CN108588001A - 一种经表观遗传修饰调控后沉默基因显著激活的海洋真菌 - Google Patents

一种经表观遗传修饰调控后沉默基因显著激活的海洋真菌 Download PDF

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    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/38—Chemical stimulation of growth or activity by addition of chemical compounds which are not essential growth factors; Stimulation of growth by removal of a chemical compound

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Abstract

一种经表观遗传修饰调控后沉默基因显著激活的海洋真菌，所述的表观遗传修饰调控的方法包括如下步骤：（a）扩大培养，将海洋真菌接种在培养基中扩大培养；（b）表观遗传修饰调控，在真菌液体培养基中添加溶有TSA的甲醇溶液，并将扩大培养后的海洋真菌接种到配置好的真菌液体培养基中进行发酵；得到沉默基因显著激活的海洋真菌；所述扩大培养基的成分及其重量份为：10—20份甘露醇，2—6份酵母膏，0.2—1.0份硫酸镁，10—15份味精，10—20份葡萄糖，0.2—1.0份磷酸二氢钾，15—25份麦芽糖，1.0—1.5份玉米浆，30—40份海水素；所述海洋真菌为海洋真菌ZS—HT—13，将其接种到真菌液体培养基中的接种量为1—5%；将海洋真菌ZS‑HT‑13经TSA表观遗传修饰调控后沉默基因显著激活，代谢产物显著丰富活性显著提升，Nrf2抑制活性显著提高。

Description

一种经表观遗传修饰调控后沉默基因显著激活的海洋真菌
技术领域
本发明涉及的是一种经表观遗传修饰调控后沉默基因显著激活的海洋真菌。
背景技术
微生物上万个合成次生代谢产物的编码基因，只有一小部分在实验室培养条件下能够表达和被检测到，而大多数编码基因处于沉默状态。因此，寻找新方法使真核微生物代谢产物多样性和新颖性充分表达出来，是天然产物化学中的一个热门课题。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术存在的不足，而提供一种可有效激活真核微生物沉默基因表达并获得结构新颖活性化合物的经表观遗传修饰调控后沉默基因显著激活的海洋真菌。
本发明的目的是通过如下技术方案来完成的，一种经表观遗传修饰调控后沉默基因显著激活的海洋真菌，所述的表观遗传修饰调控的方法包括如下步骤：
（a）扩大培养，将海洋真菌接种在培养基中扩大培养；
（b）表观遗传修饰调控，在真菌液体培养基中添加溶有TSA的甲醇溶液，并将扩大培养后的海洋真菌接种到配置好的真菌液体培养基中进行发酵；得到沉默基因显著激活的海洋真菌。
作为优选：所述扩大培养基的成分及其重量份为：10—20份甘露醇，2—6份酵母膏，0.2—1.0份硫酸镁，10—15份味精，10—20份葡萄糖，0.2—1.0份磷酸二氢钾，15—25份麦芽糖，1.0—1.5份玉米浆，30—40份海水素；
所述海洋真菌为海洋真菌ZS—HT—13，将其接种到真菌液体培养基中的接种量为1—5%。
作为优选：真菌液体培养基的成份及其重量份为：10—20份甘露醇，2—6份酵母膏，0.2—1.0份硫酸镁，10—15份味精，10—20份葡萄糖，0.2—1.0份磷酸二氢钾，15—25份麦芽糖，1.0—1.5份玉米浆，30—40份海水素，0.00001—0.0001份四甲基乙二胺和0.005—0.01份芹菜素；
将海洋真菌接种到真菌液体培养基中进行培养和发酵温度均为30—40℃，pH均为6.5—7.5，培养和发酵时间均为20—40天。
作为优选：所述的TSA的甲醇溶液中的TSA：甲醇的质量体积比为1mg：1—1.5ml；甲醇溶液：真菌液体培养基的体积比为1：500—700；甲醇溶液加入真菌液体培养基之前用微孔滤膜过滤，并在2—10℃条件下保存备用。
一株海洋真菌经表观遗传修饰调控后，代谢产物。
本发明是将海洋真菌ZS-HT-13经TSA表观遗传修饰调控后沉默基因显著激活，代谢产物显著丰富活性显著提升，Nrf2抑制活性显著提高。
具体实施方式
下面将结合具体实施例对本发明作详细的介绍：本发明所述的一种经表观遗传修饰调控后沉默基因显著激活的海洋真菌，所述的表观遗传修饰调控的方法包括如下步骤：
（a）扩大培养，将海洋真菌接种在培养基中扩大培养；
（b）表观遗传修饰调控，在真菌液体培养基中添加溶有TSA的甲醇溶液，并将扩大培养后的海洋真菌接种到配置好的真菌液体培养基中进行发酵；得到沉默基因显著激活的海洋真菌。
作为优选的实施例：本发明所述扩大培养基的成分及其重量份为：10—20份甘露醇，2—6份酵母膏，0.2—1.0份硫酸镁，10—15份味精，10—20份葡萄糖，0.2—1.0份磷酸二氢钾，15—25份麦芽糖，1.0—1.5份玉米浆，30—40份海水素；
所述海洋真菌为海洋真菌ZS—HT—13，将其接种到真菌液体培养基中的接种量为1—5%。
作为进一步的优选实施例：本发明所述真菌液体培养基的成份及其重量份为：10—20份甘露醇，2—6份酵母膏，0.2—1.0份硫酸镁，10—15份味精，10—20份葡萄糖，0.2—1.0份磷酸二氢钾，15—25份麦芽糖，1.0—1.5份玉米浆，30—40份海水素，0.00001—0.0001份四甲基乙二胺和0.005—0.01份芹菜素；
将海洋真菌接种到真菌液体培养基中进行培养和发酵温度均为30—40℃，pH均为6.5—7.5，培养和发酵时间均为20—40天。
本发明所述的TSA的甲醇溶液中的TSA：甲醇的质量体积比为1mg：1—1.5ml；甲醇溶液：真菌液体培养基的体积比为1：500—700；甲醇溶液加入真菌液体培养基之前用微孔滤膜过滤，并在2—10℃条件下保存备用。
本发明的其它实施例可以在上述公开的实施例基础上，通过数值和特征的简单替换，可以获得无数个实施例，且本领域技术人员在了解本发明内容的基础上，可以方便地实施本发明，并不需要做出任何创造性劳动。

Claims (4)

1.一种经表观遗传修饰调控后沉默基因显著激活的海洋真菌，其特征在于：所述的表观遗传修饰调控的方法包括如下步骤：
（a）扩大培养，将海洋真菌接种在培养基中扩大培养；
（b）表观遗传修饰调控，在真菌液体培养基中添加溶有TSA的甲醇溶液，并将扩大培养后的海洋真菌接种到配置好的真菌液体培养基中进行发酵；得到沉默基因显著激活的海洋真菌。
2.根据权利要求1所述的经表观遗传修饰调控后沉默基因显著激活的海洋真菌，其特征在于：所述扩大培养基的成分及其重量份为：10—20份甘露醇，2—6份酵母膏，0.2—1.0份硫酸镁，10—15份味精，10—20份葡萄糖，0.2—1.0份磷酸二氢钾，15—25份麦芽糖，1.0—1.5份玉米浆，30—40份海水素；
所述海洋真菌为海洋真菌ZS—HT—13，将其接种到真菌液体培养基中的接种量为1—5%。
3.根据权利要求1或2所述的经表观遗传修饰调控后沉默基因显著激活的海洋真菌，其特征在于：真菌液体培养基的成份及其重量份为：10—20份甘露醇，2—6份酵母膏，0.2—1.0份硫酸镁，10—15份味精，10—20份葡萄糖，0.2—1.0份磷酸二氢钾，15—25份麦芽糖，1.0—1.5份玉米浆，30—40份海水素，0.00001—0.0001份四甲基乙二胺和0.005—0.01份芹菜素；
将海洋真菌接种到真菌液体培养基中进行培养和发酵温度均为30—40℃，pH均为6.5—7.5，培养和发酵时间均为20—40天。
4.根据权利要求1所述的经表观遗传修饰调控后沉默基因显著激活的海洋真菌，其特征在于：所述的TSA的甲醇溶液中的TSA：甲醇的质量体积比为1mg：1—1.5ml；甲醇溶液：真菌液体培养基的体积比为1：500—700；甲醇溶液加入真菌液体培养基之前用微孔滤膜过滤，并在2—10℃条件下保存备用。
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