CN108732150A - 检测样本中过氧化亚硝酸盐的方法 - Google Patents
检测样本中过氧化亚硝酸盐的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108732150A CN108732150A CN201810537624.5A CN201810537624A CN108732150A CN 108732150 A CN108732150 A CN 108732150A CN 201810537624 A CN201810537624 A CN 201810537624A CN 108732150 A CN108732150 A CN 108732150A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- peroxynitrite
- probe
- sample
- method described
- fluorescence
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 19
- CMFNMSMUKZHDEY-UHFFFAOYSA-N peroxynitrous acid Chemical compound OON=O CMFNMSMUKZHDEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract 9
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims abstract description 51
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 12
- -1 sulfonic group Chemical group 0.000 claims description 20
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000004185 ester group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 2
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 claims 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 abstract description 16
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 abstract description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 5
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 abstract description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- CMFNMSMUKZHDEY-UHFFFAOYSA-M peroxynitrite Chemical compound [O-]ON=O CMFNMSMUKZHDEY-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 49
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000000047 product Substances 0.000 description 13
- IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M Nitrite anion Chemical compound [O-]N=O IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- IKDUDTNKRLTJSI-UHFFFAOYSA-N hydrazine monohydrate Substances O.NN IKDUDTNKRLTJSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- NWZSZGALRFJKBT-KNIFDHDWSA-N (2s)-2,6-diaminohexanoic acid;(2s)-2-hydroxybutanedioic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O.NCCCC[C@H](N)C(O)=O NWZSZGALRFJKBT-KNIFDHDWSA-N 0.000 description 6
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 6
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 6
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 6
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 6
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 6
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 5
- 125000005909 ethyl alcohol group Chemical group 0.000 description 5
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 5
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N nitrogen oxide Inorganic materials O=[N] MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XXQBEVHPUKOQEO-UHFFFAOYSA-N potassium superoxide Chemical compound [K+].[K+].[O-][O-] XXQBEVHPUKOQEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N tert-butyl alcohol Substances CC(C)(C)O DKGAVHZHDRPRBM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000370738 Chlorion Species 0.000 description 3
- VTLYFUHAOXGGBS-UHFFFAOYSA-N Fe3+ Chemical compound [Fe+3] VTLYFUHAOXGGBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N Magnesium ion Chemical compound [Mg+2] JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- NPYPAHLBTDXSSS-UHFFFAOYSA-N Potassium ion Chemical compound [K+] NPYPAHLBTDXSSS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FKNQFGJONOIPTF-UHFFFAOYSA-N Sodium cation Chemical compound [Na+] FKNQFGJONOIPTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N Zinc dication Chemical compound [Zn+2] PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 3
- 229910001447 ferric ion Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000002189 fluorescence spectrum Methods 0.000 description 3
- 229910001425 magnesium ion Inorganic materials 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 229910001414 potassium ion Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 3
- 229910001415 sodium ion Inorganic materials 0.000 description 3
- MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N Dioxygen Chemical compound O=O MYMOFIZGZYHOMD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CWYNVVGOOAEACU-UHFFFAOYSA-N Fe2+ Chemical compound [Fe+2] CWYNVVGOOAEACU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- FFFHZYDWPBMWHY-VKHMYHEASA-N L-homocysteine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCS FFFHZYDWPBMWHY-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 239000005708 Sodium hypochlorite Substances 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 229910001448 ferrous ion Inorganic materials 0.000 description 2
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 2
- SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N sodium hypochlorite Chemical compound [Na+].Cl[O-] SUKJFIGYRHOWBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-N Nitrous acid Chemical class ON=O IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010063837 Reperfusion injury Diseases 0.000 description 1
- OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M Superoxide Chemical compound [O-][O] OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 1
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- CHWRSCGUEQEHOH-UHFFFAOYSA-N potassium oxide Chemical compound [O-2].[K+].[K+] CHWRSCGUEQEHOH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910001950 potassium oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000007348 radical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000007845 reactive nitrogen species Substances 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000011896 sensitive detection Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
- G01N21/6428—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
- G01N2021/6417—Spectrofluorimetric devices
- G01N2021/6421—Measuring at two or more wavelengths
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pathology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
Abstract
本发明涉及检测样本中过氧化亚硝酸盐的方法。具体地，本发明的检测方法使用一种苯并噻唑‑罗丹明类化合物，其可作为过氧化亚硝酸盐比率荧光探针用于过氧化亚硝酸盐的检测。该方法可实现如下的技术效果中的至少一个：高选择性地识别过氧化亚硝酸盐；可以快速对过氧化亚硝酸盐实现响应；可以实现对过氧化亚硝酸盐的超灵敏分析；可以实现对过氧化亚硝酸盐的比率定量分析。
Description
技术领域
本发明涉及苯并噻唑-罗丹明类化合物作为过氧化亚硝酸盐比率荧光探针用于检测样品中过氧化亚硝酸盐的方法，能够对过氧化亚硝酸盐高选择超灵敏分析，或者其可测定样品中过氧化亚硝酸盐的浓度。
背景技术
活性氧和活性氮物质参与生命系统中多种生理过程，包括信号传导、炎症和抗氧化损伤。过氧化亚硝酸盐作为活性氧和活性氮中的一种强氧化性物质，它是由一氧化氮和超氧自由基反应产生的，具有高的反应活性和不稳定性，在生命系统中的信号传导和抑菌作用中起着重要作用。然而由于其对蛋白质、核酸、脂类等的硝化损伤，过氧化亚硝酸盐也被认为是有害的，细胞中过氧化亚硝酸盐的异常积累将导致许多疾病，包括缺血再灌注损伤、炎症性疾病、神经退行性疾病，甚至是癌症。由于缺乏检测生理水平的过氧化亚硝酸盐的可靠技术，因此过氧化亚硝酸盐的作用机制还没有被完全的阐明。因此，寻求一种特定和灵敏检测生命体中的过氧化亚硝酸盐的技术是至关重要的。
近年来，已报到道的检测过氧化亚硝酸盐的方法有分光光度比色法、高效液相色谱法、化学发光分析法、荧光探针分析法等，其中荧光探针因其高选择、超灵敏、合成简单等独特的优势而成为研究者关注的焦点。目前已报道的荧光探针分析方法仍存在一定的缺陷，例如灵敏度低、选择性差、水溶性差、合成复杂等。生命体内其他活性氧和活性氮与过氧化亚硝酸盐性质相似，它会对过氧化亚硝酸盐的检测构成潜在干扰，并且生理环境中的过氧化亚硝酸盐含量较低，因此，发展高选择性高灵敏荧光探针成为急需解决的课题。另外，比率型荧光探针可以消除环境因素的干扰，因此受到广泛关注。总之，发展高选择性的、高灵敏度、合成简单的、水溶性好的比率荧光探针是本领域技术人员急需解决的问题
发明内容
本领域急需检测样本中过氧化亚硝酸盐的方法。为此，本发明首先合成了一种简单的高选择超灵敏过氧化亚硝酸盐比率荧光探针，以用于检测过氧化亚硝酸盐。具体地，本发明合成了一类新颖的过氧化亚硝酸盐比率荧光探针，其合成简单、选择性好、灵敏度高、能够识别过氧化亚硝酸盐。
一方面，本发明提供了一种过氧化亚硝酸盐比率荧光探针，其为苯并噻唑-罗丹明类化合物，其结构如下：
优选的，本发明的荧光探针是：
另一方面，本发明提供了检测样本中过氧化亚硝酸盐浓度的方法，其包括将本发明的探针与待测样本接触的步骤。
本发明还提供了本发明的探针在制备用于检测样本中过氧化亚硝酸盐浓度的制剂中的用途。
本发明的过氧化亚硝酸盐比率荧光探针可与过氧化亚硝酸盐进行作用，产生荧光光谱的变化，从而实现对过氧化亚硝酸盐的定量检测。
具体而言，本发明的过氧化亚硝酸盐比率荧光探针不与钾离子、钙离子、钠离子、镁离子、锌离子、三价铁离子、二价铁离子、硝酸根、亚硝酸根、氯离子、硫酸根、过氧化氢、超氧化钾等反应，从而实现对过氧化亚硝酸盐的选择性识别。
本发明的过氧化亚硝酸盐比率荧光探针与过氧化亚硝酸盐反应非常灵敏，从而有利于对过氧化亚硝酸盐的检测。
可选择地，本发明的过氧化亚硝酸盐荧光探针的稳定性好，进而能够长期保存使用。
进一步的，本发明的过氧化亚硝酸盐比率荧光探针是高选择性超灵敏过氧化亚硝酸盐比率荧光探针，且合成简单，有利于商业化的推广应用。
附图说明
图1a是探针(5μM)加入过氧化亚硝酸盐(0-60μM)前后的荧光光谱；
图1b是探针(5μM)定量分析不同浓度过氧化亚硝酸盐(0-20μM)的工作曲线；
图2是探针(5μM)加入过氧化亚硝酸盐(50μM)后光谱随时间的变化情况；
图3是人体内常见的物质对探针(5μM)荧光强度的影响。其中编号1-24分别为空白、钾离子、钙离子、钠离子、镁离子、锌离子、三价铁离子、二价铁离子、硝酸根、亚硝酸根、氯离子、硫酸根、半胱氨酸(500μM)、同型半胱氨酸(500μM)、谷胱甘肽(5mM)、过氧化叔丁醇、羟基自由基、过氧化叔丁醇自由基、过氧化氢、超氧化钾、一氧化氮、单线态氧、次氯酸钠、过氧化亚硝酸盐(50μM)(除特殊标明外，其他分析物浓度均为100μM)。柱状图代表的是不同分析物存在下探针在581nm与454nm处荧光强度的比值。
具体实施方式：
本发明提供了上述高选择性高灵敏过氧化亚硝酸盐荧光探针的合成路线、方法及其光谱性能。
本发明的过氧化亚硝酸盐比率荧光探针是一类苯并噻唑-罗丹明类化合物，其具有以下结构通式
上式中：R1，R2，R3，R4，R5，R6，R7，R8，R9，R10为氢原子，直链或支链烷基，直链或支链烷氧基，磺酸基，酯基，羧基；R1，R2，R3，R4，R5，R6，R7，R8，R9和R10可以相同或不同。
该类过氧化亚硝酸盐比率荧光探针的合成路线和方法如下：
具体地，本发明的比率荧光探针可以通过如下方法制备，将一定摩尔比(例如1∶1-1∶20)的苯并噻唑-罗丹明类化合物与水合肼(例如1∶1-1∶20)溶于无水乙醇中冷却，二者的摩尔比为(1∶20)，然后回流一段时间(例如6h)，减压条件下旋蒸干溶剂。如果要得到较纯的产品，可以将粗产品用二氯甲烷和甲醇的混合体系(例如v/v，100∶1)进行柱色谱分离得到纯品。
因此，本发明还提供了水合肼在制备用于检测过氧化亚硝酸盐的比率荧光探针中的用途。
本发明还提供了苯并噻唑-罗丹明类化合物在制备用于检测过氧化亚硝酸盐的比率荧光探针中的用途。
本发明的过氧化亚硝酸盐比率荧光探针的显著特征是能够高选择超灵敏识别过氧化亚硝酸盐以及在人体内的其他离子的存在下能够准确对过氧化亚硝酸盐进行定量分析。
下面将通过借助以下实施例来更详细地说明本发明。以下实施例仅是说明性的，应该明白，本发明并不受下述实施例的限制。
实施例1
(方案1)将200mg(0.38mmol)苯并噻唑-罗丹明类化合物溶于15mL无水乙醇中，再加入57mg(1.14mmol)水合肼回流6h，减压条件下旋蒸干溶剂。如果要得到较纯的产品，可以将粗产品用二氯甲烷和甲醇的混合体系(例如v/v，100∶1)进行柱色谱分离得到纯品，得到淡黄色纯净产品110mg，产率为54％。
(方案2)将200mg(0.38mmol)苯并噻唑-罗丹明类化合物溶于15mL无水乙醇中，再加入95mg(1.9mmol)水合肼回流6h，减压条件下旋蒸干溶剂。如果要得到较纯的产品，可以将粗产品用二氯甲烷和甲醇的混合体系(例如v/v，100∶1)进行柱色谱分离得到纯品，得到淡黄色纯净产品130mg，产率为64％。
(方案3)将200mg(0.38mmol)苯并噻唑-罗丹明类化合物于15mL无水乙醇中，再加入190mg(3.8mmol)水合肼回流6h，减压条件下旋蒸干溶剂。如果要得到较纯的产品，可以将粗产品用二氯甲烷和甲醇的混合体系(例如v/v，100∶1)进行柱色谱分离得到纯品，得到淡黄色纯净产品140mg，产率为69％。
(方案4)将200mg(0.38mmol)苯并噻唑-罗丹明类化合物溶于15mL无水乙醇中，再加入380mg(7.6mmol)水合肼回流6h，减压条件下旋蒸干溶剂。如果要得到较纯的产品，可以将粗产品用二氯甲烷和甲醇的混合体系(例如v/v，100∶1)进行柱色谱分离得到纯品，得到淡黄色纯净产品180mg，产率为89％。
(方案5)将200mg(0.38mmol)苯并噻唑-罗丹明类化合物溶于15mL无水乙醇中，再加入190mg(10mmol)水合肼回流2h，减压条件下旋蒸干溶剂。如果要得到较纯的产品，可以将粗产品用二氯甲烷和甲醇的混合体系(例如v/v，100∶1)进行柱色谱分离得到纯品，得到淡黄色纯净产品105mg，产率为52％。
1H NMR验证了产物结构的正确性。
实施例2
图1a是探针(5μM)加入过氧化亚硝酸盐(0-60μM)前后的荧光光谱。图1b是不同浓度过氧化亚硝酸盐(0-20μM)对探针(5μM)的线性关系图。
配置多个探针浓度为5μM的平行样品于10mL比色管中，然后将不同浓度的过氧化亚硝酸盐加入到测试体系中，摇晃均匀后静置。上述测定是在二甲基亚砜∶水＝3∶7(20mMPBS，pH 7.4)体系中进行的，所使用的探针是实施例1中所制备的探针，且所有光谱测试都是在25℃下测得的。
用荧光光谱仪测试其荧光强度变化，从图1a可以清晰的看出，随着过氧化亚硝酸盐浓度的增加，454nm处的荧光强度降低，581nm处的荧光强度逐渐增强。并且，由图1b可以看出荧光探针(5μM)加入过氧化亚硝酸盐(0-20μM)之后，其两波长处荧光强度的比值与过氧化亚硝酸盐的浓度之间呈现了良好的线性关系，这证明借助于该荧光探针能够对过氧化亚硝酸盐进行比率定量分析。
实施例3
图2是探针(5μM)加入过氧化亚硝酸盐(50μM)后的响应时间。从探针母液中取出50μL置于10mL的测试体系，然后将50μM的过氧化亚硝酸盐加入到测试体系中，摇晃均匀后立即用荧光光谱仪测试其荧光强度变化。上述测定是在二甲基亚砜∶水＝3∶7(20mM PBS，pH7.4)体系中进行的，所使用的探针是实施例1中所制备的探针，且所有光谱测试都是在25℃下测得的。
由图可以清楚地看到，当过氧化亚硝酸盐加入后，经检测6min左右荧光强度达到最大值并保持不变，这说明该探针与过氧化亚硝酸盐反应迅速，能够为过氧化亚硝酸盐的测定提供快速的分析方法。
实施例4
图3是不同分析物对探针(5μM)荧光光谱的影响。
分析物分别为空白、钾离子、钙离子、钠离子、镁离子、锌离子、三价铁离子、二价铁离子、硝酸根、亚硝酸根、氯离子、硫酸根、半胱氨酸(500μM)、同型半胱氨酸(500μM)、谷胱甘肽(5mM)、过氧化叔丁醇、羟基自由基、过氧化叔丁醇自由基、过氧化氢、超氧化钾、一氧化氮、单线态氧、次氯酸钠、过氧化亚硝酸盐(50μM)、(除特殊标明外，其他分析物浓度均为100μM)。柱状图代表的是不同分析物存在下探针在581nm处和454nm处的荧光强度比值。上述测定是在二甲基亚砜∶水＝3∶7(20mM PBS，pH 7.4)体系中进行的，所使用的探针是实施例1中所制备的探针，且所有光谱测试都是在25℃下测得的。具体地，配置多个探针浓度为5μM的平行样品于10mL比色管中，然后加入一定量的分析物，摇匀，待10分钟后测定。由图3可以清晰的看出，该探针对过氧化亚硝酸盐具有高的选择性。
虽然用上述实施方式描述了本发明，应当理解的是，在不背离本发明的精神的前提下，本发明可进行进一步的修饰和变动，且这些修饰和变动均属于本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.检测样本中过氧化亚硝酸盐的方法，其包括将探针与待测样本接触的步骤，所述探针具有以下结构：
其中：R1，R2，R3，R4，R5，R6，R7，R8，R9和R10为独立地选自由氢原子、直链或支链烷基、直链或支链烷氧基、磺酸基、酯基和羟基组成的组；且其中的R1，R2，R3，R4，R5，R6，R7，R8，R9和R10可以相同或不同。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述探针为如下结构的化合物：
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述检测是在二甲基亚砜∶水＝3∶7，20mM PBS，pH7.4的体系中进行的。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述的样本是水或血液。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述检测是定性的或定量的。
6.根据权利要求4所述的方法，其包括在将所述探针与样品接触之前将样品进行稀释的步骤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810537624.5A CN108732150A (zh) | 2018-05-30 | 2018-05-30 | 检测样本中过氧化亚硝酸盐的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810537624.5A CN108732150A (zh) | 2018-05-30 | 2018-05-30 | 检测样本中过氧化亚硝酸盐的方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN108732150A true CN108732150A (zh) | 2018-11-02 |
Family
ID=63935919
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201810537624.5A Pending CN108732150A (zh) | 2018-05-30 | 2018-05-30 | 检测样本中过氧化亚硝酸盐的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN108732150A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108586473A (zh) * | 2018-05-30 | 2018-09-28 | 济南大学 | 一种高选择超灵敏过氧化亚硝酸盐比率荧光探针 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104031039A (zh) * | 2013-03-05 | 2014-09-10 | 西北大学 | 氧杂蒽类染料及其制备方法和应用 |
| CN105086998A (zh) * | 2015-09-08 | 2015-11-25 | 济南大学 | 一种溶酶体靶向次氯酸分子荧光探针及其制备方法和应用 |
-
2018
- 2018-05-30 CN CN201810537624.5A patent/CN108732150A/zh active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104031039A (zh) * | 2013-03-05 | 2014-09-10 | 西北大学 | 氧杂蒽类染料及其制备方法和应用 |
| CN105086998A (zh) * | 2015-09-08 | 2015-11-25 | 济南大学 | 一种溶酶体靶向次氯酸分子荧光探针及其制备方法和应用 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| BAOCUN ZHU ET AL.: "《A highly specific far-red fluorescent probe for imaging endogenous peroxynitrite in the mitochondria of living cells》", 《SENSORS AND ACTUATORS B: CHEMICAL》 * |
| HONGYU LI ET AL.: "《Observation of the Generation of ONOO− in Mitochondria under Various Stimuli with a Sensitive Fluorescence Probe》", 《AMERICAN CHEMICAL SOCIETY》 * |
| MINGGUANG REN ET AL.: "《A lysosome-targeted and ratiometric fluorescent probe for imaging exogenous and endogenous hypochlorous acid in living cells》", 《J. MATER. CHEM. B》 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108586473A (zh) * | 2018-05-30 | 2018-09-28 | 济南大学 | 一种高选择超灵敏过氧化亚硝酸盐比率荧光探针 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Zhang et al. | A BODIPY-based dual-responsive turn-on fluorescent probe for NO and nitrite | |
| Kaushik et al. | Alizarin red S–zinc (ii) fluorescent ensemble for selective detection of hydrogen sulphide and assay with an H 2 S donor | |
| CN103012199B (zh) | 快速高选择性硫化氢比色探针的制备方法 | |
| CN107746406B (zh) | 一种超灵敏高选择性次氯酸荧光探针的制备及应用 | |
| CN108530459A (zh) | 一种荧光探针的制备方法 | |
| CN109897080A (zh) | 高选择超灵敏肝癌特异性过氧化亚硝酸盐探针及其应用 | |
| CN108409697A (zh) | 一种超灵敏高选择性检测次氯酸的探针 | |
| CN108689933A (zh) | 一种快速高选择性分析次氯酸的荧光探针 | |
| CN111039972B (zh) | 4-羟基咔唑类化合物作为氟离子荧光探针的应用 | |
| CN105400508A (zh) | 肼浓度的检测方法 | |
| Yang et al. | New Schiff base probe for the fluorometric turn-on sensing of Cd2+ ions and bio-imaging application | |
| Wang et al. | A smartphone-adaptable dual-signal readout chemosensor for rapid detection of nitrite in food samples | |
| CN111205220B (zh) | 一种荧光探针及其制备方法和应用 | |
| CN113624727A (zh) | 一种检测肼浓度的方法 | |
| CN110878085B (zh) | 一种快速高选择性次溴酸荧光探针、制备方法与应用 | |
| CN108732150A (zh) | 检测样本中过氧化亚硝酸盐的方法 | |
| CN110981857B (zh) | 一种超灵敏亚铁离子荧光探针、制备方法与应用 | |
| CN110044864B (zh) | 基于香豆素二酮的荧光探针在检测过氧亚硝酸根离子中的应用 | |
| CN108717055A (zh) | 高选择超灵敏过氧化亚硝酸盐比率荧光探针的用途 | |
| CN108586473A (zh) | 一种高选择超灵敏过氧化亚硝酸盐比率荧光探针 | |
| CN108801993A (zh) | 一种快速高选择性分析次氯酸的试剂盒 | |
| CN108623522A (zh) | 一种快速高选择性检测次氯酸的方法 | |
| CN105418500A (zh) | 高选择性肼比率荧光探针及其制备方法 | |
| CN109734710A (zh) | 一种检测半胱氨酸的荧光探针及其合成方法与应用 | |
| CN112500382B (zh) | 一种可逆检测二氧化硫/甲醛的比率荧光探针、制备方法与应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20181102 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |