CN108727581A - 以苯硼酸酯为连接单元的两亲性喜树碱高分子前药及其制备方法和应用 - Google Patents

以苯硼酸酯为连接单元的两亲性喜树碱高分子前药及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种以苯硼酸酯为连接单元的两亲性喜树碱高分子前药及其共传递胶束系统，以苯硼酸儿茶酚酯(BC)为连接单元，合成聚乙二醇‑聚谷氨酸喜树碱两嵌段聚合物(mPEG‑BC‑PGluCPT)，进而构建其载阿霉素胶束(mPEG‑BC@PGluCPT·Dox)。本发明针对喜树碱水溶性不好，通过对喜树碱20位羟基进行修饰，合成一种喜树碱作为疏水端的，可有效促进两嵌段聚合物组装成为胶束的高分子前药。提高喜树碱的溶解性，增加喜树碱内酯环的稳定性，提高疗效和生物利用度，以期克服喜树碱临床治疗的局限性。本发明制备的两亲性喜树碱高分子前药可以用于构筑纳米药物共同传递系统，具有较好的释药性，较强的细胞抑制率和良好的细胞吞噬性。

Description

以苯硼酸酯为连接单元的两亲性喜树碱高分子前药及其制备 方法和应用
技术领域
本发明涉及生物医药技术、纳米医药及新材料技术领域，具体涉及一种以苯硼酸酯为连接单元的两亲性喜树碱高分子前药的合成及其共传递胶束系统的构建及应用。
背景技术
传统化疗药物在肿瘤的治疗上取得了很大成功，但有其存在的很多局限性限制了其临床疗效的进一步提高，如严重的毒副作用，选择性差，肿瘤细胞易对其产生耐药性等。喜树碱(Camptothecin,CPT)是一种类色氨酸-萜烯生物碱类抗癌药物，对治疗多种恶性肿瘤具有显著疗效，通过与DNA拓扑异构酶Ⅰ(DNAtopoisomeraseⅠ)作用，抑制DNA的复制、转录和有丝分裂。其分子结构中闭合的内酯环形式是其具有肿瘤抑制活性的有效形式，但在生理环境下，喜树碱内酯环的20位羟基能与邻位的酯羰基形成分子内氢键，使内酯环水解开环，从而导致活性降低。另外，喜树碱的水溶性很差，阻碍了其在临床治疗中的应用。
现有技术中，大多数通过改善喜树碱的溶解性来构建喜树碱前药，A.V.Yurkovetskiy等报导环糊精聚合物形式包裹喜树碱的纳米药物传递系统是在1998年被发现、2003年被公布的线性环糊精共聚物的基础上，对聚合物进行羧基化修饰，使喜树碱与其键合在一起(Advance DrugDeliveryReview,2009,61,1193-1202)，提高喜树碱的溶解性，但是此高分子前药缺乏靶向性，生物降解能力差，并且不具备细胞内定点释放药物的功能。
在癌症的临床治疗中，单一化疗的局限性很大，如容易产生耐药性，增加药物剂量，副作用相应增加。受到艾滋病的“鸡尾酒”疗法启发，临床开发了治疗癌症的“鸡尾酒”疗法，但是药物进入机体内不能协同分布，造成这种疗法在临床应用中受到很大的限制。纳米药物共同传递系统能够实现药物在机体内协同分布，Gu等(Biomaterials,2014,35,7194-7203)利用NHS-PEG5000-NHS构建喜树碱前药，与脂溶性药物阿霉素共传递，实现了药物在体内的协同分布,但是其构建的胶束通过被动靶向聚集在肿瘤组织后,只能依靠胞吞作用进入细胞释放药物,对细胞内药物浓度及其作用的发挥有一定的限制性。
苯硼酸(PBA)类材料应用研究最多的领域是糖尿病治疗，利用PBA与糖可逆结合的能力来制备胰岛素的投递载体。随着对PBA在生理环境下糖敏性研究的深入，研究者们发现其在抗肿瘤纳米药物载体方面有独特的刺激响应性。苯硼酸与顺式的邻或间二羟基化合物形成可逆的具有pH响应性的苯硼酸酯键,在酸性环境中苯硼酸酯键容易发生裂解，Yang等(Acta Biomaterialia,2014,10,3686-3695)根据此特性，将PBA修饰的胆固醇与聚乙二醇-聚赖氨酸-g-邻苯二酚键合在一起，得到具有pH敏感性能的两亲性聚合物，此聚合物自组装形成纳米胶束，物理包裹药物Dox,该载药胶束在pH 7.4环境中稳定存在，但是在体外释药实验中，当pH降到5.0时，胶束内Dox的释放速度加快。Deshayes等(Journal oftheAmericanChemical Society,2013,135,15501-15507)将PBA与聚乙二醇-b-聚(L-谷氨酸)修饰在一起，再将得到的嵌段共聚物组装成胶束，实验研究在胶束状态下PBA与细胞膜表面糖蛋白侧链末端的单糖唾液酸(SA)的结合能力。研究发现，即使在pH 6.5的条件下，PBA对SA的结合能力依然很强，导致该胶束的细胞摄取增加、小鼠活体实验中胶束在肿瘤部位的滞留时间明显增加,抗癌作用明显提高，表明将抗癌药物载体与PBA修饰在一起，可以使载体具有靶向癌细胞的功能，有利于载体在肿瘤部位的富集并促进载体的细胞摄取。但是此研究中也发现PBA材料对其他单糖类(如半乳糖，甘露糖，葡萄糖)也有一定结合能力。人体内血红蛋白及网状内皮组织均含有SA,这对PBA修饰的载药胶束能够靶向到肿瘤组织造成很大的影响。
发明内容
为了克服现有技术中的上述缺陷及提供一种治疗肺癌，前列腺癌等广谱抗癌前药及制备方法，本发明提出了一种以苯硼酸酯为连接单元的两亲性喜树碱高分子前药及其共传递胶束系统，以该两亲性喜树碱高分子前药构筑的载药胶束不仅在体内实现长效循环，mPEG壳层包裹的苯硼酸酯键可以避免胶束与血红蛋白结合及被网状内皮组织的识别，在肿瘤部位富集后，在肿瘤弱酸性环境的影响下，胶束可脱去mPEG壳层，避免mPEG阻碍细胞内吞的同时，露出的苯硼酸可以增强其介导的细胞内吞过程，使药物在溶酶体中释放，实现药物的定点快速释放。本发明制备的两亲性喜树碱高分子前药可以用于构筑纳米胶束及纳米药物共同传递系统，具有较好的释药性，良好的细胞吞噬性，较强的抗肿瘤活性。本发明基于PBA材料对酸性环境的刺激响应性，在喜树碱高分子前药的制备中引入苯硼酸酯键；mPEG做为亲水部分，引入喜树碱的高分子前药，构建的两亲性喜树碱高分子前药自组装形成胶束，包裹脂溶性药物阿霉素，能够实现体内长效循环，对癌变组织能够被动靶向，在肿瘤部位累积后,能够脱去mPEG壳层,暴露出的苯硼酸键对癌变细胞表面过表达的SA能够主动靶向，增强细胞内吞，实现药物细胞内定点稳定释放，实现药物的协同效果，具有较高的应用前景。
本发明提出了一种以苯硼酸酯为连接单元的两亲性喜树碱高分子前药mPEG‐BC‐PGluCPT，所述两亲性高分子前药的结构如式(I)所示，
式(I)中：
m＝40-120，x＝2-5。
优选地，m＝44，x＝2。
其中，mPEG的结构式如式(i)所示：
其中，BC的结构式如式(ii)所示：
其中，PGluCPT的结构式如式(iii)所示：
本发明还提出了一种以苯硼酸酯为连接单元的两亲性喜树碱高分子前药mPEG-BC-PGluCPT的合成方法：其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(a)在溶剂中，3,4-二羟基苯乙酸、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐、1-羟基苯并三唑、N,N-二异丙基乙胺、mPEG-NH2进行酰胺化反应，合成如式(1)所示的mPEG-NH2的多巴衍生物mPEG-3,4-DA；
(b)在溶剂中，mPEG-3,4-DA与3-氨基苯硼酸脱水缩合，得到如式(2)所示的mPEG的苯硼酸酯衍生物mPEG-BC；
(c)在溶剂中，喜树碱与Boc-L-谷氨酸-1-叔丁酯、4-二甲氨基吡啶,1-羟基苯并三氮唑，1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐，三乙胺进行酯化反应，得到如式(3)所示的Boc-Glu(CPT)-OtBu；
(d)在溶剂中，利用TFA，脱除Boc-Glu(CPT)-OtBu分子中的Boc保护基团，得到如式(4)所示的Glu(CPT)-OH；
(e)在溶剂中，三光气作为引发剂，在三乙胺的作用下，Glu(CPT)-OH发生环化反应，Glu(CPT)-OH中的α-氨基酸结构形成N-羧基环内酸酐，得到结构如式(5)所示的Glu(CPT)-NCA；
(f)在溶剂中，以mPEG-BC作为大分子引发剂，对Glu(CPT)-NCA进行开环聚合反应，得到如式(I)所示的以苯硼酸酯为连接单元的两亲性喜树碱高分子前药mPEG-BC-PGluCPT；所述反应过程如路线(a)所示：
路线(a)
其中，m＝40-120，x＝2-5。
优选地，m＝44，x＝2。
其中，mPEG的结构式如式(i)所示：
其中，BC的结构式如式(ii)所示：
其中，PGluCPT的结构式如式(iii)所示：
步骤(a)中，所述溶剂选自二氯甲烷、二甲基甲酰胺；优选地，为二氯甲烷；进一步优选地，为无水二氯甲烷。
步骤(a)中，所述3,4-二羟基苯乙酸、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐、1-羟基苯并三唑、N,N-二异丙基乙胺、mPEG-NH2的摩尔比为(1.2-2)：(1.2-3)：(1.2-3)：(2-4)：1；优选地，为1.5：1.6：1.6：3：1。
步骤(a)中，所述酰胺化反应的温度为20℃-37℃；优选地，为室温25℃。
步骤(a)中，所述酰胺化反应的时间为8h-16h；优选地，为12h。
步骤(a)中，优选在避光，氮气保护下进行。
步骤(b)中，所述脱水缩合反应的溶剂选自四氢呋喃、甲苯；优选地，为甲苯。
步骤(b)中，所述mPEG-3,4-DA与3-氨基苯硼酸的摩尔比为1：(5-10)；优选地，为1：10。
步骤(b)中，所述脱水缩合反应的温度为100-130℃；优选地，为120℃。
步骤(b)中，所述脱水缩合反应的时间为3-8h；优选地，为5h。
步骤(b)中，优选在氮气保护下进行。
步骤(c)中，所述酯化反应的溶剂选自二氯甲烷、二甲基甲酰胺；优选地，为二氯甲烷。
步骤(c)中，所述Boc-L-谷氨酸-1-叔丁酯、4-二甲氨基吡啶、1-羟基苯并三氮唑、1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐、三乙胺、喜树碱的摩尔比为(1.5-2)：(0.25-1)：(1-1.5)：(1-1.5)：(1-1.5)：1；优选地，为2：0.5：1.2：1.2：1.2：1。
步骤(c)中，所述酯化反应的温度为20-37℃；优选地，为室温25℃。
步骤(c)中，所述酯化反应的时间为3-8h；优选地，为5h。
步骤(c)中，优选在氮气保护下进行。
步骤(c)中，4-二甲氨基吡啶,1-羟基苯并三氮唑，1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐，三乙胺是对Boc-L-谷氨酸-1-叔丁酯中的羧酸进行活化，然后活化后的Boc-L-谷氨酸-1-叔丁酯中的羧酸与喜树碱分子中的羟基进行酯化反应。
步骤(d)中，所述脱除反应的溶剂选自二氯甲烷、乙酸乙酯；优选地，为二氯甲烷；进一步优选地，为无水二氯甲烷。
步骤(d)中，所述TFA、Boc-Glu(CPT)-OtBu的摩尔比为(10-15)：1；优选地，为13：1。
步骤(d)中，所述脱除反应的温度为0-25℃；优选地，为室温25℃。
步骤(d)中，所述脱除反应的时间为1.5-4h；优选地，为3h。
步骤(d)中，优选在氮气保护下进行。
步骤(d)中，将Boc-Glu(CPT)-OtBu加入溶剂后，优选在0℃条件下将三氟乙酸缓慢滴加入反应体系。
步骤(e)中，所述引发剂选自三乙胺、吡啶、N,N-二异丙基乙胺；所述引发剂的作用为促使三光气分解，与反应中产生的多余光气成盐；
步骤(e)中，所述溶剂选自乙酸乙酯、四氢呋喃；优选地，为四氢呋喃；进一步优选地，为无水四氢呋喃。
步骤(e)中，所述三光气、三乙胺、Glu(CPT)-OH的摩尔比为(1/3-1)：(1-2)：1；优选地，为2/3：1：1。
步骤(e)中，所述环化反应的温度为48-55℃；优选地，为50℃。
步骤(e)中，所述环化反应的时间为1-4h；优选地，为3h。
步骤(f)中，所述开环聚合反应的溶剂选自四氢呋喃、二甲基甲酰胺；优选地，为四氢呋喃；进一步优选地，为无水四氢呋喃。
步骤(f)中，所述mPEG-BC、Glu(CPT)-NCA的摩尔比为1：(3-10)；优选地，为1：3.3。
步骤(f)中，所述开环聚合反应的温度为20-37℃；优选地，为25℃。
步骤(f)中，所述开环聚合反应的时间为24-72h；优选地，为48h。
步骤(f)中，优选在氮气保护下进行。
在一具体实施方式中，所述以苯硼酸酯为连接单元的两亲性喜树碱高分子前药mPEG-BC-PGluCPT的制备过程如路线(b)所示：
路线(b)
本发明还提出了一种将所述的以苯硼酸酯为连接单元的两亲性喜树碱高分子前药制备前药纳米胶束mPEG-BC@PGluCPT的方法，所述方法包括以下步骤：
(1)称取2mg式(I)mPEG-BC-PGluCPT，溶于有机溶剂和水的混合溶液；
(2)用步骤(1)得到的溶液进行过滤，然后将滤液装入透析袋透析48h，得到所述纳米胶束mPEG-BC@PGluCPT。
其中，所述有机溶剂选自四氢呋喃、二甲亚砜、丙酮；优选地，为四氢呋喃。
其中，步骤(1)得到的溶液中，式(I)mPEG-BC-PGluCPT的浓度为0.1-0.5mg/mL；优选地，0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.3mg/mL、0.4mg/mL、0.5mg/mL。
其中，所述式(I)mPEG-BC-PGluCPT中，m＝44，x＝2。
当选用聚合度(x)高的式(I)mPEG-BC-PGluCPT，水溶液极容易产生沉淀；而选用x＝2的聚合物溶液，当浓度等于1mg/mL时，胶束溶液就会有沉淀产生，但是浓度为0.1mg/mL，0.5mg/mL时，胶束溶液很稳定，结合图5分析可知，在4℃低温条件下，0.5mg/mL的式(I)mPEG-BC-PGluCPT的聚合物前药胶束溶液能够长时间保持稳定。
在本发明一个具体实施方式中，所述前药纳米胶束mPEG-BC@PGluCPT的方法包括以下步骤：
(1)称取2mg式(I)mPEG-BC-PGluCPT，溶于1mL四氢呋喃，将得到的四氢呋喃溶液滴加入搅拌速度为500r/min的10mL超纯水；
(2)用0.45μm的针式过滤器过滤步骤(1)得到的溶液，然后将滤液装入透析袋透析48h(每6h换一次超纯水)，冷冻干燥，制得所述纳米胶束mPEG-BC@PGluCPT冻干粉。
其中，所述纳米胶束mPEG-BC@PGluCPT的结构示意图如图1A所示，该纳米胶束中的硼酸酯键具有酸敏感特性，对肿瘤组织微环境具有响应性；胶束中的小分子药物喜树碱通过化学键键合在载体上，在体内长效循环过程中不会提前释药。
本发明还提出了一种由上述方法制备得到的前药纳米胶束mPEG-BC@PGluCPT。
本发明还提出了将所述的以苯硼酸酯为连接单元的两亲性喜树碱高分子前药或纳米胶束mPEG-BC@PGluCPT用于制备药物共同传递系统，所述药物(如阿霉素，紫杉醇等)通过物理方式包裹在胶束内，可以实现联合用药的应用。所述纳米药物共同传递系统用于增强肿瘤细胞的内吞特性，增强肿瘤细胞抑制的活性，实现药物的协同作用。
其中，所述药物为脂溶性药物；优选地，所述脂溶性药物包括阿霉素、紫杉醇，SN38、氮芥等。
其中，所述药物共同传递系统为纳米药物共同传递系统；优选地，所述纳米药物共同传递系统为酸敏感型。
其中，所述纳米药物共同传递系统用于增强肿瘤细胞的内吞特性，增强肿瘤细胞抑制的活性，实现药物体内长效循环，实现药物细胞内定点稳定释放，对病变细胞能够主动靶向增强介导细胞内吞，实现药物的协同效果。
其中，所述肿瘤细胞包括肝癌细胞、胰腺癌细胞、结肠癌细胞、肺癌细胞等；优选地，为肝癌细胞、胰腺癌细胞。
本发明还提出了一种由mPEG-BC@PGluCPT制备得到的载药纳米胶束(药物共同传递系统)，如载阿霉素纳米胶束mPEG-BC@PGluCPT·Dox；所述药物(如阿霉素，紫杉醇等)通过物理方式包裹在胶束内。
本发明还提出了一种利用所述以苯硼酸酯为连接单元的两亲性喜树碱高分子前药制备载阿霉素纳米胶束mPEG‐BC@PGluCPT·Dox(纳米药物共同传递系统)的方法，所述方法包括以下步骤：
(1)称取10mgmPEG-BC-PGluCPT和2mg Dox，溶于1mLDMSO，将得到的溶液滴加入搅拌速度为500r/min的20mL超纯水；
(2)用0.45μm的针式过滤器过滤步骤(1)得到的溶液，将滤液装入截留分子量为1000的透析袋透析48h(每6h换一次超纯水)，冷冻干燥，制得所述载阿霉素纳米胶束mPEG-BC@PGluCPT·Dox冻干粉。
其中，所述纳米药物共同传递系统运载阿霉素，构建的载阿霉素胶束的结构如图1D所示，所述阿霉素Dox通过物理方式包裹在胶束内。
本发明还提出了一种由上述方法制备得到的载阿霉素纳米胶束mPEG-BC@PGluCPT·Dox；所述mPEG-BC@PGluCPT·Dox的结构如图1D所示，该胶束中的硼酸酯键具有酸敏感特性，对肿瘤组织微环境具有响应性。
本发明利用苯硼酸酯对肿瘤微酸性环境的响应性，苯硼酸对细胞膜表面的寡聚糖具有非常强的结合能力，以及喜树碱分子结构中20位羟基被修饰后可以有效改善喜树碱的水溶性及内酯环稳定性的特点，以苯硼酸儿茶酚酯(BC)为连接单元合成两亲性喜树碱高分子前药(mPEG‐BC‐PGluCPT)，进而构建其载阿霉素胶束(mPEG‐BC@PGluCPT·Dox)。研究该mPEG‐BC@PGluCPT·Dox胶束对肿瘤微环境的主动有序响应行为及快速释药过程，评价其联合用药协同抑制肿瘤活性。该主动有序响应行为及快速释药过程具体可描述为：前药胶束经长效循环充分实现EPR效应后富集于肿瘤组织；胶束中的硼酸酯键对肿瘤细胞外微酸性环境响应而断裂脱去mPEG壳层；裸露出苯硼酸，苯硼酸与细胞膜表面的寡聚糖结合实现苯硼酸介导增强的主动胞吞，在溶酶体内释放出被包裹的药物和喜树碱。
本发明所涉及的以苯硼酸酯为连接单元的两亲性喜树碱高分子前药的结构及载阿霉素纳米胶束mPEG-BC@PGluCPT·Dox示意图如图1所示，实施步骤如下：
第一步：两亲性喜树碱高分子前药的合成与表征
(1)喜树碱与Boc-L-谷氨酸-1-叔丁酯酯化，得到Boc-Glu(CPT)-OtBu；(2)利用TFA，脱除Boc-Glu(CPT)-OtBu分子中的Boc保护基团，得到Glu(CPT)-OH；(3)三光气作为引发剂，Glu(CPT)-OH中的α-氨基酸结构形成N-羧基环内酸酐，得到Glu(CPT)-NCA；(4)合成mPEG-NH2的多巴衍生物mPEG-3,4-DA；(5)mPEG-3,4-DA与3-氨基苯硼酸脱水缩合，得到mPEG的苯硼酸酯衍生物mPEG-BC；(6)以mPEG-BC作为大分子引发剂对Glu(CPT)-NCA进行开环聚合，得到所述酸降解释药的以苯硼酸酯为连接单元的两亲性喜树碱高分子前药mPEG-BC-PGluCPT，表征其结构；(4)合成用于对照研究的不含苯硼酸酯键的两亲性喜树碱高分子前药mPEG-PGluCPT。
第二步：两亲性喜树碱高分子前药纳米胶束系统的构筑及表征
用溶剂蒸发法制备mPEG-BC@PGluCPT胶束及载阿霉素胶束mPEG-BC@PGluCPT·Dox，测定其临界胶束浓度；用透射电镜(TEM)观测其形貌，用动态光散射仪(DLS)测定粒径大小及分布；用紫外吸收法测定载药胶束的包封率和载药量。
所述mPEG-BC@PGluCPT胶束的结构示意图如图1A所示：
本发明中，两亲性喜树碱高分子前药mPEG-BC-PGluCPT自组装形成mPEG-BC@PGluCPT胶束时，mPEG端形成亲水外层，PGluCPT形成疏水球状内核(如图1B所示)，mPEG和PGluCPT之间以苯硼酸酯为连接单元。在酸性条件下苯硼酸酯键断裂时，胶束脱去mPEG外层，裸露出苯硼酸端，结构示意图如下图1B所示；其化学结构如下式(iv)所示：
第三步：两亲性喜树碱高分子前药纳米胶束mPEG-BC@PGluCPT的降解及释药性能
用DLS追踪mPEG-BC@PGluCPT纳米胶束在模拟肿瘤微环境pH值(pH 6.5,pH 6.0,pH5.0)及正常血液pH值(pH 7.4)中降解后粒径变化情况；测定纳米胶束mPEG-BC@PGluCPT及载药胶束mPEG-BC@PGluCPT·Dox的释药性能。
第四步：mPEG-BC@PGluCPT·Dox纳米胶束的细胞吞噬
研究细胞表面SA较多的HepG2细胞对mPEG-BC@PGluCPT·Dox胶束吞噬行为，以细胞表面SA较少的HL7702细胞作为对照。在不同pH值条件下培养4h后，用流式细胞仪测量细胞吞噬Dox标记胶束样品的荧光值。
第五步：前药纳米胶束mPEG-BC@PGluCPT和载阿霉素纳米胶束mPEG-BC@PGluCPT·Dox的细胞毒性研究
噻唑蓝(MTT)比色法检测mPEG-BC@PGluCPT前药纳米胶束，载阿霉素纳米胶束mPEG-BC@PGluCPT·Dox，CPT及Dox在pH 7.4，pH 6.5，pH 6.0培养条件下HepG2细胞毒性。
本发明中，所述mPEG-BC@PGluCPT前药纳米胶束，载阿霉素纳米胶束mPEG-BC@PGluCPT·Dox，小分子药物CPT及Dox在不同培养条件下关于HepG2的IC50如下表1所示。
本发明的有益效果在于，本发明提供了一种喜树碱高分子前药mPEG-BC-PGluCPT的制备方法，以苯硼酸儿茶酚酯(BC)为连接单元，合成聚乙二醇-聚谷氨酸喜树碱两嵌段聚合物(mPEG-BC-PGluCPT)，进而构建其载阿霉素胶束(mPEG-BC@PGluCPT·Dox)。本发明针对喜树碱水溶性不好，通过对喜树碱20位羟基进行修饰，合成一种喜树碱作为疏水端的，可有效促进两嵌段聚合物组装成为胶束的高分子前药。提高喜树碱的溶解性，增加喜树碱内酯环的稳定性，提高疗效和生物利用度，以期克服喜树碱临床治疗的局限性。本发明由所述mPEG-BC-PGluCPT制备的纳米药物共同传递系统，本发明的纳米药物共同传递系统具有良好的释药性，对肿瘤组织的弱酸性环境具有响应性，良好的细胞吞噬性和对肿瘤细胞较强的抑制活性。
附图说明
图1：A为载药纳米胶束mPEG-BC@PGluCPT的结构示意图；B为mPEG-BC@PGluCPT胶束在酸性条件下苯硼酸酯键断裂时，胶束脱去mPEG外层，裸露出苯硼酸端，结构示意图；C为PGluCPT示意图；D为载阿霉素纳米胶束mPEG-BC@PGluCPT·Dox的结构示意图。
图2为酸降解释药的以苯硼酸酯为连接单元的两亲性喜树碱高分子前药mPEG-BC-PGluCPT的1HNMR谱图。
图3为mPEG-BC@PGluCPT胶束的粒径分布(DLS图)及形貌图(TEM图)。
图4为mPEG-BC@PGluCPT胶束在不同pH缓冲溶液中的粒径变化图。pH 7.4中胶束粒径在180nm左右，相对稳定，随介质pH降低，胶束的粒径呈明显增大的趋势，分别达到420,530,700nm。
图5为mPEG-BC@PGluCPT胶束在4℃水相环境中的稳定性。粒径有微微涨幅，基本保持不变。
图6为mPEG-BC@PGluCPT前药胶束及不含硼酸酯键的mPEG@PGluCPT胶束在不同pH缓冲溶液中的药物释放行为。CPT分子结构中20位羟基形成的酯键在碱性环境中快速水解；A:mPEG-BC@PGluCPT；B mPEG@PGluCPT。
图7为载阿霉素纳米胶束mPEG-BC@PGluCPT·Dox在不同pH缓冲溶液中的药物释放行为。
图8为HepG2、HL-7702细胞在不同pH条件下对载阿霉素纳米胶束mPEG-BC@PGluCPT·Dox的细胞吞噬行为荧光强度统计图。
具体实施方式
结合以下具体实施例和附图，对本发明作进一步的详细说明。实施本发明的过程、条件、实验方法等，除以下专门提及的内容之外，均为本领域的普遍知识和公知常识，本发明没有特别限制内容。
实施例1、mPEG-3,4-DA的合成
称取3,4-二羟基苯乙酸(0.126g,0.750mmol)溶于25mL无水二氯甲烷，超声促其分散，形成混悬液，依次加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(0.154g，0.800mmol)，1-羟基苯并三唑(0.108g，0.800mmol)，N,N-二异丙基乙胺(0.260mL，1.500mmol)，0.5h后，在氮气保护下加入mPEG-NH2(1.000g，0.500mmol)，反应装置避光，室温反应过夜，浓缩后加入纯水溶解，用二氯甲烷萃取数次，无水硫酸钠干燥有机相后，滤液浓缩拌样过硅胶柱纯化，流动相为二氯甲烷与甲醇按一定体积比(30:1)混合。纯化的产物浓缩后加入冰乙醚中沉淀，抽滤得到白色沉淀，多次洗涤过滤之后干燥得到mPEG-3,4-DA0.960g，产率85％。
所述mPEG-3,4-DA的结构如式(1)所示；
其中，m＝44。
实施例2、mPEG-BC的合成
称取3-氨基苯硼酸(0.191g，1.390mmol)及200mL重蒸后的甲苯加入500mL单口烧瓶，超声促其溶解，在氮气保护下加入mPEG-3,4-DA(0.300g，0.139mmol)，120℃反应5h，浓缩反应液后，加入30mL无水四氢呋喃溶解，将四氢呋喃溶液转移至截留分子量为1000的透析袋中，无水四氢呋喃透析5h后滴加到100mL冰乙醚中，洗涤抽滤数次后得到淡黄色粉末mPEG-BC 0.360g，产率87％。
所述mPEG-BC的结构式如式(2)所示；
其中，m＝44。
实施例3、Boc-Glu(CPT)-OtBu的合成
称取Boc-L-谷氨酸-1-叔丁酯(1.7416g，5.74mmol)，4-二甲氨基吡啶(0.1754g，1.44mmol)，1-羟基苯并三氮唑(0.4654g，3.44mmol)，1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐(0.6604g，3.44mmol)，三乙胺(0.48mL，3.44mmol)，及110mL无水二氯甲烷于反应瓶中，0.5h后，在氮气保护下加入喜树碱(1.000g，2.87mmol)，室温反应5h后，反应液变澄清。加入pH 1的盐酸水溶液终止反应，用饱和NaCl水溶液萃取三次，无水NaSO4干燥有机相，过滤后，滤液浓缩拌样过硅胶柱纯化，流动相为二氯甲烷与甲醇按一定体积比(300:1)混合，纯化后的产物为淡黄色粉末Boc-Glu(CPT)-OtBu 1.54g，产率85％。
所述Boc-Glu(CPT)-OtBu的结构式如式(3)所示；
实施例4、Glu(CPT)-OH的合成
称取Boc-Glu(CPT)-OtBu(0.500g，0.789mmol)及20mL无水二氯甲烷于反应瓶中，氮气保护及0℃条件下将三氟乙酸缓慢滴加入反应体系，室温反应3h，将浓缩后的反应液滴加入50mL冰乙醚中，抽滤得到黄色沉淀，多次洗涤过滤后真空干燥得到淡黄色粉末Glu(CPT)-OH 0.263g，产率70％。
所述Glu(CPT)-OH的结构式如式(4)所示；
实施例5、Glu(CPT)-NCA的合成
称取Glu(CPT)-OH(0.200g，0.420mmol)，三乙胺(0.058mL，0.420mmol)溶于100mL无水四氢呋喃，0.5h后，向反应液滴加三光气(0.083g，0.280mmol)的无水四氢呋喃溶液，反应体系在50℃下反应3h后，反应体系变澄清，反应结束。用氮气流及尾气处理装置处理反应体系中剩余的光气，将浓缩后的反应液滴加入50mL正己烷中，放置在-20℃冰箱中过夜，抽滤得到黄色沉淀，多次洗涤过滤干燥后得到黄色粉末Glu(CPT)-NCA 0.159g，产率75％。
所述Glu(CPT)-NCA的结构式如式(5)所示；
实施例6、mPEG-BC-PGluCPT的合成
称取mPEG-BC(0.500g，0.222mmol)，Glu(CPT)-NCA(0.370g，0.735mmol)及100mL无水四氢呋喃于反应瓶中，超声促其分散形成混悬液，氮气保护，室温反应48h，浓缩后的反应液转移至截留分子量为2000的透析袋中，无水四氢呋喃透析12h，将透析液浓缩后滴加到100mL冰乙醚中，过滤洗涤数次后干燥得到终产物mPEG-BC-PGluCPT 0.7569g，产率85％。
所述mPEG-BC-PGluCPT的结构式如下式(I)所示；
其中，x＝2；m＝44。
实施例7、mPEG-BC-PGluCPT合成优选结果确定过程
称取mPEG-BC(0.500g，0.222mmol)，Glu(CPT)-NCA(1.118g，2.220mmol)及200mL无水四氢呋喃于反应瓶中，超声促其分散形成混悬液，氮气保护，室温反应72h，浓缩后的反应液转移至截留分子量为2000的透析袋中，无水四氢呋喃透析24h，将透析液浓缩后滴加到100mL冰乙醚中，过滤洗涤数次后干燥得到终产物mPEG-BC-PGluCPT 0.485g，产率48％。
所述mPEG-BC-PGluCPT的结构式如下式(I)所示；
其中，x＝2-5；m＝44。
增加投料比，并没有实现CPT链节数目增加的设想，这与喜树碱的空间位阻大导致开环效率不高有关；在长时间透析过程中，四氢呋喃使透析袋自身孔径增大，截留分子量也随之增大，使得最终沉淀得到的产物产率不高。
实施例8、mPEG-BC@PGluCPT胶束的组装
将2mg式(I)mPEG-BC-PGluCPT(其中，式(I)中，m＝44，x＝2)溶于1mL四氢呋喃中，滴加入搅拌速度为500r/min的10mL超纯水中，用0.45μm的针式过滤器过滤，装入透析袋透析48h(每6h换一次超纯水)，冷冻干燥，制得所述mPEG-BC@PGluCPT胶束冻干粉。TEM观察其为球形形貌，动态光散射测得其平均粒径约为181nm，与DLS结果吻合。
实验结果如图3所示，DLS测得纳米粒径及其分布与TEM结果极其吻合，且大多数分布在181nm附近，符合纳米胶束具有被动靶向所需的特质，即纳米粒径范围在5-500nm的纳米胶束，能够通过被动靶向聚集在肿瘤组织。
当选用聚合度(x)高的式(I)mPEG-BC-PGluCPT，水溶液极容易产生沉淀；而选用x＝2的聚合物溶液，当浓度等于1mg/mL时，胶束溶液就会有沉淀产生，但是浓度为0.1mg/mL，0.5mg/mL时，胶束溶液很稳定，结合图5分析可知，在4℃低温条件下，0.5mg/mL的式(I)mPEG-BC-PGluCPT(其中，式(I)中，m＝44，x＝2)的聚合物前药胶束溶液能够长时间保持稳定。
实施例9、载阿霉素胶束mPEG-BC@PGluCPT·Dox的制备
取10mgmPEG-BC-PGluCPT和2mg Dox溶于1mLDMSO中，滴加入搅拌速度为500r/min的20mL超纯水中，用0.45μm的针式过滤器过滤，装入截留分子量为1000的透析袋透析48h(每6h换一次超纯水)，冷冻干燥，制得mPEG-BC@PGluCPT·Dox。
用DLS测定溶液散射光强随胶束浓度变化的情况，测定其临界胶束浓度(CMC)，取1mg mPEG-BC@PGluCPT胶束冻干粉末重新分散于1mL的超纯水中，轻微振荡半小时后，得到均一的胶束溶液，然后逐级稀释，浓度从0.1mg/mL至1×10-6mg/mL，按照从浓到稀的次序，依次测定，最终得到胶束的临界胶束浓度为6.12×10-4mg/mL。
用紫外吸收法测定其载药量(DLC)和包封率(DLE)，将制备的载阿霉素胶束mPEG-BC@PGluCPT·Dox粉末溶于DMSO中，测定其在480nm处的紫外吸收值，与Dox的标准工作曲线对照，计算得载药量和包封率分别为7.3％和41.61％。
载药量(DLC％)＝(胶束中Dox的质量/聚合物的质量)×100％
包封率(DLE％)＝(胶束中Dox的质量/Dox投料的质量)×100％。
所述载阿霉素纳米胶束mPEG-BC@PGluCPT·Dox的示意图如图1所示。
实施例10、mPEG-BC@PGluCPT胶束的酸降解性能
用DLS测定在pH缓冲液中mPEG-BC@PGluCPT胶束粒径的变化，能反应mPEG-BC@PGluCPT胶束的降解情况。取1mg mPEG-BC@PGluCPT冻干胶束溶解在10mL各pH缓冲液中，监测粒径变化情况。30min后在pH 7.4，pH 6.5，pH 6.0，pH 5.0介质中其粒径变化。
实验结果如图4所示，在pH 6.5，pH 6.0，pH 5.0条件下纳米胶束粒径分别增大到420nm，530nm，700nm，而在pH 7.4条件下纳米胶束的粒径基本保持不变，依然稳定在180nm附近。原因是硼酸酯键在酸性环境中断裂，纳米胶束的亲水亲油平衡状态被破坏，mPEG壳层慢慢脱落，胶束发生聚沉，造成DLS测试结果增大。该项实验证明纳米胶束mPEG-BC@PGluCPT中硼酸酯键具备酸敏感特性。
实施例11、mPEG@PGluCPT胶束，mPEG-BC@PGluCPT胶束及mPEG-BC@PGluCPT·Dox胶束在不同pH介质中的释药行为
用高效液相色谱法测定mPEG@PGluCPT胶束，mPEG-BC@PGluCPT胶束在不同pH缓冲液的CPT释药性能。mPEG@PGluCPT及mPEG-BC@PGluCPT(0.1mg/mL)各取10mL分别置于pH7.4，6.5，6.0，5.5，5.0，4.5缓冲液中透析48h(MWCO500)，高效液相色谱仪分别测定透析后各组的CPT含量，与测得CPT的标准曲线对照，计算出各组释药量。
用紫外分光光度计测定mPEG-BC@PGluCPT·Dox胶束在pH缓冲液的Dox释药性能。取10mLmPEG-BC@PGluCPT·Dox(0.1mg/mL)分别置于pH 7.4，6.5，6.0，5.5，5.0，4.5缓冲液中透析48h(MWCO 2000)，紫外分光光度计分别测得透析后各组的吸光度，与测得Dox的标准曲线对照，计算出各组释药量。
所述mPEG-PGluCPT的结构式如下式(7)所示：
实验结果如图6所示，不含硼酸酯键的mPEG@PGluCPT纳米胶束在不同pH缓冲溶液中，药物释放速率缓慢，在pH7.4介质中，药物释放速度较快，48h累积释放量仅约14％。mPEG-BC@PGluCPT前药纳米胶束的释药量与pH介质呈现出一定的依赖关系，在pH 5.5介质中，12h内释药速率很快，累计释药量达23.98％，在随后的36h内，释药速率相对减缓，而对照不含硼酸酯键的mPEG@PGluCPT纳米胶束在pH 5.5条件下释药量仅为7％，该实验不仅证明mPEG壳层对胶束内核具有保护作用，同时也再次证明前药纳米胶束mPEG-BC@PGluCPT中的硼酸酯键具有酸敏感性能。
实验结果如图7所示，载阿霉素纳米胶束mPEG-BC@PGluCPT·Dox在pH7.4介质中，48h累积释药量仅有15％。随着介质pH降低，载药胶束在12h内的累计释药量增加，表现为：pH越低，释药量增加越多，12h至48h内释药量趋于平缓。pH 4.5缓冲液中，mPEG-BC@PGluCPT·Dox载阿霉素纳米胶束释放Dox的累计释药量达到75％。在酸性环境中硼酸酯键断裂，阿霉素从纳米胶束内核释放，而且具有酸性依赖，再次验证硼酸酯键具有酸敏感性能，本发明的纳米药物共同传递系统能够实现药物的控制释放。
实施例12、mPEG-BC@PGluCPT·Dox纳米胶束的细胞吞噬行为
将HepG2细胞和HL7702细胞在六孔板(Greiner)上预培养24h(25×104cells/孔)后，分别加入2mLpH为7.4，6.5，6.0的培养基，其中每组含mPEG-BC@PGluCPT·Dox(以Dox含量为标准：14.40μg/mL)，继续培养4h后，PBS(pH7.4)清洗数次，消化后离心收集，转移至96孔板，用流式细胞仪对各组细胞荧光强度进行测定。
实验结果如图8所示，HepG2细胞的荧光强度随着pH的降低而增加，HL7702细胞的荧光强度基本保持不变，这与两种细胞表面的SA含量有直接的关系。HepG2细胞表面的SA含量高，载阿霉素纳米胶束mPEG-BC@PGluCPT·Dox的硼酸酯键在酸性环境中断裂后，裸露出的苯硼酸与细胞表面的SA结合，增强了细胞的内吞，细胞的荧光强度增加，而HL7702细胞表面的SA含量低，其荧光强度低于HepG2细胞。
实施例13、mPEG-BC@PGluCPT前药纳米胶束在不同培养条件下抑制HepG2的IC50
将处于对数生长期的HepG2细胞接种于96孔板上，每孔9000个细胞，恒温培养箱培养12h后，分别加入20μLpH为7.4，6.5，6.0的培养基，各组含有一系列浓度梯度的mPEG-BC@PGluCPT，mPEG-BC@PGluCPT·Dox，CPT及Dox，浓度均以CPT含量为标准分别为0.5，1，2.5，5，10，20和40μg/mL，对应的Dox含量为0.18，0.36，0.90，1.80，3.60，7.20和14.40μg/mL，培养48h；吸去80μL培养基，加入10μLMTT溶液(5mg/mL)后继续培养4h，加入50μL三联液溶解甲瓒晶体，用酶标仪于570nm波长处测定吸光度。细胞抑制率计算如下：
细胞抑制率(％)＝(1-OD样品/OD控制)×100％。
本发明中，所述mPEG-BC@PGluCPT前药纳米胶束，载阿霉素纳米胶束mPEG-BC@PGluCPT·Dox，小分子药物CPT及Dox在不同培养条件下关于HepG2的IC50如下表1所示。
表1
a代表该组药物IC50的计算是以CPT浓度为标准。
在不同pH下，前药纳米胶束mPEG-BC@PGluCPT的IC50大于游离小分子药物CPT的IC50，主要因为前药纳米胶束中的CPT在细胞内释放需要一定的时间，而游离小分子药物CPT可以直接被细胞摄取发挥抑制肿瘤细胞的作用；另外，小分子药物通过自由扩散进入细胞发挥作用，而纳米胶束通过胞吞进入细胞，并在溶酶体内释放药物，然后使运载/键合的药物发挥作用，两者进入细胞的方式，会进一步影响它们在体内的疗效。载阿霉素纳米胶束mPEG-BC@PGluCPT·Dox的IC50小于前药纳米胶束，说明纳米胶束所运载/键合的两种药物共同传递，能够发挥协同抑制肿瘤的活性。
实施例14、mPEG-BC@PGluCPT胶束和载阿霉素mPEG-BC@PGluCPT·Dox胶束的细胞毒性研究
为研究mPEG-BC@PGluCPT和mPEG-BC@PGluCPT·Dox的体外细胞毒性，研究CPT和Dox的联合用药情况，选取游离小分子药物CPT和Dox作为对照实验。对mPEG-BC@PGluCPT胶束，载阿霉素胶束mPEG-BC@PGluCPT·Dox及未被胶束包裹的CPT和Dox在pH7.4，pH6.5，pH6.0条件下进行肝癌细胞HepG2毒性测试。细胞培养方法为：将处于对数生长期的HepG2细胞接种于96孔板上，每孔9000个细胞，恒温培养箱培养12h后，每组分别加入20μL含有一系列浓度梯度的mPEG-BC@PGluCPT，mPEG-BC@PGluCPT·Dox，CPT及Dox，浓度均以CPT含量为标准分别为0.5，1，2.5，5，10，20和40μg/mL，对应的Dox的含量为0.18，0.36，0.90，1.80，3.60，7.20和14.40μg/mL，培养48h；吸去80μL培养基，加入10μLMTT溶液(5mg/mL)后继续培养4h，加入50μL三联液溶解甲瓒晶体，用酶标仪于570nm波长处测定吸光度。细胞存活率计算如下：
细胞存活率(％)＝(OD实验组-OD空白组/OD对照组-OD空白组)×100％。
实验结果如下表2所示：
表2
a代表此组药物IC50的计算是以CPT浓度为标准。
由表2可知，在不同pH下，前药纳米胶束mPEG-BC@PGluCPT的IC50大于游离小分子药物CPT的IC50，主要因为前药纳米胶束中的CPT在细胞内释放需要一定的时间，而游离小分子药物CPT可以直接被细胞摄取发挥抑制肿瘤细胞的活性。载阿霉素纳米胶束mPEG-BC@PGluCPT·Dox的IC50小于前药纳米胶束，主要因为两种药物共同传递，发挥了协同抑制肿瘤的活性。
将表2与图8结合分析可知，本发明涉及的纳米药物共同传递系统能够实现酸敏感，对细胞表面SA过表达的癌细胞能够实现受体介导的增强细胞内吞，具有协同抑制肿瘤细胞的活性。
本发明的保护内容不局限于以上实施例。在不背离发明构思的精神和范围下，本领域技术人员能够想到的变化和优点都被包括在本发明中，并且以所附的权利要求书为保护范围。

Claims (15)

1.一种以苯硼酸酯为连接单元的两亲性喜树碱高分子前药mPEG‐BC‐PGluCPT，其特征在于，其结构如式(I)所示，
式(I)中：m＝40-120，x＝2-5。
2.一种以苯硼酸酯为连接单元的两亲性喜树碱高分子前药mPEG‐BC‐PGluCPT的合成方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(a)在溶剂中，3,4-二羟基苯乙酸、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐、1-羟基苯并三唑、N,N-二异丙基乙胺、mPEG-NH2进行酰胺化反应，合成如式(1)所示的mPEG-NH2的多巴衍生物mPEG-3,4-DA；
(b)在溶剂中，mPEG-3,4-DA与3-氨基苯硼酸脱水缩合，得到如式(2)所示的mPEG的苯硼酸酯衍生物mPEG-BC；
(c)在溶剂中，喜树碱与Boc-L-谷氨酸-1-叔丁酯、4-二甲氨基吡啶,1-羟基苯并三氮唑，1-乙基-3-(3-二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐，三乙胺进行酯化反应，得到如式(3)所示的Boc-Glu(CPT)-OtBu；
(d)在溶剂中，利用TFA，脱除Boc-Glu(CPT)-OtBu分子中的Boc保护基团，得到如式(4)所示的Glu(CPT)-OH；
(e)在溶剂中，三光气作为引发剂，在三乙胺的作用下，Glu(CPT)-OH发生环化反应，Glu(CPT)-OH中的α-氨基酸结构形成N-羧基环内酸酐，得到如式(5)所示的Glu(CPT)-NCA；
(f)在溶剂中，以mPEG-BC作为大分子引发剂，对Glu(CPT)-NCA进行开环聚合反应，如式(I)所示的得到所述以苯硼酸酯为连接单元的两亲性喜树碱高分子前药mPEG-BC-PGluCPT；所述反应过程如路线(a)所示：
路线(a)，m＝40-120，x＝2-5。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(a)中，所述3,4‐二羟基苯乙酸、1‐乙基‐(3‐二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐、1‐羟基苯并三唑、N,N‐二异丙基乙胺、mPEG‐NH2的摩尔比为(1.2‐2)：(1.2‐3)：(1.2‐3)：(2‐4)：1；和/或，所述酰胺化反应的温度为20℃‐37℃。
4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(b)中，所述mPEG‐3,4‐DA与3‐氨基苯硼酸的摩尔比为1：(5‐10)；和/或，所述脱水缩合反应的温度为100‐130℃。
5.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(c)中，所述Boc‐L‐谷氨酸‐1‐叔丁酯、4‐二甲氨基吡啶、1‐羟基苯并三氮唑、1‐乙基‐3‐(3‐二甲胺丙基)碳二亚胺盐酸盐、三乙胺、喜树碱的摩尔比为(1.5‐2)：(0.25‐1)：(1‐1.5)：(1‐1.5)：(1‐1.5)：1；和/或，所述酯化反应的温度为20‐37℃。
6.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(d)中，所述TFA、Boc‐Glu(CPT)‐OtBu的摩尔比为(10‐15)：1；和/或，所述脱除反应的温度为0‐25℃。
7.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(e)中，所述引发剂选自三乙胺、吡啶、N,N‐二异丙基乙胺；所述三光气、三乙胺、Glu(CPT)‐OH的摩尔比为(1/3‐1)：(1‐2)：1；和/或，所述环化反应的温度为48‐55℃。
8.如权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(f)中，所述mPEG‐BC、Glu(CPT)‐NCA的摩尔比为1：(3‐10)；和/或，所述开环聚合反应的温度为20‐37℃。
9.一种前药纳米胶束mPEG‐BC@PGluCPT的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)将权利要求1所述的式(I)mPEG‐BC‐PGluCPT溶于有机溶剂和水的混合溶液；
(2)用步骤(1)得到的溶液进行过滤，然后将滤液装入透析袋透析48h，得到所述纳米胶束mPEG-BC@PGluCPT；
其中，所述有机溶剂选自四氢呋喃、二甲亚砜、丙酮；
其中，步骤(1)得到的溶液中，式(I)mPEG-BC-PGluCPT的浓度为0.1-0.5mg/mL
所述式(I)mPEG-BC-PGluCPT中，m＝44，x＝2。
10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述方法具体包括以下步骤：
(1)将权利要求1所述的2mg mPEG-BC-PGluCPT溶于1mL四氢呋喃，将得到的四氢呋喃溶液滴加入搅拌速度为500r/min的10mL超纯水；
(2)用针式过滤器过滤步骤(1)得到的溶液，然后将滤液装入透析袋透析48h，每6h换一次超纯水，得到所述纳米胶束mPEG-BC@PGluCPT；或进行冷冻干燥，得到所述纳米胶束mPEG-BC@PGluCPT冻干粉。
11.一种由权利要求9所述方法制备得到的前药纳米胶束mPEG‐BC@PGluCPT。
12.将权利要求1～8之任一项所述的mPEG‐BC‐PGluCPT或如权利要求11所述的mPEG‐BC@PGluCPT用于制备药物共同传递系统的应用。
13.一种载阿霉素纳米胶束mPEG‐BC@PGluCPT·Dox的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)将权利要求1～8之任一项所述的mPEG-BC-PGluCPT和Dox溶于DMSO中，将得到的溶液滴加入搅拌中的超纯水；
(2)过滤步骤(1)得到的溶液，将滤液装入截留分子量为1000的透析袋透析，得到所述载阿霉素纳米胶束mPEG-BC@PGluCPT·Dox。
14.如权利要求13所述的方法，其特征在于，所述方法具体包括以下步骤：
(1)称取10mg权利要求1～8之任一项所述的mPEG-BC-PGluCPT和2mg Dox，溶于1mLDMSO，将得到的溶液滴加入搅拌速度为500r/min的20mL超纯水；
(2)用0.45μm的针式过滤器过滤步骤(1)得到的溶液，将滤液装入截留分子量为1000的透析袋透析48h，每6h换一次超纯水)，制得所述载阿霉素纳米胶束mPEG-BC@PGluCPT·Dox；冷冻干燥，制得所述载阿霉素纳米胶束mPEG-BC@PGluCPT·Dox的冻干粉。
15.一种由权利要求13或14所述方法制备得到的载阿霉素纳米胶束mPEG‐BC@PGluCPT·Dox。
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