CN108586552B - 海南天料木茎中酚苷类新化合物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种海南天料木茎中酚苷类新化合物的制备方法及其应用，该酚苷类新化合物的制备如下：将海南天料木茎粉碎后过筛，用醇溶液冷浸提取，减压浓缩后得浸膏，浸膏中加入蒸馏水悬浮，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取得各部位浸膏；乙酸乙酯浸膏经柱层析、高效液相即得到酚苷新化合物。本发明从海南天料木茎中提取的酚苷类新化合物具有较好的抗炎活性。

Description

海南天料木茎中酚苷类新化合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及一种天然的植物提取物，具体涉及一种海南天料木茎中酚苷新化合物及其制备方法和应用。
背景技术
海南天料木（Homalium stenophyllum）是大风子科天料木属（Homalium）植物。近年来药理筛选表明其具有很好的生物活性。例如许琼情等（广南天料木茎的抗氧化活性【J】. 精细化工杂志，2012 , 29 (1):35-37）以抗坏血酸（Vc）、二叔丁基羟基甲苯（BHT）和芦丁（Rutin）为阳性对照，利用酶标仪，采用二苯代苦味肼基自由基（DPPH）法、铁离子还原总抗氧化力（FRAP）法两种微量体外抗氧化活性分析方法对广南天料木茎加速溶剂萃取物及常规溶剂提取物进行评价。研究表明，乙酸乙酯加速溶剂萃取物（ASE-EtOAc，EC50 =20.8 ms/L）清除DPPH自由基的能力最强，但弱于阳性对照。二氯甲烷加速溶剂萃取物（ASE-DCM）还原Fe3+能力最强 [FRAP值 = (7933±457)molTE/g]，强于阳性对照BHT，弱于阳性对照Vc和Rutin。常规水提取物 (W) 清除DPPH自由基的能力和还原Fe3+能力最弱。综合比较发现，常规正丁醇提取物（NBA）抗氧化能力较强、制备简单，具有更为广阔的研究与应用前景。
对海南天料木进一步的化学成分分离、结构鉴定和物质用途的工作还需继续进行。
发明内容
本发明目的在于解决上述问题，提供一种海南天料木茎中酚苷类新化合物及其制备方法和应用。
实现本发明目的的技术方案是：一种酚苷新化合物，其结构如式（Ⅰ）所示：
Figure 100002_DEST_PATH_IMAGE001
（Ⅰ）。
上述酚苷的制备方法包括以下步骤：
①将海南天料木的茎粉碎后用乙醇浸泡、回流提取，将收集到的回流液合并、减压蒸馏，得到乙醇总浸膏，然后将上述乙醇总浸膏均匀分散于蒸馏水中，依次石油醚、乙酸乙酯进行萃取，得到石油醚和乙酸乙酯部位浸膏。
②将步骤①得到的乙酸乙酯部位浸膏经过硅胶柱层析，采用氯仿-甲醇溶剂体系进行梯度洗脱，收集、浓缩、合并相同流，即Fr. 1-7。
③将步骤②硅胶柱分离得到的第七大段组份依次进行硅胶柱色谱分离和Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱层析分离后，最后经高效液相色谱分离得到目标产物酚苷。
上述步骤③中硅胶柱色谱分离使用的溶剂体系为氯仿∶甲醇=10∶1，Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱层析分离使用的溶剂体系为氯仿∶甲醇=1∶1，高效液相色谱分离使用的流动相体系为70% 乙腈和30% 水。
上述酚苷新化合物在抗炎活性的应用，具体为对一氧化氮（NO）生成的抑制活性。
本发明具有积极的效果：本发明从海南天料木茎中提取获得一种酚苷类新化合物，该化合物对一氧化氮（NO）生成抑制具有较好的抑制活性。
附图说明
图1为本发明的酚苷类新化合物的1H-NMR谱（核磁共振氢谱）图。
图2为本发明的酚苷类新化合物的13C-NMR谱（核磁共振碳谱）图。
图3为本发明的酚苷类新化合物的HSQC谱图。
图4为本发明的酚苷类新化合物的HMBC谱图。
图5为本发明的酚苷类新化合物的1H-1H COSY谱（氢氢相关谱）图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明所述的制备方法进一步说明，但与本发明保护范围并不限于此。
（实施例）
本实施例的酚苷类新化合物的结构式如式（Ⅰ）所示：
Figure 973034DEST_PATH_IMAGE001
（Ⅰ）。
该酚苷类新化合物的制备方法包括以下步骤：
①海南天料木粉末20Kg用95％乙醇常温下浸泡3次，每次5天，过滤，滤液在60℃减压浓缩至棕色干浸膏1000g。将浸膏混悬于3L蒸馏水中，依次用3L石油醚(60–90℃)、乙酸乙酯进行萃取3-5次，回收溶剂，分别得石油醚部位约144g，乙酸乙酯部位约532g。。
本实施例所用的海南天料木的茎采自海南乐东县尖峰岭国家森林保护区，标本存放于海南师范大学热带药用植物化学教育部重点实验室。
②将步骤①得到的532 g乙酸乙酯部位的氯仿层浸膏经过硅胶柱层析，采用氯仿-甲醇溶剂体系，按照100∶0-0∶100（V/V）的梯度进行洗脱，每1000 mL收集流分，浓缩流分，通过TLC（薄层色谱）检测，合并相同流分。
③步骤②硅胶柱分离得到的第七大段组份依次进行硅胶柱色谱分离（溶剂体系氯仿∶甲醇=10∶1，V/V）和Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱层析（溶剂体系为氯仿∶甲醇=1∶1，V/V）分离后，最后经高效液相使用流动相70% 乙腈和30% 水分离得到目标产物酚苷20.1 mg（展开剂氯仿∶甲醇＝15∶1，V/V）。
（测试例）
对实施例得到的酚苷类新化合物进行产品分析：
（1）该酚苷类新化合物的1H-NMR谱见图1（溶剂DMSO-d 6，TMS内标，400 MHz）。
（2）该酚苷类新化合物的13C-NMR谱见图2（溶剂DMSO-d 6，TMS内标，100 MHz）。
具体数据见表1。
表1 化合物1的1H和13C-NMR (400/100 MHz, DMSO-d 6)数据 (ppm)
Figure DEST_PATH_IMAGE002
（3）该酚苷类新化合物的HSQC谱见图3（溶剂acetone-d 6）。
（4）该酚苷类新化合物的HMBC谱见图4（溶剂acetone-d 6）。
（5）该酚苷类新化合物的1H-1H COSY谱（氢氢相关谱）见图5（溶剂acetone-d 6）。
酚苷类新化合物：白色无定型粉末，易溶于甲醇、DMSO；紫外灯254nm下呈黑色暗斑。由HRESI-MS [M+Na]+ 569.1636，计算值569.1635]推出该化合物分子式为C27H30O12，不饱和度为13。IR (KBr)光谱给出羟基和羰基的伸缩振动特征吸收峰3356和2889 cm–1。通过与已知化合物homaloside D的1H和13C NMR数据相比较,发现化合物1与已知化合物homaloside D（Ekabo et al., 1993a, J. Nat. Prod. 56, 699–707）相似，不同之处在与化合物homaloside D在C-6′′缺少一个羰基基团，取而代之的是一个羟基基团,在13C NMR谱图上存在一个化学位移为δ C 73.3 ppm。在HMBC谱中,分别存在H-6′′′与C-7′信号相关，H-1′′′与C-2信号相关，H-7与C-7′′信号相关，可以确定苯酰基连接在C-6′′′位上，葡萄糖连接在C-2位上，1′′,6′′二羟基环己-2-烯酰基连接在C-7位上。因此确定了该化合物的结构：2-[(6′′′-O-benzoyl)-β-D-glucopyranosloxy)]-7-(1′′,6′′-dihydroxycyclohex-2-enoyl)-5-hydroxybenzyl alcohol。
（试验例、酚苷新化合物对一氧化氮（NO）生成抑制活性评价）
试验方法：一氧化氮（nitric oxide, NO）具有广泛而重要的生物学调控功能，在炎症、肿瘤及心血管系统等均有重要作用。当免疫细胞遭受微生物内毒素、炎症介质等刺激时，会生成大量的诱导型一氧化氮合成酶（induced NO synthase，iNOS），产生NO进行免疫应答，因此抑制NO生成是化合物抗炎活性的直接指标。将小鼠单核巨噬细胞RAW264.7用LPS脂多糖诱导一氧化氮合成酶的生成，同时加入待测化合物处理，吸取培养基通过Griess法在570nm波长测吸光值来检测亚硝酸盐(NO2)
将RAW264.7细胞接种至96孔板，用1 μg/ml LPS进行诱导刺激，同时加入待测化合物（终浓度25μM开始）处理，设置不含药物组和L-NMMA阳性药物组做对照。细胞过夜培养后取培养基检测NO生成，在570 nm处测定吸光值。在剩余培养基中加入MTS进行细胞存活率检测，排除化合物对细胞的毒性影响。
NO生成抑制率（%）=（非药物处理组OD570 nm- 样品组OD570 nm）/非药物处理组OD570 nm× 100%
IC50（50％ concentration of inhibition）按Reed＆Muench法计算。
表1 样品的NO生成抑制率
本次实验对化合物1个样品的一氧化氮（NO）生成抑制活性进行评价，结果显示在25μM浓度下，化合物1有超过50%的抑制活性。

Claims (3)

1.一种酚苷新化合物，其结构如式（Ⅰ）所示：
Figure DEST_PATH_IMAGE001
（Ⅰ）。
2.权利要求1所述的酚苷新化合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
①将海南天料木的茎粉碎后用乙醇浸泡、回流提取，将收集到的回流液合并、减压蒸馏，得到乙醇总浸膏，然后将上述乙醇总浸膏均匀分散于蒸馏水中，依次石油醚、乙酸乙酯进行萃取，得到石油醚和乙酸乙酯部位浸膏；
②将步骤①得到的乙酸乙酯部位浸膏经过硅胶柱层析，采用氯仿-甲醇溶剂体系进行梯度洗脱，收集、浓缩、合并相同流份，得到组份Fr. 1-7；
③将步骤②硅胶柱分离得到的第七大段组份依次进行硅胶柱色谱分离和SephadexLH-20葡聚糖凝胶柱层析分离后，最后经高效液相色谱分离得到目标产物酚苷新化合物（Ⅰ）；
步骤③中硅胶柱色谱分离使用的溶剂体系为氯仿∶甲醇=10∶1，Sephadex LH-20葡聚糖凝胶柱层析分离使用的溶剂体系为氯仿∶甲醇=1∶1，高效液相色谱分离使用的流动相体系为70% 乙腈和30% 水。
3.权利要求1所述的酚苷新化合物在制备抗炎活性药物上的应用，具体为对一氧化氮（NO）生成的抑制活性。
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