CN108588173A - 一种花生条纹病毒接种方法 - Google Patents

一种花生条纹病毒接种方法 Download PDF

Info

Publication number
CN108588173A
CN108588173A CN201810638357.0A CN201810638357A CN108588173A CN 108588173 A CN108588173 A CN 108588173A CN 201810638357 A CN201810638357 A CN 201810638357A CN 108588173 A CN108588173 A CN 108588173A
Authority
CN
China
Prior art keywords
peanut
inoculation
blade
viruses
viral
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201810638357.0A
Other languages
English (en)
Inventor
许曼琳
迟玉成
张霞
董炜博
吴菊香
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shandong Peanut Research Institute
Original Assignee
Shandong Peanut Research Institute
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shandong Peanut Research Institute filed Critical Shandong Peanut Research Institute
Priority to CN201810638357.0A priority Critical patent/CN108588173A/zh
Publication of CN108588173A publication Critical patent/CN108588173A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/24—Methods of sampling, or inoculating or spreading a sample; Methods of physically isolating an intact microorganisms

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)

Abstract

本发明提出一种花生条纹病毒的接种方法，属于植物病毒接种技术领域，该方法能够简单、高效的完成花生条纹病毒的接种。该技术方案省略了接种前在植株上喷洒金刚砂的步骤，而是将金刚砂同病毒叶片及磷酸盐缓冲液一起配制成匀浆，以少量的病毒叶片即可完成高效的接种。该方法提高了花生条纹病毒的接种速度和接种效率，有利于快速高效的鉴定花生对条纹病毒的抗性，加快抗病育种选育和病毒致病机理研究。

Description

一种花生条纹病毒接种方法
技术领域
本发明属于植物病毒接种技术领域，尤其涉及一种花生条纹病毒的接种方法。
背景技术
目前，花生条纹病毒在我国长江以北花生产区普遍发生，在病毒类病害中，花生条纹病毒对我国花生产业的影响最为严重，为花生生产的重要防控对象。花生条纹病毒高效接种是花生条纹病毒种质培育和抗病机制研究的重要基础，是实现花生条纹病毒高效防控的关键。
机械摩擦接种是目前常用的花生条纹病毒的接种方法，这种方法一般采用接种时先在花生叶片上喷洒金刚砂完成。但是，机械摩擦接种需要较多的感病毒材料，且金刚砂的用量不好控制。
发明内容
本发明的目的在于提供一种简单、高效的花生条纹病毒接种方法，以少量的感病毒材料即可完成高效的接种，实现花生条纹病毒高效防控，为花生条纹病毒种质培育和抗病机制研究提供重要基础。
为了达到上述目的，本发明提供了一种花生条纹病毒接种方法，包括以下步骤：
取被花生条纹病毒侵染的病毒叶片，依次加入磷酸盐缓冲液、金刚砂，研磨至匀浆；
取上述匀浆置于待接种的已长出两个羽状复叶的花生叶片上，轻轻涂抹数次，清水冲洗。
作为优选，所述磷酸盐缓冲液的pH值为7.2-7.4。
作为优选，所述被花生条纹病毒侵染的病毒叶片的保存温度为-80～-60℃。
作为优选，所述1g花生病毒叶片中加入30～50mL磷酸盐缓冲液。
作为优选，所述花生病毒叶片与金刚砂的质量比为1:1～4:1。
作为优选，所述匀浆的用量为40～60μL，所述涂抹数次为2～3次。
与现有技术相比，本发明提供了一种简单、高效的花生条纹病毒接种方法，该方法省略了接种前在植株上喷洒金刚砂的步骤，而是将金刚砂同病毒叶片及磷酸盐缓冲液一起配制成匀浆，以少量的病毒叶片即可完成高效的接种。该方法提高花生条纹病毒的接种速度和接种效率，有利于快速高效的鉴定花生对条纹病毒的抗性，加快抗病育种选育和病毒致病机理研究。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明实施例提供了一种花生条纹病毒的接种方法，包括以下步骤：
S1：取被花生条纹病毒侵染的病毒叶片，依次加入磷酸盐缓冲液、金刚砂，研磨至匀浆。
在该步骤中，被花生条纹病毒侵染的病毒叶片通过以下方式采集：
用打孔器采集被花生条纹病毒侵染的花生新鲜叶片，得到圆形、直径为0.9cm的病毒叶片。
该步骤采用磷酸盐缓冲液的原因在于磷酸盐缓冲液具有盐平衡、可调整的适宜pH缓冲作用，优选pH值为7.2-7.4；金刚砂的加入主要为了在摩擦过程中制造伤口，使病毒能够有侵染途径，另外，在配制匀浆的过程中加入金刚砂，有利于使病毒叶片研磨的更加均匀，使寄生在病毒叶片细胞中的病毒能够更加充分地释放出来。
S2：取上述匀浆置于待接种的已长出两个羽状复叶的花生叶片上，轻轻涂抹数次，清水冲洗。
在该步骤中，选用长出两个羽状复叶的花生叶片作为接种对象的原因在于该时期的花生处于幼苗期，接种效率高。
在一优选的实施例中，所述被花生条纹病毒侵染的病毒叶片的保存温度为-80～-60℃。本实施例中，具体限定了病毒叶片的保存温度，这该温度范围内，有利于病毒叶片中病毒的存活。可以理解的是，该温度还可以是-75℃、-70℃、-65℃或上述范围内的任意点值。
在一优选的实施例中，所述1g花生病毒叶片中加入30～50mL磷酸盐缓冲液。本实施例中，具体限定了花生病毒叶片与磷酸盐缓冲液的加入比例，可以理解的是，磷酸盐缓冲液的量还可以是35mL、40mL、45mL或上述范围内的任意点值。
在一优选的实施例中，所述花生病毒叶片与金刚砂的质量比为1:1～4:1。本实施例中，具体限定了花生病毒叶片与金刚砂的质量比，这样有利于控制金刚砂的用量，且在摩擦的过程中制造足够适量的伤口，提高接种效率。可以理解的是，花生病毒叶片与金刚砂的质量比还可以是2:1、3:1或上述范围内的任意点值比。
在一优选的实施例中，所述匀浆的用量为40～60μL，所述涂抹数次为2～3次。在本实施例中，具体限定了匀浆的用量及涂抹次数，这样有利于控制匀浆的用量，提高接种效率。可以理解的是，匀浆的用量还可以是45μL、50μL、55μL或上述范围内的任意点值。
为了更清楚详细地介绍本发明实施例所提供的花生条纹病毒的接种方法，下面将结合具体实施例进行描述。
实施例1
用打孔器采集被花生条纹病毒侵染的新鲜花生叶片，得到圆形、直径为0.9cm的病毒叶片，置于1.5mL离心管，-70℃保存；
播种花生，待长出两个羽状复叶后接种；
取0.02g病毒叶片，依次加入800μL pH为7.2的磷酸盐缓冲液、0.01g金刚砂，用7.5cm研磨棒将感病花生叶片研磨至匀浆。其中，病毒叶片与磷酸盐缓冲液的加入比例为1g病毒叶片加入40mL磷酸盐缓冲液，病毒叶片与金刚砂的加入比例为2:1；
取50μL匀浆置于待接种的花生叶片上，沿一个方向轻轻涂抹3次，喷清水冲洗。
实施例2
花生条纹病毒的接种方法同实施例1相同，不同之处在于，磷酸盐缓冲溶液的pH值为7.3，病毒叶片与金刚砂的加入比例为1:1。
实施例3
花生条纹病毒的接种方法同实施例1相同，不同之处在于，磷酸盐缓冲溶液的pH值为7.4，病毒叶片与金刚砂的加入比例为3:1。
实施例4
花生条纹病毒的接种方法同实施例1相同，不同之处在于，病毒叶片的保存温度为-80℃，匀浆的用量为40μL。
实施例5
花生条纹病毒的接种方法同实施例1相同，不同之处在于，病毒叶片的保存温度为-60℃，涂抹次数为2次。
实施例6
花生条纹病毒的接种方法同实施例1相同，不同之处在于，病毒叶片与金刚砂的加入比例为4:1，匀浆用量为60μL。
实施例7
花生条纹病毒的接种方法同实施例1相同，不同之处在于，病毒叶片与磷酸盐缓冲液的加入比例为1g病毒叶片加入30mL磷酸盐缓冲液，涂抹次数为3次。
实施例8
花生条纹病毒的接种方法同实施例1相同，不同之处在于，病毒叶片与磷酸盐缓冲液的加入比例为1g病毒叶片加入50mL磷酸盐缓冲液。
对比例1
用打孔器采集被花生条纹病毒侵染的新鲜花生叶片，得到圆形、直径为0.9cm的病毒叶片，置于1.5mL离心管，-70℃保存；
播种花生，待长出两个羽状复叶后接种；
取0.02g病毒叶片，加入800μL pH为7.2的磷酸盐缓冲液，用7.5cm研磨棒将感病花生叶片研磨至匀浆。其中，病毒叶片与磷酸盐缓冲液的加入比例为1g病毒叶片加入40mL磷酸盐缓冲液；
取金刚砂，将其喷洒在待接种的花生叶片上，取100μL匀浆置于待接种的花生叶片上，沿一个方向轻轻涂抹3次，喷清水冲洗。
性能测试
按照本发明实施例1-8以及对比例1的接种方法分别接种10株花生，相关接种效果数据见表1。
由表1数据可知，实施例1-8采用本发明的花生条纹病毒接种方法接种的花生发病率比对比例1采用传统接种方法接种的花生发病率高，且本发明省略了接种前在植株上喷洒金刚砂的步骤，而是将金刚砂同病毒叶片及磷酸盐缓冲液一起配制成匀浆，以少量的病毒叶片即可完成高效的接种，从而可快速高效的鉴定花生对条纹病毒的抗性。

Claims (6)

1.一种花生条纹病毒的接种方法，其特征在于，包括以下步骤：
取被花生条纹病毒侵染的病毒叶片，依次加入磷酸盐缓冲液、金刚砂，研磨至匀浆；
取上述匀浆置于待接种的已长出两个羽状复叶的花生叶片上，轻轻涂抹数次，清水冲洗。
2.根据权利要求1所述的接种方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液的pH值为7.2-7.4。
3.根据权利要求1所述的接种方法，其特征在于，所述被花生条纹病毒侵染的病毒叶片的保存温度为-80～-60℃。
4.根据权利要求1所述的接种方法，其特征在于，所述1g花生病毒叶片中加入30～50mL磷酸盐缓冲液。
5.根据权利要求1所述的接种方法，其特征在于，所述花生病毒叶片与金刚砂的质量比为1:1～4:1。
6.根据权利要求1所述的接种方法，其特征在于，所述匀浆的用量为40～60μL，所述涂抹数次为2～3次。
CN201810638357.0A 2018-06-20 2018-06-20 一种花生条纹病毒接种方法 Pending CN108588173A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810638357.0A CN108588173A (zh) 2018-06-20 2018-06-20 一种花生条纹病毒接种方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810638357.0A CN108588173A (zh) 2018-06-20 2018-06-20 一种花生条纹病毒接种方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN108588173A true CN108588173A (zh) 2018-09-28

Family

ID=63628336

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810638357.0A Pending CN108588173A (zh) 2018-06-20 2018-06-20 一种花生条纹病毒接种方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108588173A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111066516A (zh) * 2019-12-19 2020-04-28 扬州大学 一种大麦黄花叶病病毒的幼苗叶片快速接种方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103756975A (zh) * 2013-12-05 2014-04-30 南京农业大学 一种感染烟草的大豆花叶病毒的获得方法及其应用
CN105724078A (zh) * 2016-03-15 2016-07-06 云南农业大学 一种番茄斑萎病毒接种的方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103756975A (zh) * 2013-12-05 2014-04-30 南京农业大学 一种感染烟草的大豆花叶病毒的获得方法及其应用
CN105724078A (zh) * 2016-03-15 2016-07-06 云南农业大学 一种番茄斑萎病毒接种的方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
董炜博 等: "花生条纹病毒侵染对花生叶片内过氧化物酶活性及其同工酶的影响", 《花生科技》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111066516A (zh) * 2019-12-19 2020-04-28 扬州大学 一种大麦黄花叶病病毒的幼苗叶片快速接种方法
CN111066516B (zh) * 2019-12-19 2022-04-22 扬州大学 一种大麦黄花叶病病毒的幼苗叶片快速接种方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106613359B (zh) 一种蛹虫草液体培养基瓶栽出菇培养方法
CN105359973B (zh) 番红1号西红花的脱毒试管球茎的培养法
CN104719162B (zh) 一种筛选蒲公英耐盐突变体的方法
CN101445808A (zh) 以花生种子休眠芽胚轴为外植体的农杆菌介导的遗传转化方法
CN105191793A (zh) 紫马铃薯组培苗的高效繁育方法
CN1799342A (zh) 一种半夏脱毒组培快繁的方法
Yin et al. Influence of medium salt strength and nitrogen source on biomass and metabolite accumulation in adventitious root cultures of Pseudostellaria heterophylla
CN103477886A (zh) 不同6-ba浓度对空气凤梨分蘖芽发育的影响的试验方法
CN108588173A (zh) 一种花生条纹病毒接种方法
CN1918959A (zh) 一种烟草普通花叶病抗性的苗期鉴定方法
CN104429956A (zh) 利用复配led光源进行杉木组培苗瓶内生根的方法
CN102893869B (zh) 草莓的根尖脱毒与快繁技术
CN107041307A (zh) 铁线莲亨利的组织培养方法
CN107333656A (zh) 一种火焰南天竹快速繁殖培养基系列及组培方法
CN104372034A (zh) 一种虎杖毛状根生产白藜芦醇及扩大培养的方法
CN103548695A (zh) 一种岩黄连组织培养快速繁殖方法
CN104126508B (zh) 一种兰花无菌苗快速菌根化的方法
CN102972297B (zh) 棉花再生植株的栽培方法
CN109105256A (zh) 甘薯茎尖脱毒方法
CN104620983A (zh) 一种稗草组织培养成苗的方法
CN1597933A (zh) 一种建立黑麦草转基因受体体系的方法及其应用
CN104324365B (zh) 重组人干扰素-α-2b-BCG的干粉剂制备方法
CN106613973A (zh) 利用组培苗叶片再生不定芽快速繁育羊踯躅的方法
CN105284617A (zh) 一种橡胶草根段一步诱导成苗高效离体繁殖方法
CN101979603A (zh) 针刺幼苗茎节法高效诱导紫草毛状根的产生及应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20180928

RJ01 Rejection of invention patent application after publication