CN104982571A - 一种内生菌发酵茶及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于保健饮品或保健食品技术领域，具体涉及一种内生菌发酵茶及其制备方法，该内生菌发酵茶由1-99.99重量份茶叶、0.01-30重量份石斛内生菌菌液和/或松露产香菌菌液制备而成。该方法得当的发酵茶，具有很好的保护人体器官衰老的作用。

Description

一种内生菌发酵茶及其制备方法

技术领域

本发明属于保健饮品或保健食品技术领域，具体涉及一种内生菌发酵茶及其制备方法。

背景技术

茶，是中华民族的举国之饮。发于神农，闻于鲁周公，兴于唐朝，盛于宋代。中国茶文化糅合了中国儒、道、佛诸派思想，独成一体，是中国文化中的一朵奇葩，芬芳而甘醇。

茶不仅具有生津止喝、醒脑明目、抗疲劳、清热、利尿的作用，还有降血脂、降胆固醇等多种功效。茶是世界三大饮料之一，是多数中国人的一种常用饮品，而且，随着人们健康消费观念的普及，茶正被越来越多的人接受、喜爱和追求。茶叶深加工产品开发也逐渐呈现多样化，功能型茶饮料消费需求进一步加大，为适应国际、国内的市场需求，急需开发出更有效、更方便的健康快速消费茶产品。

发酵茶是指在茶叶制作中有“发酵”这一工序的茶的统称，茶树芽叶经过萎凋，揉切，发酵，干燥等初制工序制成毛茶后，再经精制制成的茶，就是发酵茶。茶叶中含有茶多酚，茶多酚具有收敛性，对胃有一定的刺激作用，在空腹的情况下刺激性更强。而发酵茶就不一样了。它是经过发酵烘制而成的，茶多酚在氧化酶的作用下发生酶促氧化反应，含量减少，对胃部的刺激性就随之减小了。另外，这些茶多酚的氧化产物还能够促进人体消化，因此发酵茶不仅不会伤胃，反而能够养胃。经常饮用加糖的发酵茶、加牛奶的发酵茶，能消炎、保护胃黏膜，对治疗溃疡也有一定效果，因此，研究新型的发酵茶，能够进一步促进茶文化的发展。

发明内容

基于上述原因，申请人经过多年的研究，以茶叶、石斛内生菌菌液和/或松露产香菌菌液为原料，得到一种新的发酵茶制备方法，该方法得当的发酵茶，具有很好的保护人体器官衰老的作用。

本发明通过下述技术方案实现的。

一种内生菌发酵茶，由1-99.99重量份茶叶、0.01-30重量份石斛内生菌菌液和/或松露产香菌菌液制备而成。

所述茶叶为茶青、半成品茶或成品茶。

其制备方法包含以下步骤：

步骤1：采摘茶树鲜叶或石斛伴生茶鲜叶，摊放1-20h，以60-280℃杀青1-30min，将杀青叶冷却，以揉抢机揉抢10-30min，得揉抢叶；

步骤2：将得到的揉抢叶或成品茶分装于透明玻璃容器中，挤压至装满为止，密封，于121℃高压蒸汽下灭菌10-20min，冷却后得灭菌茶叶，备用；

步骤3：将得到的灭菌茶叶，按每100g灭菌茶叶的量接种0.5ml-200ml石斛内生菌菌液和/或松露产香菌菌液，在10-60℃下培养发酵1-60天，取出于60-300℃下烘焙或晒干至水分含量为5％-7％，得到内生菌发酵茶。

其中石斛内生菌菌液由以下方法制备：

步骤1：将新鲜石斛的茎、叶、菌根、假鳞茎、花或果实在无菌条件下，以75％酒精处理30s，再用0.1％升汞处理7min后用无菌水冲洗，吸干多余水分，分别切成0.5cm左右的小段或用无菌研钵磨成浆状，分别接种在查氏培养基和PDA培养基上，在20-50℃恒温培养1-10d，长出不同类型的微生物，对不同形态、不同颜色的菌落进行初步分类，并在相应的培养基纯化获得一批石斛内生菌的微生物菌株，然后用筛选培养基发酵实验，利用薄层层析法定性检测发酵液石斛多糖和高效液相色谱定量检测发酵液中石斛多糖的含量，富产石斛多糖的菌株即为筛选的石斛内生菌；所述筛选培养基为：葡萄糖1-50g/L、蛋白胨1-10g/L、硫酸铵0.1-10g/L，氯化锰0.01-10g/L、硫酸镁0.1-10g/L、磷酸二氢钾0.1-5g/L、茶叶汁200-800ml/L。

步骤2：取石斛内生菌在液体摇瓶中扩大培养；然后按1-10％的接种量接入装有20-90mL发酵培养基的250mL三角瓶中，在摇床转速10-600rpm，温度20-60℃条件下，培养1-48h得到石斛内生菌菌液；发酵培养基的成份为：葡萄糖0.1-20g/L、蛋白胨0.1-20g/L、酵母膏0.1-10g/L、氯化钠0.1-10g/L、磷酸二氢钾0.1-10g/L；培养基初始pH5-8。

其中松露产香菌菌液由以下方法制备：

步骤1：将新鲜松露的子囊果或共生菌根在无菌条件下，以75％酒精处理30s，再用0.1％升汞处理7min后用无菌水冲洗，吸干多余水分，用无菌研钵磨成浆状，分别接种在查氏培养基、PDA培养基和MS培养基上，在20-50℃恒温培养1-10d，长出不同类型的微生物，对不同形态、不同颜色的菌落进行初步分类，并在相应的培养基纯化获得一批松露微生物菌株，然后用筛选培养基发酵实验，利用薄层层析法定性检测发酵液a-雄烷醇和高效液相色谱定量检测发酵液中a-雄烷醇的含量，富产a-雄烷醇的菌株即为筛选的松露产香菌；所述筛选培养基为：葡萄糖或蔗糖1-50g/L、蛋白胨1-10g/L、硫酸镁0.1-10g/L、磷酸二氢钾0.1-5g/L、茶叶汁200-800ml/L。

步骤2：取松露产香菌，在液体摇瓶中扩大培养；然后按1-10％的接种量接入装有20-90mL发酵培养基的250mL三角瓶中，在摇床转速10-600rpm，温度20-60℃条件下，培养时间1-48h得到松露产香菌菌液；发酵培养基的成份为：葡萄糖或蔗糖0.1-100g/L、蛋白胨和/或麸皮(浸出汁)0.1-100g/L、酵母膏或松针(浸出液)0.1-100g/L、硫酸镁和/或氯化钙0.1-10g/L、磷酸二氢钾0.1-10g/L；培养基初始pH5-8。

药效学试验

对D-半乳糖致亚急性衰老小鼠生殖器官的作用研究

试药：实施例1-实施例5发酵茶5g用水煮3次，每次100ml水，合并水液，浓缩，干燥，加入20mL注射用水，备用。

试验动物：昆明小鼠，SPF级，18-22g。

试验方法：取昆明种成年小鼠，体重20±2g，雌雄各半。将动物随机分组，分别为：正常对照组、衰老模型组、实施例1-实施例5组，每组18只。除正常对照组外，各鼠每天在颈背部皮下注射D-半乳糖(注射用水配制)125mg/kg，连续8周，普通饲料常规喂养。各组动物在造模第10d后，同时每日灌胃相应受试药液容量0.1ml/10g，正常对照组以同等剂量的蒸馏水灌胃。

给药9周后，取血后颈椎脱臼处死，测定SOD值。

数据用均数±标准差表示，n为样本量。统计作图软件用MicrosoftExcel。统计方法用One-way t test，P＜0.05表示差异有统计学意义。

试验结果：见表1和表2.

表1雄性小鼠血清SOD含量情况见表

组别	SOD含量(U/mgprot)
		正常组	168.44±16.16**
模型组	135.17±14.66
		实施例1组	165.60±13.26*

实施例2组	160.11±16.17*
		实施例3组	161.44±14.97*
实施例4组	165.94±17.44*
		实施例5组	165.73±16.49*

注：与模型组相比：*P＜0.05**P＜0.01

表2雌性小鼠血清SOD含量情况见表

组别	SOD含量(U/mgprot)
		正常组	161.11±8.33
模型组	150.47±8.03
		实施例1组	174.66±17.35**
实施例2组	169.11±14.52**
		实施例3组	167.89±18.46**
实施例4组	175.11±13.44**
		实施例5组	176.90±14.94**

注：与模型组相比：*P＜0.05**P＜0.01

试验结论：上述试验表明，本发明发酵茶具有很好的抗衰老的作用。

本发明发酵茶具有传统茶叶的功效。

实施例

实施例1

500g茶叶、75g石斛内生菌菌液、75g松露产香菌菌液。

步骤1：采摘茶树鲜叶或石斛伴生茶鲜叶，摊放10h，以150℃杀青15min，将杀青叶冷却，以揉抢机揉抢20min，得揉抢叶；

步骤2：将得到的揉抢叶分装于透明玻璃容器中，挤压至装满为止，密封，于121℃高压蒸汽下灭菌15min，冷却后得灭菌茶叶，备用；

步骤3：将得到的灭菌茶叶，按每100g灭菌茶叶的量接种50ml石斛内生菌菌液和50ml松露产香菌菌液，在30℃下培养发酵30天，取出于150℃下烘至水分含量为6％，得到内生菌发酵茶。

其中石斛内生菌菌液由以下方法制备：

步骤1：将新鲜石斛的茎在无菌条件下，以75％酒精处理30s，再用0.1％升汞处理7min后用无菌水冲洗，吸干多余水分，分别切成0.5cm左右的小段，分别接种在查氏培养基和PDA培养基上，在35℃恒温培养5d，长出不同类型的微生物，对不同形态、不同颜色的菌落进行初步分类，并在相应的培养基纯化获得一批石斛内生菌的微生物菌株，然后用筛选培养基发酵实验，利用薄层层析法定性检测发酵液石斛多糖和高效液相色谱定量检测发酵液中石斛多糖的含量，富产石斛多糖的菌株即为筛选的石斛内生菌；所述筛选培养基为：葡萄糖25g/L、蛋白胨5g/L、硫酸铵5g/L，氯化锰5g/L、硫酸镁5g/L、磷酸二氢钾2.5g/L、茶叶汁500ml/L。

步骤2：取石斛内生菌在液体摇瓶中扩大培养；然后按5％的接种量接入装有55mL发酵培养基的250mL三角瓶中，在摇床转速300rpm，温度40℃条件下，培养24h得到石斛内生菌菌液；发酵培养基的成份为：葡萄糖10g/L、蛋白胨10g/L、酵母膏5g/L、氯化钠5g/L、磷酸二氢钾5g/L；培养基初始pH6.5。

其中松露产香菌菌液由以下方法制备：

步骤1：将新鲜松露的子囊果在无菌条件下，以75％酒精处理30s，再用0.1％升汞处理7min后用无菌水冲洗，吸干多余水分，用无菌研钵磨成浆状，分别接种在查氏培养基和PDA培养基上，在35℃恒温培养5d，长出不同类型的微生物，对不同形态、不同颜色的菌落进行初步分类，并在相应的培养基纯化获得一批松露微生物菌株，然后用筛选培养基发酵实验，利用薄层层析法定性检测发酵液a-雄烷醇和高效液相色谱定量检测发酵液中a-雄烷醇的含量，富产a-雄烷醇的菌株即为筛选的松露产香菌；所述筛选培养基为：葡萄糖25g/L、蛋白胨5g/L、硫酸镁5g/L、磷酸二氢钾2.5g/L、茶叶汁500ml/L。

步骤2：取松露产香菌，在液体摇瓶中扩大培养；然后按5％的接种量接入装有60mL发酵培养基的250mL三角瓶中，在摇床转速300rpm，温度40℃条件下，培养时间24h得到松露产香菌菌液；发酵培养基的成份为：葡萄糖10g/L、蛋白胨10g/L、酵母膏5g/L、硫酸镁5g/L、磷酸二氢钾5g/L；培养基初始pH6.5。

实施例2

一种内生菌发酵茶，由100g茶叶、1g石斛内生菌菌液制备而成。

其制备方法包含以下步骤：

步骤1：采摘茶树鲜叶或石斛伴生茶鲜叶，摊放1h，以280℃杀青1min，将杀青叶冷却，以揉抢机揉抢10min，得揉抢叶；

步骤2：将得到的揉抢叶分装于透明玻璃容器中，挤压至装满为止，密封，于121℃高压蒸汽下灭菌10min，冷却后得灭菌茶叶，备用；

步骤3：将得到的灭菌茶叶，按每100g灭菌茶叶的量接种0.5ml石斛内生菌菌液，在10℃下培养发酵60天，取出于60℃下烘至水分含量为5％，得到内生菌发酵茶。

其中石斛内生菌菌液由以下方法制备：

步骤1：将新鲜石斛的叶在无菌条件下，以75％酒精处理30s，再用0.1％升汞处理7min后用无菌水冲洗，吸干多余水分，用无菌研钵磨成浆状，分别接种在查氏培养基和PDA培养基上，在20℃恒温培养10d，长出不同类型的微生物，对不同形态、不同颜色的菌落进行初步分类，并在相应的培养基纯化获得一批石斛内生菌的微生物菌株，然后用筛选培养基发酵实验，利用薄层层析法定性检测发酵液石斛多糖和高效液相色谱定量检测发酵液中石斛多糖的含量，富产石斛多糖的菌株即为筛选的石斛内生菌；所述筛选培养基为：葡萄糖1g/L、蛋白胨1g/L、硫酸铵0.1g/L，氯化锰0.01g/L、硫酸镁0.1g/L、磷酸二氢钾0.1g/L、茶叶汁200ml/L。

步骤2：取石斛内生菌在液体摇瓶中扩大培养；然后按1％的接种量接入装有20mL发酵培养基的250mL三角瓶中，在摇床转速10rpm，温度60℃条件下，培养1h得到石斛内生菌菌液；发酵培养基的成份为：葡萄糖0.1g/L、蛋白胨0.1g/L、酵母膏0.1g/L、氯化钠0.1g/L、磷酸二氢钾0.1g/L；培养基初始pH5。

实施例3

一种内生菌发酵茶，由100g茶叶、1g松露产香菌菌液制备而成。

所述茶叶为茶青、或成品茶。

其制备方法包含以下步骤：

步骤1：采摘茶树鲜叶或石斛伴生茶鲜叶，摊放1h，以60℃杀青30min，将杀青叶冷却，以揉抢机揉抢10min，得揉抢叶；

步骤2：将得到的揉抢叶分装于透明玻璃容器中，挤压至装满为止，密封，于121℃高压蒸汽下灭菌10min，冷却后得灭菌茶叶，备用；

步骤3：将得到的灭菌茶叶，按每100g灭菌茶叶的量接种0.5ml松露产香菌菌液，在10℃下培养发酵60天，取出于60℃下烘至水分含量为7％，得到内生菌发酵茶。

其中松露产香菌菌液由以下方法制备：

步骤1：将新鲜松露的共生菌根在无菌条件下，以75％酒精处理30s，再用0.1％升汞处理7min后用无菌水冲洗，吸干多余水分，用无菌研钵磨成浆状，分别接种在查氏培养基和PDA培养基上，在20℃恒温培养10d，长出不同类型的微生物，对不同形态、不同颜色的菌落进行初步分类，并在相应的培养基纯化获得一批松露微生物菌株，然后用筛选培养基发酵实验，利用薄层层析法定性检测发酵液a-雄烷醇和高效液相色谱定量检测发酵液中a-雄烷醇的含量，富产a-雄烷醇的菌株即为筛选的松露产香菌；所述筛选培养基为：葡萄糖1g/L、蛋白胨1g/L、硫酸镁0.1g/L、磷酸二氢钾0.1g/L、茶叶汁200m1/L。

步骤2：取松露产香菌，在液体摇瓶中扩大培养；然后按1-％的接种量接入装有20mL发酵培养基的250mL三角瓶中，在摇床转速10rpm，温度60℃条件下，培养时间2h得到松露产香菌菌液；发酵培养基的成份为：葡萄糖0.1g/L、蛋白胨0.1g/L、酵母膏0.1g/L、硫酸镁0.1g/L、磷酸二氢钾0.1g/L；培养基初始pH5。

实施例4

一种内生菌发酵茶，由900g重量份茶叶、125g石斛内生菌菌液和125g松露产香菌菌液制备而成。

其制备方法包含以下步骤：

步骤1：采摘茶树鲜叶或石斛伴生茶鲜叶，摊放18h，以270℃杀青25min，将杀青叶冷却，以揉抢机揉抢25min，得揉抢叶；

步骤2：将得到的揉抢叶分装于透明玻璃容器中，挤压至装满为止，密封，于121℃高压蒸汽下灭菌18min，冷却后得灭菌茶叶，备用；

步骤3：将得到的灭菌茶叶，按每100g灭菌茶叶的量接种90ml石斛内生菌菌液和90ml松露产香菌菌液，在55℃下培养发酵3天，取出于295℃下烘至水分含量为5％％，得到内生菌发酵茶。

其中石斛内生菌菌液由以下方法制备：

步骤1：将新鲜石斛的茎在无菌条件下，以75％酒精处理30s，再用0.1％升汞处理7min后用无菌水冲洗，吸干多余水分，用无菌研钵磨成浆状，分别接种在查氏培养基和PDA培养基上，在45℃恒温培养2d，长出不同类型的微生物，对不同形态、不同颜色的菌落进行初步分类，并在相应的培养基纯化获得一批石斛内生菌的微生物菌株，然后用筛选培养基发酵实验，利用薄层层析法定性检测发酵液石斛多糖和高效液相色谱定量检测发酵液中石斛多糖的含量，富产石斛多糖的菌株即为筛选的石斛内生菌；所述筛选培养基为：葡萄糖45g/L、蛋白胨8g/L、硫酸铵10g/L，氯化锰10g/L、硫酸镁10g/L、磷酸二氢钾4.5g/L、茶叶汁750ml/L。

步骤2：取石斛内生菌在液体摇瓶中扩大培养；然后按8％的接种量接入装有90mL发酵培养基的250mL三角瓶中，在摇床转速550rpm，温度55℃条件下，培养3h得到石斛内生菌菌液；发酵培养基的成份为：葡萄糖18g/L、蛋白胨20g/L、酵母膏10g/L、氯化钠8g/L、磷酸二氢钾8g/L；培养基初始pH8。

其中松露产香菌菌液由以下方法制备：

步骤1：将新鲜松露的共生菌根在无菌条件下，以75％酒精处理30s，再用0.1％升汞处理7min后用无菌水冲洗，吸干多余水分，用无菌研钵磨成浆状，分别接种在查氏培养基和PDA培养基上，在45℃恒温培养2d，长出不同类型的微生物，对不同形态、不同颜色的菌落进行初步分类，并在相应的培养基纯化获得一批松露微生物菌株，然后用筛选培养基发酵实验，利用薄层层析法定性检测发酵液a-雄烷醇和高效液相色谱定量检测发酵液中a-雄烷醇的含量，富产a-雄烷醇的菌株即为筛选的松露产香菌；所述筛选培养基为：葡萄糖45g/L、蛋白胨8g/L、硫酸10g/L、磷酸二氢钾4.5g/L、茶叶汁750ml/L。

步骤2：取松露产香菌，在液体摇瓶中扩大培养；然后按8％的接种量接入装有85mL发酵培养基的250mL三角瓶中，在摇床转速600rpm，温度20℃条件下，培养时间44h得到松露产香菌菌液；发酵培养基的成份为：葡萄糖20g/L、蛋白胨18g/L、酵母膏8g/L、硫酸镁10g/L、磷酸二氢钾10g/L；培养基初始pH8。

实施例5

一种内生菌发酵茶，由450g茶叶、90g石斛内生菌菌液和90g松露产香菌菌液制备而成。

其制备方法包含以下步骤：

步骤1：采摘茶树鲜叶或石斛伴生茶鲜叶，摊放114h，以200℃杀青13min，将杀青叶冷却，以揉抢机揉抢16min，得揉抢叶；

步骤2：将得到的揉抢叶分装于透明玻璃容器中，挤压至装满为止，密封，于121℃高压蒸汽下灭菌16min，冷却后得灭菌茶叶，备用；

步骤3：将得到的灭菌茶叶，按每100g灭菌茶叶的量接种80ml石斛内生菌菌液和80ml松露产香菌菌液，在35℃下培养发酵25天，取出于210℃下烘至水分含量为6.5％，得到内生菌发酵茶。

其中石斛内生菌菌液由以下方法制备：

步骤1：将新鲜石斛的菌根在无菌条件下，以75％酒精处理30s，再用0.1％升汞处理7min后用无菌水冲洗，吸干多余水分，分别切成0.5cm左右的小段，分别接种在查氏培养基和PDA培养基上，在35℃恒温培养6d，长出不同类型的微生物，对不同形态、不同颜色的菌落进行初步分类，并在相应的培养基纯化获得一批石斛内生菌的微生物菌株，然后用筛选培养基发酵实验，利用薄层层析法定性检测发酵液石斛多糖和高效液相色谱定量检测发酵液中石斛多糖的含量，富产石斛多糖的菌株即为筛选的石斛内生菌；所述筛选培养基为：葡萄糖28g/L、蛋白胨4g/L、硫酸铵6g/L，氯化锰6g/L、硫酸镁7g/L、磷酸二氢钾3g/L、茶叶汁550ml/L。

步骤2：取石斛内生菌在液体摇瓶中扩大培养；然后按4％的接种量接入装有50mL发酵培养基的250mL三角瓶中，在摇床转速280rpm，温度45℃条件下，培养20h得到石斛内生菌菌液；发酵培养基的成份为：葡萄糖12g/L、蛋白胨12g/L、酵母膏6g/L、氯化钠4g/L、磷酸二氢钾6g/L；培养基初始pH7。

其中松露产香菌菌液由以下方法制备：

步骤1：将新鲜松露的子囊果在无菌条件下，以75％酒精处理30s，再用0.1％升汞处理7min后用无菌水冲洗，吸干多余水分，用无菌研钵磨成浆状，分别接种在查氏培养基和PDA培养基上，在35℃恒温培养6d，长出不同类型的微生物，对不同形态、不同颜色的菌落进行初步分类，并在相应的培养基纯化获得一批松露微生物菌株，然后用筛选培养基发酵实验，利用薄层层析法定性检测发酵液a-雄烷醇和高效液相色谱定量检测发酵液中a-雄烷醇的含量，富产a-雄烷醇的菌株即为筛选的松露产香菌；所述筛选培养基为：葡萄糖30g/L、蛋白胨7g/L、6g/L、硫酸镁6g/L、磷酸二氢钾3g/L、茶叶汁550ml/L。

步骤2：取松露产香菌，在液体摇瓶中扩大培养；然后按6％的接种量接入装有55mL发酵培养基的250mL三角瓶中，在摇床转速450rpm，温度40℃条件下，培养时间24h得到松露产香菌菌液；发酵培养基的成份为：葡萄糖12g/L、蛋白胨12g/L、酵母膏6g/L、硫酸镁5g/L、磷酸二氢钾6g/L；培养基初始pH6。

Claims (5)

1.一种内生菌发酵茶，其特征在于由1-99.99重量份茶叶、0.01-30重量份石斛内生菌菌液和/或松露产香菌菌液制备而成。

2.根据权利要求1所述的一种内生菌发酵茶，其特征在于所述茶叶为茶青、半成品茶或成品茶。

3.权利要求1所述的一种内生菌发酵茶，其特征在于其制备方法包含以下步骤：

步骤1：采摘茶树鲜叶或石斛伴生茶鲜叶，摊放1-20h，以60-280℃杀青1-30min，将杀青叶冷却，以揉抢机揉抢10-30min，得揉抢叶；

步骤2：将得到的揉抢叶或成品茶分装于透明玻璃容器中，挤压至装满为止，密封，于121℃高压蒸汽下灭菌10-20min，冷却后得灭菌茶叶，备用；

步骤3：将得到的灭菌茶叶，按每100g灭菌茶叶的量接种0.5ml-200ml石斛内生菌菌液和/或松露产香菌菌液，在10-60℃下培养发酵1-60天，取出于60-300℃下烘焙或晒干至水分含量为5％-7％，得到内生菌发酵茶。

4.根据权利要求1或3所述的一种内生菌发酵茶，其特征在于石斛内生菌菌液由以下方法制备：

步骤1：将新鲜石斛的茎、叶、菌根、假鳞茎、花或果实在无菌条件下，以75％酒精处理30s，再用0.1％升汞处理7min后用无菌水冲洗，吸干多余水分，分别切成0.5cm左右的小段或用无菌研钵磨成浆状，分别接种在查氏培养基和PDA培养基上，在20-50℃恒温培养1-10d，长出不同类型的微生物，对不同形态、不同颜色的菌落进行初步分类，并在相应的培养基纯化获得一批石斛内生菌的微生物菌株，然后用筛选培养基发酵实验，利用薄层层析法定性检测发酵液石斛多糖和高效液相色谱定量检测发酵液中石斛多糖的含量，富产石斛多糖的菌株即为筛选的石斛内生菌；所述筛选培养基为：葡萄糖1-50g/L、蛋白胨1-10g/L、硫酸铵0.1-10g/L，氯化锰0.01-10g/L、硫酸镁0.1-10g/L、磷酸二氢钾0.1-5g/L、茶叶汁200-800ml/L。

步骤2：取石斛内生菌在液体摇瓶中扩大培养；然后按1-10％的接种量接入装有20-90mL发酵培养基的250mL三角瓶中，在摇床转速10-600rpm，温度20-60℃条件下，培养1-48h得到石斛内生菌菌液；发酵培养基的成份为：葡萄糖0.1-20g/L、蛋白胨0.1-20g/L、酵母膏0.1-10g/L、氯化钠0.1-10g/L、磷酸二氢钾0.1-10g/L；培养基初始pH5-8。

5.根据权利要求1或3所述的一种内生菌发酵茶，其特征在于松露产香菌菌液由以下方法制备：

步骤1：将新鲜松露的子囊果或共生菌根在无菌条件下，以75％酒精处理30s，再用0.1％升汞处理7min后用无菌水冲洗，吸干多余水分，用无菌研钵磨成浆状，分别接种在查氏培养基、PDA培养基和改良MS培养基上，在20-50℃恒温培养1-10d，长出不同类型的微生物，对不同形态、不同颜色的菌落进行初步分类，并在相应的培养基纯化获得一批松露微生物菌株，然后用筛选培养基发酵实验，利用薄层层析法定性检测发酵液a-雄烷醇和高效液相色谱定量检测发酵液中a-雄烷醇的含量，富产a-雄烷醇的菌株即为筛选的松露产香菌；所述筛选培养基为：葡萄糖或蔗糖1-50g/L、蛋白胨1-10g/L、硫酸镁0.1-10g/L、磷酸二氢钾0.1-5g/L、茶叶汁200-800ml/L。

步骤2：取松露产香菌，在液体摇瓶中扩大培养；然后按1-10％的接种量接入装有20-90mL发酵培养基的250mL三角瓶中，在摇床转速10-600rpm，温度20-60℃条件下，培养时间1-48h得到松露产香菌菌液；发酵培养基的成份为：葡萄糖或蔗糖0.1-100g/L、蛋白胨和/或麸皮(浸出汁)0.1-100g/L、酵母膏或松针(浸出液)0.1-100g/L、硫酸镁和/或氯化钙0.1-10g/L、磷酸二氢钾0.1-10g/L；培养基初始pH5-8。