcaa 420
gccttggtaa ggttcttcgc gttgcgtcga attaagccac atgctccgcc gcttgtgcgg 480
gcccccgtca attcctttga gttttagcct tgcggccgta ctccccaggc ggggaactta 540
atgcgttagc tgcggcacgg acgacgtgga atgtcgccca cacctagttc ccaccgttta 600
cggcgtggac taccagggta tctaatcctg ttcgctcccc acgctttcgc tcctcagcgt 660
cagtatcggc ccagagatcc gccttcgcca ccggtgttcc tcctgatatc tgcgcatttc 720
accgctacac caggaattcc gatctcccct accgaactct agcctgcccg tatcgactgc 780
agacccgggg ttaagccccg ggctttcaca accgacgtga caagccgcct acgagctctt 840
tacgcccaat aattccggac aacgcttgcg ccctacgtat taccgcggct gctggcacgt 900
agttagccgg cgcttcttct gcaggtaccg tcactttcgc ttcttccctg ctgaaagagg 960
tttacaaccc gaaggccgtc atccctcacg cggcgtcgct gcatcaggct ttcgcccatt 1020
gtgcaatatt ccccactgct gcctcccgta ggagtctggg ccgtgtctca gtcccagtgt 1080
ggccggtcgc cctctcaggc cggctacccg tcgtcgcctt ggtgagcttc tacctcacca 1140
actagctgat aggccgcggg ctcatccttc accgccggag ctttcaaccc tctcccatgc 1200
gagagagagt gttatccggt attagacccc gtttccaggg cttgtcccag agtgaagggc 1260
agattgccca cgtgttactc acccgtt 1287

Claims (7)

1.一株黄赭色链霉菌（Streptomyces silaceus）PAPM18，其生物保藏号为：CGMCCNO.16054。
2.含有权利要求1所述黄赭色链霉菌（Streptomyces silaceus）PAPM18的菌剂；所述菌剂为黄赭色链霉菌PAPM18活菌菌剂。
3.根据权利要求2所述的菌剂，其特征在于，所述菌剂中还包括辅料和/或载体。
4.根据权利要求2所述的菌剂，其特征在于，所述菌剂的剂型为液剂、乳剂、悬浮剂、颗粒剂、粉剂、可湿性粉剂或水分散剂。
5.一种黄赭色链霉菌PAPM18活菌菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
将权利要求1所述的黄赭色链霉菌PAPM18接种至发酵培养基中，35-37℃培养72-96h，得到黄赭色链霉菌PAPM18发酵液；
向黄赭色链霉菌PAPM18发酵液中加入海藻糖、糖蜜和生物黄腐酸粉，搅拌均匀，干燥，获得活菌菌剂；
黄赭色链霉菌PAPM18的接种量为4-5%；
所述发酵培养基的配方为：玉米淀粉15g、玉米浆15g、KNO3 1g、K2HPO4 0.5g、MgSO4·7H2O 0.5g、NaCl 0.5g、FeSO4· 7H2O 0.01g、邻苯二甲酸500mg、复合酶制剂2g、水1000mL，初始pH7.5；所述复合酶制剂的组成为碱性蛋白酶35%、中温α-淀粉酶65%。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，海藻糖、糖蜜和生物黄腐酸粉的加入量分别为黄赭色链霉菌PAPM18发酵液重量的1%、5%和15%。
7.权利要求1所述的黄赭色链霉菌（Streptomyces silaceus）PAPM18或权利要求2-4任一项所述的菌剂在降解盐碱地棉花产生的酚酸类自毒物质、促进棉花生长或提高棉花产量中的应用；所述酚酸类自毒物质为苯烯丙酸、对羟基苯甲酸和阿魏酸。
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