CN108553526A - 一种用生物法制备改善睡眠质量的组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种用生物法制备改善睡眠质量的组合物，由以下原料组成：发酵分心木，发酵刺五加，大枣提取物和葡萄糖醛酸衍生物；本发明的用生物法制备改善睡眠质量的组合物，各组分之间配伍合理，起到很好的协同增效作用，并且补中益气，养血安神，滋阴补肾、安眠健胃，能灭肝火，通肺脏，对改善睡眠和舒缓情绪具有良好的作用与效果，口味独特，安全性高，能达到改善睡眠的目的，并且无任何毒副作用，不会产生依赖性，可以长期食用；本发明的用生物法制备改善睡眠质量的组合物能明显改善睡眠质量，能达到和西药基本相同的改善睡眠效果，并且停止服用后不易复发。

Description

一种用生物法制备改善睡眠质量的组合物
技术领域
本发明涉及生物发酵技术领域，是一种用生物法制备改善睡眠质量的组合物。
背景技术
失眠是临床最为常见的睡眠障碍类型，长期失眠对于人的正常生活和工作会产生严重的负面影响，甚至会导致恶性意外事故的发生。失眠属于中医不寐、不得眠范畴，主要是因为邪扰心神或者心神失养而导致阳不交阴或神不守舍而发生。另有理论认为，失眠病机多为湿食生痰，郁痰生热而扰动心神所致。
临床上常用的治疗失眠的西药主要有苯二氮类，如安定、硝基安定等，巴比妥类，如苯巴比妥、司可巴比妥，二苯甲烷类，如安泰乐，其他类，如唑吡坦、三唑仑、唑吡酮等；虽然疗效确切，见效快，但也存在问：首先，服用西药易产生依赖性，并且易产生耐药性，使服用剂量会越来越大，易超过安全剂量范围，长期服用易产生较重不良后果；其次，西药一般为抗生素类药物，具有一定毒性，长期服用会影响肝肾功能，并且会导致很多脏器功能紊乱，失调，如胃肠功能紊乱导致恶心、食欲减退、腹胀、便秘、早上起床后感觉到口干、口苦、口干舌躁、头晕、眼花等不适症状；
临床上常用的治疗失眠的中成药，如天王补心丹、牛黄清心丸、同仁柏子养心丸、安神补心丸、朱砂安神丸等，这些药物一般是针对某一类型特定的失眠，比如天王补心丹针对的是阴虚血少明显的失眠，而牛黄清心丸针对的是心火旺盛的失眠等，然而，有些睡眠障碍的人较难被确定为上述特定类型。另外，中药改善睡眠质量不明显，有些效果较缓慢。
另外，还有少部分病人服用外国进口药，虽然效果显著，但是价格昂贵，并且也有一定的依赖作用，较难长期服用。为了减低药物的不良反应，许多有睡眠障碍的人选择保健品期待予以替代药物，虽然改善睡眠质量的保健品品牌比较多，但是，改善睡眠质量的药物替代品较难达到较好的效果。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供一种用生物法制备改善睡眠质量的组合物，使其具有较好的改善睡眠质量的效果。
本发明为实现上述目的，通过以下技术方案实现：
一种用生物法制备改善睡眠质量的组合物，以重量份计，包括以下原料：发酵分心木40～50份，发酵刺五加30～40份，大枣提取物5～10份和葡萄糖醛酸衍生物3～8份；
所述发酵分心木按照以下步骤制备得到：
将分心木粉碎至100～200目，然后加入水浸泡30～45分钟，得到分心木浆液，向其中加入纤维素酶，搅拌均匀后置于温度为30～40℃下发酵3～5天，然后向其中加入白糖，枯草芽孢杆菌和产朊假丝酵母菌在35～50℃下发酵1～2天，得到发酵原液，向发酵原液中加入蒸馏水，过滤，将滤液冷冻干燥，得到发酵分心木；其中分心木、水、纤维素酶、白糖、枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母菌和蒸馏水的质量比为1：0.5～1：0.03～0.06：0.01～0.05：0.04～0.08：0.03～0.06：3～6；纤维素酶的活性为200～500U/g，枯草芽孢杆菌和产朊假丝酵母菌的活菌含量均为8～12亿/克；
所述发酵刺五加按照以下步骤制备得到：
向刺五加中加水，搅拌均匀后打成浆液，向其中加入纤维素酶、嗜热链球菌和双歧杆菌，在30～40℃下发酵2～3天，得到刺五加发酵原液，向发酵原液中加蒸馏水，过滤，将滤液冷冻干燥，得到发酵刺五加；其中刺五加、水、纤维素酶、嗜热链球菌、双歧杆菌和蒸馏水的质量比为1：1～1.2：0.01～0.03：0.05～0.08：0.04～0.08：2～3；纤维素酶的活性为200～500U/g，嗜热链球菌和双歧杆菌的活菌含量均为8～12亿/克；
所述葡萄糖醛酸衍生物的结构式为
优选的，以重量份计，由以下原料组成：发酵分心木45份，发酵刺五加38份，大枣提取物6份和葡萄糖醛酸衍生物5份。
优选的，分心木、水、纤维素酶、白糖、枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母菌和蒸馏水的质量比为1：0.8：0.05：0.04：0.06：0.04：5。
优选的，发酵分心木的制备过程中，纤维素酶的活性为400U/g，枯草芽孢杆菌和产朊假丝酵母菌的活菌含量均为10亿/克。
优选的，刺五加、水、纤维素酶、嗜热链球菌、双歧杆菌和蒸馏水的质量比为1：1.1：0.02：0.06：0.05：2.5。
本发明还包括下述方案，以重量份计，将发酵分心木40～50份，发酵刺五加30～40份，大枣提取物5～10份和葡萄糖醛酸衍生物3～8份混合均匀，制备成不同的形态，所述形态为颗粒状，片状或粉状。
本发明具有以下优点：
本发明所述组合物中的原料分心木用于健脾固肾、收涩精气；刺五加用于补中益精、补元气、生津、补脾益肺、安神；大枣用于补脾和胃、益气生津、解药毒；葡萄糖醛酸衍生物用于舒缓神经、灭肝火，各原料组合配起到好的协同增效作用，具有补中益精，益气生津、安神，健脾固肾、舒缓神经等作用，对改善睡眠和舒缓情绪达到了良好的效果。本发明所述组合物口味微甜，安全性高，能达到改善睡眠的目的，并且无毒副作用，不会产生依赖性，可以长期食用；本发明的组合物能明显改善睡眠质量，能达到和西药基本相同的改善睡眠效果，并且停止服用后不易复发。
本发明所述的组合物中通过将分心木发酵，将分心木中的有效成分经过益生菌转换，由大分子变成小分子，极易被人体吸收，并且通过发酵改善了分心木的口味，并且提高了药效；本发明所述的组合物，通过大枣提取物改善整个组合物的口感，并且大枣提取物和其他组分的配伍性良好，更能发挥补中益气，安神等作用。
本发明的组合物中加入的发酵刺五加成分，在刺五加发酵的过程中采用纤维素酶、嗜热链球菌和双歧杆菌对其发酵，纤维素酶能够将刺五加中的大分子水不溶物分解成小分子物质的黄酮和多糖，从而改善刺五加的发涩的口感和增加其安神药效，嗜热链球菌和双歧杆菌可以使发酵刺五加的口感更加柔和醇厚，改善了其风味并且将刺五加中的营养物质尽可能的保留，并采用冷冻干燥的方法将其干燥，保留了刺五加安神等作用，与其他成分的配伍起到相互补充的协同增效作用；
本发明所述的组合物中加入的葡萄糖醛酸衍生物，能够进一步增加改善睡眠的效果。由于其分子中含有亲水性的羟基和疏水性的长链结构，一方面能够起到表面活性剂的作用，增加其他组分的混合均匀程度，增加组合物的水溶性，促进人体对发酵分心木、发酵刺五加和大枣提取物的吸收；另一方面，进入人体后，葡萄糖醛酸衍生物中的糖苷键被体内的糖苷酶水解，只保留其中的酰胺键结构，酰胺键的存在使得葡萄糖醛酸衍生物相比葡萄糖醛酸更容易与非结合胆红素结合成直接胆红素，通过胆道排出体外，或随着小肠吸收进入血液通过肾脏排尿排出体外，并且能与肝脏中的多种有害物质结合，发挥其解毒作用，起到灭肝火，通肺脏，舒缓神经的作用，因而对痰热内扰型的顽固性失眠有比较显著的效果。
附图说明
图1为葡萄糖醛酸衍生物的核磁共振氢谱图。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明作进一步描述。
本发明所述的葡萄糖醛酸衍生物通过以下制备方法得到：称取(1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCl)，288g,1.5mol)，化合物1(306g,1mol)加入到1L二氯甲烷和500mL无水DMF的混合物溶剂中，开启搅拌，室温条件下加入1-氨基辛烷(194g,1.5mol)。混合液在室温下搅拌反应两天，TLC(二氯甲烷/甲醇4/1)检测至原料全部消失，过滤除去不溶解的固体杂质，向滤液中加入1L二氯甲烷，并用水洗涤(200mL×3)。有机相旋干，所得固体混合物经柱色谱纯化，得白色粉末状固体(847mg,83％)。
其合成路线为
其中化合物1可以在市场上购买或者按照文献Synthesis ofsugar-based chelating surfactants for metal removal from wastewater，Carbohydrate Research 343(2008)839–847合成；
产物的检测数据：如图1所示的葡萄糖醛酸衍生物的核磁共振氢谱图：1H NMR(400MHz,CD3Cl3/CD3OD＝3/1):δ4.29(d,1H,J＝8.0Hz,H-1),3.89-3.84(m,1H),3.74(d,1H,J＝9.6Hz,H-5),3.56-3.49(m,2H),3.39(t,1H,J＝9.2Hz),3.25(t,1H,J＝8.0Hz),2.72-2.61(m,2H),1.62-1.59(m,2H),1.42-1.19(m,22H),0.88-0.85(m,6H)；高分辨质谱(m/z):calcd for C22H44NO6[M+H]+,计算值418.3163；实测值,418.3169。
实施例1
一种用生物法制备改善睡眠质量的组合物，包括以下原料：发酵分心木40kg，发酵刺五加30kg，大枣提取物5kg和葡萄糖醛酸衍生物3kg；
所述发酵分心木按照以下步骤制备得到：
将分心木粉碎至100～200目，然后加入水浸泡30分钟，得到分心木浆液，向其中加入纤维素酶，搅拌均匀后置于温度为30℃下发酵3天，然后向其中加入白糖，枯草芽孢杆菌和产朊假丝酵母菌在35℃下发酵1天，得到发酵原液，向发酵原液中加入蒸馏水，过滤，将滤液冷冻干燥，得到发酵分心木；其中分心木、水、纤维素酶、白糖、枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母菌和蒸馏水的质量比为1：0.5：0.03：0.01：0.04：0.03：3；纤维素酶的活性为200U/g，枯草芽孢杆菌和产朊假丝酵母菌的活菌含量均为8亿/克；
所述发酵刺五加按照以下步骤制备得到：
向刺五加中加水，搅拌均匀后打成浆液，向其中加入纤维素酶、嗜热链球菌和双歧杆菌，在30℃下发酵2天，得到刺五加发酵原液，向发酵原液中加蒸馏水，过滤，将滤液冷冻干燥，得到发酵刺五加；其中刺五加、水、纤维素酶、嗜热链球菌、双歧杆菌和蒸馏水的质量比为1：1：0.01：0.05：0.04：2；纤维素酶的活性为200U/g，嗜热链球菌和双歧杆菌的活菌含量均为8亿/克；
所述葡萄糖醛酸衍生物的结构式为
取上述步骤得到的发酵分心木40kg，发酵刺五加30kg，大枣提取物5kg和葡萄糖醛酸衍生物3kg混合均匀，制成颗粒形态，即为一种用生物法制备改善睡眠质量的组合物。
实施例2
一种用生物法制备改善睡眠质量的组合物，包括以下原料：发酵分心木50kg，发酵刺五加40kg，大枣提取物10kg和葡萄糖醛酸衍生物8kg；
所述发酵分心木按照以下步骤制备得到：
将分心木粉碎至100～200目，然后加入水浸泡45分钟，得到分心木浆液，向其中加入纤维素酶，搅拌均匀后置于温度为40℃下发酵5天，然后向其中加入白糖，枯草芽孢杆菌和产朊假丝酵母菌在50℃下发酵2天，得到发酵原液，向发酵原液中加入蒸馏水，过滤，将滤液冷冻干燥，得到发酵分心木；其中分心木、水、纤维素酶、白糖、枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母菌和蒸馏水的质量比为1：1：0.06：0.05：0.08：0.06：6；纤维素酶的活性为500U/g，枯草芽孢杆菌和产朊假丝酵母菌的活菌含量均为12亿/克；
所述发酵刺五加按照以下步骤制备得到：
向刺五加中加水，搅拌均匀后打成浆液，向其中加入纤维素酶、嗜热链球菌和双歧杆菌，在40℃下发酵3天，得到刺五加发酵原液，向发酵原液中加蒸馏水，过滤，将滤液冷冻干燥，得到发酵刺五加；其中刺五加、水、纤维素酶、嗜热链球菌、双歧杆菌和蒸馏水的质量比为1：1.2：0.03：0.08：0.08：3；纤维素酶的活性为500U/g，嗜热链球菌和双歧杆菌的活菌含量均为12亿/克；
所述葡萄糖醛酸衍生物的结构式为
取上述步骤得到的发酵分心木50kg，发酵刺五加40kg，大枣提取物10kg和葡萄糖醛酸衍生物8kg混合均匀，制成片状，即为一种用生物法制备改善睡眠质量的组合物。
实施例3
一种用生物法制备改善睡眠质量的组合物，包括以下原料：发酵分心木42kg，发酵刺五加34kg，大枣提取物8kg和葡萄糖醛酸衍生物6kg；
所述发酵分心木按照以下步骤制备得到：
将分心木粉碎至100～200目，然后加入水浸泡40分钟，得到分心木浆液，向其中加入纤维素酶，搅拌均匀后置于温度为35℃下发酵4天，然后向其中加入白糖，枯草芽孢杆菌和产朊假丝酵母菌在40℃下发酵1.5天，得到发酵原液，向发酵原液中加入蒸馏水，过滤，将滤液冷冻干燥，得到发酵分心木；其中分心木、水、纤维素酶、白糖、枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母菌和蒸馏水的质量比为1：0.6：0.04：0.02：0.05：0.04：4；纤维素酶的活性为300U/g，枯草芽孢杆菌和产朊假丝酵母菌的活菌含量均为9亿/克；
所述发酵刺五加按照以下步骤制备得到：
向刺五加中加水，搅拌均匀后打成浆液，向其中加入纤维素酶、嗜热链球菌和双歧杆菌，在34℃下发酵2.5天，得到刺五加发酵原液，向发酵原液中加蒸馏水，过滤，将滤液冷冻干燥，得到发酵刺五加；其中刺五加、水、纤维素酶、嗜热链球菌、双歧杆菌和蒸馏水的质量比为1：1.1：0.02：0.07：0.05：2.2；纤维素酶的活性为300U/g，嗜热链球菌和双歧杆菌的活菌含量均为9亿/克；
所述葡萄糖醛酸衍生物的结构式为
取上述步骤得到的发酵分心木42kg，发酵刺五加34kg，大枣提取物8kg和葡萄糖醛酸衍生物6kg混合均匀，制成粉状，即为一种用生物法制备改善睡眠质量的组合物。
实施例4
一种用生物法制备改善睡眠质量的组合物，包括以下原料：发酵分心木45kg，发酵刺五加38kg，大枣提取物6kg和葡萄糖醛酸衍生物5kg；
所述发酵分心木按照以下步骤制备得到：
将分心木粉碎至100～200目，然后加入水浸泡40分钟，得到分心木浆液，向其中加入纤维素酶，搅拌均匀后置于温度为35℃下发酵4天，然后向其中加入白糖，枯草芽孢杆菌和产朊假丝酵母菌在40℃下发酵1.5天，得到发酵原液，向发酵原液中加入蒸馏水，过滤，将滤液冷冻干燥，得到发酵分心木；其中分心木、水、纤维素酶、白糖、枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母菌和蒸馏水的质量比为1：0.8：0.05：0.04：0.06：0.04：5；纤维素酶的活性为400U/g，枯草芽孢杆菌和产朊假丝酵母菌的活菌含量均为10亿/克；
所述发酵刺五加按照以下步骤制备得到：
向刺五加中加水，搅拌均匀后打成浆液，向其中加入纤维素酶、嗜热链球菌和双歧杆菌，在30～40℃下发酵2～3天，得到刺五加发酵原液，向发酵原液中加蒸馏水，过滤，将滤液冷冻干燥，得到发酵刺五加；其中刺五加、水、纤维素酶、嗜热链球菌、双歧杆菌和蒸馏水的质量比为1：1.1：0.02：0.06：0.05：2.5；纤维素酶的活性为400U/g，嗜热链球菌和双歧杆菌的活菌含量均为10亿/克；
所述葡萄糖醛酸衍生物的结构式为
取上述步骤得到的发酵分心木45kg，发酵刺五加38kg，大枣提取物6kg和葡萄糖醛酸衍生物5kg混合均匀，制成颗粒状，即为一种用生物法制备改善睡眠质量的组合物。
本发明上述实施例中葡萄糖醛酸衍生物的制备方法均按照本发明所述方法制备。
葡萄糖醛酸衍生物的细胞毒性实验
细胞毒性测试采用HepG2肝癌细胞，将HepG2细胞于37℃，5％CO2条件下培养(15％胎牛血清，1‰青-链霉素的DMEM培养液)，待细胞贴壁长至90％左右，弃去培养基，用0.25％胰酶消化后将细胞制成1×105个/mL单细胞悬液，接种于96孔板，每孔100μL，二氧化碳培养箱继续培养12h，准备进行试验。设置空白组，葡萄糖醛酸衍生物组和药物组，药物组选用的药物为舒乐安定片(常用安眠药)，每组6个复孔。空白组加入100μLDMEM培养液，葡萄糖醛酸衍生物组和药物组每孔加入100μL不同浓度的化合物溶液(3.125，6.25，12.5，25.0，50，100.0，500μg/mL)，预处理12小时，然后每孔加入20μL的MTT溶液(5mg/mL)，继续孵育1-4小时。吸出培养液，每孔加入100μL的DMSO，于多功能酶标仪上，在570nm处测定其吸光度。根据药物浓度对应的抑制率用SPSS统计分析软件作直线回归，得到直线方程，计算抑制率在50％时对应的药物浓度即为待测样品对肿瘤细胞的半抑制浓度(IC50)。其中，药物组的半数抑制浓度IC50为80.05μg/mL，葡萄糖醛酸衍生物组的半数抑制浓度IC50为152.48μg/mL，接近药物组的2倍，由此可见，葡萄糖醛酸衍生物组较常规安眠药具有更小的毒性。
葡萄糖醛酸衍生物对于大鼠高血压肝火亢盛证的生物学相关指标的影响实验
选择15周龄经属性症候分类，筛选出高血压肝火亢盛证雌性大鼠72只，体重190～210g，随机分为对照组和实验组，两组大鼠年龄、体重类型等方面无统计学差异具有可比性。实验组大鼠给予葡萄糖醛酸衍生物，一次10g/kg，1次/天，相当于人体推荐剂量的30倍，连续服药6周，对照组大鼠给予相同体积的去离子水，通过灌胃胃药，作为空白对照。
大鼠各项体征指标的测量：
大鼠易激惹程度的评分1分：握持颈部处时惊跳、尖叫；2分：握持颈部处时欲咬人或咬人；3分：提携尾部处时马上惊跳、尖叫，欲咬人，甚至与同笼其他大鼠打斗频繁；0分：无上述状况；
大鼠宏观表现采集记录：
大鼠常见状态包括精神情况、活动量和痛阈以及眼球突出度等一般状态。
结果如表1所示。
表1两组大鼠用药过程中的症状比较(xbar±s，n＝36)
由表1的结果可知，服用本发明组合物前两组大鼠的易激惹程度、痛阈以及眼球突出度均无统计学差异(P＞0.05)，服用本发明组合物后，实验组大鼠的易激惹程度明显降低，痛阈以及眼球突出度同治疗前相比差异显著(P＜0.05)，同对照组相比差异显著(P＜0.05)。
由于高血压肝火亢盛证在有各种表现，主要为在外部刺激下，患者会反复出现、持续时间较长的神经紧张、烦躁不安、易怒、焦虑等情绪上的变化，内部表现为肝郁气滞证等，由表1的数据可知葡萄糖醛酸衍生物能起到一定的灭肝火，舒缓神经的作用。
改善睡眠功能的试验：
试验材料：实施例4所得的用生物法制备改善睡眠质量的组合物；
样品：人体口服推荐摄入量为每日两次，饭后1～2小时服用，每次的剂量为10g/60kg，本实验设低、中、高三个剂量组：1.7、3.3和10g/kg，分别相当于人体推荐剂量的5倍、10倍和30倍，另设水对照组。
实验动物：SD大鼠，体重195～205g。
饲养条件：温度20～25℃，相对湿度40～70％的屏障系统。
样品处理：取样品0.17、0.33、1.0g分别加水至20ml溶解，使其均匀混悬，得到低、中、高三剂量，供试。
给样途径：灌胃，灌胃容量为4ml/200g.b.w。
实验方法和结果
1.1样品对动物体重的影响试验，结果如表2所示。
表2样品对动物体重的影响
由表2的结果可知，样品各剂量组动物体重与对照组对比，均无显著性差异。
按照《保健食品检验及评价技术规范》(2003版)评价标准进行直接催眠实验，巴比妥钠阈下剂量催眠试验和巴比妥钠睡眠潜伏期试验，具体的：
1.2直接睡眠试验
取大鼠40只，随机分4组，每组10只，按剂量设计给予样品，以大鼠翻正反射消失达1分钟以上作为入睡判断标准，翻正反射消失至恢复这段时间为睡眠时间，观察灌胃后各组入睡动物数及睡眠时间，结果如表3所示。
表3样品对动物直接睡眠时间的影响
由表3的结果可以看出，样品各剂量组与对照组相比，无显著性差异，本发明的用生物法制备改善睡眠质量的组合物无明显直接睡眠作用。
1.3延长巴比妥钠睡眠时间试验
选用SD大鼠40只，随机分四组，每组10只，连续给样30天，于第30天样品灌胃15分钟后，给各组动物50mg/kg.b.w的巴比妥钠腹腔注射，注射量为2ml/200g.b.w，以大鼠翻正反射消失达1分钟作为入睡判断标准，翻正反射消失至恢复这段时间为睡眠时间，观察各组动物睡眠时间，结果如表4。
表4阈上剂量的巴比妥钠诱导大鼠睡眠时间的影响
组别 动物数/只 入睡时间/秒 睡眠时间/秒
对照组 10 275±45 1901±124
1.7g/kg 10 260±55 2045±242
3.3g/kg 10 234±40 2185±186*
10g/kg 10 221±50 2556±189*
*P＜0.05与对照组相比(经方差分析)
由表4的结果可以看出，本发明的用生物法制备改善睡眠质量的组合物具有延长巴比妥钠睡眠时间的作用。
1.4巴比妥钠阈下剂量催眠试验
选用SD大鼠40只，随机分四组，每组10只，连续给样30天，于第30天样品灌胃15分钟后，给各组动物30mg/kg.b.w的巴比妥钠腹腔注射，注射量为2ml/200g.b.w，以大鼠翻正反射消失达1分钟作为入睡判断标准，翻正反射消失至恢复这段时间为睡眠时间，观察各组动物睡眠时间，结果如表5。
表5阈下剂量的巴比妥钠诱导大鼠睡眠发生率的影响
*P＜0.05与对照组相比(经卡方检验)
由表5的结果可知，样品3.3g/kg、10g/kg组动物在阈下剂量巴比妥钠诱导下的入睡动物与对照组相比，有显著的差异，本发明的改善睡眠的组合物能增加注射巴比妥钠阈下计量后的入睡动物数。
1.5巴比妥钠睡眠潜伏期试验
选用SD大鼠40只，随机分四组，每组10只，连续给样30天，于第30天样品灌胃15分钟后，给各组动物250mg/kg.b.w的巴比妥钠腹腔注射，注射量为2ml/200g.b.w，以大鼠翻正反射消失达1分钟作为入睡判断标准，翻正反射消失至恢复这段时间为睡眠时间，观察各组动物睡眠时间，结果如表6。
表6巴比妥钠对动物睡眠潜伏期的影响
组别 动物数/只 睡眠潜伏期/秒
对照组 10 1635±205
1.7g/kg 10 1420±234
3.3g/kg 10 1272±190
10g/kg 10 1020±85*
*P＜0.05与对照组相比(经方差分析)
由表6的结果可知，样品10g/kg剂量组动物睡眠潜伏期与对照组相比，具有显著性差异，本发明的改善睡眠的组合物能有效缩短注射巴比妥钠后的睡眠潜伏期。
综上，本发明的改善睡眠的组合物具有显著的改善睡眠的功能。
改善睡眠症状结果：
共选有失眠症状的58人，年龄41～72岁，其中开始出现睡眠障碍的时间为12～24个月的16人，24～36个月的11人，36～48个月的10人，48～60个月的12人，60～96个月的9人，其中36～48个月、48～60个月和60～96个月的31人，在服用本发明所述的组合物的30天内，对原来服用的安眠药减半服用，第31天以后停用安眠药，只服用本发明所述的组合物。
服用实施例4制备的改善睡眠质量的组合物，每日两次，每次10g，饭后服用，连续服120天；服用期间忌浓茶、咖啡。
评定标准：
失眠症状消失：睡眠时间恢复正常，或夜间睡眠时间在6个小时左右，睡眠深沉，醒后精力充沛。
显效：睡眠明显好转，睡眠时间增加2小时左右，睡眠深度增加。
有效：症状减轻，睡眠时间增加不足2小时。
无效：达不到上述标准。
结果如表7所示。
表7统计结果
由表7的结果可知，开始出现睡眠障碍的时间越短，服用本发明组合物的效果越明显，并且服用120天以后有些人的失眠症状基本消失，停止服药1年后跟踪随访，失眠症状没有复发，能够自主入睡；出现睡眠障碍的时间较长的显效和有效的人经过一段时间的继续服用后失眠的症状也能明显改善；并且在服用该组合物期间无不良反应。
李某，64岁，61kg，男，患有失眠症状近10年，从出现睡眠障碍以来一直服用安眠药，如安神补脑液，白草香解郁安神胶囊，安定片等，后改为服用酒石酸唑吡坦片(思诺思)，吃药后能睡5个小时左右，并且服用剂量也由开始的每天5mg增加至15mg，但是减低药量不易进入睡眠状态，睡眠达不到3个小时，睡眠不深，多梦易醒，醒后不易再睡。起床后头昏乏力，注意力不集中。
第一个月服用本发明实施例4的改善睡眠质量的组合物，每日两次，每次10g，睡前服用酒石酸唑吡坦片(思诺思)，剂量为每天5mg，睡眠时间能达到3小时；第二个月停止服用酒石酸唑吡坦片(思诺思)，只服用本发明实施例4的改善睡眠质量的组合物，每日三次，每次10g，睡眠时间能达到4小时左右，偶尔醒后也容易入睡；继续服用3个月用本发明实施例4的改善睡眠质量的组合物，每日三次，每次10g，睡眠时间能达到5小时左右，睡眠深度增加，偶尔醒后容易入睡；维持每日3次、每次10g剂量连续服用4个月后，夜间睡眠时间达到5个小时左右，睡眠深沉，醒后精力充沛；服用1年后将服用剂量减少至每日1次，每次10g，睡眠时间也能在5个小时左右。本发明的改善睡眠质量的组合物可以替代西药起到较好的改善睡眠的作用，无毒副作用。

Claims (6)

1.一种用生物法制备改善睡眠质量的组合物，其特征在于：以重量份计，由以下原料组成：发酵分心木40～50份，发酵刺五加30～40份，大枣提取物5～10份和葡萄糖醛酸衍生物3～8份；
所述发酵分心木按照以下步骤制备得到：
将分心木粉碎至100～200目，然后加入水浸泡30～45分钟，得到分心木浆液，向其中加入纤维素酶，搅拌均匀后置于温度为30～40℃下发酵3～5天，然后向其中加入白糖，枯草芽孢杆菌和产朊假丝酵母菌在35～50℃下发酵1～2天，得到发酵原液，向发酵原液中加入蒸馏水，过滤，将滤液冷冻干燥，得到发酵分心木；其中分心木、水、纤维素酶、白糖、枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母菌和蒸馏水的质量比为1：0.5～1：0.03～0.06：0.01～0.05：0.04～0.08：0.03～0.06：3～6；纤维素酶的活性为200～500U/g，枯草芽孢杆菌和产朊假丝酵母菌的活菌含量均为8～12亿/克；
所述发酵刺五加按照以下步骤制备得到：
向刺五加中加水，搅拌均匀后打成浆液，向其中加入纤维素酶、嗜热链球菌和双歧杆菌，在30～40℃下发酵2～3天，得到刺五加发酵原液，向发酵原液中加蒸馏水，过滤，将滤液冷冻干燥，得到发酵刺五加；其中刺五加、水、纤维素酶、嗜热链球菌、双歧杆菌和蒸馏水的质量比为1：1～1.2：0.01～0.03：0.05～0.08：0.04～0.08：2～3；纤维素酶的活性为200～500U/g，嗜热链球菌和双歧杆菌的活菌含量均为8～12亿/克；
所述葡萄糖醛酸衍生物的结构式为
2.根据权利要求1所述的一种用生物法制备改善睡眠质量的组合物，其特征在于：以重量份计，由以下原料组成：发酵分心木45份，发酵刺五加38份，大枣提取物6份和葡萄糖醛酸衍生物5份。
3.根据权利要求1所述的一种用生物法制备改善睡眠质量的组合物，其特征在于：分心木、水、纤维素酶、白糖、枯草芽孢杆菌、产朊假丝酵母菌和蒸馏水的质量比为1：0.8：0.05：0.04：0.06：0.04：5。
4.根据权利要求1所述的一种用生物制备法改善睡眠质量的组合物，其特征在于：发酵分心木的制备过程中，纤维素酶的活性为400U/g，枯草芽孢杆菌和产朊假丝酵母菌的活菌含量均为10亿/克。
5.根据权利要求1所述的一种用生物法制备改善睡眠质量的组合物，其特征在于：刺五加、水、纤维素酶、嗜热链球菌、双歧杆菌和蒸馏水的质量比为1：1.1：0.02：0.06：0.05：2.5。
6.根据权利要求1所述的一种用生物法制备改善睡眠质量的组合物，其特征在于：包括以下步骤：以重量份计，将发酵分心木40～50份，发酵刺五加30～40份，大枣提取物5～10份和葡萄糖醛酸衍生物3～8份混合均匀，制备成颗粒形态。
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