CN108721135A - 具有牙本质小管封闭性的牙处置用材料 - Google Patents
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Abstract
本发明可以提供一种牙处置用材料,即使是纯水也可以提高牙本质小管封闭材料的分散性,用于稳定化的知觉过敏症处置,此外因具有抗菌性而有助于改善口腔内环境。使作为用作牙处置用材料的成分的牙本质小管封闭材料的钙化合物担载鱼精蛋白分解物,提高在水中的分散性,获得良好的牙本质小管封闭性,并且对牙处置用材料赋予抗菌性。
Description
技术领域
本发明涉及一种组合牙本质小管封闭材料和鱼精蛋白分解物而成的牙处置用材料。
背景技术
知觉过敏症的原因是由牙龈的萎缩造成的牙本质小管的露出、牙表面的龟裂等,在牙科领域中,被作为难以取得治疗效果的症状之一为人所知。作为此前的对知觉过敏症的处理法,可以举出配合有硝酸钾并抑制牙髓神经的兴奋性的牙膏的应用、或包含促进再矿化的Recaldent成分(CPP-ACP等)的牙膏的应用等,主要的治疗方法的原则是将露出的牙本质小管、龟裂物理性地封闭。
近年来,公布过的封闭材料的主流是将磷酸钙、磷酸氢钙微粉碎而得的材料(专利文献1),经过试剂盒化的专用封闭材料制品被限定销售给医疗从业者。利用该封闭材料制品的牙的处置是通过如下操作来实行,即,向封闭用的微细粉体滴下附属的水系分散材料并混炼,将所得的膏剂擦涂到牙本质小管的露出表面或牙表面的龟裂部位等一定时间后,进行水洗。由此,将患部的孔洞、沟填埋,从而得以解痛。
另一方面,作为“抗菌性材料”,现有专利申请过担载骨强化用鱼精蛋白的磷酸钙(专利文献2)。
现有技术文献
专利文献
专利文献1:日本特开2013-082702号公报
专利文献2:日本特开2013-163655号公报
发明内容
发明所要解决的问题
在将对磷酸钙、磷酸氢钙进行微粉碎而得的材料以粉体的状态直接混炼时,有报告认为可以是纯水,也可以是以水作为主成分并含有其他成分的液体(专利文献1)。然而,根据本发明人等的研究,实际上,当进行混炼时就会凝聚,难以获得封闭性(图5),因此需要另行准备粉体的水系分散材料(试剂盒例:牙本质小管封闭材料、计量小勺、混和皿、混炼液、刷子)、并进行混炼而使用等,存在有烦杂的一面。
本发明是为了解决上述问题而完成的,其目的在于,可以提供即使是纯水也能够提高牙本质小管封闭材料的分散性、用于稳定化的知觉过敏症处置的牙处置用材料,此外还因具有抗菌性而有助于改善口腔内环境。
用于解决问题的方法
本发明的牙处置用材料的特征在于,含有包含担载有鱼精蛋白分解物的钙化合物的牙本质小管封闭材料。
作为牙本质小管封闭材料中所含的钙化合物,可以使用磷酸钙及无水磷酸氢钙的至少一方。
发明效果
本发明不需要特定的分散材料,即使是纯水也能够使用,显示出对牙的牙本质小管、牙的龟裂的封闭性,因此除了可以用作专用的试剂盒以外,还可以添加到膏剂、凝胶等任何的牙科用材料中。在牙的处置的牙处置用材料的操作过程中,操作性也会提高,也可以期待应用于家庭用等牙科专业用途以外的用途。
此外,牙处置用材料中所含的牙本质小管封闭材料中所担载的鱼精蛋白分解物在口腔内发挥抗菌性,还可以期待对牙周病、龋齿的预防。所担载的鱼精蛋白分解物是来源于食品、生物的原料,容易确保安全性,这一点也是长处之一。
附图说明
图1是说明为了求出粉体悬浮液的分散度而使用的试验体系的图。
图2是表示试样1~4的分散性的比较结果的图。
图3是表示试样1~4的分散度的比较结果的图。
图4是表示试样1与试样3的粒度分布的比较结果的图。
图5是表示试样3的捏合时的凝聚状态的图。
图6是表示试样3与试样4的牙本质小管封闭性的比较结果的图。
图7是表示试样3和试样4对Streptococcus mutans(链球菌突变株)的抗菌性的比较结果的图。
图8是表示试样3和试样4对Porphylomonas gingivalis(牙龈卟啉单胞菌)的抗菌性的比较结果的图。
图9是表示对试样4对人工唾液的牙本质小管封闭的持续性进行试验的结果的图。
具体实施方式
本发明的目标在于,通过使磷酸钙、磷酸氢钙等作为牙本质小管封闭材料的钙化合物担载鱼精蛋白分解物,来提高牙本质小管封闭材料微粒的分散性而改善牙本质小管封闭处理的操作性,并且提高牙本质小管封闭性,此外利用鱼精蛋白分解物的杀菌作用,来降低龋蚀菌、牙周病菌的繁殖风险,抑制牙本质露出的根面龋的发生。
专利文献2中,公开了担载骨强化用鱼精蛋白的磷酸钙,然而没有关于磷酸钙的由鱼精蛋白分解物担载带来的水中的分散性提高的记载或启示,专利文献2对于在知觉过敏症处置制剂中的应用没有提及。
本发明的牙处置用材料的特征在于,含有包含担载有鱼精蛋白分解物的钙化合物的牙本质小管封闭材料。
在牙本质小管封闭材料中,作为用作牙本质小管封闭用途而包含的钙化合物,只要是具有作为牙本质小管封闭用途的功能的物质,就没有特别限定。作为此种钙化合物,可以使用已经被作为牙本质小管封闭用途利用的钙化合物、或从公知的钙化合物中作为牙本质小管封闭用途选择的钙化合物的至少1种。作为优选的钙化合物,可以举出磷酸钙、无水磷酸氢钙。
钙化合物优选制成包含调整为作为牙本质小管的封闭用途而言优选的粒径的钙化合物微粒的粉体使用。作为钙化合物的粉碎方法,可以使用干式粉碎法及湿式粉碎法、或它们的组合等公知的或通常所用的方法。作为湿式粉碎法,可以优选利用将颗粒状或粉体状的钙化合物使用球磨机等粉碎机与蒸馏水、氧化锆球一起粉碎至获得作为目标的粒径的分布为止、例如粉碎5小时的方法。在粉碎后,利用抽滤和冷冻干燥除去水分,可以得到钙化合物的粉体。
钙化合物粉体中所含的钙化合物微粒的粒径优选分布于0.1μm~10μm的范围内。另外,钙化合物微粒的中值粒径(d50)优选处于0.1μm~5μm的范围,更优选处于0.5μm~3μm的范围,最优选处于1μm~2μm的范围。通过采用上述的粒径的分布及处于这些范围的中值粒径,可以获得牙本质小管封闭功能、和由与水混合时的分散性得到的良好的操作性。
钙微粒的粒径可以通过图像分析法、沉降法、激光衍射散射法等公知的方法求出,可以采用利用任意方法得到的粒径。本发明中,在粒径的测定中使用了激光衍射散射法。
担载于钙化合物中的所谓鱼精蛋白分解物,是通过对鱼精蛋白进行水解、物理的切割、以及它们的组合而得的分解物。
作为原料的鱼精蛋白是在鲑鱼、鲱鱼、鳟鱼等鱼类的精子核中作为与脱氧核糖核酸结合了的核精蛋白存在的强碱性蛋白质,根据原料的不同,例如称作鲑精蛋白(鲑鱼)、鲱精蛋白(鲱鱼)等,虽然结构分别略有不同,然而可以使用任意的鱼精蛋白。
作为本发明的鱼精蛋白的水解方法,可以使用借助酸、碱或蛋白质分解酶的水解法,或者也可以利用借助这些方法的组合的分解,然而最好使用蛋白质分解酶。更具体而言,如下所示。向鱼精蛋白中加入去离子水,加入氢氧化钠或盐酸而将pH调整为酶的最佳pH。加热到酶的最佳温度后,添加酶,一边搅拌一边进行酶反应。反应结束后,将反应液加热到80~100℃而加热失活5~60分钟,将pH调整为中性区域后,将反应液冷冻干燥,就可以得到鱼精蛋白分解物。鱼精蛋白分解物包含蛋白质分解而得的多个寡肽的混合物,对于是否得到作为目标的鱼精蛋白分解物,可以利用HPLC分析来确认,此外也可以通过测定其抗菌性来确认。
鱼精蛋白的分解率只要是可以获得作为目标的对钙化合物微粒的分散性赋予及抗菌性,就没有特别限定,然而最好以使分子量分布于500Da~4000Da的范围的方式使鱼精蛋白部分分解。
作为本发明中可以用于水解中的蛋白质分解酶,例如可以举出芽孢杆菌(Bacillus)属(例如枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、嗜热解朊芽孢杆菌(Bacillusthermoproteolyticus)、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)等所产生的酶、曲霉(Aspergillus)属(例如米曲霉(Aspergillus oryzae)、黑曲霉(Aspergillus niger)、蜂蜜曲霉(Aspergillus melleus)等)所产生的酶、根霉(Rhizopus)属(例如雪白根霉(Rhizopusniveus)、戴尔根霉(Rhizopus delemar)等)所产生的酶、胃蛋白酶、胰酶、木瓜蛋白酶等。这些酶可以单独使用,或者组合2种以上。另外,蛋白质分解酶被分类为特异性地识别蛋白质的内部序列而切断的肽链内切酶、和从末端逐次切断1~2个氨基酸残基的肽链外切酶。因而,根据需要,可以利用肽链内切酶与肽链外切酶的组合,生成各种肽链。在利用酶进行水解的情况下,相对于基质,添加酶0.001%~10%,将溶液设为所使用的酶的最佳pH而水解。
本发明的鱼精蛋白分解物(肽混合物)根据需要可以形成与无机酸或有机酸的盐、与无机碱或有机碱的盐。作为酸、碱,可以根据盐的用途来选择,然而如果考虑在食品、化妆品、医药品等中的用途,则优选以下举出的药学上容许的盐。作为酸加成盐,例如可以举出盐酸盐、硝酸盐、硫酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐、以及与草酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、或富马酸等二酸的盐、以及与乙酸、丙酸、或丁酸等单羧酸的盐等。另外,适于本发明中所得的肽化合物的盐的形成的无机碱例如为氨、钠、锂、钙、镁、铝等的氢氧化物、碳酸盐及重碳酸盐等。作为与有机碱的盐,例如可以举出甲胺、二甲胺、三乙胺之类的单-、二-及三-烷基胺盐、单-、二-及三-羟基烷基胺盐、胍盐、N-甲基葡萄糖胺盐等。
可以推测,鱼精蛋白因分解并低分子化,而使静电的粒子的推斥变强,变得更容易分散。通过使之担载于钙化合物的粉体中所含的钙化合物微粒上,可以对钙化合物粉体赋予在分散用的液体介质中的分散性,有助于牙本质小管的良好的封闭。
鱼精蛋白分解物具有向钙化合物微粒上的吸附性,使鱼精蛋白分解物接触钙化合物微粒,就可以使鱼精蛋白分解物担载于钙化合物微粒上。使鱼精蛋白分解物担载于钙化合物微粒上的方法没有特别限定,只要是可以获得作为目标的鱼精蛋白分解物在钙化合物微粒上的担载状态的方法,任意的方法都可以利用。作为此种方法,适合为如下的方法,即,将钙化合物粉体与鱼精蛋白分解物的溶液在室温下混合而制备混合物,从该混合物中除去剩余的溶液,对所得的湿润状态的浆料进行冷冻干燥,得到包含吸附有鱼精蛋白分解物的钙化合物微粒的粉体。作为从钙化合物粉体与鱼精蛋白分解物的溶液的混合物中除去剩余的溶液的方法,可以利用如下的方法,即,对它们的混合物施加离心分离,分离为沉淀层和上清层,除去上清层,取出沉淀层。
在沉淀中得到的钙化合物微粒的表面吸附有鱼精蛋白分解物,对钙化合物微粒赋予良好的分散性,在上述用于吸附的操作中不会产生钙化合物微粒的凝聚。可以将包含吸附有鱼精蛋白分解物的钙化合物微粒的钙化合物粉体作为具有向液体介质中的良好的分散性的牙本质小管封闭材料来利用。
本发明中的所谓“牙本质小管的封闭”,是指向牙的牙本质的表面以无法确认牙本质小管的程度涂布封闭材料、消除了知觉过敏症状的状态。
本发明中的担载有鱼精蛋白分解物的钙化合物微粒的所谓“分散性”,是指在与水捏合时不使之凝聚地将牙本质小管封闭、并维持该状态。
本发明的牙处置用材料中所含的包含担载有鱼精蛋白分解物的钙化合物的牙本质小管封闭材料如上所述具有相对于水的良好的分散性,适于制备牙处置用的涂布液,可以操作性良好地进行涂布液的制备。而且,分散于涂布液中的状态的牙本质小管封闭用的微粒被有效地分配填充到牙本质小管、牙的龟裂中,可以获得良好的知觉过敏抑制效果。
另外,在将本发明的牙处置用材料的涂布液应用于牙面,以给定的时间保持利用涂布液的覆盖状态后,用水等清洗液清洗牙面时,插入牙本质小管、牙的龟裂内的牙处置用材料也不会脱落,可以发挥效果。
此外,在利用牙处置用材料的牙的处置部,牙处置用材料中所含的担载于钙化合物上的鱼精蛋白分解物发挥抗菌性,因而可以期待对牙周病、龋齿的预防。而且,在牙处置用材料包含能够利用口腔内的水分溶出地吸附于钙化合物上的鱼精蛋白分解物的情况下,从牙的处置部通过缓慢释放等溶出的鱼精蛋白分解物在口腔内发挥抗菌性,因而不仅是对牙的处置部,还可以对处置部以外期待牙周病、龋齿的预防。
担载于钙化合物上的鱼精蛋白分解物是来源于食品、生物的原料,容易确保安全性,这一点也是长处之一。
需要说明的是,对于利用鱼精蛋白分解物的牙周病、龋齿的预防效果,推定是基于以下的机理。
鱼精蛋白分解物与钙化合物因静电的相互作用,即,因鱼精蛋白分解物的化学的吸附而担载于钙化合物上。化学地吸附于钙化合物上的鱼精蛋白化合物与钙化合物一起在牙的处置部发挥抗菌性。另外,因唾液中的钙离子等的影响,也有吸附上的鱼精蛋白分解物被缓慢释放的情况,可以在处置部周围、或牙的处置部以外的鱼精蛋白分解物的送达部发挥抗菌性。此外,牙处置用材料也可以包含物理地吸附于钙化合物的表面的鱼精蛋白分解物,该物理地吸附上的鱼精蛋白分解物能够通过缓慢释放等从牙的处置部向口腔内的水分中溶出。该物理地吸附上的鱼精蛋白分解物与化学地吸附的鱼精蛋白分解物一起在牙的处置部发挥抗菌性,并且在向口腔内放出时,可以在牙的处置部的周围、或牙的处置部以外的鱼精蛋白分解物的送达部发挥抗菌性。因而,鱼精蛋白分解物的钙化合物的担载优选包括上述的利用化学的吸附及物理的吸附的担载。
可以使用含有包含担载有鱼精蛋白分解物的钙化合物微粒的粉体的牙处置用材料来提供知觉过敏处置用的试剂盒(或组件)。该试剂盒可以至少具有牙处置用材料和捏合用等分散用的液体。作为该液体,可以使用水(离子交换水、蒸馏水、纯水、超纯水等)或药学上容许的各种液体。也可以在分散用的液体以外,还将作为知觉过敏处置用途而言公知的钙化合物的各种凝聚剂的至少1种追加到试剂盒中。此外,也可以向牙处置用材料自身、或向该试剂盒中追加公知的知觉过敏处置用的材料。
该试剂盒可以作为牙科用、或家庭用来提供。
作为水以外的液体没有特别限定,可以例示出各种缓冲液、以及例如甘油、乙二醇、丙二醇、二甘油等多元醇、聚乙二醇、聚丙二醇等聚醚等有机溶剂。也可以将这些有机溶剂的至少1种与水混合后使用。
这些液体优选在无菌地密封在经过灭菌处理的容器中的状态下制成试剂盒的构成部件。另外,包含担载有鱼精蛋白分解物的钙化合物微粒的粉体也优选密封在根据需要进行了灭菌处理的容器内而制成试剂盒的构成部件。
需要说明的是,使用液体捏合包含担载有鱼精蛋白分解物的钙化合物微粒的粉体时的粉液比没有特别限定。
本发明的包含担载有鱼精蛋白分解物的钙化合物微粒的粉体可以用于知觉过敏处置用的、或兼作知觉过敏处置用的食品、口腔卫生用品(口腔护理用品)的制造中。在食品、口腔卫生用品的制造中的适当的阶段,直接、或制成分散于水或适当的液体介质中的分散液以可以获得作为目标的效果的量添加本发明的粉体,就可以制造知觉过敏处置用的、或兼作知觉过敏处置用的食品、口腔卫生用品。
作为此种食品,可以举出饴糖、水果糖、含片、软糖、果冻、糊状食品、口香糖、清凉饮料等。另外,作为口腔卫生用品,可以举出粉状、膏剂状、奶油状、凝胶状、液状等形态的牙膏、含漱剂、粉状、膏剂状、奶油状、凝胶状、液状等形态的口腔清洗剂(漱口水)等。需要说明的是,含漱剂、漱口水可以制成喷雾式。
例如,在膏剂状的牙膏的情况下,在使用研磨剂、粘结剂、粘稠剂及表面活性剂、根据需要使用的甜味剂、着色剂、防腐剂及香料的至少1种制造牙膏时,可以在适当的阶段,直接或制成分散液后添加包含担载有鱼精蛋白分解物的钙化合物微粒的粉体而制造牙膏。
[实施例]
(实施例1:粉体的制备法)
计量10g的无水磷酸氢钙原料粉体(粉体0(-)),向其中加入40cm3的纯水而得到混合物。将该混合物和10mmφ氧化锆球50个一起放置于球磨机粉碎机中,以300rpm进行5小时粉碎。粉碎后,抽滤所得的浆料而除去水分后,冷冻干燥约24小时,得到鱼精蛋白分解物担载用的无水磷酸氢钙粉体(5小时粉碎粉体:粉体5(-))。
相对于使用HAP-100(鱼精蛋白分解物、MARUHA NICHIRO株式会社制)制备出的1000ppm鱼精蛋白分解物溶液45cm3,混合粉体5(-)的1.5g而制备混合物,在所得的混合物中,在室温下进行48小时吸附反应。对吸附反应后的混合物以8000rpm进行10分钟离心分离,除去上清液。采集除去上清液后的沉淀物后,冷冻干燥约24小时,得到担载有鱼精蛋白分解物的无水磷酸氢钙粉体(5小时粉碎粉体:粉体5(+))。
(鱼精蛋白及其分解物的分子量的测定)
利用以下的基于凝胶渗透色谱法(GPC:Gel Permeation Chromatography)的高速液相色谱(HPLC:High Performance Liquid Chromatography)测定出鱼精蛋白及其分解物(HAP-100、MARUHA NICHIRO株式会社制)的重均分子量。
在以达到0.1%(w/v)的方式用去离子水配制评价试样后,使用孔径0.45μm乙酸纤维素膜滤器(ADVANTEC公司制,DISMIC-13cp)过滤,将所得的物质作为试样液使用。对上述配制出的试样液在下述的分离条件下使用HPLC(GPC)系统(Waters alliance 2965)进行了分析。
<HPLC分析条件>
系统:Waters alliance 2965
色谱柱:TSKgel G3000PWxl(7.8×3000mm)+TSK guardcolumn PWxl(6.0×40mm)
流动相:含0.1%TFA的45%乙腈
流速:0.3ml/min
检测器:Waters 2414(RI),30℃(池温),Waters 2996(UV220nm)
柱箱:30℃、注射体积:50μl、分析时间:50min
将所得的结果表示于表1中。GPC分析的结果是,鱼精蛋白的重均分子量(Mw)为4342Da,鱼精蛋白分解物的重均分子量(Mw)为2482Da。
[表1]
表1:GPC分析结果
(参考例1:粉体的制备法)
将无水磷酸氢钙原料粉体1.5g与使用HAP-100(鱼精蛋白分解物、MARUHANICHIRO株式会社制)制备出的1000ppm鱼精蛋白分解物溶液45cm3混合,在所得的混合物中,在室温下进行48小时的吸附反应。对吸附反应后的混合物以8000rpm进行10分钟离心分离,除去上清液。采集除去上清液后的沉淀物后,冷冻干燥约24小时,得到担载有鱼精蛋白分解物的无水磷酸氢钙粉体(粉碎处理无粉体:粉体0(+))。
(实施例2:粉体的物性评价)
针对以下的项目评价了实施例1及参考例1中得到的各粉体的物性。作为评价用试样,准备了以下的试样1~4。
·试样1:原料粉体(粉体0(-))。
·试样2:不进行原料粉体的5小时粉碎处理、而是将原料粉体作为鱼精蛋白分解物的担载用使用的参考例1中制备的担载有鱼精蛋白分解物的无水磷酸氢钙粉体(粉体0(+))。
·试样3:实施例1的经过5小时粉碎处理、担载鱼精蛋白分解物前的无水磷酸氢钙粉体(粉体5(-))。
·试样4:在实施例1中制备的经过5小时粉碎处置的无水磷酸氢钙粉体上担载有鱼精蛋白分解物的无水磷酸氢钙粉体(粉体5(+))
<1.分散性>
(a)方法
使试样1~4分别悬浮、分散于超纯水中,将所得的各悬浮液的10ml转移到10ml计量用的量筒(内径:10mm)中。
如图1中示意性所示,在刚刚注入悬浮液后(测定开始时)、和注入结束5分钟后,用数码相机拍摄量筒1的7.5ml的部分,使用图像分析软件ImageJ(Schneider,C.A.,Rasband,W.S.,Eliceiri,K.W."NIH Image to ImageJ:25years of image analysis".NatureMethods 9,671-675,2012.)测定出亮度。需要说明的是,本试验中通过将亮度作为分散性的指标,将分散度定义为式(1),而在使用了各试样的各试验区间中比较了开始时的亮度和5分钟后的亮度的相对值。
式(1):
D5[%]=[(5分钟后的亮度)/(测定开始时的亮度)]×100
(b)结果
将关于试样1~4的分散性的评价结果表示于图2及图3中。由图2及图3所示的结果可知,通过粉碎无水磷酸氢钙,分散性就会提高。另外,通过使构成粉体的无水磷酸钙微粒担载有鱼精蛋白分解物,可以得到分散性进一步提高的结果。
<2.Zeta电位>
(a)方法
利用激光多普勒散射法,测定出上述的试样1、3及4的表面电位。测定是使用Zeta电位测定装置(大塚电子株式会社,ELSZ-2)进行。使粉体分散于10mM NaCl水溶液中而作为表面电位测定用样品溶液使用。将测定条件表示如下。
测定条件:
光学系统:激光多普勒法
光源:半导体激光器
检测器:光子计数用光电子倍增管
比色皿:石英流动池
溶剂温度:25.0±0.5℃
pH:7.30
Zeta电位换算式:Smoluchowski
(b)结果
将所得的测定结果表示于表2中。Zeta电位没有随着粉碎时间而大幅度变化,然而随着粉碎处理而轻微地趋向于负的方向。另外,担载有鱼精蛋白的物质的Zeta电位反转为正,可以理解为鱼精蛋白分解物向无水磷酸氢钙微粒上吸附、鱼精蛋白分解物被担载于无水磷酸氢钙微粒上。鱼精蛋白分解物担载后的Zeta电位的绝对值与担载前相比增加。该结果表明,担载鱼精蛋白分解物的无水磷酸氢钙微粒之间因它们的正电荷而相互推斥,有助于在悬浮液内的分散性的提高。
[表2]
表2:Zeta电位的比较
试样 | Zeta电位/mV |
试样1(粉体0(-)) | -9.11 |
试样3(粉体5(-)) | -12.75 |
试样4(粉体5(+)) | 18.89 |
<3.粒度分布>
(a)方法
测定试样1及3的粒度分布,求出它们的中值粒径。测定是使用HORIBA制LASERSCATTERING PRACTICE SIZE DISTRIBUTION ANALYSER LA-300进行。将测定条件表示如下。
测定条件:
溶剂:纯水
粉体量:0.05g
测定模式:10
超声波时间:3min
(b)结果
试样1(粉体0(-))的粒度分布具有单一的峰,基本上为正态分布,其中值粒径为29.7μm(图4(a))。另一方面,试样3(粉体5(-))的粒度分布向小的粒径侧移动,其中值粒径减少至1.4μm。试样3的粒度分布在右侧可以观察到肩部,然而接近正态分布,可知基本上被均匀地粉碎(图4(b))。在30μm~50μm轻微地观察到的峰被认为是起因于未粉碎的磷酸氢钙。如果考虑到牙本质小管的孔径为1μm~2μm,则可以判断该试样3的粒径是可以最为有效地将牙本质小管封闭的粒径。
<4.牙本质小管封闭性>
(a)方法
将试样4(粉体5(+))用蒸馏水捏合15秒以上,涂布于人牙样品的牙本质小管露出部位后,维持30秒覆盖状态后水洗,利用实体显微镜(倍率3000倍)观察了涂布表面。
在试样3(粉体5(-))中实施相同的操作,比较了牙本质小管的封闭性。
(b)结果
对于没有担载鱼精蛋白分解物的粉体5(-),在捏合时发生凝聚(图5及图6(b)),有难以获得封闭性的趋势。另一方面,在担载鱼精蛋白分解物的粉体5(+)中,看不到捏合时的凝聚,而是观察到将牙本质小管良好地封闭的样子(图6(a))。
<5.抗菌性>
(a)方法
在已灭菌的试管中,称量试样3(粉体5(-))及试样4(粉体5(+))各0.3g,滴下胰蛋白胨大豆肉汤(トリプチケース·ソイプロス)(TSB)培养基400μl并使之浸润,将试管固定为仰角30℃。向其中分别添加使用能够公开获取的菌株制备出的Streptococcus mutansATCC25175株的菌液、以及Porphylomonas gingivalis JCM12257株的菌液各100μl,温和地搅拌后,在37℃、厌氧条件下曝露0小时(未暴露)或18小时(设定厌氧条件后维持18小时厌氧条件)。
Porphylomonas gingivalis JCM12257株可以从国立研究开发法人理化学研究所、生物资源研究中心微生物材料开发室(Japan Collection of Microorganisms(JCM))、〒305-0074茨城县筑波市高野台3-1-1获取。
Streptococcus mutans ATCC25175株可以从American Type CultureCollection(ATCC),10801University Boulevard,Manassas,VA 20110USA公开地获取。
在各暴露时间下,从试管中采集菌液,对于S.mutans试验区是涂抹于BHI平板培养基,对于P.gingivalis试验区是涂抹于BHK平板培养基。在37℃培养7天后,进行菌数计测。
(b)结果
将结果表示于图7及图8中。
如图7所示,关于S.mutans试验区,试样3(粉体5(-):“无水磷酸氢钙”)在18小时后菌数增加,而试样4(粉体5(+):“担载HAP-100的无水磷酸氢钙”)在18小时中未检出菌,在双方的菌数方面观察到约4个数量级的差异。
另一方面,如图8所示,关于P.gingivalis试验区,试样4(粉体5(+):“担载HAP-100的无水磷酸氢钙”)在18小时的暴露下,观察到约107CFU/ml的菌数减少趋势。另一方面,在试样3(粉体5(-):“无水磷酸氢钙”)中,没有观察到大幅度的菌数减少趋势。需要说明的是,对于1个数量级的减少,可以推测是由于在试验操作中的搅拌中与氧的接触等而产生的。
由以上的结果显示出,试样4(粉体5(+))对于S.mutans及P.gingivalis具有抗菌性。
<6.鱼精蛋白分解物的吸附量的测定>
<方法>
利用HPLC分析测定出试样2和试样4中的鱼精蛋白分解物的吸附量。
HPLC条件如下所示。
·HPLC
[HPLC系统]:(株)岛津制作所制Prominence系列(系统控制器:CBM-20A、自动进样器:SIL-20AC、输液泵:LC-20AB、柱温箱:CTO-20A、PDA检测器:SPD-M20A、脱气机:DGU-20A3)
[流速]:0.8mL/min
[色谱柱]:TSKgel G3000PWXL(保护柱TSKguardcolumn PWXL)
[流动相]:45%乙腈(含有0.1%TFA)
[注入样品量]:20μL
[柱温]:30℃
[检测波长]:220nm
[标准]:使用HAP-100(Lot.1503041)30、100、300、1000ppm溶液制作校准曲线。
<结果>
将鱼精蛋白分解物的吸附量的结果表示于表3中。
[表3]
表3鱼精蛋白分解物的吸附量
<7.牙本质小管封闭的持续性>
(a)方法
除了以使中值粒径为2.0μm的方式变更粉碎条件以外,与实施例1的粉体5(+)相同地制备出担载鱼精蛋白分解物的粉体(试样4:粉体5(+)、中值粒径2.0μm)。将该试样4用蒸馏水捏合15秒以上,涂布于人牙样品的牙本质小管露出部位后,维持30秒覆盖状态后水洗。利用实体显微镜(倍率3000倍)观察涂布表面,确认到将牙本质小管良好地封闭的样子。其后,将各样品在表4所示的组成的人工唾液I单独、人工唾液II单独、或人工唾液I与人工唾液II交替中分别浸渍20天后,利用实体显微镜(倍率3000倍)观察涂布表面。
在人工唾液I与人工唾液II的交替使用中通过如下操作来进行,即,开始的7天是从人工唾液I开始1天1次更换人工唾液,其后在第14天更换1次人工唾液。
[表4]
表4:人工唾液组成
(b)结果
在将涂布有担载鱼精蛋白分解物的粉体的牙本质小管在各人工唾液中浸渍20天后也被良好地封闭(图9)。担载鱼精蛋白分解物的粉体在人工唾液中具有牙本质小管封闭的持续性,显示出能够在口腔内长时间持续发挥牙本质小管封闭的效果的可能性。特别是,确认不仅有可能应对由组成及pH不同的人工唾液I单独使用及人工唾液II单独使用造成的口腔内环境,还有可能应对由人工唾液I及人工唾液II的交替使用造成的口腔内环境的周期性变化,相对于以往技术的牙本质小管封闭剂而言,本发明的担载鱼精蛋白分解物的粉体的优越性明显。
根据该结果,也有可能压缩该材料向牙面的涂布频度,还可以考虑扩大商品拓展的范围的可能性。
符号的说明
1:量筒
Claims (13)
1.一种牙处置用材料,其特征在于,
含有包含担载有鱼精蛋白分解物的钙化合物的牙本质小管封闭材料。
2.根据权利要求1所述的牙处置用材料,其特征在于,
所述钙化合物为磷酸钙及无水磷酸氢钙的至少一方。
3.根据权利要求1或2所述的牙处置用材料,其特征在于,
包含含有所述钙化合物的微粒的粉体。
4.根据权利要求3所述的牙处置用材料,其特征在于,
所述粉体中所含的钙化合物的微粒的粒径分布于0.1μm~10μm的范围内。
5.根据权利要求4所述的牙处置用材料,其特征在于,
所述钙化合物的微粒的粒径的分布的中值粒径处于0.1μm~5μm的范围。
6.一种牙处置用的涂布液,其特征在于,
是牙处置用的涂布液,包含权利要求1至5中任一项所述的牙处置用材料和该牙处置用材料的分散用的液体,该牙处置用材料分散于该液体中。
7.一种牙处置用的组件,其具有权利要求1至5中任一项所述的牙处置用材料和该牙处置用材料的分散用的液体。
8.一种食品,其包含权利要求1至5中任一项所述的牙处置用材料。
9.一种口腔卫生用品,其包含权利要求1至5中任一项所述的牙处置用材料。
10.根据权利要求9所述的口腔卫生用品,其中,
所述口腔卫生用品为牙膏、含漱剂或口腔清洗剂。
11.一种方法,该方法将权利要求1至5中任一项所述的牙处置用材料作为用于知觉过敏的处置及对口腔内的抗菌性的赋予的有效成分在食品的制造中使用。
12.一种方法,该方法将权利要求1至5中任一项所述的牙处置用材料作为用于知觉过敏的处置及对口腔内的抗菌性的赋予的有效成分在口腔卫生用品的制造中使用。
13.根据权利要求12所述的方法,其中,
所述口腔卫生用品为牙膏、含漱剂或口腔清洗剂。
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