CN101190329B - 一种重组人p43蛋白的药物组合物及其在医药上的应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种治疗胃腺癌的药物组合物，它包含p43蛋白和药学上可接受的载体，所述药物组合物不包含紫杉醇。本发明的还提供了p43蛋白在治疗胃腺癌中的用途。

Description

一种重组人P43蛋白的药物组合物及其在医药上的应用

技术领域

本发明涉及一种治疗胃腺癌的药物组合物，更涉及包含p43蛋白的药物组合物以及在治疗胃腺癌中的用途。

背景技术

恶性肿瘤是威胁人类健康的大敌，医学界对恶性肿瘤的治疗主要采取杀死癌细胞为主的方法，即：手术、化疗、放疗等。这些方法在杀死癌细胞的同时也损伤正常细胞，并且容易使肿瘤细胞产生耐药性。因而，人们一直在探索一种能专一性地杀死肿瘤细胞且不损伤正常细胞，同时又不易使肿瘤产生耐药性的治癌方法。目前用于治疗肿瘤的新药层出不穷。近年来，随着分子生物学基因工程的研究水平的不断提高，人们逐渐关注运用基因工程药物治疗恶性肿瘤的方法。传统的肿瘤化疗方法大多为细胞毒性药物，在杀死肿瘤细胞的同时也对正常细胞造成损害，削弱人的体质。所以很多癌症晚期患者最后多因为无法承受治疗而致死亡。恶性肿瘤有一个共同的特性，那就是局部的细胞疯狂地、不受遏制地增殖，而维持这种增殖就意味着需要大量营养供应。在肿瘤形成的同时，瘤体的内部及周围会形成大量供应养分的血管。那么如果能切断这些供养“管道”，阻断肿瘤的营养来源，肿瘤也就会衰竭而死。

当前兴起的新生血管抑制疗法为彻底治疗肿瘤带来了曙光。研究发现肿瘤特别是实体瘤的生长需要大量的营养供应，在肿瘤周围会形成大量的新生血管。抗血管生成疗法主要是通过抑制快速异常增殖的血管内皮细胞的生长，特异性抑制肿瘤血管内皮细胞增殖生长，从而达到阻止肿瘤血管生成，使肿瘤毛细血管发生萎缩，切断肿瘤的营养供应，使肿瘤细胞凋亡，退化到最初的休眠状态，从而达到治疗癌症的目的。

经过近十年的不断努力，现在已发现了多种有希望成为肿瘤治疗药物的新生血管抑制剂。其中最具代表性的是人体内皮抑素(human endostatin)。有关内皮抑素(Endostatin)国际上首先报道是1997年1月Cell杂志上刊登了美国哈佛医学院福尔克曼(Folkman)研究小组的鼠内皮抑素基因的论文，发现两种药物(Angiostatin、Endostatin)可以消除老鼠体内恶性肿瘤，而且未再复发。这两种药物是以阻止为肿瘤提供营养的血管生长的方式治疗肿瘤的。当时引起了国际轰动，Endostatin迅速成为肿瘤治疗领域的研究热点。美国FDA在没有完成临床前研究的情况下特批30例对其它药物已无反应的晚期癌症病人于99年初用人血管抑素(Angiostatin)和鼠内皮抑素(Endostatin)混合基因工程针剂进行临床试验。美国临床肿瘤学会专家认为该药的出现是很有希望的迹象。目前，Endostatin已经通过了FDA的一期临床，目前正处于二期临床阶段。但由于Endostatin的溶解性较差，使得它的制备成本升高，同时在使用上也只能采用水针剂型，这使它的应用受到了很大的限制。

p43蛋白是哺乳类动物tRNA合成酶的辅助因子，一方面直接调节内皮细胞形成毛细血管的生理过程，另一方面通过改变微环境来抑制肿瘤血管的生成。p43蛋白的抗血管生成活性及抑制肿瘤生长作用已经在体外及动物实验获得证实。人基因重组p43蛋白显示出其被开发成新型治疗癌症药物的潜力，对抗多种原发性和转移性实体肿瘤均有效，并可与化疗和放疗协同治疗。

p43蛋白作为人体氨酰tRNA合成酶系的家族成员并且是内皮单核细胞激活肽的前体于1997年被Sophie Q等人发现。p43蛋白为单链蛋白，全长312个氨基酸，二级结构含有11个β片层。韩国Imagene公司对人p43蛋白的结构、生物活性进行了深入的研究，结果显示人p43蛋白可以抑制快速异常增殖的血管内皮细胞的生长，以及抑制鸡胚尿囊膜新生血管生成，这说明p43蛋白具有潜在的抗肿瘤作用。但是该蛋白究竟对哪几种实体瘤具有较高的抑瘤率，也就是该蛋白的抑瘤谱目前仍不清楚。

现有技术中并没有提出有效治疗胃腺癌的特效药，因此，急需一种能有效治疗的药物组合物。

发明内容

本发明的目的在于提供一种有效治疗胃腺癌的药物组合物。

本发明提供了一种治疗胃腺癌的药物组合物，它包含p43蛋白和药学上可接受的载体，所述药物组合物不包含紫杉醇。

在本发明的一个优选实例中，所述p43蛋白的含量为0.1-99.9％。

在本发明的一个优选实例中，所述p43蛋白的含量为5-95重量％。

在本发明的一个优选实例中，所述p43蛋白的含量为10-60重量％。

在本发明的一个优选实例中，所述p43蛋白的含量为20-40重量％。

在本发明的一个优选实例中，所述药学上可接受的载体选自生理盐水。

在本发明的一个优选实例中，所述药物组合物还包括人白蛋白。

在本发明的一个优选实例中，所述人白蛋白的含量为0.01-10重量％。

本发明还提供了p43蛋白在制备治疗胃腺癌的药物中的用途。

本发明的药物组合物对于治疗胃腺癌特别有效，而且没有副作用。

具体实施方式

本发明提供了一种治疗胃腺癌的药物组合物，它包括p43蛋白和药学上可接受的盐，所述药物组合物不包含紫杉醇。

所述p43蛋白是常规的，现有技术中已经公开了其制备方法和序列，具体参见US5641867和WO0195927，上述专利文献的所有内容以引用的方式全文插入于此。在本发明的一个优选实例中，所述p43蛋白由信谊药厂提供。

在本发明药物组合物中，所述p43蛋白的用量是常规，本领域的普通技术人员根据现有技术可以直接确定其具体用量。在本发明的一个优选实例中，所述p43蛋白的用量为0.1-99.9重量％，较好为5-95重量％，更好为10-60重量％，最好为20-40重量％。

在本发明中，所述药学上可接受的载体是常规的，本领域的普通技术人员根据现有技术可直接推导出哪些药学上可接受的载体可用于本发明中。在本发明的一个优选实例中，所述药学上可接受的载体选自生理盐水。所述药学上可接受的载体的用量通常为0.1-99.9重量％，较好为5-95重量％，更好为40-90重量％，最好为60-80重量％。

在本发明的药物组合物，还可以包含其它助剂，例如人白蛋白。在本发明的一个优选实例中，所述人白蛋白的用量为0.01-10重量％，较好为0.1-5重量％，更好为0.2-1重量％，最好为0.3重量％。

在本发明的药物组合物中，通常不包含紫杉醇。

所述药物组合物通常可制成任何合适的剂型，例如口服液、片剂、胶囊、口崩片、注射液等等。本领域的普通技术人员根据现有技术可以轻易地将上述药物组合物制成上述剂型。

所述p43蛋白的用量是常规的，本领域的普通技术人员技术根据现有技术可以直接得到其用量。通常，p43蛋白的用量为1-10mg/kg/天，较好为2-8mg/kg/天，更好为3-7mg/kg/天，最好为5mg/kg。

本发明另一方面还提供了p43蛋白在制备治疗胃腺癌的药物中的用途。

以下结合实施例具体描述本发明，但本发明的范围并没有局限于此。

实施例

实施例1

动物：

来源、种系、品系：BALB/cA裸小鼠，由中国科学院上海实验动物中心提供。

合格证编号：沪动合证字122号。

日龄：35-40天

体重：18-22g

性别：雌雄兼用

移植瘤：

人胃腺癌SGC-7901裸小鼠移植瘤由人胃腺癌SGC-7901细胞株接种于裸小鼠皮下而建立。细胞接种量为1-3×10⁶，接种形成移植瘤后再在裸小鼠体内传3代后使用。

实验方法：

取生长旺盛期的瘤组织剪切成1.5mm³左右，在无菌条件下，接种于裸小鼠右侧腋窝皮下。裸小鼠移植瘤用游标卡尺测量移植瘤直径，待肿瘤生长至100-300mm³后将动物随机分组。使用测量瘤径的方法，动态观察被试物抗肿瘤的效应。肿瘤直径的测量次数为每周3次，每次测量同时还需称鼠重。给药组每周静脉给药6次，阳性对照组每周静脉给药2次，阴性对照组同时给等量生理盐水。

肿瘤体积(tumor volume，TV)的计算公式为：

TV＝1/2×a×b²

其中a、b分别表示长宽。根据测量的结果计算出相对肿瘤体积(relativetumor volume，RTV)，计算公式为：RTV＝Vt/V0。其中V0为分笼给药时(即d0)测量所得肿瘤体积，Vt为每一次测量时的肿瘤体积。抗肿瘤活性的评价指标为相对肿瘤增殖率T/C(％)，计算公式如下：

$T/C(\%)=\frac{T_{\mathrm{RTV}}}{C_{\mathrm{RTV}}}\×100$

T_RTV：治疗组RTV；C_RTV：阴性对照组RTV。

将100mg p43蛋白(信谊药厂提供)溶解于生理盐水中，形成浓度为1mg/ml的溶液。

将所得溶液分别以2.5mg p43蛋白/kg鼠体重、5mg p43蛋白/kg鼠体重、10mgp43蛋白/kg鼠体重的剂量对裸小鼠静脉注射给药。具体结果如表1所示。

表1

d0：开始给药时间

d21：给药后第21天

由上表可知，p43对人胃腺癌SGC-7901的实验性治疗结果见表1和图1。p43对人胃腺癌SGC-7901裸小鼠移植瘤有明显的生长抑制作用。p432.5mg/kg、5mg/kg、10mg/kg剂量组对SGC-7901的T/C(％)分别为81.7、54.2、61.9，且实验组无明显毒副反应。

实施例2

动物：

来源、种系、品系：BALB/cA裸小鼠，由中国科学院上海实验动物中心提供。

合格证编号：沪动合证字122号。

日龄：35-40天

体重：18-22g

性别：雌雄兼用

每组动物数：阴性对照组10只，给药组5只。

移植瘤：

人胃腺癌SGC-7901裸小鼠移植瘤由人胃腺癌SGC-7901细胞株接种于裸小鼠皮下而建立。细胞接种量为1-3×10⁶，接种形成移植瘤后再在裸小鼠体内传3代后使用。

实验方法：

取生长旺盛期的瘤组织剪切成1.5mm³左右，在无菌条件下，接种于裸小鼠右侧腋窝皮下。裸小鼠移植瘤用游标卡尺测量移植瘤直径，待肿瘤生长至100-300mm³后将动物随机分组。使用测量瘤径的方法，动态观察被试物抗肿瘤的效应。肿瘤直径的测量次数为每周3次，每次测量同时还需称鼠重。给药组每周静脉给药6次，阳性对照组每周静脉给药2次，阴性对照组同时给等量生理盐水。

肿瘤体积(tumor volume，TV)的计算公式为：

TV＝1/2×a×b²

其中a、b分别表示长宽。根据测量的结果计算出相对肿瘤体积(relativetumor volume，RTV)，计算公式为：RTV＝Vt/V0。其中V0为分笼给药时(即d0)测量所得肿瘤体积，Vt为每一次测量时的肿瘤体积。抗肿瘤活性的评价指标为相对肿瘤增殖率T/C(％)，计算公式如下：

$T/C(\%)=\frac{T_{\mathrm{RTV}}}{C_{\mathrm{RTV}}}\×100$

T_RTV：治疗组RTV；C_RTV：阴性对照组RTV。

将100mg p43蛋白(信谊药厂提供)溶解于生理盐水中，形成浓度为1mg/ml的溶液。

将所得溶液分别以2.5mg p43蛋白/kg鼠体重、5mg p43蛋白/kg鼠体重、10mgp43蛋白/kg鼠体重的剂量对裸小鼠静脉注射给药。具体结果如表2所示。

表2

d0：开始给药时间

d21：给药后第21天

p43蛋白对人结肠癌HCT-116的实验性治疗结果见表3。p43对人结肠癌HCT-116裸小鼠移植瘤无明显的生长抑制作用。p43蛋白以2.5mg/kg、5mg/kg、10mg/kg剂量组对HCT-116的T/C(％)分别为84.5、76.0、79.7。实验组无明显毒副反应。

实施例3

动物：

来源、种系、品系：BALB/cA裸小鼠，由中国科学院上海实验动物中心提供。

合格证编号：沪动合证字122号。

日龄：35-40天

体重：18-22g

性别：雌雄兼用

每组动物数：阴性对照组10只，给药组5只。

移植瘤：

人胃腺癌SGC-7901裸小鼠移植瘤由人胃腺癌SGC-7901细胞株接种于裸小鼠皮下而建立。细胞接种量为1-3×10⁶，接种形成移植瘤后再在裸小鼠体内传3代后使用。

实验方法：

取生长旺盛期的瘤组织剪切成1.5mm³左右，在无菌条件下，接种于裸小鼠右侧腋窝皮下。裸小鼠移植瘤用游标卡尺测量移植瘤直径，待肿瘤生长至100-300mm³后将动物随机分组。使用测量瘤径的方法，动态观察被试物抗肿瘤的效应。肿瘤直径的测量次数为每周3次，每次测量同时还需称鼠重。给药组每周静脉给药6次，阳性对照组每周静脉给药2次，阴性对照组同时给等量生理盐水。

肿瘤体积(tumor volume，TV)的计算公式为：

TV＝1/2×a×b²

其中a、b分别表示长宽。根据测量的结果计算出相对肿瘤体积(relativetumor volume，RTV)，计算公式为：RTV＝Vt/V0。其中V0为分笼给药时(即d0)测量所得肿瘤体积，Vt为每一次测量时的肿瘤体积。抗肿瘤活性的评价指标为相对肿瘤增殖率T/C(％)，计算公式如下：

$T/C(\%)=\frac{T_{\mathrm{RTV}}}{C_{\mathrm{RTV}}}\×100$

T_RTV：治疗组RTV；C_RTV：阴性对照组RTV。

将100mg p43蛋白(信谊药厂提供)溶解于生理盐水中，形成浓度为1mg/ml的溶液。

将所得溶液分别以2.5mg p43蛋白/kg鼠体重、5mg p43蛋白/kg鼠体重、10mg p43蛋白/kg鼠体重的剂量对裸小鼠口服给药。具体结果如表3所示。

表3

d0：开始给药时间

d21：给药后第21天

p43对人鼻咽癌CNE-1的实验性治疗结果见表3。p43对人鼻咽癌CNE-1裸小鼠移植瘤无明显的生长抑制作用。p43以2.5mg/kg、5mg/kg、10mg/kg剂量组对CNE-1的T/C(％)分别为88.9、84.4、83.6。实验组无明显毒副反应。

Claims (8)

1.一种药物组合物在制备治疗胃腺癌的药物中的用途，它包含p43蛋白和药学上可接受的载体，所述药物组合物不包含紫杉醇。

2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于所述p43蛋白的含量为0.1-99.9％。

3.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于所述p43蛋白的含量为5-95重量％。

4.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于所述p43蛋白的含量为10-60重量％。

5.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于所述p43蛋白的含量为20-40重量％。

6.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于所述药学上可接受的载体选自生理盐水。

7.如权利要求1所述的药物组合物，它还包括人白蛋白。

8.如权利要求7所述的药物组合物，其特征在于所述人白蛋白的含量为0.01-10重量％。

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