CN108739382A - 一种锦地罗的组织培养育苗方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种锦地罗的组织培养育苗方法，属于锦地罗种植领域，首先选取锦地罗新鲜、未开裂植株的花梗，洗净后用次氯酸钠溶液消毒，再用流水冲掉花梗表面的消毒液，得到无菌的外植体；再将其与培养基中恒温恒湿下光照得到小苗，先将小苗放在大棚经过一段时间的驯化后，移入栽培基质中即可。本发明提供一种锦地罗的组织培养育苗方法使其快速繁殖，操作简单，不仅成本低廉，且大大提高了锦地罗的成活率，适用于大规模系统化种植，可为农户增产增收。
Description
【技术领域】
本发明涉及锦地罗种植技术领域，具体涉及一种锦地罗的组织培养育苗方法。
【背景技术】
锦地罗是一种食虫植物，生长在草地上或者潮湿的岩面，沙土上；属于草本植物，其茎短，不具球茎，锦地罗的叶呈莲座状平铺地面，宽匙状的叶，边缘长满腺毛，待昆虫落入，腺毛将虫体包围，带粘性的腺体将昆虫粘住，分泌的液体可分解虫体蛋白质等营养物质，然后由叶面吸收；叶特化，形成捕虫器。锦地罗是一种濒危野生观赏、药用植物，野生种越来越稀有，可供观赏作为家庭园艺小盆栽，既能捕食昆虫又能开出美丽的花朵。锦地罗还有清肺止咳、解毒疗疳的功效。因此，锦地罗的种植在国内具有广阔的市场前景和经济效益。
目前，现有锦地罗育苗方法大多为种子直接种植的方法，产量较低，成活率较低，无法适应市场需求，通过组织培养的技术可达到快速繁殖的目的。
【发明内容】
本发明的发明目的在于：针对上述存在的问题，提供一种锦地罗的组织培养育苗方法使其快速繁殖，操作简单，不仅成本低廉，且大大提高了锦地罗的成活率，适用于大规模系统化种植，可为农户增产增收。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一种锦地罗的组织培养育苗方法，包括以下步骤：
S1：将组培操作室、培养室用新洁尔灭消毒，保证工作台工作区内处于无菌环境；
S2：选取锦地罗新鲜、未开裂植株的花梗，将其用洗衣液洗净，冲洗15～30min，于无菌超净工作台上用次氯酸钠溶液浸泡花梗3～5min，再用无菌水将其冲洗5～6遍后置于灭菌的培养皿中，直接放在超净工作台里，切成长度为1cm的茎段作为外植体备用；
S3：制作培养基：所述培养基为1/4MS培养基配方+28～32g/L白糖+0.3～0.6mg/L6-BA+0.15～0.25mg/L NAA激素+0.04～0.055％Ac(活性炭)+5～7g/L琼脂，将上述物质装入培养瓶中调节pH值为5.8～6.5后进行密封，再将培养瓶于115～120℃条件下蒸汽灭菌15～20min后冷却备用；
S4：将器具及双手消毒后，取出经过高温灭菌的培养瓶，在超净工作台里按无菌操作要求打开培养瓶的瓶盖，用镊子夹取消毒好的外植体，将镊子伸进瓶口，放在培养基上，盖好瓶盖，拿出超净工作台备用；
S5：对温室内消毒后，采用荧光灯对培养瓶进行光照28～35d后即长出小苗，两个月后小苗过密并且培养基瓶营养耗尽，需要更换培养瓶，对小苗进行分瓶培养，分瓶后继续培养2～3个月即出瓶炼苗；
S6：将小苗从培养瓶中出瓶后，用多菌灵溶液浸泡清洗小苗2～3次，将根部的培养基洗掉，然后将小苗种植到培养土苗盘里，将种好锦地罗苗的苗盘放入练苗大棚内培育2～3个月后，大棚培育期间，浇水不能浇到小苗的叶片上，最后将培育后的小苗移植入潮湿的地方自然生长即可。
进一步地，在步骤S2中，所述次氯酸钠溶液的质量浓度为70～75％。
进一步地，在步骤S3中，所述培养基为：1/4MS培养基+30g/L白糖+0.5mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA激素+0.05％Ac+6g/L琼脂，pH值为6.2。
进一步地，在步骤S5中，所述培养室内的温度控制在25℃±2℃，相对湿度超过60％，所述荧光灯的光照强度大于1200lx。
进一步地，在步骤S5中，所述培养室内的温度控制在25℃±1℃，相对湿度为80％，所述荧光灯的光照强度为1800～2200lx。
进一步地，在步骤S6中，所述多菌灵液溶液的质量浓度为0.11～0.125％。
本发明提供一种锦地罗的组织培养育苗方法，相对于现有技术的有益效果在于：
本发明通过对锦地罗花梗的诱导培育获得幼苗。利用了锦地罗新鲜、未开裂植株的花梗作为外植体进行组织培养，相对于已经开裂的锦地罗，其愈伤组织的分化能力更强，分化率更高，且花梗对消毒剂更敏感，剪取外植体后，先用一定浓度的洗衣液作为消毒剂进行清洗，再采用一定浓度的次氯化钠溶液进行灭菌，洗衣液和次氯化钠的浓度均根据锦地罗的特性进行选择，且消毒和灭菌时间严格控制，一方面可保证外植体消毒和灭菌充分，另一方面确保外植体的组织结构不被破坏，消毒和灭菌效果好，为下一步处理做好充足准备；然后，根据外植体的营养要求，通过研究摸索筛选出适宜锦地罗的培养基的种类和浓度，并严格控制培养的温度和湿度，在本发明培养条件下进行诱导培育，小苗形成快(相对于温度在23℃以下，或27℃以上，愈伤组织形成时间可以缩短4-6天)，诱导率高，小苗的活力高，器官分化率高。本发明所采用的每一技术手段都是相互配合、相互促进的，且步步为营、环环相扣的，所产生的总的技术效果远远高于单个技术手段所产生的技术手段的简单加和。
总之，本发明提供一种锦地罗的组织培养育苗方法使其快速繁殖，操作简单，不仅成本低廉，且大大提高了锦地罗的成活率，适用于大规模系统化种植，可为农户增产增收。
【具体实施方式】
以下通过具体实施例对本发明作进一步详述。
实施例1
一种锦地罗的组织培养育苗方法，包括以下步骤：
S1：将组培操作室、培养室用新洁尔灭消毒，保证工作台工作区内处于无菌环境；
S2：选取锦地罗新鲜、未开裂植株的花梗，将其用洗衣液洗净，冲洗15～30min，于无菌超净工作台上用质量浓度为70％的次氯酸钠溶液浸泡花梗3min，再用无菌水将其冲洗5遍后置于灭菌的培养皿中，直接放在超净工作台里，切成长度为1cm的茎段作为外植体备用；
S3：制作培养基：所述培养基为1/4MS培养基配方+28g/L白糖+0.3mg/L 6-BA+0.15mg/L NAA激素+0.04Ac+5g/L琼脂，将上述物质装入培养瓶中调节pH值为5.8后进行密封，再将培养瓶于115℃条件下蒸汽灭菌15min后冷却备用；
S4：将器具及双手消毒后，取出经过高温灭菌的培养瓶，在超净工作台里按无菌操作要求打开培养瓶的瓶盖，用镊子夹取消毒好的外植体，将镊子伸进瓶口，放在培养基上，盖好瓶盖，拿出超净工作台备用；
S5：对温室内消毒后，采用荧光灯对培养瓶进行光照28d后即长出小苗，两个月后更换培养瓶，对小苗进行分瓶培养，分瓶后继续培养2个月即出瓶炼苗；其中，所述培养室内的温度控制在25℃±2℃，相对湿度超过60％，所述荧光灯的光照强度大于1200lx；
S6：将小苗从培养瓶中出瓶后，用质量浓度为0.11％的多菌灵溶液浸泡清洗小苗2次，将根部的培养基洗掉，然后将小苗种植到培养土苗盘里，将种好锦地罗苗的苗盘放入练苗大棚内培育2个月后，将其移植入潮湿的地方自然生长即可。
实施例2
一种锦地罗的组织培养育苗方法，包括以下步骤：
S1：将组培操作室、培养室用新洁尔灭消毒，保证工作台工作区内处于无菌环境；
S2：选取锦地罗新鲜、未开裂植株的花梗，将其用洗衣液洗净，冲洗30min，于无菌超净工作台上用质量浓度为75％的次氯酸钠溶液浸泡花梗5min，再用无菌水将其冲洗6遍后置于灭菌的培养皿中，直接放在超净工作台里，切成长度为1cm的茎段作为外植体备用；
S3：制作培养基：所述培养基为1/4MS培养基配方+32g/L白糖+0.6mg/L 6-BA+0.25mg/L NAA激素+0.055％Ac+7g/L琼脂，将上述物质装入培养瓶中调节pH值为6.5后进行密封，再将培养瓶于120℃条件下蒸汽灭菌20min后冷却备用；
S4：将器具及双手消毒后，取出经过高温灭菌的培养瓶，在超净工作台里按无菌操作要求打开培养瓶的瓶盖，用镊子夹取消毒好的外植体，将镊子伸进瓶口，放在培养基上，盖好瓶盖，拿出超净工作台备用；
S5：对温室内消毒后，采用荧光灯对培养瓶进行光照35d后即长出小苗，两个月后更换培养瓶，对小苗进行分瓶培养，分瓶后继续培养3个月即出瓶炼苗；其中，所述培养室内的温度控制在25℃±1℃，相对湿度为80％，所述荧光灯的光照强度为2200lx；
S6：将小苗从培养瓶中出瓶后，用质量浓度为0.125％的多菌灵溶液浸泡清洗小苗3次，将根部的培养基洗掉，然后将小苗种植到培养土苗盘里，将种好锦地罗苗的苗盘放入练苗大棚内培育3个月后，将其移植入潮湿的地方自然生长即可。
实施例3
一种锦地罗的组织培养育苗方法，包括以下步骤：
S1：将组培操作室、培养室用新洁尔灭消毒，保证工作台工作区内处于无菌环境；
S2：选取锦地罗新鲜、未开裂植株的花梗，将其用洗衣液洗净，冲洗18min，于无菌超净工作台上用质量浓度为72％的次氯酸钠溶液浸泡花梗4min，再用无菌水将其冲洗6遍后置于灭菌的培养皿中，直接放在超净工作台里，切成长度为1cm的茎段作为外植体备用；
S3：制作培养基：所述培养基为1/4MS培养基+30g/L白糖+0.5mg/L 6-BA+0.2mg/LNAA激素+0.05％Ac+6g/L琼脂，将上述物质装入培养瓶中调节pH值为6.2后进行密封，再将培养瓶于118℃条件下蒸汽灭菌18min后冷却备用；
S4：将器具及双手消毒后，取出经过高温灭菌的培养瓶，在超净工作台里按无菌操作要求打开培养瓶的瓶盖，用镊子夹取消毒好的外植体，将镊子伸进瓶口，放在培养基上，盖好瓶盖，拿出超净工作台备用；
S5：对温室内消毒后，采用荧光灯对培养瓶进行光照30d后即长出小苗，两个月后更换培养瓶，对小苗进行分瓶培养，分瓶后继续培养3个月即出瓶炼苗；其中，所述培养室内的温度控制在25℃±1℃，相对湿度为80％，所述荧光灯的光照强度为1800lx；
S6：将小苗从培养瓶中出瓶后，用质量浓度为0.12％的多菌灵溶液浸泡清洗小苗3次，将根部的培养基洗掉，然后将小苗种植到培养土苗盘里，将种好锦地罗苗的苗盘放入练苗大棚内培育2个月后，将其移植入潮湿的地方自然生长即可。
对比例1
一种锦地罗的组织培养育苗方法，包括以下步骤：
S1：将组培操作室、培养室用新洁尔灭消毒，保证工作台工作区内处于无菌环境；
S2：选取锦地罗新鲜、未开裂植株的花梗，将其冲洗18min，于无菌超净工作台上用氯化汞溶液浸泡花梗4min，再用无菌水将其冲洗6遍后置于灭菌的培养皿中，直接放在超净工作台里，切成长度为1cm的茎段作为外植体备用；
S3：制作培养基：所述培养基为1/4MS培养基+30g/L白糖+0.5mg/L 6-BA+0.2mg/LNAA激素+0.05％Ac+6g/L琼脂，将上述物质装入培养瓶中调节pH值为6.2后进行密封，再将培养瓶于118℃条件下蒸汽灭菌18min后冷却备用；
S4：将器具及双手消毒后，取出经过高温灭菌的培养瓶，在超净工作台里按无菌操作要求打开培养瓶的瓶盖，用镊子夹取消毒好的外植体，将镊子伸进瓶口，放在培养基上，盖好瓶盖，拿出超净工作台备用；
S5：对温室内消毒后，采用荧光灯对培养瓶进行光照30d后即长出小苗，两个月后更换培养瓶，对小苗进行分瓶培养，分瓶后继续培养3个月即出瓶炼苗；其中，所述培养室内的温度控制在25℃±1℃，相对湿度为80％，所述荧光灯的光照强度为1800lx；
S6：将小苗从培养瓶中出瓶后，用质量浓度为0.12％的多菌灵溶液浸泡清洗小苗3次，将根部的培养基洗掉，然后将小苗种植到培养土苗盘里，将种好锦地罗苗的苗盘放入练苗大棚内培育2个月后，将其移植入潮湿的地方自然生长即可。
对比例2
一种锦地罗的组织培养育苗方法，包括以下步骤：
S1：将组培操作室、培养室用新洁尔灭消毒，保证工作台工作区内处于无菌环境；
S2：选取锦地罗新鲜、未开裂植株的花梗，将其用洗衣液洗净，冲洗18min，于无菌超净工作台上用质量浓度为72％的次氯酸钠溶液浸泡花梗4min，再用无菌水将其冲洗6遍后置于灭菌的培养皿中，直接放在超净工作台里，切成长度为1cm的茎段作为外植体备用；
S3：制作培养基：所述培养基为1/4MS培养基+30g/L白糖+0.5mg/L 6-BA+0.2mg/LNAA激素+0.05％Ac+6g/L琼脂，将上述物质装入培养瓶中调节pH值为6.2后进行密封，再将培养瓶于118℃条件下蒸汽灭菌18min后冷却备用；
S4：将器具及双手消毒后，取出经过高温灭菌的培养瓶，在超净工作台里按无菌操作要求打开培养瓶的瓶盖，用镊子夹取消毒好的外植体，将镊子伸进瓶口，放在培养基上，盖好瓶盖，拿出超净工作台备用；
S5：对温室内消毒后，采用荧光灯对培养瓶进行光照30d后即长出小苗，两个月后更换培养瓶，对小苗进行分瓶培养，分瓶后继续培养3个月即出瓶炼苗；其中，所述培养室内的温度控制在22℃，相对湿度为55％，所述荧光灯的光照强度为1000lx；
S6：将小苗从培养瓶中出瓶后，用水清洗小苗3次，将根部的培养基洗掉，然后将小苗种植到培养土苗盘里，将种好锦地罗苗的苗盘放入练苗大棚内培育2个月后，将其移植入潮湿的地方自然生长即可。
对比例3
一种锦地罗的组织培养育苗方法，包括以下步骤：
S1：将组培操作室、培养室用新洁尔灭消毒，保证工作台工作区内处于无菌环境；
S2：选取锦地罗新鲜、未开裂植株的花梗，将其用洗衣液洗净，冲洗18min，于无菌超净工作台上用质量浓度为72％的次氯酸钠溶液浸泡花梗4min，再用无菌水将其冲洗6遍后置于灭菌的培养皿中，直接放在超净工作台里，切成长度为1cm的茎段作为外植体备用；
S3：制作培养基：所述培养基为1/2MS培养基+30g/L白糖+0.2mg/L NAA激素+0.05％Ac+6g/L琼脂，将上述物质装入培养瓶中调节pH值为6.2后进行密封，再将培养瓶于118℃条件下蒸汽灭菌18min后冷却备用；
S4：将器具及双手消毒后，取出经过高温灭菌的培养瓶，在超净工作台里按无菌操作要求打开培养瓶的瓶盖，用镊子夹取消毒好的外植体，将镊子伸进瓶口，放在培养基上，盖好瓶盖，拿出超净工作台备用；
S5：对温室内消毒后，采用荧光灯对培养瓶进行光照30d后即长出小苗，两个月后更换培养瓶，对小苗进行分瓶培养，分瓶后继续培养3个月即出瓶炼苗；其中，所述培养室内的温度控制在25℃±1℃，相对湿度为80％，所述荧光灯的光照强度为1800lx；
S6：将小苗从培养瓶中出瓶后，用质量浓度为0.12％的多菌灵溶液浸泡清洗小苗3次，将根部的培养基洗掉，然后将小苗种植到培养土苗盘里，将种好锦地罗苗的苗盘放入练苗大棚内培育2个月后，将其移植入潮湿的地方自然生长即可。
对比例4
一种锦地罗的组织培养育苗方法，包括以下步骤：
S1：将组培操作室、培养室用新洁尔灭消毒，保证工作台工作区内处于无菌环境；
S2：选取锦地罗新鲜、未开裂植株的花梗，将其用洗衣液洗净，冲洗18min，于无菌超净工作台上用质量浓度为72％的次氯酸钠溶液浸泡花梗4min，再用无菌水将其冲洗6遍后置于灭菌的培养皿中，直接放在超净工作台里，切成长度为1cm的茎段作为外植体备用；
S3：制作培养基：所述培养基为MS培养基+30g/L白糖+0.5mg/L 6-BA+6g/L琼脂，将上述物质装入培养瓶中调节pH值为6.2后进行密封，再将培养瓶于118℃条件下蒸汽灭菌18min后冷却备用；
S4：将器具及双手消毒后，取出经过高温灭菌的培养瓶，在超净工作台里按无菌操作要求打开培养瓶的瓶盖，用镊子夹取消毒好的外植体，将镊子伸进瓶口，放在培养基上，盖好瓶盖，拿出超净工作台备用；
S5：对温室内消毒后，采用荧光灯对培养瓶进行光照30d后即长出小苗，两个月后更换培养瓶，对小苗进行分瓶培养，分瓶后继续培养3个月即出瓶炼苗；其中，所述培养室内的温度控制在25℃±1℃，相对湿度为80％，所述荧光灯的光照强度为1800lx；
S6：将小苗从培养瓶中出瓶后，用质量浓度为0.12％的多菌灵溶液浸泡清洗小苗3次，将根部的培养基洗掉，然后将小苗种植到培养土苗盘里，将种好锦地罗苗的苗盘放入练苗大棚内培育2个月后，将其移植入潮湿的地方自然生长即可。
实验案例
具体实验方法为：分别采用本发明实施例1-3及对比例1-4的培养方法，培养后统计并计算出30d后的组织诱导率以及大棚炼苗的生长成活率，具体诱导结果如下表1所示。
表1培养结果
从上表1可看出，采用本发明实施例1-3方法进行锦地罗组织培养，可培养出组织幼苗，组织诱导率高达50％，且组织幼苗的生长成活率高，实现了快速高效繁殖的目的；且相较对比例来说，实施例1-3的方案的组织诱导率和生长成活率均较高，说明采用本发明实施例1-3的方案能好的对锦地罗组织培养和育苗。
上述锦地罗花梗无菌系体系建立的方法打破传统的以种子获得再生植株，同时能够传承母株的优良性状，获得大量组培苗，实现了锦地罗培养诱导无菌芽，达到快速繁殖的作用。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (6)
1.一种锦地罗的组织培养育苗方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：将组培操作室、培养室用新洁尔灭消毒，保证工作台工作区内处于无菌环境；
S2：选取锦地罗新鲜、未开裂植株的花梗，将其用洗衣液洗净，冲洗15～30min，于无菌超净工作台上用次氯酸钠溶液浸泡花梗3～5min，再用无菌水将其冲洗5～6遍后置于灭菌的培养皿中，直接放在超净工作台里，切成长度为1cm的茎段作为外植体备用；
S3：制作培养基：所述培养基为1/4MS培养基配方+28～32g/L白糖+0.3～0.6mg/L 6-BA+0.15～0.25mg/L NAA激素+0.04～0.055％Ac+5～7g/L琼脂，将上述物质装入培养瓶中调节pH值为5.8～6.5后进行密封，再将培养瓶于115～120℃条件下蒸汽灭菌15～20min后冷却备用；
S4：将器具及双手消毒后，取出经过高温灭菌的培养瓶，在超净工作台里按无菌操作要求打开培养瓶的瓶盖，用镊子夹取消毒好的外植体，将镊子伸进瓶口，放在培养基上，盖好瓶盖，拿出超净工作台备用；
S5：对温室内消毒后，采用荧光灯对培养瓶进行光照28～35d后即长出小苗，两个月后更换培养瓶，对小苗进行分瓶培养，分瓶后继续培养2～3个月即出瓶炼苗；
S6：将小苗从培养瓶中出瓶后，用多菌灵溶液浸泡清洗小苗2～3次，将根部的培养基洗掉，然后将小苗种植到培养土苗盘里，将种好锦地罗苗的苗盘放入练苗大棚内培育2～3个月后，将其移植入潮湿的地方自然生长即可。
2.根据权利要求1所述锦地罗的组织培养育苗方法，其特征在于，在步骤S2中，所述次氯酸钠溶液的质量浓度为70～75％。
3.根据权利要求1所述锦地罗的组织培养育苗方法，其特征在于，在步骤S3中，所述培养基为：1/4MS培养基+30g/L白糖+0.5mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA激素+0.05％Ac+6g/L琼脂，pH值为6.2。
4.根据权利要求1所述锦地罗的组织培养育苗方法，其特征在于，在步骤S5中，所述培养室内的温度控制在25℃±2℃，相对湿度超过60％，所述荧光灯的光照强度大于1200lx。
5.根据权利要求1所述锦地罗的组织培养育苗方法，其特征在于，在步骤S5中，所述培养室内的温度控制在25℃±1℃，相对湿度为80％，所述荧光灯的光照强度为1800～2200lx。
6.根据权利要求1所述锦地罗的组织培养育苗方法，其特征在于，在步骤S6中，所述多菌灵液溶液的质量浓度为0.11～0.125％。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20181106 |
|
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