CN108841949B - 帕金森病早期检测和诊断试剂盒及装置 - Google Patents

帕金森病早期检测和诊断试剂盒及装置 Download PDF

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    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material

Abstract

本发明公开了一种帕金森病早期检测和诊断试剂盒及装置。其中，该试剂盒包括用于检测红细胞中CHCHD2基因表达的试剂。应用本发明的技术方案，仅仅通过检测红细胞中CHCHD2基因的表达即可区分PD患者和健康对照，并能够实现对PD患者的早期诊断和预警；本发明所需样本为静脉血，它的抽取在临床上非常常规，抽取简单，创伤小，患者无抗拒，且检测流程简单，成本低廉，后续数据分析省时省力，出结果快，临床推广容易。

Description

帕金森病早期检测和诊断试剂盒及装置
技术领域
本发明涉及生物医学技术领域，具体而言，涉及一种帕金森病早期检测和诊断试剂盒及装置。
背景技术
帕金森病(Parkinson’s disease，PD)是一种临床常见的神经退行性疾病，目前对该病的诊断主要基于病史、观察主要运动指标以及对药物疗法的反应。然而，症状出现时50％的多巴胺能神经元已经凋亡，导致迟发性诊断，治疗效果差和预后不良。因此，迫切需要开发一种能够早期检测和诊断PD的方法。
目前，关于PD生物标志物的研究主要集中于发现脑脊液内的蛋白生物标志物，α-突触核蛋白及其变体受到了最多的关注。然而，脑脊液中PD蛋白生物标志物检测的缺点主要为：1)脑脊液采集困难，对患者的损伤较大，临床上患者普遍难以接受；2)缺乏早期预警和诊断的蛋白标志物，目前已有的蛋白标志物仅仅能诊断中晚期PD，而不能够早期检测出潜在的PD患者；3)灵敏度低，目前检测脑脊液中蛋白标志物多采用酶联免疫吸附(ELISA)的方法，该方法对于脑脊液中低丰度的蛋白标志物不够灵敏，而采用高灵敏度的电化学发光方法(如MSD技术)成本较高。因此，开发基于临床上容易获取的组织来源，如血液、唾液、尿液等的PD检测方法迫在眉睫。最近，关于血液中PD相关蛋白的研究受到了更多关注；然而，由于样本的复杂性目前还没有取得一致的结果。
另外，基于血液的mRNA表达变化为区分PD患者和健康对照提供了另外一种有希望的生物标志物策略。一项研究比较了伴有或不伴有体位不稳的PD患者的血细胞转录谱，发现了超过200个差异表达的基因，其中一些在PD的多巴胺能细胞模型中也发现失调，说明血液中基因表达的改变可能反映了中枢神经系统中相应基因的变化。此外，另一组研究了大量PD患者血液中的遗传特征，并确定了87个特发性PD患者和健康对照基因之间的区别，进一步支持血液中基因表达改变的改变可作为预测PD的有用指标。但是，血液中基因表达谱检测技术存在以下缺点：上述两项研究均通过基因芯片的方法对血液中表达的所有基因进行筛选，其成本较高，临床上患者难以承受。另外，由于基因较多，数据分析耗时耗力，无法满足临床上对于快速诊断的需求。而且，这两项研究均使用从全血细胞(主要是白细胞)提取的RNA，其在疾病状态期间经常发生核和转录的变化，因此容易受到其它疾病的干扰。
发明内容
本发明旨在提供一种帕金森病早期检测和诊断试剂盒及装置，适用于帕金森病早期临床检测和诊断。
为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种帕金森病早期检测和诊断试剂盒。该试剂盒包括用于检测红细胞中CHCHD2基因表达的试剂。
进一步地，试剂包括检测CHCHD2基因表达的探针和特异扩增CHCHD2基因的引物对。
进一步地，检测CHCHD2基因表达的探针具有如SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列，特异扩增CHCHD2基因的引物对具有如SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列。
进一步地，试剂还包括红细胞用RNA提取试剂。
进一步地，试剂盒还包括检测AHSP基因表达的探针和特异扩增AHSP基因的引物。
进一步地，检测AHSP基因表达的探针具有如SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列，特异扩增AHSP基因的引物对具有如SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示的核苷酸序列。
进一步地，试剂盒还包括液滴稳定剂、RT逆转录酶/Taq酶混合物以及缓冲液。
根据本发明的另一方面，提供了一种检测红细胞中CHCHD2基因表达的产品在制备帕金森病早期检测和诊断工具中的应用。
进一步地，产品包括：通过RT-PCR、实时定量PCR、数字PCR、免疫检测、原位杂交、芯片或高通量测序平台检测红细胞中CHCHD2基因表达水平以检测和诊断早期帕金森病的产品。
进一步地，RT-PCR、实时定量PCR或数字PCR诊断帕金森病的产品至少包括一对特异扩增CHCHD2基因的引物；免疫检测诊断帕金森病的产品包括：与CHCHD2蛋白特异性结合的抗体；原位杂交诊断帕金森病的产品包括：与CHCHD2基因的核酸序列杂交的探针；芯片诊断帕金森病的产品包括：蛋白芯片和基因芯片；其中，蛋白芯片包括与CHCHD2蛋白特异性结合的抗体，基因芯片包括与CHCHD2基因的核酸序列杂交的探针。
根据本发明的再一方面，提供了一种帕金森病早期检测和诊断装置，包括：样品获取单元，用于提取红细胞中的RNA；检测单元，用于检测红细胞中CHCHD2基因的表达水平。
进一步地，装置还包括：比对单元，用于将检测样品中红细胞CHCHD2基因的表达水平与参考值进行比对。
进一步地，检测单元中包括用于检测红细胞中CHCHD2和AHSP基因表达的试剂，试剂包括检测CHCHD2和AHSP基因表达的探针和特异扩增CHCHD2和AHSP基因的引物对。
进一步地，检测CHCHD2基因表达的探针具有如SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列，特异扩增CHCHD2基因的引物对具有如SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列；检测AHSP基因表达的探针具有如SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列，特异扩增AHSP基因的引物对具有如SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示的核苷酸序列。
应用本发明的技术方案，仅仅通过检测红细胞中CHCHD2基因的表达即可区分PD患者和健康对照，并能够实现对PD患者的早期诊断和预警；本发明所需样本为静脉血，它的抽取在临床上非常常规，抽取简单，创伤小，患者无抗拒，且检测流程简单，成本低廉，后续数据分析省时省力，出结果快，临床推广容易。
附图说明
构成本申请的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中：
图1A示出了实施例1中CHCHD2(NM_016139.2)基因的表达在PD和健康对照中差异最明显；
图1B示出了实施例1中通过数字PCR方法验证图1A的结果；
图2A示出了实施例2中采用数字PCR方法和本实施例试剂盒组分对135例健康对照和205例PD患者进行了检测的检测结果；以及
图2B示出了实施例2中CHCHD2的ROC曲线。
具体实施方式
需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将参考附图并结合实施例来详细说明本发明。
针对现有技术中没有能够快速检测且易临床推广的帕金森病早期检测和诊断方法的技术问题，本发明的发明人提出了以下技术方案。
根据本发明一种典型的实施方式，提供一种帕金森病早期检测和诊断试剂盒。该试剂盒包括用于检测红细胞中CHCHD2基因表达的试剂。
应用本发明的技术方案，仅仅通过检测红细胞中CHCHD2基因的表达即可区分PD患者和健康对照，并能够实现对PD患者的早期诊断和预警；本发明所需样本为静脉血，它的抽取在临床上非常常规，抽取简单，创伤小，患者无抗拒，且检测流程简单，成本低廉，后续数据分析省时省力，出结果快，临床推广容易。
优选的，试剂包括检测CHCHD2基因表达的探针和特异扩增CHCHD2基因的引物对，从mRNA水平快速准确的检测CHCHD2基因表达。更优选的，检测CHCHD2基因表达的探针具有如SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列，特异扩增CHCHD2基因的引物对具有如SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列。
与白细胞(和大多数其他细胞)相比，成熟红细胞具有独特的结构，缺少替换功能失调蛋白所必需的细胞器和细胞核。正因为如此，红细胞中残留的RNA和蛋白质差异可能反映了疾病早期的病理学改变而非生理波动。因此，红细胞更可能在疾病进展中比其他类型细胞更早地携带相关的生物标志物。优选的，试剂还包括红细胞用RNA提取试剂，便于血液样本中红细胞RNA提取。
为了使RNA检测，有阳性对照，优选的，试剂盒还包括检测AHSP基因表达的探针和特异扩增AHSP基因的引物。更优选的，检测AHSP基因表达的探针具有如SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列，特异扩增AHSP基因的引物对具有如SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示的核苷酸序列。
本发明的是结合可以采用数字PCR的方式对CHCHD2基因表达的产物进行检测，优选的，试剂盒还包括液滴稳定剂、RT逆转录酶/Taq酶混合物以及缓冲液。
根据本发明一种典型的实施方式，提供一种检测红细胞中CHCHD2基因表达的产品在制备帕金森病早期检测和诊断工具中的应用。优选的，产品包括：通过RT-PCR、实时定量PCR、数字PCR、免疫检测、原位杂交、芯片或高通量测序平台检测红细胞中CHCHD2基因表达水平以检测和诊断早期帕金森病的产品。其中，用RT-PCR、实时定量PCR或数字PCR诊断帕金森病的产品至少包括一对特异扩增CHCHD2基因的引物；用免疫检测诊断帕金森病的产品包括：与CHCHD2蛋白特异性结合的抗体；用原位杂交诊断帕金森病的产品包括：与CHCHD2基因的核酸序列杂交的探针；用芯片诊断帕金森病的产品包括：蛋白芯片和基因芯片；其中，蛋白芯片包括与CHCHD2蛋白特异性结合的抗体，基因芯片包括与CHCHD2基因的核酸序列杂交的探针。
根据本发明一种典型的实施方式，提供一种帕金森病早期检测和诊断装置。该帕金森病早期检测和诊断包括：用于提取红细胞中的RNA的样品获取单元和用于检测红细胞中CHCHD2基因的表达水平的检测单元。
优选的，装置还包括用于将检测样品中红细胞CHCHD2基因的表达水平与参考值进行比对的比对单元，便于检测数据更直观的输出。更优选的，检测单元中包括用于检测红细胞中CHCHD2和AHSP基因表达的试剂，试剂包括检测CHCHD2和AHSP基因表达的探针和特异扩增CHCHD2和AHSP基因的引物对。更优选的，检测CHCHD2基因表达的探针具有如SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列，特异扩增CHCHD2基因的引物对具有如SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列；检测AHSP基因表达的探针具有如SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列，特异扩增AHSP基因的引物对具有如SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示的核苷酸序列。
下面将结合实施例进一步说明本发明的有益效果。
实施例1
筛选实验：在本实施例中，所使用到的具体技术方法如下：
1.实验对象
本研究经所有参与机构的伦理审查委员会批准。发现队列(总共48名：12名健康对照，36名PD患者)和验证队列(共340名：135名健康对照，205名PD患者)均来自北京天坛医院。所有参与者都提供了知情同意书，并接受了神经科医生对其进行的病史采集，神经学检查，实验室检查和心理学评估。所有对照受试者都是社区志愿者，他们的精神状态检查评分>27，段落回忆评分>6，无神经系统疾病史，没有认知或功能衰退的病史或证据。所有PD患者符合UKPD社会脑库临床诊断标准。基于UPDRS第III部分的状态运动评分将PD患者进一步分类以接近疾病阶段。为了将CHCHD2的表现与PD严重程度相关联，将UPDRS评分<15的患者定义为早期PD，UPDRS评分15～30的患者被归类为中期PD，而UPDRS>30的评分被归类为晚期PD患者。
2.从红细胞中分离RNA
与白细胞(和大多数其他细胞)相比，成熟红细胞具有独特的结构，缺少替换功能失调蛋白所必需的细胞器和细胞核。正因为如此，红细胞中残留的RNA和蛋白质差异可能反映了疾病早期的病理学改变而非生理波动。因此，红细胞更可能在疾病进展中比其他类型细胞更早地携带相关的生物标志物。
为了从血液中分离红细胞，新鲜全血样品立即在静脉抽取后以2,000g离心10分钟。根据厂家的说明，使用200μl纯红细胞用Trizol试剂(Invitrogen，USA)提取总RNA。使用Nanodrop1000评估RNA的量，并使用2100生物分析仪(Agilent Technologies，Canada)评估RNA的质量。RNA可立即使用或者保存在-80℃冰箱中。
3.Nanostring nCounter方法
nCounter分析系统(Nanostring Technologies,Seattle,WA)可以在不扩增或逆转录成cDNA的情况下对mRNA进行多重数字分析。总共对21种PD相关基因[APOE(NM_000041.2)，APP(NM_000484.3)，ATP13A2(NM_001141974.1)，CHCHD2(NM_016139.2)，EIF4G1(NM_004953.3)，FBXO7(NM_001033024.1))，GATA1(NM_002049.2)，GBA(NM_001005742.2)，LRRK2(NM_198578.3)，MAPT(NM_016834.3)，PARK2(NM_004562.2)，PARK7(NM_001123377.1)，PINK1(NM_032409.2)，PLA2G6(NM_001199562.1)，PSEN1(NM_000021.2)，PSEN2(NM_000447.2)，SNCA(NM_000345.2)，SNCAIP(NM_001242935.2)，TPPP(NM_007030.2)，UCHL1(NM_004181.3)，VPS35NM_018206.4)]进行筛选。将总RNA(100ng)与Tagset探针杂交并加载到nCounter prep station制备工作站中，然后使用nCounter数字分析仪进行定量。Nanostring平台包括阴性对照探针(不与任何内源性mRNA互补)，以评估与荧光条码光学识别系统相关的背景噪音。将每个基因的计数与三种内源性对照基因[AHSP(NM_016633.2)，β-actin(NM_001101.2)和GAPDH(NM_002046.3)的比值最为最终的结果。
用于Nanostring法检测CHCHD2mRNA表达的杂交探针序列如下：
CHCHD2杂交探针序列(SEQ ID NO:7)：
CTGTCATTCCTGGCTTCCTTGCTTCAGAATTGAAATGGAAGTGGGGGTGTCCCTACTCTGTAGAATCTGGGACTGGGCAAATGTTTGTGTGGCCTCCTTA
AHSP杂交探针序列(SEQ ID NO:8)：CAATGATCCTCTCGTCTCTGAAGAAGACATGGTGACTGTGGTGGAGGACTGGATGAACTTCTACATCAACTATTACAGGCAGCAGGTGACAGGGGAGCCC
4.数字PCR绝对定量
为了绝对定量红细胞中CHCHD2的mRNA含量，使用最近开发的数字微滴PCR。CHCHD2和AHSP Taqman-MGB探针(探针在5'末端分别用FAM和VIC标记)以及相应引物均由ThermoFisher Scientific公司合成。引物和探针序列见下文。使用SuperScriptTM IIIPlatinumTM一步法qRT-PCR试剂盒(#11732020，Thermo Scientific，USA)在单个管中进行cDNA合成和PCR扩增。RainDrop Source微滴生成器(RainDance Technologies，Inc.)用于产生乳化的微滴。每个25μL反应体系由24μL ddPCR体系和1μL 25x液滴稳定剂组成。乳化后，将8连管直接密封并放入ABI ProFlexTM PCR仪(Thermo Fisher Scientific，Inc.USA)中。PCR扩增程序如下：50℃，15min；95℃，4分钟；(95℃，15秒；60℃，45秒)循环45次。将热循环仪的升降温速率设置为0.6℃/s，以便在数百万微滴中进行更好的PCR扩增。扩增后，将8连管转移至Raindrop Sense机器，并使用RainDrop Analyst v3软件分析扩增液滴的数量。
用于检测CHCHD2mRNA表达的数字PCR所用引物对和探针组合序列如下：
CHCHD2探针序列(SEQ ID NO:1)：AGCCTGCGAGGCC
CHCHD2上游引物序列(SEQ ID NO:2)：GGGCTTCAGTGGAGGAAGTAATG
CHCHD2下游引物序列(SEQ ID NO:3)：TGAGGCTCCTGGTAAGTGATGTC
AHSP上游引物序列(SEQ ID NO:4)：CCTGAAGGCAGATGGCTCTT
AHSP下游引物序列(SEQ ID NO:5)：CCTTCAATCCTGCGGAAATG
AHSP探针序列(SEQ ID NO:6)：TTAAGGCCAATAAGGATC
在本实施例技术方案中，采用了目前最先进的数字PCR来检测CHCHD2基因的表达，与现在普遍使用的荧光定量PCR相比，它是一种绝对定量的技术，能够实现对单个分子的检测。当然，用现在的荧光定量PCR技术也可以实现对CHCHD2基因的检测，只不过，荧光定量PCR技术是一种相对定量的方法。另外，RT-PCR通过先PCR再进行DNA电泳观察条带亮度也可以实现这一目的。
通过Nanostring多重基因表达谱技术检测发现队列PD患者(36人)和健康对照(12人)红细胞中21个PD相关基因(基因列表见上文详细方案)的表达变化。在数据分析时，排除了14个较低表达的基因后(<5倍阴性内对照的数值)，7个基因用于后续数据分析。从图1A中可以看出CHCHD2(NM_016139.2)基因的表达在PD和健康对照中差异最明显。该差异随后通过另外一种更灵敏的数字PCR方法证实(图1B)。
本实施例中经过了严格的实验设计和大规模的人群验证，筛选出红细胞中CHCHD2mRNA可作为帕金森病诊断和早期预警的生物标志物。
实施例2
本实施例中试剂盒组成成分如下表1：
表1
SuperScript<sup>TM</sup>III RT逆转录酶/Platinum<sup>TM</sup>Taq酶混合物
2X mix buffer 含0.2mM dNTPs,3mM MgS0<sub>4</sub>
CHCHD2探针 200nM
CHCHD2上、下游引物对 各500nM
AHSP探针 200nM
AHSP上、下游引物对 各500nM
液滴稳定剂 1x
H<sub>2</sub>O
注：CHCHD2/AHSP探针和引物同实施例1中数字PCR的探针和引物。
随后采用数字PCR方法采用上述试剂盒组分对135例健康对照和205例PD患者进行了检测，其结果与我们在发现队列中的结果比较一致(图2A)。ROC曲线显示CHCHD2检测出PD的灵敏度和特异性均超过了80％，提示其有非常好的诊断价值。与健康对照比较，其能检测出早期PD的灵敏度和特异性也超过了80％，说明CHCHD2可作为PD早期诊断和预警的标志物(图2B)。
从以上的描述中，可以看出，本发明实现了如下技术效果：
1)现有技术主要通过检测帕金森患者脑脊液中的蛋白标志物来实现，而脑脊液存在抽取困难，创伤较大，患者普遍难以接受。与脑脊液抽取相比，本发明所需样本可以为静脉血，它的抽取在临床上非常常规，抽取简单，创伤小，患者无抗拒。
2)与蛋白检测需要昂贵的抗体检测试剂盒相比，本发明可通过数字PCR或者荧光定量PCR仅仅检测一个基因CHCHD2即可实现，其成本低廉，所需仪器在大多数检验科都有，临床推广容易。
3)与现有方法通过基因芯片检测很多基因的表达才能区分帕金森患者相比，本发明仅仅检测一个基因，检测流程简单，后续数据分析省时省力，出结果快，满足临床上对检测结果要求的时效。
4)本发明能够实现对帕金森潜在患者的早期诊断，可作为帕金森发病的普遍筛查手段，能够尽早的预警和干预。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 北京大学
<120> 帕金森病早期检测和诊断试剂盒及装置
<130> PN90575BEJDX
<160> 8
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 13
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> primer_bind
<222> (1)..(13)
<223> CHCHD2探针序列
<400> 1
agcctgcgag gcc 13
<210> 2
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> primer_bind
<222> (1)..(23)
<223> CHCHD2上游引物序列
<400> 2
gggcttcagt ggaggaagta atg 23
<210> 3
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> primer_bind
<222> (1)..(23)
<223> CHCHD2下游引物序列
<400> 3
tgaggctcct ggtaagtgat gtc 23
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> primer_bind
<222> (1)..(20)
<223> AHSP上游引物序列
<400> 4
cctgaaggca gatggctctt 20
<210> 5
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> primer_bind
<222> (1)..(20)
<223> AHSP下游引物序列
<400> 5
ccttcaatcc tgcggaaatg 20
<210> 6
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> primer_bind
<222> (1)..(18)
<223> AHSP探针序列
<400> 6
ttaaggccaa taaggatc 18
<210> 7
<211> 100
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> primer_bind
<222> (1)..(100)
<223> CHCHD2杂交探针序列
<400> 7
ctgtcattcc tggcttcctt gcttcagaat tgaaatggaa gtgggggtgt ccctactctg 60
tagaatctgg gactgggcaa atgtttgtgt ggcctcctta 100
<210> 8
<211> 100
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> primer_bind
<222> (1)..(100)
<223> AHSP杂交探针序列
<400> 8
caatgatcct ctcgtctctg aagaagacat ggtgactgtg gtggaggact ggatgaactt 60
ctacatcaac tattacaggc agcaggtgac aggggagccc 100

Claims (13)

1.一种从mRNA水平特异性检测红细胞中CHCHD2基因表达的产品在制备帕金森病早期检测和诊断试剂盒中的应用，其特征在于，所述试剂盒包括用于从mRNA水平特异性检测红细胞中CHCHD2基因表达的试剂；所述试剂还包括红细胞用RNA提取试剂。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂包括检测CHCHD2基因表达的探针和特异扩增CHCHD2基因的引物对。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述检测CHCHD2基因表达的探针如SEQ IDNO：1所示的核苷酸序列，所述特异扩增CHCHD2基因的引物对如SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂盒还包括检测AHSP基因表达的探针和特异扩增AHSP基因的引物。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述检测AHSP基因表达的探针如SEQ IDNO：4所示的核苷酸序列，所述特异扩增AHSP基因的引物对如SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示的核苷酸序列。
6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂盒还包括液滴稳定剂、RT逆转录酶/Taq酶混合物以及缓冲液。
7.从mRNA水平特异性检测红细胞中CHCHD2基因表达的产品在制备帕金森病早期检测和诊断工具中的应用，所述产品还包括红细胞用RNA提取试剂。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述产品包括：通过RT-PCR、实时定量PCR、数字PCR、原位杂交或基因芯片检测红细胞中CHCHD2基因表达水平以检测和诊断早期帕金森病的产品。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述RT-PCR、实时定量PCR或数字PCR诊断帕金森病的产品至少包括一对特异扩增CHCHD2基因的引物；所述原位杂交诊断帕金森病的产品包括：与CHCHD2基因的核酸序列杂交的探针；所述基因芯片包括与CHCHD2基因的核酸序列杂交的探针。
10.一种从mRNA水平特异性检测红细胞中CHCHD2基因表达的产品在制备帕金森病早期检测和诊断装置中的应用，其特征在于，包括：
样品获取单元，包括红细胞用RNA提取试剂，用于提取红细胞中的RNA；
检测单元，用于从mRNA水平特异性检测所述红细胞中CHCHD2基因的表达水平。
11.根据权利要求10所述的应用，其特征在于，所述装置还包括：
比对单元，用于将检测样品中红细胞CHCHD2基因的表达水平与参考值进行比对。
12.根据权利要求10所述的应用，其特征在于，所述检测单元中包括用于检测红细胞中CHCHD2和AHSP基因表达的试剂，所述试剂包括检测CHCHD2和AHSP基因表达的探针和特异扩增CHCHD2和AHSP基因的引物对。
13.根据权利要求12所述的应用，其特征在于，所述检测CHCHD2基因表达的探针如SEQID NO：1所示的核苷酸序列，所述特异扩增CHCHD2基因的引物对如SEQ ID NO：2和SEQ IDNO：3所示的核苷酸序列；所述检测AHSP基因表达的探针如SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列，所述特异扩增AHSP基因的引物对如SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示的核苷酸序列。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111454960B (zh) * 2020-04-10 2022-02-15 四川大学华西医院 一种检测帕金森病的诊断试剂盒
CN112522425B (zh) * 2020-12-25 2023-11-28 武汉睿健医药科技有限公司 Dpc细胞鉴定分类用标记物基因、筛选方法及应用
CN115029428B (zh) * 2022-05-27 2023-08-15 四川省医学科学院·四川省人民医院 基于口腔黏膜pink1基因的颞下颌关节骨关节病辅助诊断、预后评价试剂盒及其应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2016086787A (ja) * 2014-11-11 2016-05-23 学校法人順天堂 パーキンソン病の診断
CN107419008A (zh) * 2017-06-26 2017-12-01 上海惠皓医疗科技有限公司 一种早期精确诊断帕金森病的方法和试剂盒

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9970056B2 (en) * 2015-02-25 2018-05-15 Rosalind Franklin University Of Medicine And Science Methods and kits for diagnosing, prognosing and monitoring parkinson's disease

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2016086787A (ja) * 2014-11-11 2016-05-23 学校法人順天堂 パーキンソン病の診断
CN107419008A (zh) * 2017-06-26 2017-12-01 上海惠皓医疗科技有限公司 一种早期精确诊断帕金森病的方法和试剂盒

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHCHD2 mutations in autosomal dominant late-onset Parkinsons disease: a genome-wide linkage and sequencing study;Manabu Funayama等;《The Lancet Neurology》;20150331;第14卷(第3期);274-282 *
Loss of Parkinsons disease-associated protein CHCHD2 affects mitochondrial crista structure and destabilizes cytochrome c;Hongrui Meng等;《NATURE COMMUNICATIONS》;20170607;摘要 *

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