CN108721208B - 长春瑞滨注射液及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开长春瑞滨注射液及其制备方法，具体涉及供静脉注射用的长春瑞滨注射液，该注射液包含长春瑞滨磷脂复合物、β‑环糊精、等渗调节剂、pH调节剂和注射用水，其中β‑环糊精与长春瑞滨磷脂复合物形成包合物，不仅有效降低了长春瑞滨对血管的刺激性及毒副作用，而且稳定性好，适于临床应用。

Description

长春瑞滨注射液及其制备方法

技术领域

本发明属于药物制剂领域，具体涉及抗肿瘤药物制剂长春瑞滨注射液及其制备方法。

背景技术

从植物长春花中分离的生物碱类及其衍生物通称为“长春花生物碱类”，长春花生物碱是高细胞毒药物，破坏微管、抑制细胞分裂和诱导细胞凋亡。已经证明可有效地作为多种类型的淋巴瘤、白血病和其他癌症的一线治疗药物。长春新碱和长春碱由长春碱核部分连接长春多灵组成，它们结构的不同在于长春多灵基团中的一个取代。后来，利用新型合成方法制备了存在8元而非9元长春碱核环长春瑞滨，长春瑞滨通常为酒石酸盐的形式，即重酒石酸长春瑞滨或酒石酸长春瑞滨。

长春瑞滨抗癌活性高，抗瘤谱广，经国外临床研究，单药或联合用药治疗非小细胞肺癌、乳腺癌、卵巢癌、恶性淋巴瘤等，已显示突出的疗效。但是该药的注射液在临床使用时具有较大的刺激性，比如目前临床使用的酒石酸长春瑞滨注射液(法国Pierre Fabre公司的商品，名为

)是高渗性溶液，且其水溶液呈酸性，如局部浓度过高或药液外渗可对输液静脉产生较大的毒性刺激，并可导致静脉炎的发生。研究表明，其静脉发生率47.2％，毒副反应主要是白细胞数下降，总反应率72％。因此目前临床上使用的注射液都要求必须先用生理盐水稀释至50ml，于短时间(6-10分钟)内经静脉输入，然后用250-500ml生理盐水冲洗静脉，且必须确认注射针头在静脉内方可开始注射，一旦药液外漏应立即停止注药，余药另换静脉注入。这无疑会给患者带来痛苦，限制长春瑞滨在临床上的普遍推广及应用。

Mare报道了预防

静脉毒性的方法，即同时施用抗炎药物，如去纤苷或酮咯酸，或将输入方式从推注改为缓慢输注(Support Care Cancer 11:593-6,2003)。然而，长春瑞滨注射部位毒性问题并未从药物制剂形式得到很好的解决。在控制刺激性药物的注射部位静脉毒性方面，水包油型乳剂可能优于传统的溶液制剂如

例如，肌肉或静脉注射溶液制剂形式的红霉素或克拉霉素可引起严重的注射部位疼痛，但红霉素或克拉霉素的脂肪乳剂(水包油型)没有局部刺激性(WO9014094)。然而，水包油型乳剂通常只适用于亲脂性的药物，如异丙酚、安定、红霉素和克拉霉素等。Desai(美国专利No.4,816,247)揭示了适用于水难溶性的、可离子化的、疏水性药物的乳剂组合物。

在水包油型乳剂中，亲脂性药物倾向于溶解在油相中并被油滴包裹和/或包封，像长春花生物碱类药物等高水溶性的药物在常规乳剂油滴中不能良好地分配，即使加入大量辅料，也难以被有效地包裹在油相或界面膜中，从而无法达到降低对血管的刺激性、提高疗效等目的。此外，长春瑞滨易氧化降解，长春瑞滨药物的不稳定性也是其临床应用中需解决的一个重要问题。

发明内容

本发明的目的在于解决现有技术的缺陷，提供一种刺激性弱、稳定性良好的长春瑞滨注射液及其制备方法，该注射液包含长春瑞滨磷脂复合物、β-环糊精、等渗调节剂、pH调节剂和注射用水，其中β-环糊精与长春瑞滨磷脂复合物形成包合物。

其中，本发明所述长春瑞滨磷脂复合物的重量百分比为0.5～5％，以长春瑞滨计。

β-环糊精是一种新型的药物包合材料，具环状中空筒型的空间结构，能与许多物质、特别是脂溶性物质形成包合物，可防止高浓度的药物分子与静脉内皮组织直接接触，降低药物的静脉毒性。其还可用于提高脂溶性药物的稳定性，防止药物氧化和分解，提高药物的溶解性和生物利用度。然而，由于β-环糊精外环亲水和内环疏水的特殊性质，它难以与长春花生物碱等高水溶性的药物形成包合物。

本发明所述长春瑞滨磷脂复合物表现出与长春瑞滨显著不同的理化性质，脂溶性显著增加，可解决高水溶性的长春瑞滨难以与β-环糊精形成包合物的问题。

本发明所述的长春瑞滨可以为长春瑞滨、重酒石酸长春瑞滨或长春瑞滨的其他可药用盐。

本发明所述的磷脂选自大豆卵磷脂、磷脂酰肌醇、磷脂酰甘油或它们的混合物。其中，长春瑞滨和磷脂的摩尔比为1:1～1:10，例如1:2～1:6

本发明所述的β-环糊精选自羟丙基β-环糊精、羟乙基β-环糊精、甲基β-环糊精、乙基β-环糊精或其混合物，优选羟丙基β-环糊精。其中，长春瑞滨和β-环糊精的摩尔比为1:10～1:3，例如1:7～1:6。

所述等渗调节剂选自甘油、山梨醇、甘露醇、葡萄糖或其混合物，优选葡萄糖。

优选的，本发明所述长春瑞滨注射液包含长春瑞滨大豆卵磷脂复合物、羟丙基β-环糊精、葡萄糖、pH调节剂和注射用水，其中，长春瑞滨和β-环糊精的摩尔比为1:10～1:3，例如1:7～1:6。

所述等渗调节剂在本发明长春瑞滨注射液中重量百分比为1％～20％，例如3％～10％。

所述pH调节剂选自氢氧化钠、盐酸、缓冲盐或其混合物，所述长春瑞滨注射液的pH为3～5，例如3.5。

本发明提供了一种长春瑞滨磷脂复合物的制备方法，包括如下步骤：取长春瑞滨和磷脂，将其加入到有机溶剂中，在35～65℃加热回流2～5小时，旋转蒸发除去有机溶剂，置于真空干燥机或冷冻干燥机中进行干燥。例如在40～50℃加热回流2～3小时；有机溶剂可以是乙酸乙酯、丙酮、乙醇或四氢呋喃，例如乙酸乙酯。

本发明还提供一种所述长春瑞滨注射液的制备方法，包括如下步骤：

(1)在搅拌下，将长春瑞滨磷脂复合物的乙醇溶液加入到β-环糊精的水溶液中，0.2～0.45的微孔滤膜过滤，滤液减压除去乙醇，得液体包合物；

(2)向上述液体包合物中加入等渗调节剂，搅拌均匀，加入适量注射用水和pH调节剂，至pH为3～5。

本发明所述的长春瑞滨注射液中β-环糊精与长春瑞滨磷脂复合物形成包合物，既降低了长春瑞滨对血管的刺激性及毒副作用，又提高了长春瑞滨的稳定性，适于临床应用。

具体实施方式

为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明进行详细说明。

实施例1

制备长春瑞滨磷脂复合物(I)

取重酒石酸长春瑞滨10g和大豆卵磷脂18g，将其加入到乙酸乙酯中，在40～50℃加热回流2～3小时，旋转蒸发除去乙酸乙酯，置于真空干燥机或冷冻干燥机中进行干燥，得长春瑞滨磷脂复合物(I)。

实施例2

制备长春瑞滨磷脂复合物(II)

取重酒石酸长春瑞滨10g和大豆卵磷脂18g，将其加入到丙酮中，在40～50℃加热回流2～3小时，旋转蒸发除去丙酮，置于真空干燥机或冷冻干燥机中进行干燥，得长春瑞滨磷脂复合物(II)。

实施例3

制备长春瑞滨磷脂复合物(III)

取重酒石酸长春瑞滨10g和大豆卵磷脂18g，将其加入到乙醇中，在40～50℃加热回流2～3小时，旋转蒸发除去乙醇，置于真空干燥机或冷冻干燥机中进行干燥，得长春瑞滨磷脂复合物(III)。

实施例4

制备长春瑞滨磷脂复合物(IV)

取重酒石酸长春瑞滨10g和大豆卵磷脂18g，将其加入到四氢呋喃中，在40～50℃加热回流2～3小时，旋转蒸发除去四氢呋喃，置于真空干燥机或冷冻干燥机中进行干燥，得长春瑞滨磷脂复合物(IV)。

实施例5

长春瑞滨磷脂复合物复合率考察

取实施例1-4制备的长春瑞滨磷脂复合物，采用高效液相色谱法测定复合率，结果如表1所示。

表1长春瑞滨磷脂复合物的复合率

考察样品	复合率
		长春瑞滨磷脂复合物(I)	99.8％
长春瑞滨磷脂复合物(II)	89.5％
		长春瑞滨磷脂复合物(III)	86.9％
长春瑞滨磷脂复合物(IV)	78.3％

实施例6

长春瑞滨磷脂复合物溶解性试验结果

精确量取5.0ml去离子水于磨口瓶中，分别加入过量的重酒石酸长春瑞滨、重酒石酸长春瑞滨与大豆卵磷脂的物理混合物(分别按各实施例项下的比例混合)以及实施例1-4制备的长春瑞滨磷脂复合物，每个样品各四份，与实施例1-4对应，密闭后在室温下振摇，24小时后将磨口瓶内的液体转移至离心管内，于10000rpm离心10min，各取上清液100ul，用乙醇稀释，色谱进样，测各样品溶解度，结果见表2。

表2长春瑞滨磷脂复合物溶解性试验结果

由表2可知，重酒石酸长春瑞滨在水中的溶解度远高于其在正辛醇中的溶解度，但形成磷脂复合物后，在正辛醇中的溶解度为水中溶解度的6～10倍。实验结果表明，重酒石酸长春瑞滨形成磷脂复合物后，溶解性质发生变化，脂溶性显著增强。

实施例7

长春瑞滨注射液的制备

在搅拌下，将实施例1长春瑞滨磷脂复合物的乙醇溶液加入到含85.7g羟丙基β-环糊精的水溶液中，0.2～0.45的微孔滤膜过滤，滤液减压除去乙醇，得液体包合物；向上述液体包合物中加入50g葡萄糖，搅拌均匀，加入适量注射用水和pH调节剂，至溶液体积为1000ml，pH为3～4。

实施例8

长春瑞滨注射液的制备

在搅拌下，将实施例1的长春瑞滨磷脂复合物的乙醇溶液加入到含85.7g羟丙基β-环糊精的水溶液中，0.2～0.45的微孔滤膜过滤，滤液减压除去乙醇，得液体包合物；向上述液体包合物中加入50g甘油，搅拌均匀，加入适量注射用水和pH调节剂，至溶液体积为1000ml，pH为3～4。

实施例9

长春瑞滨注射液的制备

在搅拌下，将实施例1的长春瑞滨磷脂复合物的乙醇溶液加入到含57.1g羟丙基β-环糊精的水溶液中，0.2～0.45的微孔滤膜过滤，滤液减压除去乙醇，得液体包合物；向上述液体包合物中加入50g葡萄糖，搅拌均匀，加入适量注射用水和pH调节剂，至溶液体积为1000ml，pH为3～4。

实施例10

长春瑞滨注射液的制备

在搅拌下，将实施例1的长春瑞滨磷脂复合物的乙醇溶液加入到含80.2g羟乙基β-环糊精的水溶液中，0.2～0.45的微孔滤膜过滤，滤液减压除去乙醇，得液体包合物；向上述液体包合物中加入50g葡萄糖，搅拌均匀，加入适量注射用水和pH调节剂，至溶液体积为1000ml，pH为3～4。

实施例11

长春瑞滨注射液的稳定性试验

表3实施例7长春瑞滨注射液的稳定性结果

表4实施例8长春瑞滨注射液的稳定性结果

表5实施例9长春瑞滨注射液的稳定性结果

表6实施例10长春瑞滨注射液的稳定性结果

由表3-6可知，本发明的长春瑞滨注射液在4℃、25℃储存条件下，有较好的物理和化学稳定性。

实施例12

长春瑞滨注射液的刺激性试验

(1)血管刺激性试验

取2.5～3.0kg的新西兰白兔9只，随机分成A、B、C三组，每组3只。A组为阴性对照组，按2mg/kg/天剂量注射生理盐水；B组为阳性对照，按2mg/kg/天剂量注射

长春瑞滨注射液；C组为制剂组，按2mg/kg/天剂量注射实施例7的长春瑞滨注射液。通过兔耳缘静脉推注受试物，每5天给药一次，共给药三次，于末次给药24h后，处死白兔，肉眼观察注射部位的反应情况，并解剖兔耳血管及周围组织做石蜡切片，染色，光镜检查。

兔耳缘静脉外观观察结果如表7所示。

表7兔耳缘静脉外观观察结果

病理学组织检查结果，A组合C组的白兔兔耳血管内皮光滑完整，管内、管壁未见明显异常。B组两只白兔表现为重度静脉炎，耳缘静脉血管壁损伤大于60％，血管周围组织片状出血，一只白兔表现为轻微静脉炎，耳缘静脉血管壁损伤约15％。

结论：本发明的长春瑞滨注射液可显著降低长春瑞滨对静脉的刺激性。

(2)肌肉刺激性试验

取2.5～3.0kg的新西兰白兔4只，随机分成A、B组，每组2只。A组在右侧股四头肌注射

长春瑞滨注射液1ml，B组在右侧股四头肌注射实施例7的长春瑞滨注射液1ml，A、B两组都在左侧股四头肌注射等量的葡萄糖注射液作为对照，注射48h后，处死白兔，解剖取出股四头肌，纵向切开，观察注射部位肌肉组织的反应情况，确定反应级数。

0级：无变化。

1级：轻度充血，其范围在0.5cm╳1.0cm以下。

2级：中度充血，其范围在0.5cm╳1.0cm以上。

3级：重度充血，伴有肌肉变性。

4级：出现坏死，有褐色变性。

5级：出现广泛性坏死。

算出4块股四头肌反应级数总和，如表8所示。如果股四头肌反应级数的最高值和最低值之差大于2，则应另取2只健康白兔重新试验。得到结果后，若4块股四头肌反应级数总和小于10，则认为供试品的局部刺激性试验符合规定。

表8肌肉刺激性试验结果

结果表明：B组的肌肉刺激性弱于A组，即本发明的长春瑞滨注射液能显著降低长春瑞滨对肌肉的刺激性。

实施例13

生物分布探究试验

取18只雌性SD大鼠，随机分成两组，每组9只。A组为

长春瑞滨注射液组，B组为本发明长春瑞滨注射液组，两组大鼠都按照5mg/kg的剂量通过尾静脉注射药物，于给药后0.5h、2h、8h分别取6只大鼠，A、B组各三只，处死，收集各器官，用经验证的LC-MS法进行分析，长春瑞滨在各器官中的浓度分布如表9所示。

表9长春瑞滨在大鼠各器官中的浓度分布

实验证明，本发明的长春瑞滨注射液与市售

长春瑞滨注射液显示相似的生物分布特性。

本发明的方法包括但不限于具体实施例，相关人员能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

Claims (9)

1.一种长春瑞滨注射液，该注射液由长春瑞滨磷脂复合物、β-环糊精、等渗调节剂、pH调节剂和注射用水组成，其中β-环糊精与长春瑞滨磷脂复合物形成包合物，所述长春瑞滨为长春瑞滨、重酒石酸长春瑞滨或长春瑞滨的其他可药用盐；

所述长春瑞滨磷脂复合物的重量百分比为0.5～5％，以长春瑞滨计；

所述长春瑞滨磷脂复合物中，磷脂选自大豆卵磷脂，长春瑞滨和磷脂的摩尔比为1:1～1:10；

所述β-环糊精选自羟丙基β-环糊精；长春瑞滨和β-环糊精的摩尔比为1:10～1:3；

所述等渗调节剂选自葡萄糖；所述等渗调节剂的重量百分比为3％～10％；

所述pH调节剂选自氢氧化钠、盐酸、缓冲盐或其混合物，所述长春瑞滨注射液的pH为3～5。

2.根据权利要求1所述的长春瑞滨注射液，其中，所述长春瑞滨磷脂复合物中，长春瑞滨和磷脂的摩尔比为1:2～1:6。

3.根据权利要求1所述的长春瑞滨注射液，其中，长春瑞滨和β-环糊精的摩尔比为1:7～1:6。

4.根据权利要求1所述的长春瑞滨注射液，其中，所述长春瑞滨注射液的pH为3.5。

5.一种权利要求1所述长春瑞滨磷脂复合物的制备方法，包括如下步骤：取长春瑞滨和磷脂，将其加入到有机溶剂中，在35～65℃加热回流2～5小时，旋转蒸发除去有机溶剂，置于真空干燥机或冷冻干燥机中进行干燥。

6.根据权利要求5所述的制备方法，包括如下步骤：取长春瑞滨和磷脂，将其加入到有机溶剂中，在40～50℃加热回流2～3小时。

7.根据权利要求5或6所述的制备方法，其中，有机溶剂选自乙酸乙酯、丙酮、乙醇或四氢呋喃。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其中，有机溶剂选自乙酸乙酯。

9.一种权利要求1所述长春瑞滨注射液的制备方法，包括如下步骤：

1)在搅拌下，将长春瑞滨磷脂复合物的乙醇溶液加入到β-环糊精的水溶液中，0.2～0.45的微孔滤膜过滤，滤液减压除去乙醇，得液体包合物；

2)向上述液体包合物中加入等渗调节剂，搅拌均匀，加入适量注射用水和pH调节剂，至pH为3～5。