CN108709946A - 一种检测食品中十七种氨基酸的方法 - Google Patents

一种检测食品中十七种氨基酸的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN108709946A
CN108709946A CN201810604334.8A CN201810604334A CN108709946A CN 108709946 A CN108709946 A CN 108709946A CN 201810604334 A CN201810604334 A CN 201810604334A CN 108709946 A CN108709946 A CN 108709946A
Authority
CN
China
Prior art keywords
amino acid
sample
kinds
food
hydrolysis
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201810604334.8A
Other languages
English (en)
Inventor
曹雪琴
杨中
陈国通
毛琼玲
李芳�
杨飞
王文文
范蕊
王艳阳
刘潇
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
XINJIANG UYGUR AUTONOMOUS REGION INSTITUTE FOR INSTRUMENTAL ANALYSIS
Original Assignee
XINJIANG UYGUR AUTONOMOUS REGION INSTITUTE FOR INSTRUMENTAL ANALYSIS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by XINJIANG UYGUR AUTONOMOUS REGION INSTITUTE FOR INSTRUMENTAL ANALYSIS filed Critical XINJIANG UYGUR AUTONOMOUS REGION INSTITUTE FOR INSTRUMENTAL ANALYSIS
Priority to CN201810604334.8A priority Critical patent/CN108709946A/zh
Publication of CN108709946A publication Critical patent/CN108709946A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86

Landscapes

  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)

Abstract

本发明属于食品检测技术领域，公开了一种检测食品中十七种氨基酸的方法，包括以下步骤：步骤一，将样品用粉碎机粉碎混匀，密封冷冻(‑20℃)保存；步骤二，称取含蛋白7.5‑25mg的样品于20mL厌氧水解管中；步骤三，加入10mL HCL溶液(6moL/L)，将样品全部浸没，充高纯氮气1min‑2min，旋紧密封盖；步骤四，将水解管置于(110±5)℃恒温烘箱中水解22h，水解完成后，冷却、混匀，样液经0.22μm滤膜过滤；步骤五，试样液经LC‑MS/MS分析，根据保留时间定性，外标峰面积法定量。本发明使用LC‑MS/MS、外标峰面积法定量，可有效的检测出食品中十七种氨基酸，操作简单，实用性强。

Description

一种检测食品中十七种氨基酸的方法
技术领域
本发明属于食品检测技术领域，尤其涉及一种检测食品中十七种氨基酸的方法。
背景技术
氨基酸是构成动物营养所需蛋白质的基本物质，是含有氨基和羧基的一类有机化合物的通称，不仅具有营养保健价值，还有句生理调节的功效。天然的氨基酸现已经发现的有300多种，其中人体所需的氨基酸约有22种，分非必需氨基酸和必需氨基酸(人体无法自身合成)。另有酸性、碱性、中性、杂环分类，是根据其化学性质分类的。各种氨基酸在生物体中具有不同的生物功能，如生物体中的色氨酸与脑的正常代谢有密切的关系，L-半胱氨酸能增强生物体的抗病能力，因此，准确灵敏地测定食物、药品和生物样品中氨基酸的含量具有十分重要的意义。在食品工业中，氨基酸是食品品质鉴定中的一个重要的理化指标。各种食品中都含有游离氨基酸，在食品的加工过程中，可以与肽、核苷酸、有机酸、糖、无机离子等形成相应的呈味活性物质，决定了每一种食物独有的风味特征。目前食品中氨基酸的种类测定方法中，利用氨基酸分析仪只能测定食物中16种氨基酸的含量，并且氨基酸自动分析仪专一性强，价格昂贵，普及性不强，检测氨基酸的种类少，远远不能满足实际工作的需要，开发出多种氨基酸的检测方法是亟待解决的问题。
综上所述，现有技术存在的问题是：
目前食品中氨基酸的种类测定方法中，有氨基酸分析仪法和柱前衍生高效液相色谱法，氨基酸自动分析仪专一性强，价格昂贵，普及性不强，柱前衍生法需要衍生试剂，且衍生过程控制较复杂，结果重现性不好，远远不能满足实际工作的需要。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种检测食品中十七种氨基酸的方法。
本发明是这样实现的，一种液相色谱-串联质谱法检测食品中十七种氨基酸的方法包括以下步骤：
步骤一，将样品用粉碎机粉碎混匀，密封冷冻(-20℃)保存；
步骤二，称取含蛋白7.5-25mg的样品于20mL厌氧水解管中；
步骤三，加入10mL HCL溶液(6moL/L)，将样品全部浸没，充高纯氮气1min-2min，旋紧密封盖；
步骤四，将水解管置于(110±5)℃恒温烘箱中水解22h，水解完成后，冷却、混匀，样液经0.22μm滤膜过滤；
步骤五，试样液经LC-MS/MS分析，根据保留时间定性，外标峰面积法定量。
进一步，所述步骤三充高纯氮气后注意保持水解管竖直，移开氮气后立即盖好软塞。
本发明另一目的在于提供一种利用所述液相色谱-串联质谱法测定十七种氨基酸的方法的测定系统。
本发明的优点及积极效果为：
本发明使用LC-MS/MS、外标峰面积法定量，可有效的检测出食品中十七种氨基酸，操作简单，实用性强。加入盐酸溶液将样品中的蛋白质水解为游离氨基酸，充氮气是为了水解彻底，防止样品损失；与柱前衍生高兴液相色谱法相比，实验过程相对简单可控，无需衍生试剂，节省实验步骤与成本，实验结果更可靠。
附图说明
图1是本发明实施例提供的液相色谱-串联质谱法检测食品中十七种氨基酸的方法的流程图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
下面结合附图对本发明的应用原理作进一步描述。
如图1，液相色谱-串联质谱法检测食品中十七种氨基酸的方法包括以下步骤：
S101：将样品用粉碎机粉碎混匀，密封冷冻(-20℃)保存；
S102：称取含蛋白7.5-25mg的样品于20mL厌氧水解管中；
S103：加入10mL HCL溶液(6moL/L)，将样品全部浸没，充高纯氮气1min-2min，旋紧密封盖；
S104：将水解管置于(110±5)℃恒温烘箱中水解22h，水解完成后，冷却、混匀，样液经0.22μm滤膜过滤；
S105：试样液经LC-MS/MS分析，根据保留时间定性，外标峰面积法定量。
作为本发明的优选实施例，所述S103充高纯氮气后注意保持水解管竖直，移开氮气后立即盖好软塞。
下面结合具体实施例对本发明的应用原理作进一步描述。
1主要仪器与试剂
超高效液相色谱-串联质谱仪，高速离心机；涡旋混合器。
色谱纯乙腈；色谱纯甲酸；实验用水；优级纯盐酸。
十七种氨基酸包括：天门冬氨酸Asp、谷氨酸Glu、丝氨酸Ser、甘氨酸Gly、组氨酸His、精氨酸Arg、苏氨酸Thr、丙氨酸Ala、脯氨酸Pro、酪氨酸Tyr、缬氨酸Val、甲硫氨酸Met、胱氨酸Cys、异亮氨酸Ile、亮氨酸Leu、苯丙氨酸Phe、赖氨酸Lys。
2色谱和质谱条件
色谱柱：Waters AcquityUPLC HSS T3柱(150mm×2.1mm，1.8μm)；流速：0.3mL/min；柱温：30℃；进样量：3μL；流动相：A相:乙腈；B相：0.1％甲酸溶液；洗脱程序：0～1.0min，1％A；1.0～4.0min，1％～1％A；4.0～5.0min，10％～28％A；5.1～6.1min，100％A；6.2～8.0min，1％A。
电喷雾离子源(ESI)；扫描方式为多反应监测(MRM)；毛细管电压：1.0kV(-)；离子源温度：150℃；脱溶剂气(N2)温度：500℃；脱溶剂气流量：1000L/h；锥孔气流量：50L/h；碰撞气(Ar)流速：2.5L/h。
17种氨基酸的质谱分析参数见表1。
3样品前处理
样品用粉碎机粉碎混匀，密封冷冻(-20℃)保存。
称取含蛋白7.5-25mg的样品于20mL厌氧水解管中；加入10mL HCL溶液(6moL/L)，将样品全部浸没，充高纯氮气1min-2min，注意保持水解管竖直，移开氮气后立即盖好软塞，旋紧密封盖；将水解管置于(110±5)℃恒温烘箱中水解22h；水解完成后，冷却，混匀，样液经0.22μm滤膜过滤。
试样液经LC-MS/MS分析，根据保留时间定性，外标峰面积法定量。
表1 17种氨基酸质谱采集参数
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (4)

1.一种液相色谱-串联质谱法测定食品中十七种氨基酸的方法，其特征在于，该检测食品中十七种氨基酸的方法包括以下步骤：
步骤一，将样品用粉碎机粉碎混匀，密封冷冻保存；
步骤二，称取含蛋白7.5-25mg的样品于20mL厌氧水解管中；
步骤三，加入10mL HCL溶液，将样品全部浸没，充高纯氮气1min-2min，旋紧密封盖；
步骤四，将水解管置于110±5℃恒温烘箱中水解22h，水解完成后，冷却、混匀，样液经0.22μm滤膜过滤；
步骤五，试样液经LC-MS/MS分析，根据保留时间定性，外标峰面积法定量。
2.如权利要求1所述液相色谱-串联质谱法检测食品中十七种氨基酸的方法，其特征在于，所述步骤三充高纯氮气后注意保持水解管竖直，移开氮气后立即盖好软塞。
3.如权利要求1所述的液相色谱-串联质谱法测定食品中十七种氨基酸的方法，其特征在于，所述步骤五中LC-MS/MS的色谱和质谱条件为：
色谱柱：Waters Acquity UPLC HSS T3柱；流速：0.3mL/min；柱温：30℃；进样量：3μL；流动相：A相:乙腈；B相：0.1％甲酸溶液；洗脱程序：0～1.0min，1％A；1.0～4.0min，1％～1％A；4.0～5.0min，10％～28％A；5.1～6.1min，100％A；6.2～8.0min，1％A；
电喷雾离子源；扫描方式为多反应监测；毛细管电压：1.0kV(-)；离子源温度：150℃；脱溶剂气温度：500℃；脱溶剂气流量：1000L/h；锥孔气流量：50L/h；碰撞气流速：2.5L/h。
4.一种利用权利要求1～3任意一项所述液相色谱-串联质谱法测定十七种氨基酸的方法的测定系统。
CN201810604334.8A 2018-06-13 2018-06-13 一种检测食品中十七种氨基酸的方法 Pending CN108709946A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810604334.8A CN108709946A (zh) 2018-06-13 2018-06-13 一种检测食品中十七种氨基酸的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810604334.8A CN108709946A (zh) 2018-06-13 2018-06-13 一种检测食品中十七种氨基酸的方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN108709946A true CN108709946A (zh) 2018-10-26

Family

ID=63871633

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810604334.8A Pending CN108709946A (zh) 2018-06-13 2018-06-13 一种检测食品中十七种氨基酸的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108709946A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114441681A (zh) * 2022-01-28 2022-05-06 山东省食品药品检验研究院 一种测定特殊医学配方食品中20种游离氨基酸和l-羟脯氨酸的方法
CN114563512A (zh) * 2022-03-02 2022-05-31 雷美康 一种测定鱼子酱中多种磺胺类药物残留的方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102323341A (zh) * 2011-06-09 2012-01-18 山西出入境检验检疫局检验检疫技术中心 奶粉中18种蛋白水解氨基酸的高效液相色谱检测方法
CN103713078A (zh) * 2013-12-30 2014-04-09 广西中烟工业有限责任公司 一种蜂蜜中氨基酸的测定方法
CN105911206A (zh) * 2016-06-14 2016-08-31 广西中烟工业有限责任公司 一种卷烟主流烟气中氨基酸的测定方法
CN106198816A (zh) * 2015-05-07 2016-12-07 华中科技大学 一种混合氨基酸含量测定方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102323341A (zh) * 2011-06-09 2012-01-18 山西出入境检验检疫局检验检疫技术中心 奶粉中18种蛋白水解氨基酸的高效液相色谱检测方法
CN103713078A (zh) * 2013-12-30 2014-04-09 广西中烟工业有限责任公司 一种蜂蜜中氨基酸的测定方法
CN106198816A (zh) * 2015-05-07 2016-12-07 华中科技大学 一种混合氨基酸含量测定方法
CN105911206A (zh) * 2016-06-14 2016-08-31 广西中烟工业有限责任公司 一种卷烟主流烟气中氨基酸的测定方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会等: "GB5009.124-2016 食品安全国家标准食品中氨基酸的测定", 《中华人民共和国国家标准》 *
唐翎等: "UPLC-MS/MS 法测定猴头菌丝体中18 种游离氨基酸的含量", 《药物分析杂志》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114441681A (zh) * 2022-01-28 2022-05-06 山东省食品药品检验研究院 一种测定特殊医学配方食品中20种游离氨基酸和l-羟脯氨酸的方法
CN114441681B (zh) * 2022-01-28 2024-06-04 山东省食品药品检验研究院 一种测定特殊医学配方食品中20种游离氨基酸和l-羟脯氨酸的方法
CN114563512A (zh) * 2022-03-02 2022-05-31 雷美康 一种测定鱼子酱中多种磺胺类药物残留的方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Peace et al. Chromatographic determination of amino acids in foods
Özcan et al. Improved and simplified liquid chromatography/atmospheric pressure chemical ionization mass spectrometry method for the analysis of underivatized free amino acids in various foods
Kőrös et al. Simultaneous analysis of amino acids and amines as their o-phthalaldehyde-ethanethiol-9-fluorenylmethyl chloroformate derivatives in cheese by high-performance liquid chromatography
Nozal et al. Rapid and sensitive method for determining free amino acids in honey by gas chromatography with flame ionization or mass spectrometric detection
Jin et al. Determination ofd-Amino Acids Labeled with Fluorescent Chiral Reagents, R (−)-andS (+)-4-(3-Isothiocyanatopyrrolidin-1-yl)-7-(N, N-dimethylaminosulfonyl)-2, 1, 3-benzoxadiazoles, in Biological and Food Samples by Liquid Chromatography
Gu et al. A rapid solid-phase extraction combined with liquid chromatography-tandem mass spectrometry for simultaneous screening of multiple allergens in chocolates
Prior et al. Enantioselective capillary electrophoresis-mass spectrometry of amino acids in cerebrospinal fluid using a chiral derivatizing agent and volatile surfactant
CN108333268A (zh) 一种同时检测干血斑、血液和尿液中四十种氨基酸的方法
Chen et al. Rapid and sensitive ultrasonic-assisted derivatisation microextraction (UDME) technique for bitter taste-free amino acids (FAA) study by HPLC–FLD
Wu et al. Simultaneous determination of seven biogenic amines in foodstuff samples using one-step fluorescence labeling and dispersive liquid–liquid microextraction followed by HPLC-FLD and method optimization using response surface methodology
GB2612747A (en) Characteristic peptide segment capable of distinguishing deer horn gelatin from deer skin gelatin, and test method therefor
Santos et al. Direct automatic determination of biogenic amines in wine by flow injection‐capillary electrophoresis‐mass spectrometry
Geng et al. A rapid assay for angiotensin‐converting enzyme activity using ultra‐performance liquid chromatography–mass spectrometry
Akamatsu et al. Development of a simple analytical method using capillary electrophoresis-tandem mass spectrometry for product identification and simultaneous determination of free amino acids in dietary supplements containing royal jelly
CN108709946A (zh) 一种检测食品中十七种氨基酸的方法
Yin et al. Sensitive analysis of 33 free amino acids in serum, milk, and muscle by ultra-high performance liquid chromatography-quadrupole-orbitrap high resolution mass spectrometry
Yan et al. Direct determination of fourteen underivatized amino acids from Whitmania pigra by using liquid chromatography-evaporative light scattering detection
CN114577942B (zh) 一种测定特殊医学用途配方食品中22种氨基酸和牛磺酸的方法
Simionato et al. Determination of amino acids by capillary electrophoresis‐electrospray ionization‐mass spectrometry: An evaluation of different protein hydrolysis procedures
CN113804806A (zh) 燕窝中氨基酸的超高效液相色谱-串联质谱测定方法
Li et al. Rapid determination of oligopeptides and amino acids in soybean protein hydrolysates using high‐resolution mass spectrometry
Heres et al. Identification of dipeptides by MALDI-ToF mass spectrometry in long-processing Spanish dry-cured ham
Li et al. Determination of 35 free amino acids in tea using ultra-performance liquid chromatography coupled with quadrupole time-of-flight mass spectrometry
CN106404956B (zh) 高效液相色谱-串联质谱内标法同时检测葡萄酒和/或果酒中四种有机酸的方法及其应用
Zhao et al. Measurement of degree of hydrolysis and molecular weight distribution of protein hydrolysates by liquid chromatography-mass spectrometry

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20181026

RJ01 Rejection of invention patent application after publication