CN108752442A - 彩色马铃薯耐盐性相关StDof2蛋白及其编码基因与应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种彩色马铃薯耐盐性相关StDof2蛋白及其编码基因与应用。所述StDof2蛋白的氨基酸序列如序列表中序列1所示，所述编码基因的核苷酸序列如序列表中序列2所示。通过应用，其转基因烟草比非转基因烟草耐盐性和耐ABA性显著提高，丰富了培育高耐盐作物的基因资源。

Description

彩色马铃薯耐盐性相关StDof2蛋白及其编码基因与应用

技术领域

本发明属于农业的植物遗传改良技术及植物生物技术应用领域，具体涉及一种彩色马铃薯胁迫应答相关基因及其编码蛋白与应用。

背景技术

盐胁迫是一种非常影响作物生长发育的一种非生物胁迫，并且土壤盐渍化的程度呈现逐年增长的趋势，由于马铃薯是一种对盐中度敏感的作物，盐渍化给马铃薯的生产造成了严重的危害。因此，培育耐盐性马铃薯是其育种工作者的主要目标之一。随着分子生物学水平和基因操作技术的发展,基因工程育种已经成为增强作物抗逆性的重要方法之一。

Dof(DNAbinding with one finger)蛋白是植物所特有的一类转录因子，它属于锌指蛋白超家族。目前，已从单子叶和双子叶植物中分离出了Dof蛋白，并研究在植物的生长和发育等生物学过程中出可作为转录的激活子或抑制子的Dof蛋白起着不同的作用，参与各种生物学过程相关基因调控，在植物的多种生理过程中发挥着重要的作用。但是，目前还没有关于在彩色马铃薯中Dof蛋白在植物非生物胁迫方面作用的研究报道。

植物激素脱落酸(abscisic acid，ABA)在植物响应逆境胁迫中有重要作用，例如可通过调节气孔关闭，提高与盐胁迫相关的基因表达等诸多胁迫应答反应，ABA信号诱导植物向抗盐代谢调节途径转化，最终缓解盐胁迫带来的危害。

发明内容

为扩展茄科植物彩色马铃薯中非生物胁迫相关蛋白在作物抗逆育种中的应用，本发明提供一种彩色马铃薯耐盐性相关StDof2蛋白及其编码基因与应用。本发明所提供的StDof2蛋白来源于彩色马铃薯(Solanum tuberosum L)。本发明的技术方案如下：

1.一种彩色马铃薯耐盐性相关StDof2蛋白，是如下(1.1)或(1.2)的蛋白质：

(1.1)如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(1.2)在(1.1)中的氨基酸序列经过取代、缺失或添一个或几个氨基酸且具有彩色马铃薯耐盐性相关的由(1.1))衍生的蛋白质。

上述(1.1)和(1.2)中的StDof2蛋白可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。上述(1.1)和(1.2)中的StDof2蛋白的编码基因可通过将序列表中序列2的核苷酸所示的DNA序列缺失一个或几个氨基酸残基的密码子，和/或进行一个或几个碱基对的错义突变后得到。

2.编码技术方案1所述的彩色马铃薯耐盐性相关StDof2蛋白的StDof2基因。

3.根据技术方案2所述的StDof2基因，其特征在于：所述StDof2基因为如下(3.1)、(3.2)或(3.3)的基因：

(3.1)核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示的基因。

(3.2)在严格条件下与(3.1)限定的核苷酸序列杂交且编码具有的相同功能StDof2蛋白的基因；所述的严格条件下为用6×SSC，0.5％SDS的溶液，在65℃下杂交，然后用2×SSC，0.1％SDS、1×SSC、0.1％SDS各洗膜一次；

(3.3)与(3.1)或(3.2)限定的核苷酸序列具有90％以上同源性，且编码相同功能StDof2蛋白的核苷酸序列的基因。

4.编码技术方案1所述的彩色马铃薯耐盐性相关StDof2蛋白的核酸分子，所述核酸分子可以是DNA，如基因组DNA、cDNA或重组DNA；所述核酸分子也可以是RNA，如mRNA、hnRNA或tRNA。

5.含有编码彩色马铃薯耐盐性相关StDof2蛋白的StDof2基因的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌，所述StDof2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，所述彩色马铃薯耐盐性相关StDof2蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

6.根据技术方案5所述的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌，所述重组载体为重组表达载体或重组克隆载体。

7.根据技术方案6所述的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌，所述重组表达载体包括双元农杆菌载体和植物微弹轰击的载体，具体为pBin438、pCAMBIA1301、pCAMBIA1300、pCAMBIA1302、pCAMBIA2301、pBI121、pCAMBIA1391-Xa或pCAMBIA1391-Xb。

使用所述StDof2基因构建重组表达载体时，在其转录起始核苷酸前可加上任何一种增强型、组成型、组织特异型或诱导型启动子，它们可单独使用或与其它的启动子结合使用；此外，使用本发明的StDof2基因构建重组表达载体时，还可使用增强子，包括翻译增强子或转录增强子。为了便于对转基因植物细胞或植物进行鉴定及筛选，可对所用植物表达载体进行加工，如加入在植物中表达可产生颜色变化的酶或发光化合物的基因(GUS基因、GFP基因、萤光素酶基因等)或是具有抗性的抗生素标记物(卡那霉素标记物、庆大霉素标记物等)等。从转基因植物的安全性考虑，可不加任何选择性标记基因，直接以逆境筛选转化植株。

8.扩增编码彩色马铃薯耐盐性相关StDof2蛋白的StDof2基因的全长或其任意片段的引物对，所述StDof2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，所述彩色马铃薯耐盐性相关StDof2蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

9.彩色马铃薯耐盐性相关StDof2蛋白或编码彩色马铃薯耐盐性相关StDof2蛋白的StDof2基因或含有编码彩色马铃薯耐盐性相关StDof2蛋白的StDof2基因的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌在如下(9.1)或(9.2)中的应用：

(9.1)调节植物盐胁迫应答，所述调节植物盐胁迫应答为使植物的耐盐性增强；

(9.2)调节植物ABA胁迫应答，所述调节植物ABA胁迫应答为使植物的耐ABA性增强；

(9.1)和(9.2)中所述植物为单子叶植物或双子叶植物，所述双子叶植物为烟草或马铃薯；所述马铃薯为彩色马铃薯；

所述彩色马铃薯耐盐性相关StDof2蛋白的氨基酸序列如如SEQ ID NO：1所示，所述编码彩色马铃薯耐盐性相关StDof2蛋白的StDof2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。

10.彩色马铃薯耐盐性相关StDof2蛋白或编码彩色马铃薯耐盐性相关StDof2蛋白的StDof2基因或含有编码彩色马铃薯耐盐性相关StDof2蛋白的StDof2基因的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌在培育转基因植物耐盐性中的应用。

进一步，所述在培育转基因植物耐盐性中的应用中转基因植物具有如下至少一种性状：1)植物的耐盐性增强；2)植物的耐ABA性增强。

进一步，所述在培育转基因植物耐盐性中的应用中所述的植物为双子叶植物或单子叶植物；所述双子叶植物具体为烟草或马铃薯；所述马铃薯具体为彩色马铃薯。

本发明还提供一种提高目的植物耐盐性的方法，是将本发明所述的核苷酸序列如SEQ IDNO：2所示的StDof2基因导入目的植物，得到转基因植物，所述转基因植物与所述目的植物相比，具有如下至少一种性状：1)植物的耐盐性增强；2)植物的耐ABA性增强，所述植物为双子叶植物或单子叶植物；所述双子叶植物具体为烟草或马铃薯；所述马铃薯具体为彩色马铃薯。

本发明的有益效果：

本发明从彩色马铃薯“黑金刚”品种中克隆出StDof2基因，成功构建植物过表达载体，采用农杆菌介导的“叶盘法”转化烟草，与对照相比，转基因烟草比非转基因烟草耐盐性和耐ABA性显著提高，因此，本发明首次提出和验证了StDof2基因及其编码的StDof2蛋白在植物中的耐盐性功能，丰富了培育高耐盐作物的基因资源。

序列表中SEQ ID NO：1所示的是彩色马铃薯耐盐性相关StDof2蛋白的氨基酸序列，即本发明所述的StDof2蛋白。

序列表中SEQ ID NO：2所示的是编码彩色马铃薯耐盐性相关StDof2蛋白的StDof2基因的核苷酸序列。其开放阅读框架(ORF)为自5’末端第1-963位核苷酸。

序列表中SEQ ID NO：3所示的是引物StDofF1的碱基序列。

序列表中SEQ ID NO：4所示的是引物StDofR1的碱基序列。

序列表中SEQ ID NO：5所示的是引物StDofF2的碱基序列。

序列表中SEQ ID NO：6所示的是引物StDofR2的碱基序列。

序列表中SEQ ID NO：7所示的是引物StDofF3的碱基序列。

序列表中SEQ ID NO：8所示的是引物StDofR3的碱基序列。

序列表中SEQ ID NO：9所示的是引物KanF的碱基序列。

序列表中SEQ ID NO：10所示的是引物KanR的碱基序列。

附图说明

图1表示连续三天分别以50mM、100mM、150mM NaCl胁迫处理彩色马铃薯植株(株高6cm)后，根、茎和叶部位基因的表达情况，其中有清水对照组，NaCl表示盐胁迫处理组。

图2表示转基因烟草植株的PCR鉴定结果图，其中ck+表示以质粒DNA为模板(阳性对照)，ck-表示野生型烟草DNA为模板(阴性对照)。1～5为转基因阳性植株。

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

彩色马铃薯“黑金刚”品种由云南农业大学农学与生物技术学院提供，公众人员可以从云南农业大学获得或者商业途径得到。

实施例1、彩色马铃薯StDof2基因和StDof2蛋白的获得

彩色马铃薯材料(黑金刚)种植于云南农业大学后山农场，在马铃薯长出5～6片真叶后，取幼嫩叶片分别提取基因组DNA和总RNA，提取的总RNA经反转录合成cDNA。分别以基因组DNA和cDNA为模板，以StDof2基因特异引物RT-PCR扩增。上述PCR扩增的StDof2基因特异引物由引物StDofF1和引物StDofR1组成，所述引物StDofF1的碱基序列如SEQ ID NO：3所示，所述引物StDofR1的碱基序列SEQ ID NO：4所示(引物StDofF1和引物StDofR1的碱基序列根据其他不同物种Dof蛋白编码基因多序列比对的保守区域序列设计而得)。

PCR反应体系为50μl，反应体系为：1μl模板(cDNA或基因组DNA)，2μl上下游混合引物(10μM)(上引、下游物各1μl，浓度均为10μM)，5μl 10×LA buffer，4μl dNTP(2.5mMeach)，1μl LA Taq酶，ddH₂O补平至50μl。

PCR反应程序如下：94℃5min；94℃30s，52℃30s，72℃1min，30个循环；72℃10min。

PCR产物经电泳切胶后以琼脂糖凝胶回收试剂盒回收，连接至pMD18-T载体，转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞，经X-gal/IPTG蓝白斑筛选及PCR鉴定阳性克隆，将鉴定正确的克隆送上海英骏生命技术有限公司测序。测序结果表明，以基因组DNA为模板扩增得到的片段与以cDNA为模板扩增得到的片段大小相同，通过分析测序结果，对比cDNA序列与基因组DNA序列，发现该基因没有内含子；上述PCR扩增得到核酸片段的核苷酸序列如序列表中SEQID NO：2所示，共963bp(包含终止子)，其编码序列表中序列1所示的氨基酸序列，共320个氨基酸残基，分子量35.339kD，蛋白理论等电点为8.33。将该序列表中SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列命名为StDof2基因，序列表中SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列命名为StDof2蛋白。

实施例2StDof2基因功能验证

(一)盐胁迫处理下StDof2基因表达分析

彩色马铃薯材料(黑金刚)种植于云南农业大学后山农场，在马铃薯株高6cm后，连续三天分别以50mM、100mM、150mM NaCl溶液浇灌处理，以浇清水为对照，胁迫处理后3d，取各组植株根、茎、叶，液氮速冻，保存于-70℃冰箱，用于RNA提取。

采用CTAB法提取彩色马铃薯总RNA，反转录得到cDNA后，以StDofF2和StDofR2为引物，进行qRT-PCR分析。StDofF2的碱基序列如SEQ ID NO：5所示，所述引物StDofR2的碱基序列SEQ ID NO：6所示(引物StDofF2和引物StDofR2的碱基序列根据SEQ ID NO：2设计而得)。qRT-PCR反应体系为：cDNA1μl，2×SYBR Green Mix 12.5μl，10mM StDofF2引物1μl，10mMStDofR2引物1μl，ddH₂O 9.5μl，总计25μl体系。反应程序为：95℃预变性30s，95℃变性15s，60℃退火35s，72℃延伸40s，35个循环；；72℃8min。

目的基因qRT-PCR分析结果见图1。图1表明，在根、茎、叶组织中StDof2基因均有表达，通过NaCl胁迫的处理，StDof2基因在各胁迫处理的组织中表达呈显著上调。

(二)利用StDof2基因获得耐受非生物胁迫的植物

1、植物表达载体pBI121-StDof2的制备

将引物StDofF1和StDofR1分别引入限制性内切酶位点，命名为引物StDofF3和引物StDofR3，引物StDofF3的碱基序列如SEQ ID NO：7所示，所述引物StDofR3的碱基序列SEQID NO：8所示(引物StDofF3和引物StDofR3的碱基序列根据SEQ ID NO：2设计而得)。

以彩色马铃薯“黑金刚”cDNA为模板，用上述设计的含有XbaⅠ和SacⅠ酶切位点的引物StDofF3和引物StDofR3，进行PCR扩增。将测序正确的带有酶切位点的扩增目的片段连接至植物表达载体pBI121(pBI121购自中国质粒载体菌株细胞株基因保藏中心，地址：北京西海淀区直门南大街19号，邮编100044)；连接产物转化大肠杆菌DH5α，37℃培养过夜；挑取单克隆摇菌，测序验证序列的正确性。所得质粒中插入的外源基因具有序列表中序列2所示的核苷酸序列，将该质粒命名为pBI121-StDof2。

2、重组农杆菌的获得

将质粒pBI121-StDof2用冻融法转化农杆菌EHA105的感受态细胞(购自昆明中云美科技有限公司，地址：昆明市人民西路343号，邮编：650118)。28℃于含50μg/ml硫酸卡那霉素和50μg/ml利福平的YEP固体培养基中筛选培养；经过菌落PCR(使用实施例1中的引物StDofF1和StDofR1)对阳性单克隆进行鉴定，反应体系为：菌液1μl，2×PCR Mix 12.5μl，10mM StDofF1引物1μl，10mM StDofR1引物1μl，ddH₂O 9.5μl，总计25μl体系：反应程序为：95℃预变性4min，95℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸1min，30个循环；；72℃10min；最终经鉴定获得含有pBI121-StDof2质粒的重组农杆菌EHA105。

3、转基因烟草的获得

1)采用叶盘浸染法转化烟草

a)重组农杆菌侵染液的制备

将含有pBI121-StDof2质粒的重组农杆菌EHA105接种于5ml YEP液体培养基(含50μg/ml硫酸卡那霉素和50μg/ml利福平)中，摇菌12h，第二天转瓶至500ml YEP液体培养基中，28℃培养至OD600为1.6-2.0；低速离心、收集菌体，用MS培养基溶液悬浮至OD600为0.8，获得重组农杆菌侵染液。

b)受体材料烟草的准备

将本氏烟草(Nicotiana benthamiana)种子(购自云南省烟草公司昆明市公司，地址：云南省昆明市北京路523号；邮编650103)无菌处理后，接种于1/2MS培养基，萌发出无菌苗，待长出3片以上真叶，即可用于后续转基因实验。

c)转化与抗性筛选

将步骤b)的烟草无菌苗的叶片在超净台的无菌培养皿中切成1cm²左右的小块，浸泡于步骤a)制备的重组农杆菌侵染液中进行转化；共培养2～3天后，用无菌水(含羧苄青霉素200mg/L)清洗叶盘5～6次后，置于筛选分化培养基(MS+NAAmg/L+6-BAmg/L+100mg/L硫酸卡那霉素+200mg/L羧苄青霉素)，获得T1代转基因烟草植株。

d)T3代烟草纯合转基因植株的获得

挑选T1代抗性植株移入温室土壤中，成熟后按单株收获T2代种子。将T2代种子种植于田间，移栽抗性分离比为3:1的T2代株系，并单株收获T2代株系内各单株上所结T3代种子，随机取20个T3代株系种子进行抗性筛选，得到5个T3代不再产生抗性分离的纯合转基因株系。取T3代为纯合转基因烟草株系的植株或种子进行大量繁种，用于后续PCR鉴定和表型鉴定。

T1代表示转化当代植株自交获得的种子及由它所长成的植株；T2代表示T1代自交获得的种子及由它所长成的植株；T3代表示T2代自交获得的种子及由它所长成的植株。

2)转基因烟草植株的PCR鉴定

取T3代不再产生抗性分离的纯合转基因株系植株叶片提取基因组DNA，用引物KanF和KanR进行PCR扩增。引物KanF的碱基序列如SEQ ID NO：9所示，引物KanR的碱基序列如SEQ ID NO：10所示(引物KanF和KanR的碱基序列根据新霉素抗性基因序列(基因登录号ID：NG_047417.1)设计而得)。

PCR反应体系为50μl，反应体系为：1μl基因组DNA模板，2μl上下游混合引物(10μM)(上引、下游物各1μl，浓度均为10μM)，5μl 10×LAbuffer，4μl dNTP(2.5mM each)，1μlLATaq酶，ddH2O补平至50μl。

PCR反应程序如下：94℃5min；94℃30s，52℃30s，72℃1min，30个循环；72℃10min。

PCR鉴定结果表明，选取的T3代转基因烟草植株为阳性，PCR鉴定结果见图2所示：1～5为转基因阳性植株、ck-和ck+分别为阴性和阳性对照。

3)转基因烟草植株的耐盐性鉴定

将经PCR鉴定为阳性的T3代纯合转基因株系(TL1-TL5)和野生型烟草(WT)的种子，用0.5％NaClO溶液消毒之后，分别铺板于1/2MS固体培养基平板上萌发幼苗，再转移至温室土壤，21℃光照培养15天后，对烟草幼苗施加不同浓度(0、100、150、200mM)NaCl和不同浓度(0、50、100、150μM)ABA溶液8天(ABA溶液：分别将0、50、100、150μM的ABA溶解在1L水中即可得)，然后称量单株鲜重(包括根茎叶)，每个株系设3次重复，每个重复10-20株苗。

转基因烟草植株的耐盐性鉴定结果用平均值±标准差的形式表示，如表1、表2。

表1、转基因烟草植株经盐胁迫处理8天后的单株鲜重(单位：g)

从表1可以看出，在没有NaCl胁迫的情况下，转基因株系与野生型的重量相比没有显著的差异，但在不同浓度NaCl胁迫处理下，转基因株系与野生型的重量存在显著的差异，说明转化了StDof2基因的烟草能够提高其耐盐性。

表2转基因烟草植株经ABA胁迫8天后的单株鲜重(单位：g)

从表2可以看出，在没有ABA胁迫的情况下，转基因株系与野生型的重量相比没有显著的差异，但在不同浓度的ABA胁迫处理下，转基因株系与野生型的重量存在显著的差异，说明转化了StDof2基因的烟草能够提高其对ABA胁迫的耐受能力。

序列表

<110> 云南农业大学

<120> 彩色马铃薯耐盐性相关StDof2蛋白及其编码基因与应用

<160> 10

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 322

<212> PRT

<213> 彩色马铃薯(Solanum tuberosum L)

<400> 1

Met Gly Ile Ile His Pro Ile Gly Gly Gly Gly Gly Ala Pro Pro Gly

1 5 10 15

Gly Gly Gly Ala Ala Ala Leu Ala Pro Ala Ala His Gly Ala His Gly

20 25 30

Ala Leu Leu Cys Pro Ala Cys Ala Ser Leu Ala Thr Leu Pro Cys Thr

35 40 45

Thr Ala Ala Thr Ala Pro Ser Gly Pro Ala His Pro Cys Leu Ser Cys

50 55 60

Ala Ala Thr Thr Thr Leu Gly Gly Val Leu Ala Ala Val Pro Val Gly

65 70 75 80

Gly Gly Cys Ala Leu Ser Leu Ala Ser Leu Pro Leu Ser Ser Thr Ala

85 90 95

Ala Ala Ala Ala Ala Ala Pro Gly Gly His Leu Ser Ala Thr Ala Ser

100 105 110

Ser Ser Gly Ser Ser Ser Leu Thr Ala Thr Thr Thr Ala Ala Ala Ala

115 120 125

Ala Thr Ala Ala Thr Ser Gly Ala Ala Thr Thr Gly Thr Leu Ala Pro

130 135 140

Pro Gly Ser Ala Ser Ala Ser Thr Thr Leu Ala Pro Pro Gly Ser Ala

145 150 155 160

Ala Gly Pro Leu Met Gly Ala Ser Gly Thr Pro Ala Ala Gly Pro Leu

165 170 175

Met Gly Ala Ser Ser Met Ile Thr Ser Ser Ala Ala Gly Ala Pro Thr

180 185 190

Ser Met Gly Thr Ile Thr Ser Ser Ala Ala Pro Gly Ala Gly Ala Ser

195 200 205

Ala Gly Ala Thr Ala Leu Pro Gly Ala Gly Ala Ser Ala Gly Thr Ser

210 215 220

Gly Gly Met Leu Met Met Val Gly Thr Leu Pro Thr Ser Gly Gly Met

225 230 235 240

Leu Met Ala Gly Thr Pro Gly Leu Pro Pro Ala Gly Thr Gly Ala Val

245 250 255

Ala Gly Thr Pro Gly Leu Thr Gly Thr Gly Ala Leu Ala Ala Ser Ser

260 265 270

Gly Leu Ala Ser Leu Ala Thr Gly Thr Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly

275 280 285

Gly Ala His Gly Pro Thr Ala Leu Thr Gly Thr Val Ala His Thr Thr

290 295 300

Thr Thr Ser Gly Thr Gly Thr Gly Gly Ala Ala Ala Ser Leu Ala Pro

305 310 315 320

Leu Ser

<210> 2

<211> 963

<212> DNA

<213> 彩色马铃薯(Solanum tuberosum L)

<400> 2

atgcaaataa tacatccgat cggaggtgga ggagggcggt ttttcggcgg tggtggtgat 60

cggagactaa ggcctaacaa tcatcaaaac caccaggcat tgaagtgtcc tcgttgcgat 120

tctctcaaca ctaaattctg ttactataac aactataatc cctctcagcc acgtcacttc 180

tgcaagagtt gccggaggta ctggactaaa ggcggcgtac tccgtaacgt ccccgtcggt 240

ggtggttgcc ggaaaagcaa gcgttcaaag ccgaaatcaa gtactgccga cgctgccgac 300

gatgcaccgg aggaacataa gtctgatact aattctagta gtgagagttc cagtcttact 360

gctacgacaa cggcggctgc ggcagcaacg gcgaatactt ccggcgctgc aactactgaa 420

tatctcaact ttccggagtc caattctgct tcaacttatc tcaactttcc ggagtccaat 480

gatcagccat taatggagaa ctcacaaacc ttcgatgatc agccattaat ggagaactca 540

agcatgatta cgtcatcgaa tgatggaaac ttcacaagca tgattacgtc atcgaatgat 600

ccggagaacc aaaactcaaa tgaggcttac cggttgccgg agaaccaaaa ctcaaatgag 660

acatccggtg agatgaagat gatggtggaa acattgccga catccggtga gatgaagatg 720

gatgagtatc ccgggttatt ttttaatcaa acgggtcggg ttgatgagta tcccgggtta 780

tggcaaactg gtaggttaaa caacagtagt gaactcgctt cactgaattg gcaaactggt 840

gatggaggtg atggaggtgg gaatcatgga ttttatgatc taacgggtac cgttgatcat 900

tactggtact ggagtcaaac acagtggggt gaaaatgata actctcttaa ttttctttct 960

tga 963

<210> 3

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

atgcaaataa tacatccgat 20

<210> 4

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

tcaagaaaga aaattaagag ag 22

<210> 5

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

cgaatacttc cggcgctgca ac 22

<210> 6

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

gatactcatc catcttcatc tc 22

<210> 7

<211> 28

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

gctctagaat gcaaataata catccgat 28

<210> 8

<211> 29

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

cgagctctca agaaagaaaa ttaagagag 29

<210> 9

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

cactgaagcg ggaagggact 20

<210> 10

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

cgataccgta aagcacgagg aa 22

Claims (10)

1.一种彩色马铃薯耐盐性相关StDof2蛋白，是如下(1.1)或(1.2)的蛋白质：

(1.1)如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

(1.2)在(1.1)中的氨基酸序列经过取代、缺失或添一个或几个氨基酸且具有彩色马铃薯耐盐性相关的由(1.1))衍生的蛋白质。

2.编码权利要求1所述的彩色马铃薯耐盐性相关StDof2蛋白的StDof2基因。

3.根据权利要求2所述的StDof2基因，其特征在于：所述StDof2基因为如下(3.1)、(3.2)或(3.3)的基因：

(3.1)核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示的基因。

(3.2)在严格条件下与(3.1)限定的核苷酸序列杂交且编码具有的相同功能StDof2蛋白的基因；

(3.3)与(3.1)或(3.2)限定的核苷酸序列具有90％以上同源性，且编码相同功能StDof2蛋白的核苷酸序列的基因。

4.编码权利要求1所述的彩色马铃薯耐盐性相关StDof2蛋白的核酸分子，其特征在于：所述核酸分子可以是DNA，如基因组DNA、cDNA或重组DNA；所述核酸分子也可以是RNA，如mRNA、hnRNA或tRNA。

5.含有编码彩色马铃薯耐盐性相关StDof2蛋白的StDof2基因的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌，其特征在于：所述StDof2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，所述彩色马铃薯耐盐性相关StDof2蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

6.根据权利要求5所述的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌，其特征在于：所述重组载体为重组表达载体或重组克隆载体。

7.根据权利要求6所述的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌，其特征在于：所述重组表达载体包括双元农杆菌载体和植物微弹轰击的载体，具体为pBin438、pCAMBIA1301、pCAMBIA1300、pCAMBIA1302、pCAMBIA2301、pBI121、pCAMBIA1391-Xa或pCAMBIA1391-Xb。

8.扩增编码彩色马铃薯耐盐性相关StDof2蛋白的StDof2基因的全长或其任意片段的引物对，所述StDof2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，所述彩色马铃薯耐盐性相关StDof2蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

9.彩色马铃薯耐盐性相关StDof2蛋白或编码彩色马铃薯耐盐性相关StDof2蛋白的StDof2基因或含有编码彩色马铃薯耐盐性相关StDof2蛋白的StDof2基因的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌在如下(9.1)或(9.2)中的应用：

(9.1)调节植物盐胁迫应答，所述调节植物盐胁迫应答为使植物的耐盐性增强；

(9.2)调节植物ABA胁迫应答，所述调节植物ABA胁迫应答为使植物的耐ABA性增强；

(9.1)和(9.2)中所述植物为单子叶植物或双子叶植物，所述双子叶植物为烟草或马铃薯；所述马铃薯为彩色马铃薯；

所述彩色马铃薯耐盐性相关StDof2蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述编码彩色马铃薯耐盐性相关StDof2蛋白的StDof2基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。

10.彩色马铃薯耐盐性相关StDof2蛋白或编码彩色马铃薯耐盐性相关StDof2蛋白的StDof2基因或含有编码彩色马铃薯耐盐性相关StDof2蛋白的StDof2基因的重组载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌在培育转基因植物耐盐性中的应用。