CN108613973A - 一种简便快速检测尿素的微流控双水相液滴流方法及其装置 - Google Patents

Abstract

一种简便快速检测尿素的微流控双水相液滴流方法及其装置，步骤如下：以中性红指示剂和待测样品以及聚乙二醇混合溶液为内水相，以脲酶和葡聚糖混合溶液为外水相；通过本微流控装置，利用两相流体的剪切作用在入口处形成10～30纳升的双水相液滴，尿素与脲酶在该液滴内和界面处发生酶促反应，产物碳酸铵使液滴内的中性红指示剂变色，根据变色程度判断样品中是否含有尿素以及分析尿素含量的高低，1次样品检测仅需10～20秒的时间，且含酶外水相溶液可循环使用。本方法检测范围更大，操作成本较低、简单快速且对环境友好。

Description

一种简便快速检测尿素的微流控双水相液滴流方法及其装置

技术领域

本发明涉及化学品检测方法，尤其是具有简便快速特点的尿素检测方法。

背景技术

在工农医等行业生产中，如水质、土壤、食品、药品以及血液都需要检测其中尿素的含量。因此，检测尿素含量有着十分重要的意义。实验室常规尿素检测方法如凯氏定氮仪法都是检测总氮含量，并不能排除其它含氮化合物的影响而特异性的测出样品中尿素的含量；同时，市售常见的尿素测定仪器一般测量量程为0～0.2mg·mL-1，不适用于高浓度尿素的测量；并且它们都有着耗时长，仪器昂贵，化学试剂用量大等缺点，并伴随着不可避免地带来了环境污染。另一类常见的检测方法如拉曼光谱和电化学法，操作复杂，成本很高。

除上述常见的尿素检测方法和仪器外，也有一些科研工作者提出用显色法或显色试纸的方法来检测尿素含量。1986年高世忠等人[1]提出了一种二乙酰一肟与尿素反应生成有色复合物的方法(见高世忠吕介芳,吕永昌.牛乳中掺杂尿素及牛尿的快速定性分析[J].中国乳品工业,1986(3):14-16.)，通过是否显色来判断有无尿素，但二乙酰一肟并非只与尿素反应显色，与其代谢产物瓜氨酸反应也有显色，此种测量方法并不能排除瓜氨酸对尿素浓度的影响。2009年，杨水云等人[2]发明了一种检测尿素含量的试纸(见杨水云,马晓明,徐凡,等.乳品中尿素检测试纸的制备及尿素检测方法:CN101398386[P].2009.)，制备试纸的过程较为复杂且不易保存，保存和现场测试过程中较易受环境因素如pH值、湿度等的影响。2012年喻东威等人[3]提出了一种定性检测尿素的方法(见喻东威,赵源,刘志楠,等.一种乳中尿素定性检测方法:CN102539421A[P].2012.)，用溴百里香酚蓝乙醇溶液对尿素的酶溶液进行显色反应。该方法只能通过阳性对照组来比较，且操作过程复杂，测试中试剂用量大，易对环境造成污染。

由此可见，市场上仍缺乏一种快速、简便、试剂消耗量小、经济实用地判断出样品中是否含有尿素，并能得出尿素含量的分析方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种能简便快速定性定量检测尿素的微流控双水相液滴流装置。

本发明的目的是这样实现的：一种简便快速检测尿素的微流控双水相液滴流装置，由按同一轴线设置的内水相进料毛细管和内水相出料毛细管以及外水相进料毛细管构成；内水相进料毛细管的左端为平口端，作为内水相进料口，右端为锥口端作为其出料口，内水相进料毛细管从外水相进料毛细管左端插入其内腔；内水相出料毛细管的左端为锥口端，作为其进料口，右端为平口端，作为其出料口，内水相出料毛细管从外水相进料毛细管右端插入其内腔；内水相进料毛细管的锥口端内径＜内水相出料毛细管锥口端内径的；内水相注射器经硅胶管与内水相进料口连接，外水相注射器经硅胶管与外水相进料毛细管的左端进料口连接，上述内、外水相注射器分别固定在内、外水相注射泵的泵伸缩杆的夹头上，由注射泵提供推进动力。

本发明的另一目的是提供一种采用上述微流控装置简便快速进行尿素检测的方法。

本发明的另一目的是这样实现的：一种滴流装置的简便快速检测尿素的方法，在微流控双水相液滴流装置中，利用两相流体的剪切作用在锥形入口处产生10～30纳升的双水相液滴，液滴内水相为包含有待测尿素样品和中性红指示剂的聚乙二醇溶液(中性红指示剂也可分配于外水相中)，外水相为包含有脲酶的葡聚糖溶液；尿素与脲酶在双水相液滴内和界面处发生酶促反应，产物碳酸铵倾向于往液滴内扩散，并使液滴呈现弱碱性，导致液滴内的中性红指示剂变色，根据变色程度判断样品中是否含有尿素以及分析含量的高低；液滴在10～20秒的时间内流经反应管，由出口处的同轴具有锥形尖口的毛细管接收，即与含有脲酶的葡聚糖外水相溶液分离，完成检测；该含酶的外水相溶液收集后，能循环反复参与检测尿素的反应。

具体步骤如下：

(1)溶液的配制：分别配制质量分数分别为8％～12％的聚乙二醇水溶液和8％～12％的葡聚糖水溶液；在旋转培养器上充分混合后，静置6小时待两相平衡分相；上相为聚乙二醇溶液，下相为葡聚糖溶液；抽取上相，配制成含浓度为1mg·mL-1中性红指示剂的聚乙二醇溶液；抽取下相配制成含浓度为1mg·mL-1脲酶的葡聚糖溶液；上述所用聚乙二醇分子量8kDa；葡聚糖分子量500kDa；

将待测样品加入到上述制备好的含中性红指示剂的聚乙二醇溶液中作为内水相，装入内水相注射器中；用外水相注射器吸取上述制备的含脲酶的葡聚糖溶液；通过内、外水相注射泵打入微流控双水相液滴流装置，内、外水相流体在内水相进料毛细管的锥形端出料口处相遇，内水相流体被外水相流体剪切，使其形成10～30纳升的液滴，该液滴内和界面处发生酶促反应，生成产物碳酸铵，碳酸铵使得液滴内相呈现弱碱性，中性红是一种弱碱性指示剂，中性时呈红色，弱碱性时呈黄色；因此，含有中性红指示剂的液滴在锥形出口与外水相流体相遇后，酶促反应使得液滴变为黄色，通过中性红指示剂的变色程度从而检测尿素含量。

指示剂中性红的变色程度是通过软件Image-Pro Plus 6.0来测量的：中性红指示剂由红变黄，每种颜色都由红黄蓝三原色组成，使用1200万像素的摄像头拍摄标记位置液滴的显微镜照片，通过Image-Pro Plus 6.0软件对照片进行分析，得出液滴红色的强度值，来对应样品中尿素浓度的相对大小。

本发明利用毛细玻璃管、载玻片和市售注射器针头构造成一种装置，在内相入口通入聚乙二醇溶液，在外相入口通入葡聚糖溶液。它能在两相接触处的锥形入口产生聚乙二醇/葡聚糖的双水相液滴，该含酶外水相溶液可回收供循环重复使用。利用该液滴简便快速地检测样品中是否含有尿素以及其粗略分析其含量，弥补了上述背景技术的缺陷。

一种简便快速检测尿素的微流控双水相液滴流方法，包括以下步骤：以中性红和待测样品以及聚乙二醇混合溶液为内水相，以脲酶和葡聚糖混合溶液为外水相；通过首尾对称同轴环管型毛细管微流控装置，利用两相流体的剪切作用在锥形入口处形成双水相液滴，样品中的尿素与脲酶在双水相液滴界面处发生酶促反应，产物碳酸铵倾向分配于液滴内，使液滴内的中性红指示剂变色，根据变色程度判断样品中是否含有尿素以及分析含量的高低，完成1次样品检测仅需10～20秒的时间，且该含酶外水相溶液可循环多次参与检测尿素的反应。

进一步的，所述聚乙二醇、葡聚糖水溶液的配制过程如下：

分别配制质量分数为8％～12％(w/w)的聚乙二醇水溶液和8％～12％(w/w)的葡聚糖水溶液；通过旋转培养器充分混合后，静置6小时后分相；

其中上相为聚乙二醇溶液作为内水相，下相为葡聚糖溶液作为外水相；内水相中加入中性红指示剂和样品溶液，中性红浓度为1mg·mL-1；外水相中加入脲酶溶液，浓度为1mg·mL-1。

进一步的，所述外水相和内水相均通过注射泵进样；外水相进样流量为5～40μL·min-1；内水相进样流量1～10μL·min-1。

进一步的，所述内水相流量为1μL·min-1，外水相流量为10μL·min-1。尿素浓度为50mg·mL-1时，颜色强度值为0.08。

进一步的，所述内水相流量为1μL·min-1，外水相流量为10μL·min-1。尿素浓度为5mg·mL-1时，颜色强度值为0.107。

进一步的，所述内水相流量为1μL·min-1，外水相流量为10μL·min-1。尿素浓度为0.5mg·mL-1时，颜色强度值为0.127。

进一步的，所述内水相流量为1μL·min-1，外水相流量为10μL·min-1。尿素浓度为0mg·mL-1时，颜色强度值为0.2264。

本发明与现有技术比较，具有如下优点：

(1)本发明所述方法，利用脲酶和尿素的特异性反应，可以仅仅把样品中的尿素测定出来，而避免了在常用方法中其它含氮化合物对测定的影响。

(2)本发明所提供的“简便快速检测尿素的微流控双水相液滴流方法”，其测定量程为0～50mg·mL-1，弥补了市售仪器量程小的不足。

(3)本发明所述方法使用的酶溶液可回收，回收率可达60％以上，回收的酶溶液经过简单处理后即可循环使用，有效的节约成本。

(4)本发明所述方法使用的试剂用量较少，即使是对微量样品进行测定也能完成，且避免了大量有机试剂对环境造成污染。

(5)本发明所述方法检测尿素的浓度通过直接观察分析液滴的颜色实现，结果分析可视化，操作方法简便快捷、装置制作灵活，利用注射泵控制流速，操作精准。

(6)本发明所述方法快速简便，完成1次样品检测仅需10～20秒的时间，装置由载玻片、毛细玻璃管和市售注射器针头搭建，试剂为聚乙二醇、葡聚糖，脲酶和水。

附图说明

图1为本发明微流控原理示意图。

图2为本发明微流控装置结构示意图。

图3为本发明微流控装置的组装示意图。

图4为本发明微流控装置的装置实物图。

图5为本发明所述装置尿素浓度与液滴颜色强度柱状图。(在微流控装置离内水相出口锥尖距离2cm处拍摄的液滴显微镜照片)。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例对本发明做进一步说明。

图1～4示出，一种简便快速检测尿素的微流控双水相液滴流装置，由按同一轴线设置的内水相进料毛细管100和内水相出料毛细管500以及外水相进料毛细管300构成；内水相进料毛细管100的左端为平口端，作为内水相进料口110，右端为锥口端作为其出料口200，内水相进料毛细管100从外水相进料毛细管300左端插入其内腔；内水相出料毛细管500的左端为锥口端，作为其进料口400，右端为平口端，作为其出料口410，内水相出料毛细管500从外水相进料毛细管300右端插入其内腔；内水相进料毛细管100的锥口端内径＜内水相出料毛细管500锥口端内径的；内水相注射器经硅胶管与内水相进料口110连接，外水相注射器经硅胶管与外水相进料毛细管300的左端进料口连接，上述内、外水相注射器分别固定在内、外水相注射泵的泵伸缩杆的夹头上，由注射泵提供推进动力。

上述注射泵(LSP01-2A，中国保定兰格恒流泵有限公司)的原理：将医用注射器固定在泵伸缩杆的夹头上，电动机带动伸缩杆，伸缩杆收紧夹头，推动注射器推杆进样品。

注射泵产品网页：http://www.longerpump.com.cn/index.php/LaboratorialSyringePump/show/69.html

参见图2，内水相进料口110为内水相进料毛细管100的平口端，外水相进料口由外水相进料毛细管300左端与内水相进料毛细管100形成的环隙组成，位于外水相进料毛细管300左端。内水相出料毛细管500的进料口400和其出料口410分别为内水相的进、出口。内水相出料毛细管500与外水相进料毛细管300之间的环隙形成外水相的出口。

一种简便快速检测尿素的微流控双水相液滴流方法，包括以下步骤：

如图1所示，以中性红和尿素样品以及聚乙二醇混合溶液为内水相，以脲酶和葡聚糖混合溶液为外水相；通过首尾对称同轴环管型毛细管微流控装置，利用两相流体的剪切作用在锥形入口处形成10～30纳米双水相液滴；尿素与脲酶在双水相液滴内和界面处发生酶促反应，产物碳酸铵使液滴内的中性红指示剂变色，根据变色程度判断样品中是否含有尿素以及分析含量的高低；液滴由出口处的同轴毛细管锥形尖口接收，即可与含有脲酶的葡聚糖外水相溶液分离，该外水相溶液可循环多次参与检测尿素的反应。

一种简便快速检测尿素的微流控双水相液滴流方法的装置，如图2所示，由外水相进料毛细管300、内水相进料毛细管100、内水相出料毛细管500构成；外水相进料毛细管300为长7cm，外径1200μm且内径1000μm的毛细方管；内水相进料毛细管100和内水相出料毛细管500均为长3cm外径为960μm内径为550μm的毛细玻璃圆管；内水相进料毛细管100平口端为其进料口110，锥口端为其出料口200，该锥口端的内径为100μm，插入外水相进料毛细方管300，插入深度为2cm；内水相出料毛细管500从另一端插入外水相进料毛细方管300，插入深度为2cm，内水相出料毛细管500平口端为其出料口410，锥口端400为其出料口，该锥口端内径为200μm；两锥口端的距离为3cm。如图3所示，所述外水相进料毛细管(300)经胶粘剂固定在载玻片上。

整个结构用市售注射器针头固定在载玻片上,毛细玻璃圆管针尖状(即锥口端)是用显微拉针仪与显微锻针仪微加工处理获得，各处连接用胶水密封、固定。获得图4所示的微流控装置。装置各处尺寸可根据实际情况做出适当的调整。

进一步的，所述聚乙二醇、葡聚糖溶液的配制过程如下：

分别配制质量分数为8％～12％(w/w)的聚乙二醇水溶液和8％～12％(w/w)的葡聚糖水溶液；通过旋转培养器充分混合后，静置6小时后分相；

其中上相为聚乙二醇溶液作为内水相，下相为葡聚糖溶液作为外水相；内水相中加入中性红指示剂和样品溶液，中性红浓度为1mg·mL-1；外水相中加入脲酶溶液，浓度为1mg·mL-1。

进一步的，所述外水相和内水相均通过注射泵进样；外水相进样流量为5～40μL·min-1；内水相进样流量1～10μL·min-1。图5展示不同尿素浓度下双水相液滴颜色强度变化情况。

实施例1

(1)溶液的配制，分别配制50mL质量分数分别为8％～12％的聚乙二醇水溶液和8％～12％的葡聚糖水溶液；充分混合后，静置6小时后分相；上相为聚乙二醇溶液，下相为葡聚糖溶液；分别抽取上下相于两个烧杯中备用；在抽取的下相中加入脲酶，配制成脲酶浓度为1mg·mL-1的葡聚糖溶液，混合均匀，置于烧杯备用；在抽取后的聚乙二醇溶液中加入中性红和尿素，配制成中性红浓度为1mg·mL-1，尿素浓度为50mg·mL-1的聚乙二醇溶液，作为样品1，置于烧杯备用。

(2)双水相液滴的制备及显色反应，取甲、乙两只10mL注射器，甲吸取上述聚乙二醇混合溶液，乙吸取上述葡聚糖混合溶液，分别置于A、B两台注射泵内。设置A的流速为1μL·min-1，B的流速为10μL·min-1，通过如图4所示的装置即可形成液滴。

(3)本实施例通过1200万像素的摄像头拍摄标记位置液滴的显微镜照片。通过软件Image-Pro Plus 6.0对照片进行分析得出，液滴颜色强度为0.08。经查阅表1，推测样品中含有尿素且尿素浓度大于50mg·mL-1。完成1次样品检测所需时间为20秒。

实施例2

(1)溶液的配制，分别配制50mL质量分数分别为8％～12％的聚乙二醇水溶液和8％～12％的葡聚糖水溶液；充分混合后，静置6小时后分相；上相为聚乙二醇溶液，下相为葡聚糖溶液；分别抽取上下相于两个烧杯中备用；在抽取的下相中加入脲酶，配制成脲酶浓度为1mg·mL-1的葡聚糖溶液，混合均匀，置于烧杯备用；在抽取后的聚乙二醇溶液中加入中性红和尿素，配制成中性红浓度为1mg·mL-1，尿素浓度为5mg·mL-1的聚乙二醇溶液，作为样品2，置于烧杯备用。

(2)双水相液滴的制备及显色反应，取甲、乙两只10mL注射器，甲吸取上述聚乙二醇混合溶液，乙吸取上述葡聚糖混合溶液，分别置于A、B两台注射泵内。设置A的流速为1μL·min-1，B的流速为10μL·min-1，通过如图4所示的装置即可形成液滴。

(3)本实施例通过1200万像素的摄像头拍摄标记位置液滴的显微镜照片。通过软件Image-Pro Plus 6.0对照片进行分析得出，液滴颜色强度为0.098。经查阅表1，样品中含有尿素且尿素浓度范围为5～50mg·mL-1。完成1次样品检测所需时间为20秒。

实施例3

(1)溶液的配制，分别配制50mL质量分数分别为8％～12％的聚乙二醇水溶液和8％～12％的葡聚糖水溶液；充分混合后，静置6小时后分相；上相为聚乙二醇溶液，下相为葡聚糖溶液；分别抽取上下相于两个烧杯中备用；在抽取的下相中加入脲酶，配制成脲酶浓度为1mg·mL-1的葡聚糖溶液，混合均匀，置于烧杯备用；在抽取后的聚乙二醇溶液中加入中性红和尿素，配制成中性红指示剂浓度为1mg·mL-1，尿素浓度为0.5mg·mL-1的聚乙二醇溶液，作为样品3，置于烧杯备用。

(2)双水相液滴的制备及显色反应，取甲、乙两只10mL注射器，甲吸取上述聚乙二醇混合溶液，乙吸取上述葡聚糖混合溶液，分别置于A、B两台注射泵内。设置A的流速为1μL·min-1，B的流速为10μL·min-1，通过如图4所示的装置即可形成液滴。

(3)本实施例通过1200万像素的摄像头拍摄标记位置液滴的显微镜照片。通过软件Image-Pro Plus 6.0对照片进行分析得出液滴颜色强度为0.159。经查阅表1，样品中含有尿素且尿素浓度范围为0～0.5mg·mL-1。完成1次样品检测所需时间为20秒。

(4)结合表1的颜色强度还可分析，样品1浓度大于样品2浓度大于样品3浓度。

实施例4

(1)溶液的配制，分别配制50mL质量分数分别为8％～12％的聚乙二醇水溶液和8％～12％的葡聚糖水溶液；充分混合后，静置6小时后分相；上相为聚乙二醇溶液，下相为葡聚糖溶液；分别抽取上下相于两个烧杯中备用；在抽取的葡聚糖溶液中加入脲酶，配制成脲酶浓度为1mg·mL-1的葡聚糖溶液，混合均匀，置于烧杯备用；在抽取后的聚乙二醇溶液中加入中性红，配制成中性红浓度为1mg·mL-1的聚乙二醇溶液，不加入任何尿素，置于烧杯备用。

(2)双水相液滴的制备及显色反应，取甲、乙两只10mL注射器，甲吸取上述聚乙二醇混合溶液，乙吸取上述葡聚糖混合溶液，分别置于A、B两台注射泵内。设置A的流速为1μL·min-1，B的流速为10μL·min-1，通过如图4所示的装置即可形成液滴。

(3)本实施例通过1200万像素的摄像头拍摄标记位置液滴的显微镜照片。通过软件Image-Pro Plus 6.0对照片进行分析得出，液滴颜色强度为0.247。经查阅表1，推测样品中不含有尿素。完成1次样品检测所需时间为20秒。

表1为各液滴颜色强度值对应的尿素浓度范围。

表1

Claims (9)

1.一种简便快速检测尿素的微流控双水相液滴流装置，其特征是，由按同一轴线设置的内水相进料毛细管(100)和内水相出料毛细管(500)以及外水相进料毛细管(300)构成；内水相进料毛细管(100)的左端为平口端，作为内水相进料口(110)，右端为锥口端作为其出料口(200)，内水相进料毛细管(100)从外水相进料毛细管(300)左端插入其内腔；内水相出料毛细管(500)的左端为锥口端，作为其进料口(400)，右端为平口端，作为其出料口(410)，内水相出料毛细管(500)从外水相进料毛细管(300)右端插入其内腔；内水相进料毛细管(100)的锥口端内径＜内水相出料毛细管(500)锥口端内径的；内水相注射器经硅胶管与内水相进料口(110)连接，外水相注射器经硅胶管与外水相进料毛细管(300)的左端进料口连接，上述内、外水相注射器分别固定在内、外水相注射泵的泵伸缩杆的夹头上，由注射泵提供推进动力。

2.根据权利要求1所述的一种简便快速检测尿素的微流控双水相液滴流装置，其特征是，所述外水相进料毛细管(300)为长7cm，外径1200μm，内径1000μm的毛细方管；内水相进料毛细管(100)和内水相出料毛细管(500)均为长3cm，外径960μm，内径550μm的毛细玻璃圆管；内水相进料毛细管(100)的锥口端内径为100μm，内水相出料毛细管(500)的锥口端内径为200μm；内水相进料毛细管(100)和内水相出料毛细管(500)的在外水相进料毛细管(300)内腔的插入深度均为2cm。

3.根据权利要求2所述的一种简便快速检测尿素的微流控双水相液滴流装置，其特征是，所述内、外水相注射器均为10mL注射器，内水相注射泵的流速为1μL·min^-1，外水相注射泵的流速为10μL·min^-1。

4.根据权利要求1或2或3所述的一种简便快速检测尿素的微流控双水相液滴流装置，其特征是，所述外水相进料毛细管(300)经胶粘剂固定在载玻片上。

5.一种采用权利要求1～4任一权利要求所述滴流装置的简便快速检测尿素的方法，其特征是，在微流控双水相液滴流装置中，利用两相流体的剪切作用在锥形入口处产生10～30纳升的双水相液滴，液滴内水相为包含有待测尿素样品和中性红指示剂的聚乙二醇溶液，外水相为包含有脲酶的葡聚糖溶液；尿素与脲酶在双水相液滴内和界面处发生酶促反应，产物碳酸铵倾向于往液滴内扩散，并使液滴呈现弱碱性，导致液滴内的中性红指示剂变色，根据变色程度判断样品中是否含有尿素以及分析含量的高低；液滴在10～20秒的时间内流经反应管，由出口处的同轴具有锥形尖口的毛细管接收，即与含有脲酶的葡聚糖外水相溶液分离，完成检测；该含酶的外水相溶液收集后，能循环反复参与检测尿素的反应。

6.根据权利要求5所述方法，其特征在于，具体步骤如下：

(1)溶液的配制：分别配制质量分数分别为8％～12％的聚乙二醇水溶液和8％～12％的葡聚糖水溶液；在旋转培养器上充分混合后，静置6小时待两相平衡分相；上相为聚乙二醇溶液，下相为葡聚糖溶液；抽取上相，配制成含浓度为1mg·mL^-1中性红指示剂的聚乙二醇溶液；抽取下相配制成含浓度为1mg·mL^-1脲酶的葡聚糖溶液；上述所用聚乙二醇分子量8kDa；葡聚糖分子量500kDa；

将待测样品加入到上述制备好的含中性红指示剂的聚乙二醇溶液中作为内水相，装入内水相注射器中；用外水相注射器吸取上述制备的含脲酶的葡聚糖溶液；通过内、外水相注射泵打入微流控双水相液滴流装置，内、外水相流体在内水相进料毛细管(100)的锥形端出料口(200)处相遇，内水相流体被外水相流体剪切，使其形成10～30纳升的液滴，该液滴内和界面处发生酶促反应，生成产物碳酸铵，碳酸铵使得液滴内相呈现弱碱性，中性红是一种弱碱性指示剂，中性时呈红色，弱碱性时呈黄色；因此，含有中性红指示剂的液滴在锥形出口与外水相流体相遇后，酶促反应使得液滴变为黄色，通过中性红指示剂的变色程度从而检测尿素含量。

7.根据权利要求6所述方法，其特征在于，指示剂中性红的变色程度是通过软件Image-Pro Plus 6.0来测量的：中性红指示剂由红变黄，每种颜色都由红黄蓝三原色组成，使用1200万像素的摄像头拍摄标记位置液滴的显微镜照片，通过Image-Pro Plus 6.0软件对照片进行分析，得出液滴红色的强度值，来对应样品中尿素浓度的相对大小。

8.根据权利要求7所述方法，其特征在于，所述分析检测使用的脲酶能循环使用：该装置中，样品在液滴内，脲酶在液滴外，液滴在10～20秒的时间内流经反应管，通过出口处的同轴毛细管锥形尖口将脲酶和产物碳酸铵分开收集；利用上述装置中内水相收集毛细管与外水相进料毛细管之间环隙，回收含脲酶的葡聚糖溶液，循环反复使用。

9.根据权利要求5或6或7或8所述方法，其特征在于，所述内水相流量为1μL·min^-1，外水相流量为10μL·min^-1条件下，尿素浓度为50,5,0.5,0mg·mL^-1时，颜色强度值为分别为0.08，0.107，0.127，0.2264。