发明内容
本发明为解决上述技术问题,本发明提供了一种提升铁皮石斛抗病性的组培苗培育方法。
具体按照以下技术方案实现:
一种提升铁皮石斛抗病性的组培苗培育方法,包括步骤:
A原球茎诱导:将铁皮石斛蒴果浸泡于诱导液中于温度为10-18℃条件下恒温浸泡10-12h;
B内生菌活化:将浸泡后蒴果置于搅拌机内,加入蒴果质量0.1-0.5%的发酵菌剂及蒴果质量0.04-0.07%的葡萄糖酸铜,在180-240r/min的转速下搅拌处理5-12min;
C增殖培养:将活化处理的蒴果播种于紫薯基栽培基质上,于温度为20-25℃条件下恒温培育30-35d;
D生根培养:将增殖培养后的芽苗置于矿石基栽培基质上,自然培育。
上述方法中,所述诱导液包括以下重量份组分:番石榴10-15份、苦瓜3-7份、芹菜4-6份、蒲公英12-17份、水25-30份。
进一步地,所述诱导液的制备方法为:将番石榴、苦瓜、芹菜、蒲公英切碎后,分别置于功率为200-300W条件下微波处理至含水量为各鲜料含水量的10-15%,研磨成粉后混合,加入至水中,大火熬煮0.8-1.2h。
上述方法中,所述发酵菌剂为双歧杆菌、枯草芽胞杆菌、乳酸杆菌按质量比为1:(2-7):(3-6)混合而成。
上述方法中,所述紫薯基栽培基质包括以下重量份组分:紫薯20-30份、桑叶6-13份、马鞭草2-8份、糯米4-9份、水40-50份。
进一步地,所述紫薯基栽培基质的制备方法为:
1)取桑叶、马鞭草同置于温度为40-45℃的炒锅中炒制0.8-1.2h,研磨成粉,得混合粉;
2)取糯米浸泡于水12h后,大火加热至沸腾,然后加入紫薯保持沸腾至紫薯煮熟;
3)将煮熟的紫薯、糯米、混合粉高速搅拌均匀,即得紫薯基栽培基质。
上述方法中,所述矿石基栽培基质包括以下重量份组分:磷石膏5-9份、镍铁渣4-7份、煤渣1-3份、卡拉胶0.7-1份、魔芋精粉1-5份、水21-30份。
进一步地,所述矿石基栽培基质的制备方法为:
①取磷石膏、镍铁渣、煤渣、魔芋精粉混合均匀后,制粒,得颗粒物;
②取水加热至80℃,再加入卡拉胶搅拌均匀,加热至沸腾5-8min,然后加入颗粒物混合均匀,置于0-4℃条件下冷却至形成胶体。
本发明的有益效果在于:
采用本发明的铁皮石斛育苗方法,操作简便,绿色无污染,成活率高,提高了铁皮石斛的抗病能力,移栽成活率高达99.5%以上。
首先,本发明所采用紫苏基栽培基质和矿石基栽培基质相互结合,其一,基质具有良好地疏松透气性能,可保持水分和养分的良好吸收;其二,基质营养丰富,能够为铁皮石斛提供养分,无需添加化肥和营养液;其三、基质具有驱虫、杀虫和杀菌的药效成分,避免了病虫害入侵。
其次,本发明利用发酵菌活化蒴果,促进了铁皮石斛内生菌的增长,利用葡萄酸铜的生物催化作用,使得外源益生菌与内生菌的增长具有协同效应,更大程度地发挥微生物的效能,促进铁皮石斛的生长,并且,通过控制搅拌速率,有助于蒴果表皮的软化,进而有助于促进吸收。
再次,本发明在增殖培养阶段严格控制温度,防止了有害微生物的增殖,还促进了铁皮石斛对营养成分的吸收;在诱导阶段严格控制温度,有助于铁皮石斛蒴果吸收水分和营养物质,进而缩短生长周期。
本发明通过合理的栽培基质、诱导液的组分配方,不仅充分地促进了各阶段的铁皮石斛生长效果,还具有杀菌、抑菌作用,减少了杀菌步骤,避免了杀菌剂的使用,还充分地利用了天然物质和废弃物质,降低了化学试剂对铁皮石斛品质的不良影响,对培育工作的健康影响。
具体实施方式
下面对本发明的具体实施方式作进一步详细的说明,但本发明并不局限于这些实施方式,任何在本实施例基本精神上的改进或代替,仍属于本发明权利要求所要求保护的范围。
实施例1
一种提升铁皮石斛抗病性的组培苗培育方法,包括步骤:
A原球茎诱导:将铁皮石斛蒴果浸泡于诱导液中于温度为18℃条件下恒温浸泡12h;
B内生菌活化:将浸泡后蒴果置于搅拌机内,加入蒴果质量0.5%的发酵菌剂及蒴果质量0.07%的葡萄糖酸铜,在240r/min的转速下搅拌处理12min;
C增殖培养:将活化处理的蒴果播种于紫薯基栽培基质上,于温度为25℃条件下恒温培育35d;
D生根培养:将增殖培养后的芽苗置于矿石基栽培基质上,自然培育;
上述方法中,所述诱导液包括:番石榴15kg、苦瓜7kg、芹菜6kg、蒲公英17kg、水30kg;
所述诱导液的制备方法为:将番石榴、苦瓜、芹菜、蒲公英切碎后,分别置于功率为300W条件下微波处理至含水量为各鲜料含水量的15%,研磨成粉后混合,加入至水中,大火熬煮1.2h;
所述发酵菌剂为双歧杆菌、枯草芽胞杆菌、乳酸杆菌按质量比为1:7:6混合而成;
上述方法中,所述紫薯基栽培基质包括:紫薯30kg、桑叶13kg、马鞭草8kg、糯米9kg、水50kg;
进一步地,所述紫薯基栽培基质的制备方法为:取桑叶、马鞭草同置于温度为45℃的炒锅中炒制1.2h,研磨成粉,得混合粉;取糯米浸泡于水12h后,大火加热至沸腾,然后加入紫薯保持沸腾至紫薯煮熟;将煮熟的紫薯、糯米、混合粉高速搅拌均匀,即得紫薯基栽培基质;
上述方法中,所述矿石基栽培基质包括:磷石膏9kg、镍铁渣7kg、煤渣3kg、卡拉胶1kg、魔芋精粉5kg、水30kg;
进一步地,所述矿石基栽培基质的制备方法为:
①取磷石膏、镍铁渣、煤渣、魔芋精粉混合均匀后,制粒,得颗粒物;
②取水加热至80℃,再加入卡拉胶搅拌均匀,加热至沸腾8min,然后加入颗粒物混合均匀,置于4℃条件下冷却至形成胶体。
实施例2
一种提升铁皮石斛抗病性的组培苗培育方法,包括步骤:
A原球茎诱导:将铁皮石斛蒴果浸泡于诱导液中于温度为10℃条件下恒温浸泡10h;
B内生菌活化:将浸泡后蒴果置于搅拌机内,加入蒴果质量0.1%的发酵菌剂及蒴果质量0.04%的葡萄糖酸铜,在180r/min的转速下搅拌处理5min;
C增殖培养:将活化处理的蒴果播种于紫薯基栽培基质上,于温度为20℃条件下恒温培育30d;
D生根培养:将增殖培养后的芽苗置于矿石基栽培基质上,自然培育;
上述方法中,所述诱导液包括:番石榴10kg、苦瓜3kg、芹菜4kg、蒲公英12kg、水25kg;
所述诱导液的制备方法为:将番石榴、苦瓜、芹菜、蒲公英切碎后,分别置于功率为200W条件下微波处理至含水量为各鲜料含水量的10%,研磨成粉后混合,加入至水中,大火熬煮0.8h;
所述发酵菌剂为双歧杆菌、枯草芽胞杆菌、乳酸杆菌按质量比为1:2:3混合而成;
上述方法中,所述紫薯基栽培基质包括:紫薯20kg、桑叶6kg、马鞭草2kg、糯米4kg、水40kg;
进一步地,所述紫薯基栽培基质的制备方法为:取桑叶、马鞭草同置于温度为40℃的炒锅中炒制0.8h,研磨成粉,得混合粉;取糯米浸泡于水12h后,大火加热至沸腾,然后加入紫薯保持沸腾至紫薯煮熟;将煮熟的紫薯、糯米、混合粉高速搅拌均匀,即得紫薯基栽培基质;
上述方法中,所述矿石基栽培基质包括:磷石膏5kg、镍铁渣4kg、煤渣1kg、卡拉胶0.7kg、魔芋精粉1kg、水21kg;
进一步地,所述矿石基栽培基质的制备方法为:
①取磷石膏、镍铁渣、煤渣、魔芋精粉混合均匀后,制粒,得颗粒物;
②取水加热至80℃,再加入卡拉胶搅拌均匀,加热至沸腾5min,然后加入颗粒物混合均匀,置于0℃条件下冷却至形成胶体。
实施例3
一种提升铁皮石斛抗病性的组培苗培育方法,包括步骤:
A原球茎诱导:将铁皮石斛蒴果浸泡于诱导液中于温度为15℃条件下恒温浸泡11h;
B内生菌活化:将浸泡后蒴果置于搅拌机内,加入蒴果质量0.4%的发酵菌剂及蒴果质量0.05%的葡萄糖酸铜,在210r/min的转速下搅拌处理9min;
C增殖培养:将活化处理的蒴果播种于紫薯基栽培基质上,于温度为22℃条件下恒温培育32d;
D生根培养:将增殖培养后的芽苗置于矿石基栽培基质上,自然培育;
上述方法中,所述诱导液包括:番石榴13kg、苦瓜5kg、芹菜5kg、蒲公英15kg、水27kg;
所述诱导液的制备方法为:将番石榴、苦瓜、芹菜、蒲公英切碎后,分别置于功率为250W条件下微波处理至含水量为各鲜料含水量的12%,研磨成粉后混合,加入至水中,大火熬煮1h;
所述发酵菌剂为双歧杆菌、枯草芽胞杆菌、乳酸杆菌按质量比为1:5:4混合而成;
上述方法中,所述紫薯基栽培基质包括:紫薯25kg、桑叶10kg、马鞭草5kg、糯米7kg、水45kg;
进一步地,所述紫薯基栽培基质的制备方法为:取桑叶、马鞭草同置于温度为43℃的炒锅中炒制1h,研磨成粉,得混合粉;取糯米浸泡于水12h后,大火加热至沸腾,然后加入紫薯保持沸腾至紫薯煮熟;将煮熟的紫薯、糯米、混合粉高速搅拌均匀,即得紫薯基栽培基质;
上述方法中,所述矿石基栽培基质包括:磷石膏7kg、镍铁渣5kg、煤渣2kg、卡拉胶0.8kg、魔芋精粉3kg、水24kg;
进一步地,所述矿石基栽培基质的制备方法为:
①取磷石膏、镍铁渣、煤渣、魔芋精粉混合均匀后,制粒,得颗粒物;
②取水加热至80℃,再加入卡拉胶搅拌均匀,加热至沸腾7min,然后加入颗粒物混合均匀,置于2℃条件下冷却至形成胶体。
实施例4
一种提升铁皮石斛抗病性的组培苗培育方法,包括步骤:
A原球茎诱导:将铁皮石斛蒴果浸泡于诱导液中于温度为15℃条件下恒温浸泡11h;
B增殖培养:将活化处理的蒴果播种于紫薯基栽培基质上,于温度为22℃条件下恒温培育33d;
C生根培养:将增殖培养后的芽苗置于矿石基栽培基质上,自然培育;
上述方法中,所述诱导液包括:番石榴13kg、苦瓜5kg、芹菜5kg、蒲公英15kg、水27kg;
所述诱导液的制备方法为:将番石榴、苦瓜、芹菜、蒲公英切碎后,分别置于功率为250W条件下微波处理至含水量为各鲜料含水量的12%,研磨成粉后混合,加入至水中,大火熬煮1h;
上述方法中,所述紫薯基栽培基质包括:紫薯25kg、桑叶10kg、马鞭草5kg、糯米7kg、水45kg;
进一步地,所述紫薯基栽培基质的制备方法为:取桑叶、马鞭草同置于温度为43℃的炒锅中炒制1h,研磨成粉,得混合粉;取糯米浸泡于水12h后,大火加热至沸腾,然后加入紫薯保持沸腾至紫薯煮熟;将煮熟的紫薯、糯米、混合粉高速搅拌均匀,即得紫薯基栽培基质;
上述方法中,所述矿石基栽培基质包括:磷石膏7kg、镍铁渣5kg、煤渣2kg、卡拉胶0.8kg、魔芋精粉3kg、水24kg;
进一步地,所述矿石基栽培基质的制备方法为:
①取磷石膏、镍铁渣、煤渣、魔芋精粉混合均匀后,制粒,得颗粒物;
②取水加热至80℃,再加入卡拉胶搅拌均匀,加热至沸腾7min,然后加入颗粒物混合均匀,置于2℃条件下冷却至形成胶体。
实施例5
一种提升铁皮石斛抗病性的组培苗培育方法,包括步骤:
A原球茎诱导:将铁皮石斛蒴果浸泡于诱导液中于温度为15℃条件下恒温浸泡11h;
B内生菌活化:将浸泡后蒴果置于搅拌机内,加入蒴果质量0.4%的发酵菌剂及蒴果质量0.05%的葡萄糖酸铜,在210r/min的转速下搅拌处理9min;
C增殖培养:将活化处理的蒴果播种于矿石基栽培基质上,于温度为22℃条件下恒温培育32d;
D生根培养:将增殖培养后的芽苗置于紫薯基栽培基质上,自然培育;
上述方法中,所述诱导液包括:番石榴13kg、苦瓜5kg、芹菜5kg、蒲公英15kg、水27kg;
所述诱导液的制备方法为:将番石榴、苦瓜、芹菜、蒲公英切碎后,分别置于功率为250W条件下微波处理至含水量为各鲜料含水量的12%,研磨成粉后混合,加入至水中,大火熬煮1h;
所述发酵菌剂为双歧杆菌、枯草芽胞杆菌、乳酸杆菌按质量比为1:5:4混合而成;
上述方法中,所述紫薯基栽培基质包括:紫薯25kg、桑叶10kg、马鞭草5kg、糯米7kg、水45kg;
进一步地,所述紫薯基栽培基质的制备方法为:取桑叶、马鞭草同置于温度为43℃的炒锅中炒制1h,研磨成粉,得混合粉;取糯米浸泡于水12h后,大火加热至沸腾,然后加入紫薯保持沸腾至紫薯煮熟;将煮熟的紫薯、糯米、混合粉高速搅拌均匀,即得紫薯基栽培基质;
上述方法中,所述矿石基栽培基质包括:磷石膏7kg、镍铁渣5kg、煤渣2kg、卡拉胶0.8kg、魔芋精粉3kg、水24kg;
进一步地,所述矿石基栽培基质的制备方法为:
①取磷石膏、镍铁渣、煤渣、魔芋精粉混合均匀后,制粒,得颗粒物;
②取水加热至80℃,再加入卡拉胶搅拌均匀,加热至沸腾7min,然后加入颗粒物混合均匀,置于2℃条件下冷却至形成胶体。
实施例6
一种提升铁皮石斛抗病性的组培苗培育方法,包括步骤:
A材料处理:取铁皮石斛蒴果置于超净工作台,先用75%酒精清洗蒴果表面,然后在15%次氯酸钠溶液中浸泡20min,再用无菌水冲洗5次,吸干水分后待用;
B原球茎诱导:将步骤A处理的蒴果在无菌条件下播种于原球茎增殖培养基上,置于室温26℃培养,并于2000Lx光强度下光照12h,其中,原球茎增殖培养基用MS+干酪素0.3g/L+白糖30g/L+卡拉胶6.8g/L,用蒸馏水定容后调节pH值至5.8;
B增殖培养:选择高2cm并带有1-2片真叶的铁皮石斛幼苗,以MS为基本培养基,添加6-BA 2.0mg/L,NAA 0.2mg/L,IAA0.5mg/L,每瓶接种5个,培养30天后,再添加椰子汁50g/L,再培养30天;
D生根培养:选择较为粗壮的铁皮石斛芽苗,以1/2MS为基本培养基,添加6-BA0.1mg/L,NAA 0.2mg/L,IBA 1.5mg/L,每瓶接种5个,培养30天后,再添加椰子汁50g/L,再培养30天。
试验例1
1.成活率效果验证
将实施例1-6的组培苗按相同条件及方法进行移植后,其成活率情况如表1所示:
表1:
2.防虫抗病效果验证
将实施例1-6的组培苗按相同条件及方法进行移植后,在不进行防虫害用药管理条件下进行相同的水肥管理,其病虫害发生率情况如表2所示:
|
病虫害发生率 |
生长状况 |
实施例1 |
10.3% |
叶片肥厚,无虫咬;根须发达,无根腐 |
实施例2 |
12.7% |
叶片肥厚,无虫咬;根须发达,无根腐 |
实施例3 |
9.6% |
叶片肥厚,无虫咬;根须发达,无根腐 |
实施例4 |
32.2% |
叶片欠肥厚,部分有虫咬;根须偏少,无根腐 |
实施例5 |
27.6% |
叶片肥厚,部分有虫咬;根须偏少,部分根须有虫咬 |
实施例6 |
35.5% |
叶片欠肥厚,部分有虫咬;根须偏少,部分根须有虫咬 |