CN108553479A - 阳离子修饰的琼脂糖和核酸药物组合物及制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种阳离子修饰的琼脂糖和核酸药物组合物及其制备方法和靶向淋巴结免疫治疗用于阻断肿瘤迁移的应用。氨基修饰的方式是氨基为伯氨基或仲氨基或叔氨基，氨基化形式为单氨基化或多氨基化，连接方式和数量不受限制；核酸药物为质粒或小片段的DNA或RNA或DNA和RNA的杂合。所述靶向淋巴结的载体‑核酸药物给药体系可以有效破坏淋巴结中的免疫抑制性环境，恢复淋巴结固有的免疫应答体制，从而达到阻断肿瘤经淋巴结转移的目的，可在阻断肿瘤迁移中应用。
Description
一、技术领域
本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种阳离子修饰的琼脂糖和核酸药物组合物及其制备方法和靶向淋巴结免疫治疗用于阻断肿瘤迁移的应用。
二、背景技术
肿瘤转移是导致恶性肿瘤患者死亡的主要原因。恶性肿瘤转移的途径主要有直接蔓延、血行转移、淋巴转移和种植转移。淋巴结作为哺乳动物特有的周围淋巴器官，广泛分布于全身的淋巴通道上，是天然免疫反应与获得性免疫反应相互作用的重要场所，是肿瘤细胞淋巴转移的必经部位。其中临床和病理研究已经证实淋巴转移是大部分实体肿瘤扩散的早期事件，也是黑色素瘤、乳腺癌等肿瘤转移的首要途径。肿瘤细胞最早入侵的前哨淋巴结以及后续到达的肿瘤引流淋巴结内部会因为接受来自于肿瘤的含有大量免疫抑制性物质的组织液后而形成有利于肿瘤细胞生长的温床，肿瘤细胞可以在肿瘤相关区域淋巴结中迅速增殖，并以此为跳板通过血管转移至远端淋巴结和其它内脏器官，而次发部位的肿瘤急剧生长通常会影响正常的机体功能导致患者死亡。因此通过阻断肿瘤细胞经淋巴结的转移进程可以显著降低癌症患者死亡几率。
然而，长期以来，阻断肿瘤淋巴转移的主要临床手段还仅仅是淋巴结清扫术，而淋巴结清扫术很可能误将处于抗肿瘤免疫活跃状态的正常淋巴结切除从而破坏机体针对肿瘤的正常免疫反应，此外淋巴结清扫术带来的术后并发症比如疼痛、淋巴回流水肿及关节运动障碍会给患者术后恢复和生活质量都会造成较大的影响。因此，为提高肿瘤患者的生活质量，探索并建立全新的非手术治疗手段用于阻断肿瘤的淋巴转移是极为必要的。鉴于肿瘤转移相关区域的淋巴结处于免疫抑制的状态，而肿瘤细胞偏好在免疫抑制的微环境中生长增殖，理论上通过药物治疗破坏淋巴结中的免疫抑制性环境，恢复淋巴结固有的免疫应答体制同样可以达到阻断肿瘤经淋巴结转移的目的。然而目前为止临床上却很少通过药物治疗这种非手术的措施来阻止肿瘤的淋巴转移。这主要是因为淋巴结与其它内脏器官不同，其定位散布于全身，而且淋巴结的主要组成细胞如T细胞，B细胞，树突状细胞(DC)等免疫细胞主要来自于外周循环系统和其它免疫器官，淋巴结自身独有的细胞种类较少。淋巴结中的绝大部分免疫细胞都处于动态移动的状态，因此在缺少淋巴结特异性的治疗分子靶点的情况下，全身给药无法保证小分子药物以及蛋白类药物特异性的针对淋巴结发挥功能，其治疗效果不确定的同时还会带来严重的副作用。
三、发明内容
本发明需要解决的问题就是公开了一种靶向淋巴结特有的被膜下窦巨噬细胞(SCS巨噬细胞)的载体-核酸药物给药体系及其在抗肿瘤转移中的应用，具体涉及到阳离子修饰的琼脂糖(C-agarose)和核酸药物组合物的淋巴结靶向特性在阻断肿瘤迁移的治疗应用。
本发明提供的阳离子修饰的琼脂糖是具有以下结构的化合物：
阳离子修饰的琼脂糖的R1，R2，R3，R4可以分别是一个氢原子或者是一个选自以下基团组的取代基，这个基团组为伯氨基或仲氨基或叔氨基或长链长为一到十个碳原子的直链或者支链的含有氨基的碳链，上述化合物至少含有一个取代基。
阳离子修饰的琼脂糖制备过程中所采用的各种试剂配比是获取阳离子修饰的琼脂糖的最佳反应试剂配比，但是不应视为对阳离子修饰的琼脂糖制备方法的限制。
本发明中使用的核酸药物为质粒或小片段的DNA，RNA或DNA和RNA的杂合。本次实验中采用的核酸药物为富含CG的寡聚核苷酸(CpG)，但是不应视为对核酸药物使用种类的限制。
本发明的载体-核酸药物淋巴结靶向给药体系采取皮下给药方式给予合适剂量。合适的剂量是那些能得到所需要的最终量的剂量。而治疗不同的疾病也可能需要不同的剂量。该试剂的有效量是能减缓肿瘤经淋巴结转移的量。
具有常规技术的研究人员将能够确定本发明所提供的试剂的最有效的给药剂量和时间,考虑给药方式，药物代谢，以及其他一些药代动力学参数例如药物分布，清除率等。
本发明通过体内对黑色素瘤、乳腺癌经淋巴结转移等疾病模型进行例证。此处的动物包括但是不限于：小鼠，大鼠，驯养动物包括但是不限于猫，狗，以及其它一些动物，例如但是不限于牛，羊，猪，马，灵长类动物，例如但是不限于猴子和人。小鼠黑色素瘤、乳腺癌经淋巴结转移等疾病模型的体内检测是被广泛认可和接受的体内药物活性检测的模型，同时也可以为其它生物，例如但是不限于人提供参考。
下面的例子用以解释本发明的具体细节，但不应被视作对本发明的功能范围的限定。
本发明所述的C-agarose的制备方式：
取一定量的agarose溶解到DMSO中，加入N,N'-羰基二咪唑活化羟基，加入含氨基的化合物比如乙二胺进行反应，反应完全后通过透析冻干获得C-agarose。
本发明所述的C-agarose+CpG的组合物制备方法
将C-agarose用生理盐水在微波炉中加热溶解，制得琼脂糖溶液，然后加入CpG，恢复溶液温度至室温，形成组合物。这样就制得了荷载CpG的组合物。
本发明所述的C-agarose+CpG给药体系在黑色素瘤和乳腺癌转移中的应用：
1.于C57BL/6小鼠右足跖部皮下注射B16F10细胞，建立黑色素瘤模型。于Balb/c小鼠腹部乳腺注射4T1细胞，建立乳腺癌模型。
2.在植瘤后一天、一周、三周，于小鼠皮下注射C-agarose+CpG组合物三次，对肿瘤转移进行治疗。
3.在植瘤两个月后处死小鼠，治疗结束时观察小鼠肺部肿瘤转移程度。
本发明的有益效果是：提供一种新的抗肿瘤转移的方法，通过给予阳离子修饰的琼脂糖(C-agarose)和核酸药物组合物给药体系来激活淋巴结SCS巨噬细胞，而激活的SCS巨噬细胞可以表达I型干扰素来激活自然杀伤细胞(NK细胞)以及恒定型自然杀伤T细胞(iNKT)，而这两种细胞在肿瘤的免疫治疗中一直扮演着重要的角色，从而起到抗肿瘤转移的效果。同时，本发明所使用的核酸和阳离子修饰的琼脂糖易于获取，价格低廉，性质稳定，便于保存和运输。
四、具体实施方式
1.阳离子修饰的琼脂糖的合成
琼脂糖可以通过商业购买获得(南京生兴生物有限公司)，阳离子修饰的琼脂糖可以通过一种合适的含有氨基的化合物比如乙二胺通过与羟基连接获得。具体步骤如下：100mg琼脂糖加入100ml无水DMSO中，加热搅拌使其溶解，然后恢复至室温配成琼脂糖的DMSO溶液，加入0.5g N,N'-羰基二咪唑，反应1小时活化琼脂糖的羟基，然后加入3ml的乙二胺反应过夜，透析袋双蒸水透析，经透析反应体系形成胶状，透析2天，每天换水3次。将上述反应所得胶体微波炉加热溶化，滴入预冷的无水乙醚中制得直径约0.1mm的小球，将小球用0.1mol/L的重碳酸钠溶液透析2天，每天换水3次，再用双蒸水透析，透析2天，每天换水3次，冻干即得阳离子化的琼脂糖(C-agarose)。
2.本发明所述的C-agarose+CpG的组合物制备方法
C-agarose用生理盐水在微波炉中加热溶解，制得不同修饰度和不同浓度的琼脂糖溶液，然后根据需要加入不同量的CpG，恢复溶液温度至室温。这样就制得了不同浓度的荷载CpG的组合物。
3.C-agarose+CpG给药体系的淋巴结靶向特性验证
将1mg含有CpG的生理盐水(裸CpG组)和C-agarose+CpG(200μl,胶体含有1mg CpG)分别植入两组小鼠体内，48h后处死小鼠，取出心、肝、脾、肺、肾、淋巴结、皮肤、肌肉等器官组织，匀浆，提取CpG，Southern印记法定量各器官的CpG含量。
表一 C-agarose+CpG给药体系的体内分布
数据均以平均值±标准差的形式加以显示。
如表一所示，C-agarose+CpG给药系统可以保证CpG在淋巴结中特异性富集，而单独注射CpG溶液并没有靶向淋巴结的效果。
4.C-agarose+CpG给药体系在抗肿瘤转移治疗中的应用
建立小鼠黑色素瘤和乳腺癌模型，即取雌性C57BL/6和Balb/c小鼠各50只，体重16-18g，将小鼠随机分为五组，对照组，C-agarose+CpG组，C-agarose+错配寡聚核苷酸组，C-agarose组，裸CpG组。于C57BL/6小鼠右足跖部皮下注射B16F10细胞，建立黑色素瘤模型。于Balb/c小鼠腹部乳腺注射4T1细胞，建立乳腺癌模型。植瘤后一天、一周、三周，于小鼠皮下注射C-agarose+CpG组合物100μl(CpG 5mg/kg)三次，对肿瘤转移进行治疗，C-agarose+错配寡聚核苷酸组给等量的C-agarose+错配寡聚核苷酸，C-agarose组给等量的C-agarose，裸CpG组给等量的CpG，对照组不做处理。在植瘤两个月后处死小鼠，治疗结束时对小鼠肺部肿瘤结节数进行计数。
表二 两种肿瘤模型肺部肿瘤结节数
数据均以平均值±标准差的形式加以显示。*代表P≤0.05，与对照组相比。
如表二所示，对照组、C-agarose组、C-agarose+错配寡聚核苷酸组和CpG组的肺部肿瘤结节数相比于C-agarose+CpG组均显著增加。由此可见C-agarose+CpG给药系统可有效抑制肿瘤的转移。
Claims (3)
1.一种阳离子修饰的琼脂糖和核酸药物组合物，其特征是由阳离子修饰的琼脂糖和核酸药物组合构成，其中阳离子修饰的琼脂糖的结构式是其氨基修饰的方式是氨基为伯氨基或仲氨基或叔氨基，氨基化形式为单氨基化或多氨基化，连接方式和数量不受限制；核酸药物为质粒或小片段的DNA或RNA或DNA和RNA的杂合。
2.根据权利要求1所述阳离子修饰的琼脂糖和核酸药物组合物的制备方法，其特征是阳离子修饰的琼脂糖用生理盐水在微波炉中加热溶解，制得不同修饰度和不同浓度的琼脂糖溶液，然后根据需要加入不同量的核酸药物，恢复溶液温度至室温，即制得了不同浓度的荷载核酸药物的组合物。
3.根据权利要求1所述阳离子修饰的琼脂糖和核酸药物组合物在阻断肿瘤迁移中的应用。
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|---|---|---|---|---|
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| CN101331230A (zh) * | 2005-10-12 | 2008-12-24 | 癌症研究技术有限公司 | 用于治疗免疫失调的方法和组合物 |
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| CN105764525A (zh) * | 2013-09-19 | 2016-07-13 | 硕腾服务有限责任公司 | 油基佐剂 |
| US20180066074A1 (en) * | 2016-07-08 | 2018-03-08 | Arizona Board Of Regents On Behalf Of Arizona State University | Colorimetric Hydrogel Based Nanosensor for Detection of Therapeutic Levels of Ionizing Radiation |
-
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1798563A (zh) * | 2003-05-15 | 2006-07-05 | 独立行政法人科学技术振兴机构 | 免疫刺激剂 |
| CN101331230A (zh) * | 2005-10-12 | 2008-12-24 | 癌症研究技术有限公司 | 用于治疗免疫失调的方法和组合物 |
| CN105764525A (zh) * | 2013-09-19 | 2016-07-13 | 硕腾服务有限责任公司 | 油基佐剂 |
| CN104258416A (zh) * | 2014-09-25 | 2015-01-07 | 山东大学 | 基于寡聚核苷酸共递送药物和基因的纳米载体及制备方法 |
| US20180066074A1 (en) * | 2016-07-08 | 2018-03-08 | Arizona Board Of Regents On Behalf Of Arizona State University | Colorimetric Hydrogel Based Nanosensor for Detection of Therapeutic Levels of Ionizing Radiation |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 潘彦康等: "抗肿瘤缓释剂在肝癌介入治疗中的应用", 《中国组织工程研究与临床康复》 * |
| 项佳伟: "阳离子化明胶微球原位核酸给药系统研究", 《南京大学硕士学位论文》 * |
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