CN108853473B - 一种活性八肽在保护感觉毛细胞方面的应用 - Google Patents
一种活性八肽在保护感觉毛细胞方面的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108853473B CN108853473B CN201810915406.0A CN201810915406A CN108853473B CN 108853473 B CN108853473 B CN 108853473B CN 201810915406 A CN201810915406 A CN 201810915406A CN 108853473 B CN108853473 B CN 108853473B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- hair cells
- sensory hair
- octapeptide
- active
- active octapeptide
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 210000002768 hair cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 68
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 title claims abstract description 59
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 15
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract description 9
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 1
- 239000002647 aminoglycoside antibiotic agent Substances 0.000 abstract description 12
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 11
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 11
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 abstract description 11
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 abstract description 11
- 230000006378 damage Effects 0.000 abstract description 7
- 231100000199 ototoxic Toxicity 0.000 abstract description 6
- 230000002970 ototoxic effect Effects 0.000 abstract description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 5
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 abstract description 4
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 abstract description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 abstract description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 abstract description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 3
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 abstract description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 abstract description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 abstract description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 abstract description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 241000252212 Danio rerio Species 0.000 description 45
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical group O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 37
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 37
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 37
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 16
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 6
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- 238000011160 research Methods 0.000 description 6
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 210000003027 ear inner Anatomy 0.000 description 5
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- 206010033109 Ototoxicity Diseases 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 4
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 4
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 4
- 231100000262 ototoxicity Toxicity 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 206010011891 Deafness neurosensory Diseases 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 208000009966 Sensorineural Hearing Loss Diseases 0.000 description 3
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 3
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 3
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 3
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000003477 cochlea Anatomy 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 208000023573 sensorineural hearing loss disease Diseases 0.000 description 3
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 2
- KPKZJLCSROULON-QKGLWVMZSA-N Phalloidin Chemical compound N1C(=O)[C@@H]([C@@H](O)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C[C@@](C)(O)CO)NC(=O)[C@H](C2)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]3C[C@H](O)CN3C(=O)[C@@H]1CSC1=C2C2=CC=CC=C2N1 KPKZJLCSROULON-QKGLWVMZSA-N 0.000 description 2
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 2
- 210000002469 basement membrane Anatomy 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000002842 otolith Effects 0.000 description 2
- 210000001265 otolithic membrane Anatomy 0.000 description 2
- 238000005192 partition Methods 0.000 description 2
- 210000005077 saccule Anatomy 0.000 description 2
- RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 3,7-bis(dimethylamino)phenothiazin-5-ium Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 206010011803 Cystocele Diseases 0.000 description 1
- 206010011878 Deafness Diseases 0.000 description 1
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 1
- 206010022998 Irritability Diseases 0.000 description 1
- 238000012449 Kunming mouse Methods 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000580999 Neptunea Species 0.000 description 1
- 241000356847 Otolithes Species 0.000 description 1
- 108010009711 Phalloidine Proteins 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 229940126574 aminoglycoside antibiotic Drugs 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 231100000895 deafness Toxicity 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000249 desinfective effect Effects 0.000 description 1
- 208000032625 disorder of ear Diseases 0.000 description 1
- 230000000857 drug effect Effects 0.000 description 1
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 1
- 210000000883 ear external Anatomy 0.000 description 1
- 210000000959 ear middle Anatomy 0.000 description 1
- 210000005069 ears Anatomy 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 208000016354 hearing loss disease Diseases 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 210000000067 inner hair cell Anatomy 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L magnesium sulphate Substances [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000013011 mating Effects 0.000 description 1
- 229960000907 methylthioninium chloride Drugs 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 230000011514 reflex Effects 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 210000002480 semicircular canal Anatomy 0.000 description 1
- 230000035807 sensation Effects 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 229940072040 tricaine Drugs 0.000 description 1
- FQZJYWMRQDKBQN-UHFFFAOYSA-N tricaine methanesulfonate Chemical compound CS([O-])(=O)=O.CCOC(=O)C1=CC=CC([NH3+])=C1 FQZJYWMRQDKBQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- A61K38/08—Peptides having 5 to 11 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
- A23L33/18—Peptides; Protein hydrolysates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/16—Otologicals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P39/00—General protective or antinoxious agents
- A61P39/06—Free radical scavengers or antioxidants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明涉及一种活性八肽在保护感觉毛细胞方面的应用。一种活性八肽在保护感觉毛细胞方面的应用，所述八肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明通过将含8个氨基酸残基的活性肽用于氨基糖苷类抗生素所导致的感觉毛细胞损伤中；检测后首次发现，该多肽化合物可以通过降低机体内部活性氧的含量，从而对感觉毛细胞起到保护作用，改善耳毒性药物对感觉毛细胞的损害，且毒副作用小，是一种很有开发前景的听力保护药物，具有广阔的市场前景。
Description
技术领域
本发明涉及一种活性八肽在保护感觉毛细胞方面的应用，属于生物医药技术领域。
背景技术
氨基糖苷类抗生素的水溶性好、化学性质稳定、抗菌谱广、抗菌能力强、排泄良好,因此在临床上应用非常广泛,半个多世纪以来一直是抗革兰阴性和阳性细菌的有效药物。但是, 这类药物具有较强的耳毒性，可杀死哺乳动物内耳中的感觉毛细胞。
感觉毛细胞是一种听觉感受细胞，它可以将外界的声音刺激转化成神经电信号，从而产生听觉。但是在哺乳动物的听觉系统中，感觉毛细胞作为一种终末分化细胞，是不能再生的。因此，由于氨基糖苷类抗生素所导致的感音神经性耳聋，至今没有有效药物可以治愈。如何保护感觉毛细胞免受氨基糖苷类抗生素的侵害，已成为防治感音神经性耳聋疾病的关键。
研究发现，氨基糖苷类抗生素的耳毒性机制，与活性氧的存在密切相关。体外实验已证实，在氨基糖苷类抗生素诱导的感觉毛细胞损伤过程中，均伴有活性氧的应激性增加；而在抗氧化剂存在的情况下，则可以在一定程度上避免氨基糖苷类抗生素所引起的感觉毛细胞损伤。因此，探寻一种具有感觉毛细胞保护作用的抗氧化物质，并深入研究其作用机理，将有助于感音神经性耳聋疾病的治疗，并有助于推动其相关防治药物的研发，具有非常重要的意义。
在药物耳毒性研究领域，斑马鱼是除小鼠外又一常用脊椎动物模式生物。斑马鱼虽无外耳和中耳，但却具有脊椎动物典型的内耳结构。它的内耳由三个半规管与耳石器官组成，其感觉毛细胞即位于耳石的囊斑中。斑马鱼的感觉毛细胞在发育、结构和功能等方面均与哺乳动物高度同源[1]，均易被耳毒性物质损伤[2]。除以上特征外，斑马鱼感觉毛细胞毛细胞尚具有哺乳动物不具备的独特优势。斑马鱼除内耳中的感觉毛细胞外，其侧线系统中还富含大量受神经支配的感觉毛细胞。该侧线处的感觉毛细胞在结构、功能和基因调控等方面，均与人类内耳中的感觉毛细胞高度同源，且便于活体染色及观察[3]。
目前寻找对药物耳毒性损伤具有明显抑制作用的新型化合物，成为保护听觉感受细胞和治疗因听觉感受细胞损伤而导致的耳聋疾病的关键。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，提供一种活性八肽在保护感觉毛细胞方面的应用。
本发明技术方案如下：
一种活性八肽在保护感觉毛细胞方面的应用，所述活性八肽的氨基酸序列如SEQID NO.1所示。
上述活性八肽的氨基酸序列SEQ ID NO.1如下：Tyr-Ile-Ala-Glu-Asp-Ala-Glu-Arg。
根据本发明优选的，所述应用具体为活性八肽作为药效成分在制备治疗耳部疾病药物中的应用。
进一步优选的，所述耳部疾病为因感觉毛细胞受损导致的耳部疾病。
根据本发明优选的，所述应用具体为活性八肽作为有效成分在制备保护感觉毛细胞药物或食品中的应用。
有益效果
本发明通过将含8个氨基酸残基的活性肽用于氨基糖苷类抗生素所导致的感觉毛细胞损伤中；检测后首次发现，该多肽化合物可以通过降低机体内部活性氧的含量，从而对感觉毛细胞起到保护作用，改善耳毒性药物对感觉毛细胞的损害，且毒副作用小，是一种很有开发前景的听力保护药物，具有广阔的市场前景。
附图说明
图1为60μg/ml活性八肽处理斑马鱼后，毛细胞照片；
图中：A为对照组；B为庆大霉素造模组；C为活性八肽处理组；方框为耳部周围的五组感觉毛细胞。
图2为60μg/ml活性八肽处理斑马鱼后，毛细胞数量统计的柱状图；
图中：***表示p<0.001。
图3为80μg/ml活性八肽处理斑马鱼后，毛细胞照片；
图中：A为对照组；B为庆大霉素造模组；C为活性八肽处理组；方框为耳部周围的五组感觉毛细胞。
图4为80μg/ml活性八肽处理斑马鱼后，毛细胞数量统计的柱状图；
图中：***表示p<0.001。
图5为90μg/ml活性八肽处理斑马鱼后，毛细胞照片；
图中：A为对照组；B为庆大霉素造模组；C为活性八肽处理组；方框为耳部周围的五组感觉毛细胞。
图6为90μg/ml活性八肽处理斑马鱼后，毛细胞数量统计的柱状图；
图中：***表示p<0.001。
图7为不同浓度活性八肽处理斑马鱼后，其体内活性氧的含量照片；
图中：A为对照组；B为庆大霉素造模组；C为60μg/ml活性八肽处理组；D为80μg/ml活性八肽处理组；E为90μg/ml活性八肽处理组。
图8为活性八肽处理小鼠后，外毛细胞数量统计的柱状图；
图中：**表示p<0.01。
图9为活性八肽处理小鼠后，内毛细胞数量统计的柱状图；
图中：*表示p<0.05。
具体实施方式
下面结合实施例及说明书附图对本发明的技术方案做进一步阐述，但本发明所保护范围不限于此。
试剂配制：庆大霉素准品购自青岛生工生物科技有限公司，该标准品使用生理盐水溶解后，配制为1000M的储液。活性氧检测试剂盒购置上海碧云天生物技术有限公司。
胚胎培养水组分如下：
NaCl 5mM，KCl 0.17mM，CaCl2 0.4mM，MgSO4 0.16mM，去离子水配制。
实施例1：60μg/ml活性八肽样品对斑马鱼感觉毛细胞的保护作用
实验方法
1、斑马鱼样本前处理：
采用健康性成熟的AB系斑马鱼，按雌雄1：1的比例放入交配缸内，中间放置隔板，置于黑暗环境中，次日亮灯前抽去隔板，光照刺激使其排卵，排卵半小时后将成鱼捞出，将排卵时间控制在半小时内，以降低胚胎间发育时间的差异。收集受精卵，并用新的斑马鱼胚胎培养水冲洗3遍，对受精卵进行消毒和清洗；随后将受精卵移入干净的斑马鱼胚胎培养用水中，并向所述培养水中加入0.2ppm亚甲基蓝，28℃下、14h光照/10h黑暗周期下，控光培养，中间每24h换约1/3水，并及时吸出死亡胚胎。将出生后6天的斑马鱼置于解剖镜下，选取发育正常的斑马鱼胚胎，放入6孔板中，每孔20尾，每组3个平行孔。
2、活性八肽处理：
采用人工合成方式合成氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的活性八肽，该八肽采用刘振南所述的Fmoc固相合成法[4]合成。
设置1个对照组，1个庆大霉素造模组，1个活性八肽处理组。移除6孔板中的培养水，对照组加入6ml培养水溶液；庆大霉素造模组6ml培养水中加入终浓度为150M的庆大霉素；活性八肽处理组6ml培养水中同时加入终浓度为150M的庆大霉素和60μg/ml的活性八肽。将以上各组斑马鱼胚胎分别放入28℃恒温培养箱中，14h光照/10h黑暗周期下培养1小时。
3、斑马鱼感觉毛细胞标记：
1h恒温培养结束后，将上述三组6孔板中的液体吸除，加胚胎培养水分别清洗各组斑马鱼胚胎3次。随后分别将终浓度为5M的FM1-43染料加入上述三组斑马鱼胚胎中，28℃条件下，避光孵育5min。孵育结束后，将FM1-43溶液吸除，加胚胎培养水清洗各组斑马鱼胚胎3次。
4、感觉毛细胞数量统计：
利用质量浓度为0.02％的三卡因溶液将上述三组斑马鱼胚胎麻醉。在荧光显微镜下采集斑马鱼胚胎中显示绿色荧光的感觉毛细胞图像。根据采集图片，分别对各组斑马鱼胚胎中位于耳部周围的五组感觉毛细胞进行数量统计。
实验结果如图1、图2所示，表明在活体动物模型中，60μg/ml活性八肽可以有效减缓庆大霉素诱导的感觉毛细胞的缺失，与庆大霉素造模组相比，具有统计学差异。证明该浓度下的活性八肽可以在机体内部，有效保护感觉毛细胞，能够改善氨基糖苷类抗生素诱导的耳毒性损害。
实施例2：80μg/ml活性八肽样品对斑马鱼感觉毛细胞的保护作用
斑马鱼样本前处理、斑马鱼感觉毛细胞标记与感觉毛细胞数量统计同实施例1。
活性八肽处理：
采用人工合成方式合成氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的活性八肽，该八肽采用刘振南所述的Fmoc固相合成法[4]合成。
设置1个对照组，1个庆大霉素造模组，1个活性八肽处理组。移除6孔板中的培养水，对照组加入6ml培养水溶液；庆大霉素造模组6ml培养水中加入终浓度为150M的庆大霉素；八肽处理组6ml培养水中同时加入终浓度为150M的庆大霉素和80μg/ml的活性八肽。将以上各组斑马鱼胚胎分别放入28℃恒温培养箱中，14h光照/10h黑暗周期下培养1小时。
实验结果如图3、图4所示，表明在活体动物模型中，80μg/ml活性八肽可以有效减缓庆大霉素诱导的感觉毛细胞的缺失，与庆大霉素造模组相比，具有统计学差异。证明该浓度下的活性八肽可以在机体内部，有效保护感觉毛细胞，能够改善氨基糖苷类抗生素诱导的耳毒性损害。
实施例3：90μg/ml活性八肽样品对斑马鱼感觉毛细胞的保护作用
斑马鱼样本前处理、斑马鱼感觉毛细胞标记与感觉毛细胞数量统计同实施例1。
活性八肽处理：
采用人工合成方式合成氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的活性八肽，该八肽采用刘振南所述的Fmoc固相合成法[4]合成。
设置1个对照组，1个庆大霉素造模组，1个活性八肽处理组。移除6孔板中的培养水，对照组加入6ml培养水溶液；庆大霉素造模组6ml培养水中加入终浓度为150M的庆大霉素；活性八肽处理组6ml培养水中同时加入终浓度为150M的庆大霉素和90μg/ml的活性八肽。将以上各组斑马鱼胚胎分别放入28℃恒温培养箱中，14h光照/10h黑暗周期下培养1小时。
实验结果如图5、图6所示，表明在活体动物模型中，90μg/ml活性八肽可以有效减缓庆大霉素诱导的感觉毛细胞的缺失，与庆大霉素造模组相比，具有统计学差异。证明该浓度下的活性八肽可以在机体内部，有效保护感觉毛细胞，能够改善氨基糖苷类抗生素诱导的耳毒性损害。
实施例4：活性八肽样品处理后斑马鱼体内活性氧含量检测
斑马鱼样本前处理同实施例1。
活性八肽处理：
采用人工合成方式合成氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的活性八肽，该八肽采用刘振南所述的Fmoc固相合成法[4]合成。
设置1个对照组，1个庆大霉素造模组，3个活性八肽处理组。移除6孔板中的培养水，对照组加入6ml培养水溶液；庆大霉素造模组6ml培养水中加入终浓度为150M的庆大霉素；3 个活性八肽处理组在6ml培养水中，分别同时加入终浓度为150M的庆大霉素和60μg/ml的活性八肽、150M的庆大霉素和80μg/ml的活性八肽，以及150M的庆大霉素和90μg/ml的活性八肽。将以上各组斑马鱼胚胎分别放入28℃恒温培养箱中，14h光照/10h黑暗周期下培养1小时。
体内活性氧检测：
1h恒温培养结束后，将上述五组6孔板中的液体吸除，加胚胎培养水分别清洗各组斑马鱼胚胎3次。随后使用活性氧检测试剂盒对上述各组斑马鱼胚胎体内的活性氧含量进行检测。
实验结果如图7所示，该结果表明活性八肽使庆大霉素诱导的体内活性氧含量显著降低，进一步证实了该活性八肽的感觉毛细胞保护作用。
实施例5：活性八肽对小鼠感觉毛细胞的保护作用
采用人工合成方式合成氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的活性八肽，该八肽采用刘振南所述的Fmoc固相合成法[4]合成。
选取9只健康，耳廓反射正常，体重20-22g的成年昆明鼠，雌雄不限。将其随机分成对照组、庆大霉素处理组、活性八肽处理组，每组3只。对照组腹腔注射生理盐水0.25ml；庆大霉素处理组腹腔注射庆大霉素，注射剂量为100mg/kg；活性八肽处理组腹腔同时注射庆大霉素和活性八肽，注射剂量为：庆大霉素100mg/kg，活性八肽70mg/kg，连续注射6天。6天后处死上述各组小鼠，取出其耳蜗并制备耳蜗基底膜铺片。利用鬼笔环肽对基底膜铺片中的感觉毛细胞进行标记。利用激光共聚焦显微镜，在耳蜗中回选取一部分感觉毛细胞，对其数量进行统计。
实验结果如图8、9所示，在小鼠模型中，活性八肽可以有效减缓庆大霉素诱导的感觉毛细胞的缺失，与庆大霉素造模组相比，具有统计学差异。
参考文献：
1、Julie B S,Michael E S.Cell proliferation follows acoustically-induced hair cell bundle loss in the zebrafish saccule Cell proliferationfollows acoustically-induced hair cell bundle loss in the zebrafish saccule[J].Hearing research,2009,67-79.
2、Harris J A,Cheng A G,Cunningham L L,et al.Neomycin-Induced HairCell Death and Rapid Regeneration in the Lateral Line of Zebrafish(Daniorerio)[J].Journal of the Association for Research in Otolaryngology,2003,4(2):219-234.
3、Steve F P，Zebrafish[B].2010.
4、刘振南，黄强.Fmoc固相合成法.广西民族学院学报,1999,5(2):110-112。
序列表
<110> 山东省科学院生物研究所
<120> 一种活性八肽在保护感觉毛细胞方面的应用
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 8
<212> PRT
<213> 香螺(Neptunea arthritica cumingii)
<400> 1
Tyr Ile Ala Glu Asp Ala Glu Arg
1 5
Claims (2)
1.一种活性八肽在制备保护感觉毛细胞药物中的应用，所述八肽的氨基酸序列如SEQID NO.1所示。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，活性八肽作为药效成分在制备治疗耳部疾病药物中的应用；所述耳部疾病为因感觉毛细胞受损导致的耳部疾病。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810915406.0A CN108853473B (zh) | 2018-08-13 | 2018-08-13 | 一种活性八肽在保护感觉毛细胞方面的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810915406.0A CN108853473B (zh) | 2018-08-13 | 2018-08-13 | 一种活性八肽在保护感觉毛细胞方面的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN108853473A CN108853473A (zh) | 2018-11-23 |
| CN108853473B true CN108853473B (zh) | 2021-08-31 |
Family
ID=64317794
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201810915406.0A Active CN108853473B (zh) | 2018-08-13 | 2018-08-13 | 一种活性八肽在保护感觉毛细胞方面的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN108853473B (zh) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109021070B (zh) * | 2018-08-13 | 2019-05-14 | 山东省科学院生物研究所 | 具有心脑血管保护功能的多肽及其制备方法与应用 |
| CN111423491B (zh) * | 2020-04-20 | 2022-09-06 | 山东省科学院生物研究所 | 一种活性十肽及其在制备保护听觉毛细胞产品中的应用 |
| CN113730548B (zh) * | 2020-05-14 | 2023-06-30 | 山东省科学院生物研究所 | 一种活性十肽在保护听觉毛细胞方面的应用 |
| CN112618695B (zh) * | 2020-12-29 | 2022-07-15 | 郑州大学 | 一种大豆肽在制备改善听觉障碍药物中的应用 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101480385A (zh) * | 2008-01-11 | 2009-07-15 | 曲雁 | 一种蛋氨酸的用途 |
-
2018
- 2018-08-13 CN CN201810915406.0A patent/CN108853473B/zh active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101480385A (zh) * | 2008-01-11 | 2009-07-15 | 曲雁 | 一种蛋氨酸的用途 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| Further characterization of Tsol-p27 as a diagnostic antigen in sub-Saharan Africa;Noémia Nhancupe et al.;《Exp Parasitol.》;20131130;第135卷(第3期);573-579 * |
| Ｎ-乙酰半胱氨酸对活性氧诱导耳蜗毛细胞凋亡的抑制作用的观察;原红艳 等;《听力学及言语疾病杂志》;20121231;第20卷(第3期);266-268 * |
| Sesn2 gene ablation enhances susceptibility to gentamicin-induced hair cell death via modulation of AMPK/mTOR signaling;Eliane Ebnoether et al.;《Cell Death Discovery》;20170529;1-9 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN108853473A (zh) | 2018-11-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN108853473B (zh) | 一种活性八肽在保护感觉毛细胞方面的应用 | |
| Palmer | Bacterial biofilms in chronic rhinosinusitis | |
| Cong et al. | The enhanced immune protection of Zhikong scallop Chlamys farreri on the secondary encounter with Listonella anguillarum | |
| KR20150004899A (ko) | 각막 내피 세포 접착 촉진제 | |
| CN111423491B (zh) | 一种活性十肽及其在制备保护听觉毛细胞产品中的应用 | |
| US10577404B2 (en) | Polypeptide derivatives from grass carp interferon and application thereof | |
| EP3463395A1 (en) | Stem cell material, compositions, and methods of use | |
| CN113321708B (zh) | 一种人工设计抗菌肽的制备及其在水产上的应用 | |
| JP2021510379A (ja) | 魚類の体表の寄生虫感染症の処置 | |
| CN108184890A (zh) | 一种用于动物原代细胞培养的消毒液及其制备方法 | |
| CN110151761B (zh) | 一种替代抗生素的药物--褪黑素抵抗患儿脑膜炎大肠杆菌病原感染的应用 | |
| US10137156B2 (en) | Composition comprising neural cell and elastin-like polypeptide for treating Parkinson's disease | |
| US20060257374A1 (en) | Use of bdellovibrionaceae as an antimicrobial agent | |
| KR20220124137A (ko) | 중간엽줄기세포 유래 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 난청 예방용 조성물 | |
| CN109750003A (zh) | 一种宽裂解谱绿脓杆菌噬菌体及其消毒应用 | |
| CN113730548B (zh) | 一种活性十肽在保护听觉毛细胞方面的应用 | |
| Ramesh et al. | Feasibility of shrimp gut probionts with anti-vibrio and anti-QS in penaeid culture | |
| WO2019041730A1 (zh) | 一种宠物用无色碘消毒剂及其制备和使用方法 | |
| TWI736995B (zh) | 新穎小分子化合物及其用途 | |
| CN117069819B (zh) | 一种黑腹狼蛛抗菌肽lc-amp-i1及其应用 | |
| CN115444853B (zh) | 一种防治水产动物致病纤毛虫的方法 | |
| CN114736875B (zh) | 一种鸭疫里默氏杆菌噬菌体、其噬菌体组合物及其应用 | |
| US20230310505A1 (en) | Composition for preventing hearing loss containing mesenchymal stem cells or exosomes derived therefrom as active ingredient | |
| CN117100781A (zh) | 肾叶山蚂蝗及其提取物在制备治疗肌肉减少症的药物中的用途 | |
| CN104825574A (zh) | 一种改善睡眠的组合物及其制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |