CN108669382B - 柴胡提取物作为石斑鱼饲料添加剂的应用 - Google Patents

柴胡提取物作为石斑鱼饲料添加剂的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了柴胡提取物作为石斑鱼饲料添加剂的应用。柴胡提取物作为饲料添加剂，具有改善石斑鱼肝脏形态结构，降低肝脏脂肪含量和提高免疫力的作用。具体地，柴胡提取物是添加到石斑鱼基础饲料中，根据生长性能指标，其适宜添加量是占基础饲料质量的0.04‑0.08％。添加量过高会影响石斑鱼的生长性能和肝脏形态结构和脂肪的沉积。添加量过低达不到效果。实验证实，柴胡提取物对珍珠龙胆石斑鱼具有特别的改善肝脏健康状况的作用，且珍珠龙胆石斑鱼是目前养殖规模较大的一个品种。本发明柴胡提取物，不仅可以提高养殖鱼类的生长性能、饲料效率、肝脏脂肪沉积和提高免疫力，而且无毒副作用、环境友好。

Description

柴胡提取物作为石斑鱼饲料添加剂的应用
技术领域
本发明属于水产养殖领域，具体涉及柴胡提取物作为石斑鱼饲料添加剂的应用，柴胡提取物可以增强鱼类免疫力、降低脂肪沉积，防治肝脏损伤，具保肝护肝的作用。
背景技术
目前，由于环境污染，高蛋白、高脂肪或霉变饲料的使用、抗生素和杀虫剂的滥用等因素引起的鱼类肝脏疾病在全国许多地区频繁发生，造成多种鱼类的大面积死亡，给水产养殖业造成极大的经济损失。
肝脏是鱼体内最主要的代谢器官及最大的消化腺。鱼类肝病已成为当前水产养殖中一种常见而危害很大的疾病，引起了广泛的重视。因此，研究具有保肝护肝作用的饲料添加剂，对于水产品质量安全和品质的提升具有重要的现实意义。
中草药含有多糖、生物碱、皂甙、挥发油、蒽类和有机酸等，具有免疫调节作用。中草药在鱼类养殖中具有广泛的应用，主要用于鱼病的防治，具有抗菌、抗病毒及促进免疫功能的有利改善，提高机体抗病能力等作用，因其副作用少，毒性低，不产生抗药性等特点，具有化学药物不可比拟的优势。
中草药可以调节鱼类的免疫系统，提高养殖鱼类的抗应激能力和免疫机能。同时，也可以作为饲料添加剂促进鱼体的生长，增强抗病力。因此，中草药作为水产养殖动物的饲料添加剂具有广阔的意义前景。
柴胡为伞形科多年生草本植物，是中国重要的药用植物，具有2000多年的历史。
石斑鱼，属于鲈形目、鮨科、石斑鱼属，主要分布于热带、亚热带暖水海域，是最重要的海洋鱼类之一。2016年在中国年产量达到100,000吨，比2015年增长了13.48％。珍珠龙胆石斑鱼是褐点石斑鱼(母本)和鞍带石斑鱼(父本)杂交的一种新兴的海水养殖鱼类新品种，具有生长快速、肉质鲜美、营养价值高、抗病能力强等优点，在我国沿海地区得到了快速发展。但由于养殖规模的扩大，水环境的恶化，疾病防控不足，抗生素等化学物质的滥用，导致石斑鱼肝脏疾病爆发频繁，造成了大量鱼类死亡以及经济损失。因此寻找无污染纯天然无公害饲料添加剂对于石斑鱼的养殖具有重要的意义。
发明内容
本发明的首要目的在于提供柴胡提取物作为石斑鱼饲料添加剂的应用，柴胡提取物能提高石斑鱼免疫力，降低脂肪沉积和具有保肝护肝的作用。
本发明的另一目的在于提供一种杂交石斑鱼配合饲料。
本发明的目的通过下述技术方案实现：
柴胡提取物作为石斑鱼饲料添加剂的应用；柴胡提取物作为饲料添加剂，能提高石斑鱼免疫力，降低脂肪沉积和具有保肝护肝的作用。
具体地，柴胡提取物是添加到石斑鱼基础饲料中，根据生长性能，其适宜添加量是基础饲料质量的0.04-0.08％。添加量过高会影响石斑鱼的生长性能和肝脏结构以及免疫力。添加量过低达不到效果。
所述的柴胡提取物购自南京道斯夫生物科技有限公司，提取比例为20:1；
所述的石斑鱼优选杂交石斑鱼，特别优选珍珠龙胆石斑鱼；
实验证实，柴胡提取物对珍珠龙胆石斑鱼具有特别的改善肝脏免疫功能，降低脂肪沉积和保肝护肝的作用，且珍珠龙胆石斑鱼是目前养殖规模较大的一个品种。
所述的石斑鱼基础饲料，其成分组成为：粗蛋白47.17-48.04％、粗脂肪14.85-15.74％、粗灰分12.08-12.49％、水分5.26-5.88％。
一种杂交石斑鱼配合饲料，包括以下质量百分比的原料：
Figure BDA0001754715580000021
Figure BDA0001754715580000031
上述的杂交石斑鱼配合饲料中，粗蛋白的质量分数为47.17-48.04％，粗脂肪的质量分数为14.85-15.74％；
上述复合维生素矿物盐购自广州市诚一饲料有限公司。
上述的杂交石斑鱼配合饲料的制备方法，包括以下步骤：
(1)将所用原料粉碎过筛；
(2)取鱼粉、豆粕、面粉，并混合均匀；
(3)往步骤(2)的混合物中加入充分混匀的啤酒酵母、复合维生素矿物盐、氯化胆碱、维生素C磷酸酯、磷酸二氢钙，加入柴胡提取物，并搅拌均匀；
(4)往步骤(3)的混合物中加入鱼油、豆油和大豆卵磷脂，搅拌均匀；
(5)加入上述各原料质量总和30％的水，充分混合，制成颗粒料，晾干，得到杂交石斑鱼配合饲料。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
本发明使用一种功能性绿色添加剂柴胡提取物，不仅可以提高养殖鱼类的生长性能、饲料效率和免疫力以及改善肝脏结构、脂肪沉积，而且无毒副作用、环境友好。这是在目前水产养殖发展过程中是急待突破的关键性技术问题。
附图说明
图1是柴胡提取物饲料对珍珠龙胆石斑鱼增重率和饲料效率的影响；其中，A-对增重率的影响，B-对饲料效率的影响。
图2是饲料中添加柴胡提取物对杂交石斑鱼肝脏病理组织学的影响(HE染色)；其中，A-RBE0，B-RBE0.02％，C-RBE0.04％，D-RBE0.08％，E-RBE0.16％。
图3是饲料中添加柴胡提取物对杂交石斑鱼肝脏组织化学的影响(油红O染色)；其中，A-RBE0，B-RBE0.02％，C-RBE0.04％，D-RBE0.08％，E-RBE0.16％。
图4是饲料中添加柴胡提取物对杂交石斑鱼脂代谢相关基因的影响；其中，A-对脂肪合成相关基因的影响，B-对脂肪分解相关基因的影响，C-对脂肪转运相关基因的影响，D-对调节脂肪酸代谢相关基因的影响。
图5是用D-氨基半乳糖和脂多糖注射后，饲料中添加柴胡提取物对杂交石斑鱼抗氧化相关指标的影响；其中，A-对过氧化氢酶(CAT)活性的影响，B-对超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响。
图6是用D-氨基半乳糖和脂多糖注射后，饲料中添加柴胡提取物对杂交石斑鱼免疫相关基因的影响；其中，A-对抗氧化酶相关基因的影响，B-对凋亡相关基因的影响，C-对免疫相关基因的影响，D-对炎症相关基因的影响。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1
为了探究饲料中添加柴胡提取物对珍珠龙胆石斑鱼生长性能的影响，在基础饲料中添加柴胡提取物(20:1)饲喂珍珠龙胆石斑鱼，设置5个梯度，添加浓度分别为0、0.02％、0.04％、0.08％、0.16％，试验养殖期为8周。
表1饲料的组成及营养成分表(％)
Figure BDA0001754715580000051
表2柴胡提取物对杂交石斑鱼全鱼和肌肉营养成分的影响(％)
Figure BDA0001754715580000052
结果如图1和表2所示，柴胡提取物饲喂珍珠龙胆石斑鱼八周，不同处理组间的试验鱼增重率(WG)具有显著性差异，呈现出先增加后减少的趋势，并且均在柴胡提取物添加量为0.08％时达到最大值。
饲料效率(饲料效率＝(末重(g)-初重(g))/摄食量(g))在8周养殖实验结束后，均有显著差异，且添加量为0.02-0.08％时显著高于0添加组。
同时，饲料中添加0.02-0.08％柴胡提取物可以显著降低肌肉粗脂肪的含量；添加0.08％柴胡提取物可以显著提高全鱼和肌肉粗蛋白的含量。
以上结果表明，饲料中添加0.02-0.08％的柴胡提取物可以改善杂交石斑鱼的生长性能。
实施例2
为了探究饲料中添加柴胡提取物对珍珠龙胆石斑鱼肝脏形态结构和组织化学的影响。在基础饲料中添加使用柴胡提取物(提取比例为20:1)，设置5个梯度，添加浓度分别为0、0.02％、0.04％、0.08％、0.16％(如表1所示)，养殖8周后，取肝脏组织做HE染色和油红O染色。
结果如图2和图3所示，饲料中添加0.04-0.08％的柴胡提取物可以显著改善杂交石斑鱼肝脏结构，未添加组肝细胞核偏移和有大量的空泡，随着柴胡提取物浓度的增加，核偏移和空泡明显得到改善；通过油红O染色观察到，随着柴胡浓度的增加，肝脏脂滴数量明显减少，脂滴变小，可降低肝脏脂肪的沉积。
以上结果表明，饲料中添加0.04-0.08％的柴胡提取物可以明显改善肝细胞结构，降低肝脏脂肪的数量和脂滴的大小。
实施例3
为了探究饲料中添加柴胡提取物对珍珠龙胆石斑鱼肝脏脂肪代谢相关基因的影响。在基础饲料中添加使用柴胡提取物(提取比例为20:1)，设置5个梯度，添加浓度分别为0、0.02％、0.04％、0.08％、0.16％(如表1所示)，养殖8周后，取肝脏组织做荧光定量分析。
结果如图4所示，饲料中添加0.08％的柴胡提取物可以激活杂交石斑鱼脂代谢基因PPARα的表达，调节与脂肪酸β氧化有关的下游基因,脂酰CoA氧化酶、肉碱棕榈酰转移酶Ⅰ等的表达,进而加速脂肪酸的分解。饲料中添加0.04-0.08％的柴胡提取物可以显著的下调LXRα的表达，可以抑制脂肪酸生成的一些关键酶基因,如乙酰CoA羧化酶、脂肪酸合成酶的活性，因此可以减少脂肪酸生成,降低甘油三酯的含量。肝组织FATP6mRNA的表达在添加了柴胡提取物后显著的下调，减少了脂肪的沉积。
实施例4
为了探究饲料中添加柴胡提取物对珍珠龙胆石斑鱼抗氧化能力和免疫力的影响。在基础饲料中添加使用柴胡提取物(提取比例为20:1)，设置5个梯度，添加浓度分别为0、0.02％、0.04％、0.08％、0.16％(如表1所示)，养殖8周后，腹腔注射D-氨基半乳糖(500mg/kg)和脂多糖(20μg/kg)做胁迫实验，24h后取肝脏组织检测了抗氧化相关指标的活性和免疫相关基因的mRNA表达。
结果如图5、图6和表3所示，用D-氨基半乳糖和脂多糖胁迫后，模型组杂交石斑鱼的抗氧化相关酶活CAT和SOD的活力显著下降，饲料中添加0.04-0.08％的柴胡提取物可以显著的提高杂交石斑鱼的抗氧化能力，同时，进行了Q-PCR检测肝脏免疫相关基因，柴胡提取物可以明显的减弱杂交石斑鱼的炎症反应，改善肝细胞的凋亡，提高免疫力，从而降低杂交石斑鱼由于化学物质诱导的肝损伤。血清学指标表明，模型组中AST,CHE和TBA含量与对照组比显著升高，而0.04-0.08％的柴胡提取物添加组可以显著降低这些肝功能相关指标。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
Figure BDA0001754715580000081

Claims (5)

1.柴胡提取物作为石斑鱼饲料添加剂的应用，其特征在于：所述柴胡提取物添加到石斑鱼基础饲料中，添加量占饲料总质量的0.04-0.08%；
所述的柴胡提取物购自南京道斯夫生物科技有限公司，提取比例为20:1。
2.根据权利要求1所述柴胡提取物作为石斑鱼饲料添加剂的应用，其特征在于：所述的石斑鱼是杂交石斑鱼。
3.根据权利要求2所述柴胡提取物作为石斑鱼饲料添加剂的应用，其特征在于：所述的杂交石斑鱼是珍珠龙胆石斑鱼。
4.一种杂交石斑鱼配合饲料，其特征在于包括以下质量百分比的原料：
柴胡提取物： 0.04-0.08%
鱼粉： 35-52%
豆粕： 0-25%
标准面粉： 6-20%
啤酒酵母： 2%
鱼油： 3-8%
豆油： 0-5%
大豆卵磷脂： 1%
复合维生素矿物盐：2%
氯化胆碱： 0.5%
维生素C磷酸酯： 0.5%
磷酸二氢钙： 1-2%；
所述原料总和为100%；
所述的柴胡提取物购自南京道斯夫生物科技有限公司，提取比例为20:1；
上述的杂交石斑鱼配合饲料中，粗蛋白的质量分数为47.17-48.04%，粗脂肪的质量分数为14.85-15.74%。
5.权利要求4所述的杂交石斑鱼配合饲料的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）将所用原料粉碎过筛；
（2）取鱼粉、豆粕、标准面粉，并混合均匀；
（3）往步骤（2）的混合物中加入充分混匀的啤酒酵母、复合维生素矿物盐、氯化胆碱、维生素C磷酸酯、磷酸二氢钙，加入柴胡提取物，并搅拌均匀；
（4）往步骤（3）的混合物中加入鱼油、豆油和大豆卵磷脂，搅拌均匀；
（5）加入上述各原料质量总和30%的水，充分混合，制成颗粒料，晾干，得到杂交石斑鱼配合饲料。
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