CN108685970B - 厚藤提取物在制备抗肿瘤药物方面的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了厚藤提取物在制备抗肿瘤药物方面的应用。发明人经深入研究发现，厚藤的甲醇提取物具有一定的抗肿瘤作用，特别是针对结肠癌有良好疗效。同时，发明人还建立了厚藤提取物的相应提取方法。因此，本发明为进一步开辟中医药厚藤的医药应用提供了有力依据和可靠保障。

Description

厚藤提取物在制备抗肿瘤药物方面的应用
技术领域
本发明属于肿瘤治疗技术领域，尤其涉及厚藤提取物在制备抗肿瘤药物方面的应用。
背景技术
癌症的病死亡率极高，危害显著，世 界卫生组织(WHO)专家预测，2020年全球人口80 亿，癌症新发病例将达到2000万，1200万人死于癌症。其中，直肠癌在全球范围内的发病率及死亡率均高居前三，将成为新世纪人类的第一杀手，并成为全球最大的公共卫生问题之一。结肠癌是常见发生于结肠部位的消化道恶性肿瘤，好发于直肠与乙状结肠交界处，以40-50岁年龄组发病率最高。结肠癌治疗主张手术切除肿瘤并辅之以中药治疗、放化疗，放化疗对病患免疫系统产生强烈的抑制作用，而中药治疗具有多靶点、低毒等优点，可有效提高病患机体免疫系统及生活质量，目前，放化疗联合中药治疗越来越受到癌症治疗专家的青睐，挖掘有效治疗结肠癌的中药制剂逐渐成为医药工作者的研究热点。
厚藤(Ipomoea pes-caprae(Linn.)Sweet)为旋花科番薯属草本植物，又名二叶红薯、马鞍藤，主要分布于热带及亚热带沿海地区，是中国、澳大利亚、墨西哥、泰国、巴西、巴基斯坦等多个热带及亚热带国家的传统药用植物。中国民间传统应用于治疗腰肌劳损、风湿关节痛、腰腿痛及疮疖、痔疮、海蜇引起的皮炎，澳大利亚土著人用于治疗伤口、虫毒引起的皮肤炎症、淋巴结结核、高血压、偏头痛，墨西哥民间用于治疗肾炎，泰国民间用于治疗水母毒素引起的炎症，巴西民间用于治疗疝气、排尿障碍、淋病，巴基斯坦也将其作为代茶饮。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种厚藤提取物在制备抗肿瘤药物方面的应用，以深入发掘中医药厚藤的医药价值。
为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：
厚藤提取物在制备抗肿瘤药物方面的应用。
肿瘤为结肠癌。
厚藤提取物为厚藤的甲醇提取物。
厚藤提取物按以下方法制得：称取厚藤地上部位，粉碎得粗粉，采用石油醚超声1h以脱色，得药渣，挥干石油醚后采用90％甲醇为提取溶剂，按料液比1∶10超声浸提，首次提取前浸泡过夜12h，超声三次，每次1h，减压抽滤得滤液，50℃减压浓缩得干膏备用。
将上述干膏干法上样于C18常压开放柱，依次用10％、30％、50％、70％、90％、100％甲醇洗脱3个柱体积，收集各部分洗脱液浓缩至干膏状，分别得到10％、30％、50％、70％、90％、 100％甲醇洗脱液对应的干膏备用。
针对目前厚藤药用价值尚未得到有效开发的问题，发明人经深入研究发现，厚藤的甲醇提取物具有一定的抗肿瘤作用，特别是针对结肠癌有良好疗效。同时，发明人还建立了厚藤提取物的相应提取方法。因此，本发明为进一步开辟中医药厚藤的医药应用提供了有力依据和可靠保障。
附图说明
图1是按细胞分类的MTS结果图，图中：A HT-29，B SW480。
图2是按馏分分类的MTS结果图，图中：A 30％甲醇洗脱，B 50％甲醇洗脱，C 70％甲醇洗脱，D 90％甲醇洗脱，E 100％甲醇洗脱。
具体实施方式
一、实验材料
1.厚藤提取物
提取：称取厚藤地上部位3.5kg，粉碎得粗粉，采用石油醚超声1h以脱色，得药渣，挥干石油醚后采用90％甲醇为提取溶剂，按料液比1∶10超声浸提，首次提取前浸泡过夜12h，超声三次，每次1h，减压抽滤得滤液，50℃减压浓缩，得329.8g干膏备用。
分离：将干膏干法上样于C18常压开放柱(990×100mm，50μm)，依次用10％、30％、50％、70％、90％、100％甲醇洗脱3个柱体积，收集各部分洗脱液浓缩至干膏状，分别得到10％、30％、50％、70％、90％、100％甲醇洗脱液对应的干膏备用。
2.细胞株
结肠癌细胞HT-29、SW480。
3.主要试剂与仪器
Gibco胎牛血清、McCoys’5A不完全培养基、L15不完全培养基、CellTiter96Aqueous One Solution Reagent(MTS液)、胰酶、D-PDBS；超净台、酶标仪。
二、实验方法
(1)待细胞处于对数生长期时，用真空泵吸走细胞培养基，加入DPBS 5ml清洗细胞2次，弃掉DPBS后加入0.25％胰酶2ml进行消化，加入2倍体积含10％胎牛血清的完全培养基终止消化，用移液枪吸取培养液将细胞从培养瓶壁上吹打下来，转移至15ml离心管中，放入离心机中设置1000转/分钟，离心3分钟，取出喷洒酒精后转移至超净台，用真空泵吸走上清，加入5ml完全培养基重悬、混匀，进行细胞计数，重悬，将细胞的密度调整为5×104个/ml，在96孔板中每孔加入100μl细胞悬液，使得每个孔5000个细胞，每组设置3个复孔，共设5个给药梯度组(20，40，80，160，320μg/ml)，以及培养液对照组、DMSO对照组。置于37℃，5％CO2恒温孵箱中进行常规培养。
(2)配置待测药物母液：取待测药物(厚藤提取物)溶解于DMSO中，均配成100mg/ml的母液，保存于-20℃。配制最大浓度药液时，用0.22μm过滤筛滤过1次，然后稀释成相应的梯度浓度。
(3)待细胞培养贴壁后，更换培养基，各列分别加入不同浓度梯度的待测药物(20，40，80，160，320μg/ml)，对照组加入等体积的含最高浓度DMSO的1640完全培养基，以及只含完全培养基的对照组。继续培养48h。
(4)分别在培养72h后，用真空泵将96孔板将原有液体吸走，用排枪于每孔加入100μl新鲜培养液后每孔再加入20μl完全融化后的Cell Titer 96Aqueous One SolutionReagent，然后将细胞放回培养箱中继续培养2h，于酶标仪上在490nm波光处读取吸光度值。制作表格，纵坐标为细胞活力，横坐标为药物浓度，绘制出MTS结果图。
三、实验结果
如图1和图2以及表1所示，通过30％MeOH、50％MeOH、70％MeOH、90％MeOH和100％MeOH这五个馏分的细胞增殖实验的检测，发现70％MeOH和90％MeOH馏分的抗肿瘤活性较强，通过IC50的比较，90％MeOH馏分的活性最强。
表1厚藤提取物抗肿瘤活性结果(IC50，ug/ml)
Figure BDA0001700317550000031

Claims (1)

1.厚藤提取物在制备抗肿瘤药物方面的应用，其特征在于：所述肿瘤为结肠癌；所述厚藤提取物按以下方法制得：称取厚藤地上部位，粉碎得粗粉，采用石油醚超声1h以脱色，得药渣，挥干石油醚后采用90％甲醇为提取溶剂，按料液比1:10超声浸提，首次提取前浸泡过夜12h，超声三次，每次1h，减压抽滤得滤液，50℃减压浓缩得干膏，将干膏干法上样于C18常压开放柱，依次用10％、30％、50％、70％、90％、100％甲醇洗脱3个柱体积，收集70％、90％甲醇洗脱液分别浓缩至干膏状，即得所述厚藤提取物。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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冯小慧等.海洋中药厚藤的化学成分及药理活性研究进展.《中草药》.2018,第49卷(第4期), *
厚藤化学成分研究;葛玉聪等;《中药材》;20161031;第39卷(第10期);第2251-2255页，尤其是第2251页左栏第1段、右栏第3段、第2252页左栏第1段 *
海洋中药厚藤的化学成分及药理活性研究进展;冯小慧等;《中草药》;20180228;第49卷(第4期);第955-964页，尤其是第962页左栏第1段 *

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