CN108559779B - 长链非编码rna作为胃癌的诊治标志物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了LINC01342在诊治胃癌中的新用途。本发明通过实验证明与癌旁组织相比，胃癌组织中LINC01342表达上调，因此可以将LINC01342作为诊断胃癌的分子标志物。根据本发明的上述研究成果，可以制备诊断胃癌的产品。此外，本发明的体外细胞增殖实验证明，抑制LINC01342表达可以抑制胃癌细胞的增殖，据此可以开发治疗胃癌的药物。

Description

长链非编码RNA作为胃癌的诊治标志物

技术领域

本发明属于生物医学领域，涉及LINC01342在制备胃癌诊断产品、治疗药物中的用途。

背景技术

胃癌是全世界，光其是东亚地区最常见的恶性肿瘤之一，也是死亡率最高的恶性肿瘤之一(Long N,Moore MA,Chen W,Gao CM,Lai MS,Mizoue T,Oyunchimeg D,Park S,Shin HR,Tajima K,Yoo KY and Sobue T.Cancer epidemiology and control in north-East Asia-past,present and future.Asian Pacific journal of cancer prevention:APJCP 2010,11Suppl2:107-148；Shin HR,Carlos MC and Varghese C.Cancer controlin the Asia Pacific region:current status and concerns.Japanese journal ofclinical oncology.2012,42(10):867-881)。大多数胃癌患者确诊时己错失最佳诊断和治疗时机，丧失治愈机会，导致疾病进展、肿瘤转移，甚至步入终末期。在早期诊断、综合治疗及病情监测中缺乏有效的分子标记物，是限制胃癌预后改善的重要障碍之一。对胃癌发生发展过程中分子机制的进一步研究，努力寻求重要调节分子，可为胃癌诊断、预后判断甚至靶向治疗提供新的方向。

人类全基因组测序结果显示，只有1.5％-2％的基因编码蛋白质，称为蛋白质编码基因，剩下的巨大的非蛋白编码区包含大量转录调控元件和非编码RNA(noncoding RNA，ncRNA)基因(Alexander RP,Fang GS Rozowsky J,Snyder M and GersteinMB.Annotating non-coding regions of the genome.Nature reviews Genetics.2010,II(8):559-571；An integrated encyclopedia of DNA elements inthe humangenome.Nature.2012,489(7414):57-74；Hattori M.Finishing the euchromaticsequence of the human genome.Tanpakushitsu kakusan koso Protein,nucleic acid,enzyme.2005,50(2):162-168)。ncRNA通常指不能翻译为蛋白的RNA分子，目前关于ncRNA的分类，有两种比较常用的方法，一种是根据ncRNA表达特点及相关功能，分为组成型ncRNA(constitutive ncRNA)和调节型ncRNA(regulatoryncRNA)；另一种是依据ncRNA分子大小，即所含碱基数量多少，分为长链非编码RNA(LncRNA)和小分子非编码RNA(sncRNA，如microRNA、siRNA、piRNA等)。近年来，许多研究表明，LncRNA与人类疾病密切相关，尤其是肺癌、乳腺癌、胃癌等常见恶性肿瘤(Perez DS,Hoage TR,Pritchett JR,ucharme-Smith AL,Hailing ML,Ganapathiraju SC,Streng PS and Smith DI.Long,abundantly expressednon-coding transcripts are altered in cancer.Human molecular genetics.2008,17(5):642-655；Eades G,Zhang YS,Li QL,Xia JX,Yao Y and Zhou Q.Long non-codingRNAs in stem cells and cancer.World journal of clinical oncology.2014,5(2):134-141)。更有文章表明，LncRNA在胃癌组织中表达异常，在肿瘤生成及抑制通路中发挥作用。这提示，肿瘤的发生发展与LncRNA的异常表达有极为密切的联系。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于诊治胃癌的长链非编码RNA标志物。本发明利用实验证明LINC01342在胃癌组织中的表达水平明显高于在癌旁组织中的水平，因此可以将LINC01342作为诊治胃癌的分子标志物。

为了实验上述目的，本发明采用了如下技术方案：

本发明提供了检测长链非编码RNA表达的试剂在制备胃癌诊断产品中的应用。

本发明的长链非编码RNA在NCBI中的命名为LINC01342，其基因ID：254099，LINC01342的转录本序列是Genbank登录号NR_038869.1(具有1640bp的长度，相应的DNA序列如SEQ ID NO.1所示)。

进一步，所述试剂包括利用SYBR Green、TaqMan探针、分子信标、双杂交探针、或复合探针检测LINC01342表达量时使用的PCR扩增引物。

在本发明的具体实施方案中，所述引物序列如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示。

本发明提供了一种用于胃癌诊断的产品，所述产品包括检测LINC01342表达水平的试剂。

进一步，所述试剂包括SYBR Green、TaqMan探针、分子信标、双杂交探针、或复合探针检测LINC01342表达量时使用的PCR扩增引物。

在本发明的具体实施方案中，所述引物序列如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示。

进一步，前面所述的产品包括但不限于芯片、试剂盒、试纸、或高通量测序平台；高通量测序平台是一种特殊的诊断胃癌的工具，随着高通量测序技术的发展，对一个人的RNA表达谱的构建将成为十分便捷的工作。通过对比疾病患者和正常人群的RNA表达谱，容易分析出哪个RNA的异常与疾病相关。因此，在高通量测序中获知非LINC01342的异常与胃癌相关也属于LINC01342的用途，同样在本发明的保护范围之内。

所述试剂盒包括检测LINC01342表达量的试剂，所述试剂包括与LINC01342或其DNA序列结合的核酸，所述核酸包括SYBR Green、TaqMan探针、分子信标、双杂交探针、或复合探针检测LINC01342表达量时使用的PCR扩增引物。

所述芯片包括检测LINC01342表达量的试剂，所述试剂包括与LINC01342或其DNA序列结合的核酸，所述核酸包括能够检测LINC01342表达量的探针。

所述试纸包括检测LINC01342表达量的试剂，所述试剂包括与LINC01342或其DNA序列结合的核酸，所述核酸包括能够检测LINC01342表达量的探针。

本发明提供了一种用于治疗胃癌的药物组合物，所述药物组合物包括LINC01342的抑制剂。

进一步，所述抑制剂不受限制，只要是可以抑制LINC01342表达水平或抑制LINC01342功能活性即可。

所述抑制剂包括LINC01342的siRNA或shRNA。在本发明的具体实施方案中，所述LINC01342的siRNA序列如SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.7所示。

本发明的药物组合物可以作为医药单独施用或与其它药物一起施用。可以与本发明的药物组合物一起施用的其它药物不受限制，只要它不损害本发明的治疗性或预防性药物组合物的效果即可。

本发明的药物组合物可根据需要制备成各种剂型。包括但不限于，经皮、粘膜、鼻、口颊、舌下或经口使用的片剂、溶液剂、颗粒剂、贴剂、膏剂、胶囊剂、气雾剂或栓剂。

本发明的药物组合物的施用途径不受限制，只要它能发挥期望的治疗效果或预防效果即可，包括但不限于静脉内，腹膜内，眼内，动脉内，肺内，口服，小泡内，肌肉内，气管内，皮下的，通过皮肤，通过胸膜，局部的，吸入，通过粘膜，皮肤，肠胃，关节内，心室内，直肠，阴道，颅骨内，尿道内，肝内，瘤内。在某些情况下，可以系统地给药。在某些情况下是局部地给药。

本发明的药物组合物的剂量不受限制，只要获得期望的治疗效果或者预防效果即可，可以依据症状、性别、年龄等来恰当的确定。本发明的治疗药物组合物或预防药物组合物的剂量可以使用例如对疾病的治疗效果或者预防效果作为指标来确定。

本发明还提供了前面所述的长链非编码RNA在制备治疗胃癌的药物中的应用。

本发明还提供了前面所述的长链非编码RNA的抑制剂在制备治疗胃癌的药物中的应用。

本发明还提供了一种诊断胃癌的方法，所述方法包括如下步骤：

(1)获取受试者的样品；

(2)检测受试者样品中LINC01342的表达水平；

(3)将测得的LINC01342的表达水平与受试者的患病与否关联起来。

(4)与对照相比，LINC01342的表达水平升高，则该受试者被判断患有胃癌、或者该受试者患有胃癌的风险高、或者胃癌患者被判断为预后不良。

本发明还提供了一种胃癌的治疗方法，所述方法包括降低LINC01342表达量或者抑制LINC01342的功能活性。

本发明还提供了一种胃癌药物的筛选方法，可以通过在对胃癌细胞添加测试药物后或在对胃癌模型动物施用测试药物后的某个时期测量LINC01342的表达水平来测定肿瘤药物改善肿瘤预后的效果。更具体地说，当LINC01342的表达水平在添加或施用测试药物后降低时或者恢复正常水平时，可选择该药物作为改善肿瘤预后的治疗药物。

在本发明的上下文中，“诊断胃癌”包括判断受试者是否已经患有胃癌、判断受试者是否存在患有胃癌的风险、判断胃癌患者对药物治疗的反应性、或者判断胃癌患者的预后情况。

本文所用的“治疗”涵盖患有相关疾病或病症的哺乳动物例如人类中治疗相关的疾病或疾病状态，并且包括：

(1)预防疾病或疾病状态在哺乳动物中发生，尤其是当该哺乳动物易感于所述疾病状态，但尚未被诊断出患有这种疾病状态时；

(2)抑制疾病或疾病状态，即阻止其发生；或者

(3)缓解疾病或疾病状态，即使疾病或疾病状态消退。

术语“治疗”通常涉及治疗人类或动物(例如，被兽医所应用)，其中可达到某些预期的治疗效果，例如，抑制病症的发展(包括降低发展速度、使发展停止)、改善病症和治愈病症。还包括作为预防措施(例如预防)的治疗。对还没有发展为病症但有发展为该病症危险的患者的用途，也包括在术语“治疗”中。

本发明的优点和有益效果：

本发明的发现了一种诊断胃癌的分子标志物，使用该分子标志物可以在胃癌发生的早期即可作为判断，提供了患者的生存率。

本发明的包括LINC01342的抑制剂的治疗药物可用作新的胃癌的治疗药物。

附图说明

图1显示利用QPCR检测LINC01342在胃癌组织中表达情况的统计图；

图2显示利用QPCR检测LINC01342表达抑制情况的统计图；

图3显示抑制LINC01342表达对胃癌细胞增殖影响的统计图。

具体的实施方式

下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细的说明。以下实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring HarborLaboratoryPress,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。

实施例1筛选差异表达非长链编码RNA

1、研究对象：

收集医院肿瘤外科经胃癌根治术的5例原发性胃癌患者的手术标本(胃癌组织以及对应的癌旁组织)，且每位患者签署知情同意书。

入组标准：a.术前诊断为原发性胃癌，且没有接受肿瘤的治疗；b.没有合并其他恶性肿瘤；c.无其他并发症，如胃穿孔、消化道大出血、消化道梗阻等并发症，患者术前一般情况良好；d.无其他慢性疾病，如高血压、糖尿病等。

此项研究已获伦理委员会批准。

2、样本获取

1)手术中样本离体后选取肿瘤中标本，大小约0.5cmx0.5cm；

2)选取远离肿瘤组织区域，即靠近切缘，大小约为0.5cmx0.5cm；

3)将样本放入冻存管中，放入-80℃冰箱保存。

3、组织总RNA提取

1)清洗瓷质研钵后，用DEPC液浸泡过夜(至少12h)，干燥后用液氮预冷至研钵内液氮面平静无翻滚；

2)取-80℃保存的冰冻样本组织100mg加入研钵，加液氮研磨至白色粉末，直至加液氮进入研钵无片状结块翻滚；

3)向研钵中加入2m1Trizol，继续研磨至钵内液体澄清，转移至1.5m1无酶(RNA-free)EP管，13000rpm 4℃转10min离心，取上清液备用；

4)向上清液中加入200μ1氯仿萃取，用手轻微震荡，静置10min，13000rpm4℃转10min离心，取无色透明的上清液备用；

5)向上清液中再次加入200μ1氯仿萃取，用手轻微震荡，静置5min,13000rpm 4℃转10min离心，取无色透明的上清液；

6)按所取上清液体积1:1加入异丙醇，用手轻微震荡，静置10min,13000rpm 4℃转15min离心；

7)弃上清，留沉淀，加1ml 70％-75％乙醇，将沉淀混匀至不贴壁，8000rpm 4℃转5min，弃上清，开盖晾5-10min；

8)加入20μ1无酶水(Nuclease-Free water)，放置至溶解。将两管合并，进入液氮3min，放入-80℃冰箱保存；

9)用NANO drop 1000spectrophotometer分别测定所得RNA溶液在260nm和280nm波长的吸光度值A260与A280，以A260/A280的值判断样品纯度。以公式A260x35x稀释倍数计算RNA浓度。再取5μ1RNA溶液与6x电泳上样缓冲液混合，在1％甲醛变性凝胶上电泳，电泳后在紫外灯下观察，当出现5s,18s和28s三条完整条带时，说明提取的RNA较完整。

4、芯片实验

申请人选择美国Arraystar公司提供的12*135K的human LncRNAMicroarray(v2.0)芯片，该芯片数据来源几乎包含了所有权威LncRNA数据库，如NCBI Refseq，UCSCKnown Gene6.0，Gencode v13，RNA db2.0，NRED，LincRNAs，同时也对mRNA序列研究，mRNA数据主要来源于The collaborative consensus coding sequence(CCDS)project。

4.1LncRNA芯片杂交：

主要步骤如下：

(1)合成双链互补cRNA：

使用Invitrogen SuperScript ds-cDNA合成试剂盒，取5μg总RNA加入100pmol的oligo dT primers(特制引物)，按照Invitrogen SuperScript ds-cDNA合成试剂盒手册合成。

(2)标记纯化双链互补cDNA

ds-cDNA严格按照Nimblegen gene expression analyisis操作手册纯化和标记，简单来说，先把4μg的RNase加入到ds-cDNA中在37℃中孵育10分钟，然后用苯酚-氯仿-异戊醇混合液清洗接着用冰冻乙醇进行沉淀；标记ds-cDNA按照Nimblegen gene expressionanalyisis操作手册使用Nimblegen One-Color DNA标记试剂盒，先取1μg的ds-cDNA，加入1OD的Cy3引物在98℃中孵育10分钟，然后加入100pmol三磷酸脱氧核糖核酸和DNA聚合酶羧基端大片段(并充分混合在37℃中孵育2小时。最后加入0.1体积的0.5M EDTA反应液终止反应，最后用异丙醇乙醇沉淀进行纯化。

(3)标记效率质量检测：用NanoDropND-1000对ds-cDNA进行效率质量检测。

(4)芯片杂交：

将4μg标记有Cy3荧光染料的ds-cDNA和Microarrays芯片放进Nimblegenhybridization buffer液中，在杂交培植室内42℃孵育16-20小时，将杂交后的芯片在ozone-free环境下按照Nimblegen wash buffer试剂盒手册进行清洗。

4.2图像采集和数据分析

清洗后的芯片放入Axon genepix 4000B芯片扫描仪，打开genepix6.0软件以5μm像素的分辨率进行扫描，获得的扫描图像以TIFF格式输入到NimbleScan软件进行网格对齐和数据分析。这些数据需要通过分位数标准化和稳健多芯片平均标准化分析，从而获得标准化的芯片表达数据，再把数据输入到Agilent genespring GX软件进行分析，图像定量和标准化数据处理全部完成后以列表形式输出数据，获得的mRNA和LncRNA数据，经过折叠倍率筛选，筛选出差异表达的mRNA和LncRNA数据重新制作成差异表达的mRNA和LncRNA数据，表达差异巨大的mRNA和LncRNA用散点图和火山图标示出来，同时应用软件Agilentgenespring GX软件的聚类分析图表对数据进行聚类分析。

5、结果

经过图像采集和数据分析后得到了mRNA和LncRNA的数据，设定表达差异的标准：Fold chang≥2.0，P值≤0.05。根据这个标准筛选得到两组之间差异表达的mRNA和LncRNA。筛选获得的数据显示，胃癌组织和正常组织相比，有715个LncRNA差异表达，其中上调389个，下调326。

实施例2大样本验证筛选出的差异表达LncRNA

基于实施例1的筛选结果，根据P value的大小，选择LINC01342进行验证。

1、样本收集

按照实施例1的方法收集胃癌组织及相应的癌旁组织各45例。

2、在转录水平上进行验证

试剂：反转录试剂盒(DDR037A)购自宝生物工程(大连)有限公司。荧光实时(Real-time)定量PCR(polymerase chain reaction)所用的SYBR Premix Ex Taq^TM(Tli RNaseHPlus)试剂盒为日本Takara公司生产。

2.1提取组织RNA

步骤同实施例1。

2.2引物设计

根据LINC01342转录本序列，通过NCBI的引物设计工具(Primer BLAST)设计引物，上游引物：5’-TTGATATAGGTGGTGGATAC-3’(SEQ ID NO.2)；下游引物：5’-GCAAGAGAGTTTGTGTTT-3’(SEQ ID NO.3)。

根据GAPDH(内参基因)序列设计引物，上游引物：5’-CTCTGGTAAAGTGGATATTGT-3’(SEQ ID NO.4)；5’-GGTGGAATCATATTGGAACA-3’(SEQ ID NO.5)。

2.3cDNA合成

以提取的总RNA(1μg)为模板，加入以下反应体系，具体为：Buffer4μL，

RT Enzyme Mix 1μL，Oligo dT Primer(50μM)1μL，Random 6mers(100μM)1μL，以无RNA酶的ddH₂O将反应体积补足为20μL。将上述混合液置于37℃15min，85℃5s，即获得cDNA。该cDNA可用于lncRNA Real-time PCR检测。

2.4Real-time PCR

按日本Takara公司的

Premix Ex Taq^TM(Tli RNaseH Plus)试剂盒推荐的引物最适浓度(10μM)，将LINC01342引物以去离子水溶解，并建立以下反应体系：SYBRPremix Ex Taq^TM(2×)25μL，ROX Reference Dye(50×)1μL，PCR上游引物(10μM)1μL，PCR下游引物(10μM)1μL，cDNA 4μL，灭菌ddH₂O 18μL。以95℃15s预变性，按95℃10s变性、60℃20s退火、70℃10s延伸过程循环35次，获得Ct值。结果釆用相对定量法，运用公式2^-△△ct计算。实验重复3次。

3、结果

统计结果如图1显示，与癌旁组织相比，胃癌组织中LINC01342表达水平显著升高，差异具有统计学意义(P<0.05)。利用ROC曲线分析显示，LINC01342在区分胃癌组织和癌旁组织时，其AUC值是0.8743。

实施例3抑制LINC01342表达

1、细胞培养与转染

细胞培养：胃癌细胞株BGC-823用含10％FBS的DMEM，并放置在5％CO₂、饱和湿度，37℃二氧化碳培养箱培养。培养液每隔两天更换一次，细胞传代时用0.25％胰蛋白酶消化细胞。

siRNA转染：转染的前一天，将细胞消化接种到培养皿或培养板中，细胞接种的数量应保证第二天转染时能达到30-50％的密度。siRNA转染时严格按照Lipofectamin^TM2000说明书进行，4-6h后更换含10％FBS新鲜培养液，继续培养48-72h。

2、siRNA设计

siRNA(small interfering RNA)的设计：通过BLAST检索，在LINC01342的特异性序列区域设计siRNA序列：

siRNA-LINC01342

正义链：5’-AGUUUUAGACACAAGUUCGUA-3’(SEQ ID NO.6)；

反义链：5’-CGAACUUGUGUCUAAAACUGU-3’(SEQ ID NO.7)。

上述siRNA由上海吉玛制药技术有限公司合成，同时该公司提供阴性对照siRNA(siRNA-NC)。

3、利用QPCR实验检测siRNA的干扰情况

3.1提取细胞总RNA利用常规方法进行操作。

3.2cDNA合成

步骤同实施例2。

3.3QPCR

步骤同实施例2。

3.4结果

结果如图2所示，抑制LINC01342表达成功，差异具有统计学意义(P<0.05)。

实施例4抑制LINC01342表达对胃癌细胞增殖能力的测定

1、步骤：

取对数生长期的BGC-823细胞，消化调整细胞为0.3x10⁴个/孔，接种于96孔培养板上，细胞培养12h后，分别转染siRNA-LINC01342和siRNA-NC，4-6h后，更换含10％FBS的DMEM继续培养48h；细胞培养结束后各孔加入20μLMTT(5mg/ml)，孵育4h后，吸除孔内液体，加入150μL DMSO，震荡10min，用酶标仪在490nm波长处测吸光度值(A值)，以不含细胞的培养液作空白调零，每组设3个复孔，实验重复三次。

2、统计学分析

实验数据均采用均数士标准差表示，采用SPSS15.0统计学软件，进行单因素方差分析(ANOVA)或t检验。P<0.05为差异有统计学意义。

3、结果

结果如图3所示，相比于转染siRNA-NC细胞组，转染siRNA-LINC01342的细胞增殖减缓，差异具有统计学意义(P<0.05)。上述实验结果表明，抑制LINC01342表达可以抑制胃癌细胞增殖。

上述实施例的说明只是用于理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也将落入本发明权利要求的保护范围内。

序列表

<110> 中国医学科学院北京协和医院

北京泱深生物信息技术有限公司

<120> 长链非编码RNA作为胃癌的诊治标志物

<160> 7

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1640

<212> DNA

<213> 人源(Homo sapiens)

<400> 1

ctaacgacgc ggcgcccacc gagagctggg ggagcccagg gcggggaggg cgcggccgga 60

gcgagcgccg cccgggaaac ccgagccccg ccagaacccc tggcagccac agagctcagg 120

cttcaacgct ggcccgacac cagggccagg ccagaaatca gcctgggaga agctgggtcc 180

ggctccgagg ctggtgggca cggccccacc cggctttgtt cttcgcggcg ctgaggcggt 240

tagtttagcc tcccacccac cagacaaagg tgcgggaaat gggaccggtt tgacttgttc 300

aggcacatgg tcaccctgca cgtcaggggc cggctcaccc ctgatattag caaccccaag 360

cgtcttggcg cagggaggga tccccgtcag ccaggtcccc acgcagctcc aggcagcgcc 420

agcgtccacc agggagcagg ggcagcagag cccttctccc cagacaccct tgtgtcttcg 480

gaaaatgcca ggtccccccc cagctgctgt tctcgtcttt ggaggacccg gctttactgg 540

tgccacatgc ctgctgcggg ctgtgccatg gagggcggca cctgcctctt ctcacgtggc 600

agctctggca ccgggaactt cagagacccc agctgggctg agccaccccg ggctgaggcc 660

ttgtgggtcg cctcaaattc aagcctcatg ggcccggcct cccgccctaa cggtcgctga 720

agtgtcctgc tctcatacga acttgtgtct aaaactgtgg tctttgcttt tctcccaaac 780

ccgcctcccc gcgctgccta cctcaggcct gggggctccc ccgacttgtt ctctattccc 840

ccagcccctc actgcctggg ggctcccccg actcactctc taggccccca gccccacact 900

gcctgggggc tcccccgacc ctctctctat tctcccagcc ccgcactgcc tgggggctcc 960

cccgaccctc tctctattct cccagccctg cactgcctgg ggactcgcct gactcgctct 1020

ctattccccc agccccacac tgcatctcgg gagcagttcc aggccgacct ctgctctcca 1080

cggccgggag gtgtccaggt gtggacagag ccccggctct ccatcagggc acccagccgc 1140

cccacgctca gccctgcgtg gcttctcccg tccttcctgg gcatcccctg agggtgtggc 1200

cctgttgctg ggccccctcc tgcccccttg ccctgccagt tcctagagcc taggctgagg 1260

gcagggccat tgctgtgaac aaactggaca ggctccgcgg gagctcagag ctgccccgtg 1320

tctgagggcg cggctgtgtg gagtggggtc ccctcggcca ggcgggaaag gccctggatc 1380

gtgtgtgtga ccctggtact gggcaacccc tgggacaggc aagtccgtgg agacagaacg 1440

gggcggtggc tgcagcctgg gagctcggcc tccctcgggg tgacggaatg ttctggacct 1500

tgatataggt ggtggatact cagccctgtg agtgcaataa atgccaccaa attctcactt 1560

caaaattatt ttatgctatg tgaattctgc tccaattaaa acacaaactc tcttgcaaaa 1620

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1640

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

ttgatatagg tggtggatac 20

<210> 3

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

gcaagagagt ttgtgttt 18

<210> 4

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

ctctggtaaa gtggatattg t 21

<210> 5

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

ggtggaatca tattggaaca 20

<210> 6

<211> 21

<212> RNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

aguuuuagac acaaguucgu a 21

<210> 7

<211> 21

<212> RNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

cgaacuugug ucuaaaacug u 21

Claims (9)

1.检测长链非编码RNA表达的试剂在制备胃癌诊断产品中的应用；所述长链非编码RNA是LINC01342，所述长链非编码RNA相应的DNA序列如SEQ ID NO.1所示。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于， 所述试剂包括利用SYBR Green、TaqMan探针、分子信标、双杂交探针、或复合探针检测所述长链非编码RNA表达量时使用的PCR扩增引物。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述引物序列如SEQ ID NO.2和SEQ IDNO.3所示。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的应用，其特征在于，所述产品包括试剂盒、芯片、或试纸。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品包括检测权利要求1-4中任一项所述的长链非编码RNA表达的试剂。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述试剂包括SYBR Green、TaqMan 探针、分子信标、双杂交探针、或复合探针检测所述长链非编码RNA表达量时使用的PCR扩增引物。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述引物序列如SEQ ID NO.2和SEQ IDNO.3所示。

8.一种用于治疗胃癌的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括权利要求1-4中任一项所述的长链非编码RNA的抑制剂，所述抑制剂是针对所述长链非编码RNA的siRNA，所述siRNA序列如SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.7所示。

9.权利要求1-4中任一项所述的长链非编码RNA在制备治疗胃癌的药物中的应用。

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