CN108553458B - 一种抗肿瘤纳米药物 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种抗肿瘤纳米药物，该纳米药物的抗肿瘤活性成分主要以硫辛酸多聚体形式存在。本发明还公开了该纳米药物的制备方法及其应用。本发明的抗肿瘤纳米药物解决了传统化疗药物毒副作用大的问题。同时，其抗肿瘤活性成分还可与其他具有抗肿瘤活性的物质联合使用，以预定比例入胞，达到“1+1大于2”的协同抗肿瘤效果，具有广阔的应用前景。

Description

一种抗肿瘤纳米药物
技术领域
本发明属于生物材料领域，具体涉及一种抗肿瘤纳米药物。
技术背景
癌症是一类严重危害人类健康的常见、多发性重大疾病，其死亡率占人类疾病总体死亡率的第二位。化疗是癌症治疗的重要手段，然而传统化疗药物易引起肝肾功能受损、骨髓抑制、人体免疫力降低等毒副作用，因此开发具有抗肿瘤活性但对正常组织无毒或低毒的新型化疗药物能很好地解决传统化疗药物面临的问题。
(R)-(+)-硫辛酸 [(R)-(+)-Lipoic Acid，简称LA]是硫辛酸合成酶在线粒体内合成的一类B族维生素，其具有稳定血糖、强化肝功、缓解疲劳、美容养颜以及抗衰老等功效。此外，研究发现大剂量的LA还具有一定的抗肿瘤作用，而在相同剂量下对正常细胞无毒，因此LA作为天然抗肿瘤活性物质具有极好的应用前景。但由于小分子LA兼具亲水性和亲脂性，进入体内后可到达任意部位且易被快速清除，导致其用量大、疗效差。联合用药可提高LA的治疗效果，但与其他小分子药物联用时，各种药物无法以预定比例入胞，难以达到“1+1大于2”的效果。
发明内容
本发明针对上述问题，开发了一种新型抗肿瘤纳米药物。该纳米药物将(R)-(+)-硫辛酸制备成硫辛酸多聚体负载于纳米药物载体或直接将硫辛酸多聚体制备成纳米粒子,在显著提高(R)-(+)-硫辛酸单体抗肿瘤效果的同时避免了传统化疗药物毒副作用大的问题。此外，该抗肿瘤活性成分硫辛酸多聚体还可与其他具有抗肿瘤活性的物质联合使用，以预定比例入胞，达到“1+1大于2”的协同抗肿瘤效果，进一步提高了纳米药物的疗效。
本发明通过以下技术方案来实现：
一种抗肿瘤纳米药物，其发挥抗肿瘤活性的成分主要以硫辛酸多聚体形式存在。
作为可选方式，该纳米药物存在的形式可为脂质体、树状分子、聚合物胶束、囊泡、聚集体等。
作为可选方式，在上述抗肿瘤纳米药物中，所述硫辛酸多聚体中含有R型手性结构。
作为可选方式，在上述抗肿瘤纳米药物中，所述硫辛酸多聚体主要由(R)-(+)-硫辛酸或其药学上可接受的盐构筑。
作为可选方式，在上述抗肿瘤纳米药物中，所述硫辛酸多聚体由(R)-(+)-硫辛酸或其药学上可接受的盐构筑。
作为可选方式，在上述抗肿瘤纳米药物中，所述硫辛酸多聚体的结构式如下：
Figure 36328DEST_PATH_IMAGE001
其中，n≥2，R为羟基或通过酯键/酰胺键连接的官能基团或为O- M+结构（M+为金属离子）。
作为可选方式，在上述抗肿瘤纳米药物中，所述硫辛酸多聚体的存在形式为链状聚合物、胶束、囊泡、聚集体中的至少一种。
作为可选方式，在上述抗肿瘤纳米药物中，所述硫辛酸多聚体由硫辛酸自身或通过模板分子辅助制备得到。
作为可选方式，在上述抗肿瘤纳米药物中，所述硫辛酸多聚体能够与其它具有抗肿瘤活性的物质联合使用。
作为可选方式，在上述抗肿瘤纳米药物中，所述硫辛酸多聚体能够与其它具有抗肿瘤活性的物质协同抗肿瘤，起到“1 + 1大于2”的效果。
作为可选方式，在上述抗肿瘤纳米药物中，所述其它具有抗肿瘤活性的物质为任何能与所述硫辛酸多聚体产生协同抗肿瘤作用的物质。具体包括：传统化疗小分子药物，如喜树碱、羟基脲、匹杉琼、盐酸阿霉素、盐酸吉西他滨、阿糖胞苷等；天然具有抗肿瘤活性物质，如花青素、白藜芦醇、姜黄素、番茄素、茶多酚、虾青素等。
作为可选方式，在上述抗肿瘤纳米药物中，所述硫辛酸多聚体可物理负载或通过化学成键连接于纳米载体中。所述纳米药物载体为脂质体、树状分子、聚合物胶束、囊泡、聚集体、硫辛酸多聚体等。
作为可选方式，在上述抗肿瘤纳米药物中，所述硫辛酸多聚体同时还起到纳米载体的作用。所述硫辛酸链状聚合物、胶束、囊泡或聚集体可直接用于抗肿瘤。
作为可选方式，在上述抗肿瘤纳米药物中，所述硫辛酸多聚体可物理负载或通过化学成键连接于纳米药物载体上，同时纳米药物载体负载其他抗肿瘤活性成分，二者协同抗肿瘤；或所述硫辛酸多聚体直接用于负载其他具有抗肿瘤活性的物质，二者协同抗肿瘤。
作为可选方式，在上述抗肿瘤纳米药物中，所述硫辛酸多聚体物理负载在树状分子纳米载体中，用于抗肿瘤。
作为可选方式，在上述抗肿瘤纳米药物中，所述硫辛酸多聚体物理包载于脂质体纳米载体中，用于抗肿瘤。
作为可选方式，在上述抗肿瘤纳米药物中，所述硫辛酸多聚体物理包载于脂质体纳米载体中，同时脂质体负载疏水的天然抗肿瘤活性物质－姜黄素。
作为可选方式，在上述抗肿瘤纳米药物中，所述硫辛酸多聚体物理包载于脂质体纳米载体中，同时脂质体负载亲水的化疗药物－盐酸吉西他滨。
作为可选方式，在上述抗肿瘤纳米药物中，所述硫辛酸多聚体物理包载于脂质体纳米载体中，同时脂质体负载亲水的天然抗肿瘤活性物质－白藜芦醇。
作为可选方式，在上述抗肿瘤纳米药物中，所述硫辛酸链状聚合物、胶束、囊泡、聚集体等形式的多聚体通过物理包载或化学成键的方式负载其它具有抗肿瘤活性的物质。
作为可选方式，在上述抗肿瘤纳米药物中，所述硫辛酸胶束多聚体共价接连亲水化疗药物－阿糖胞苷，同时物理负载疏水的天然抗肿瘤活性物质－花青素。
作为可选方式，在上述抗肿瘤纳米药物中，所述硫辛酸囊泡多聚体物理负载亲水化疗药物－羟基脲。
作为可选方式，在上述抗肿瘤纳米药物中，所述硫辛酸囊泡多聚体共价接连亲水化疗药物－阿糖胞苷，同时物理负载亲水化疗药物－羟基脲。
作为可选方式，在上述抗肿瘤纳米药物中，先将LA与其它具有抗肿瘤活性的物质进行化学连接，再将所得连接物构筑成链状聚合物、胶束、囊泡、聚集体等形式的多聚体。
作为可选方式，在上述抗肿瘤纳米药物中，LA直接共价接连亲水药物－羟基脲，用于直接形成胶束，进一步通过硫辛酸交联形成稳定纳米粒子。
作为可选方式，在上述抗肿瘤纳米药物中，将LA与其它具有抗肿瘤活性的物质物理混合共同构筑成链状聚合物、胶束、囊泡、聚集体等形式的多聚体。
作为可选方式，在上述抗肿瘤纳米药物中，LA直接与化疗药物－喜树碱和天然抗肿瘤活性物质－花青素形成聚集体，进一步通过硫辛酸交联形成稳定纳米粒子。
本发明还提供了一种硫辛酸多聚体的应用，其特征在于，将其用于制备上述的抗肿瘤纳米药物。
本说明书中公开的所有特征，或公开的所有方法或过程中的步骤，除了互相排斥的特征和/或步骤以外，均可以以任何方式组合。
本发明的有益效果
本发明所述纳米药物选用无毒的硫辛酸多聚体作为抗肿瘤活性成分，避免了传统化疗药物带来的毒副作用，同时克服了小分子药物的固有缺陷，进入血液循环后不易被清除，靶向性好，因此与硫辛酸单体相比，能够明显提高抗肿瘤活性。当硫辛酸多聚体与其它具有抗肿瘤活性的物质联合使用时，还能以预定比例入胞，与几种药物简单混合相比，联合用药的比例可控，达到“1+1大于2”的协同抗肿瘤效果，进一步提高纳米药物的疗效。
附图说明
图1为实施例1中硫辛酸多聚体示意图；
图2为实施例1中硫辛酸胶束、囊泡及聚集体的表征结果图，其中a）为DLS尺寸图，b）和c）分别为硫辛酸囊泡和硫辛酸聚集体包载荧光桃红B过凝胶柱后，Triton X-100加入前后荧光桃红B的荧光强度变化图；
图3为实施例2中硫辛酸胶束的抗肿瘤机制研究结果图，其中a）为硫辛酸胶束对人结肠癌细胞（SW480）的毒性检测结果，b）为不同材料作用后细胞线粒体内相对O2 -.水平，c）为不同材料作用后线粒体膜电位损失百分比，d）为不同材料作用后细胞内相对Caspase-3激活量；
图4为实施例3中硫辛酸胶束和硫辛酸单体的细胞毒性检测结果；
图5为实施例4中纳米药物I和纳米药物Ⅱ的细胞毒性检测结果；
图6为实施例5中硫辛酸胶束对正常细胞毒性检测结果，其中a）为对人肾上皮细胞（293T）的毒性检测结果，b）为对鼠成纤维细胞（3T3）的毒性检测结果；
图7为实施例5中硫辛酸胶束的溶血和凝血性能评估，其中a）为溶血率，b）为凝血性；
图8为实施例5中小鼠体重变化；
图9为实施例6中硫辛酸胶束和传统化疗药物分子对人牙龈成纤维细胞（HGF）的毒性评估，其中a）为硫辛酸胶束，b）为盐酸吉西他滨和盐酸阿霉素；
图10为实施例6中三种纳米药物对人牙龈成纤维细胞（HGF）的毒性评估，其中a）为纳米药物Ⅲ，b）为纳米药物IV和纳米药物V；
图11为实施例7中硫辛酸胶束和硫辛酸单体分别与姜黄素共同负载于脂质体中，制备得到的纳米药物毒性评估，其中a）为细胞毒性，b）为协同指数；
图12为实施例8中硫辛酸胶束共价接连阿糖胞苷及其联合抗肿瘤研究结果，其中a）为细胞毒性检测结果，b）为协同指数；
图13为实施例9中硫辛酸共价接连羟基脲并制备成纳米药物及其联合抗肿瘤研究结果，其中a）为细胞毒性，b）为协同指数；
图14为实施例10中硫辛酸、花青素和番茄素直接制备成纳米粒子及其联合抗肿瘤研究结果，其中a）为细胞毒性，b）为协同指数；
图15为实施例11中硫辛酸囊泡物理负载羟基脲及其联合抗肿瘤研究结果，其中a）为细胞毒性，b）为协同指数；
图16为实施例12中羟基脲和硫辛酸囊泡协同抗肿瘤结果，其中a）为材料作用细胞后线粒体内相对O2 -.水平，b）为细胞线粒体膜电位的损失百分比，c）为相对激活caspase-3的百分比；
图17为实施例13中纳米药物的体内抗肿瘤评估，其中a）为小鼠肿瘤体积变化，b）为小鼠体重变化，c）为小鼠存活率，d）为药物体内协同抗肿瘤的联合指数（Q）；
图18为本发明所述抗肿瘤纳米药物的结构示意图。
具体实施方式
以下通过实施例的具体实施方式再对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应当将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。在不脱离本发明的精神和原则之内做的任何修改，以及根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的等同替换或者改进，均应包括在本发明的保护范围内。以下实施例中所用原料均可以从市场上购得，实施例中所涉及的硫辛酸单体，如无特殊说明均为(R)-(+)-硫辛酸。实施例中所涉及的百分比，如无特殊说明均为重量百分比。
实施例1
硫辛酸多聚体的制备。
硫辛酸多聚体可以硫辛酸胶束、硫辛酸囊泡和硫辛酸聚集体形式存在，如图1所示。
1、硫辛酸胶束（Cross-linked lipoic acid micelles, c-LAMs）的制备：
将100 mg 硫辛酸（LA）加入50 ml去离子水中，搅拌下逐滴加入1 M的NaOH水溶液直至硫辛酸完全溶解，再用1 M的HCl溶液滴至溶液中性，最后将溶液冻干，得到淡黄色的硫辛酸钠粉末。称取41.2 mg（0.2 mol）硫辛酸钠，溶解在1 ml去离子水中，超声后制备得到尺寸约为15 nm的纳米粒子。将上述所得纳米粒子通过365 nm紫外光照引发硫辛酸二硫键自交联，反应2.5 h，透析48 h后得到尺寸约15 nm的交联硫辛酸胶束（Cross-linked lipoicacid micelles, c-LAMs），如图2a所示。
2、硫辛酸囊泡（Cross-linked Lipoic acid vesicles, c-LAVs）制备：
将122.6 mg 硫辛酸（0.6 mmol）和25.8 mg 模板分子1,4,7-三氮杂壬烷（0.2mmol）溶于1 ml N,N-二甲基甲酰胺（DMF），制备得到浓度为0.2 M的前驱液，将其放置在振荡器上振荡2 h，形成超两亲分子母液。取50 μl母液在超声条件下加入到5 ml去离子水中制备得到由硫辛酸和1,4,7-三氮杂壬烷构筑的囊泡纳米粒子。DLS检测其尺寸在220 nm左右。
以上囊泡结构通过荧光桃红B泄漏实验确定。具体如下：取50 μl 超两亲分子母液在超声条件下加入到5 ml 浓度为0.5 mg/ml的荧光桃红B水溶液中，制备得到含荧光桃红B的纳米粒子溶液。所得溶液通过凝胶柱分离收集有丁达尔现象的色带。取2 ml该收集液，向其中加入40 μl 10%的Triton X-100溶液，监测纳米粒子加入Triton X-100前后荧光桃红B的荧光强度变化。如图2c所示，发现 Triton X-100加入前，荧光桃红B荧光强度很低，而加入后荧光强度很高。这主要是由于纳米粒子包载了大量的亲水荧光桃红B，荧光桃红B在高浓度时发生荧光聚集淬灭，因此其荧光强度很低，而Triton X-100的加入破坏了纳米的结构，使得包载的荧光桃红B释放出来，从而释放出荧光。证明其为囊泡。
将以上制备的囊泡纳米粒子通过365 nm紫外光照引发硫辛酸二硫键自交联，反应2.5 h后，调节溶液pH值至碱性，二氯甲烷萃取，除去溶液中的1,4,7-三氮杂壬烷，之后再次将溶液pH值调回中性，透析48 h后，最终得到尺寸约为220 nm的交联硫辛酸囊泡（Cross-linked Lipoic acid vesicles, c-LAVs），如图2b所示。
3、硫辛酸聚集体（Cross-linked Lipoic Acid Nanoparticles, c-LANPs）制备：
将41.2 mg 硫辛酸溶于1 ml DMF中，在振荡器上振荡2 h后得到0.2 M的硫辛酸母液。取50 μl该母液在超声条件下加入到5 ml去离子水中制备得到尺寸约为80 nm的硫辛酸纳米粒子。将上述所得纳米粒子通过365 nm紫外光照引发硫辛酸二硫键自交联，反应2.5h，透析后得到尺寸约75 nm左右的交联硫辛酸聚集体纳米粒子（Cross-linked LipoicAcid Nanoparticles, c-LANPs），结果如图2a所示。
以上聚集体结构通过荧光桃红B泄漏实验确定。具体如下：取50 μl 硫辛酸母液在超声条件下加入到5 ml 浓度为0.5 mg/ml的荧光桃红B水溶液中，制备得到含荧光桃红B的纳米粒子溶液。所得溶液通过凝胶柱分离收集有丁达尔现象的溶液。取2 ml该收集液，向其中加入40 μl 10%的Triton X-100溶液，监测纳米粒子加入Triton X-100前后荧光桃红B的荧光强度变化。如图2d所示，发现纳米粒子结构破坏前后荧光桃红B荧光强度无明显变化，结合其尺寸较大的特点，判断该纳米粒子以聚集体形式存在。
实施例2
硫辛酸多聚体抗肿瘤机制研究。
选择交联硫辛酸胶束（c-LAMs）为例，研究硫辛酸多聚体的抗肿瘤活性机制。
1、细胞毒性评估：
选择处于对数生长活跃期的人结肠癌细胞（SW480），接种于96孔板，培养24 h后，再分别向其中加入不同浓度的LA和c-LAMs，设置不同浓度梯度，每个浓度设置5个平行样，并设置对照组。继续培养48 h后，移去培养基后，加入100 μl含有10%（v/v）MTT的培养基继续孵育2 h后吸去旧的培养基，再每孔加入150 μl的DMSO，并在振荡器上振荡2 min，最后用酶标仪测定490 nm处的吸光值，计算细胞存活率，其结果如图3a所示。实验结果发现，c-LAMs对肿瘤细胞SW480有一定的细胞毒性，且相对于LA有更好的抗肿瘤活性。
2、抗肿瘤机制研究：
研究表明(R)-(+)-硫辛酸（LA）进入肿瘤细胞后，在还原型谷胱甘肽（Glutathione，GSH）和硫氧还蛋白还原酶（Thioredoxinreductase，TrxR）的作用下部分还原为二氢硫辛酸（Dihydrolipoic acid，DHLA）。其中LA可直接氧化线粒体膜渗透性转换孔（mitochondrial permeablity transition pore, mPTP）上蛋白的巯基，DHLA通过产生的超氧阴离子自由基（O2 -·）也可间接氧化mPTP上蛋白的巯基，二者共同作用造成线粒体膜通透性改变，导致细胞凋亡诱导因子（Apoptosis Inducing Factor, AIF）从线粒体内释放，进入细胞核引起核内DNA凝集，诱导细胞凋亡；同时从线粒体内释放的细胞色素C，可刺激促凋亡蛋白（Caspase-9, Caspase-3）表达量升高，诱导细胞凋亡。此外，DHLA产生的超氧阴离子自由基（O2 -·）还可降低抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-XL的表达量，进一步引起促凋亡蛋白（Caspase-9, Caspase-3）表达量升高，诱导细胞凋亡。
由于c-LAMs是由LA构筑，一方面，二者具有相同的二硫键结构；另一方面，在细胞内还原型谷胱甘肽（Glutathione，GSH）和硫氧还蛋白还原酶（Thioredoxinreductase，TrxR）作用下，c-LAMs与LA的还原产物同样为二氢硫辛酸。基于相同的胞内转化方式，本发明依照LA抗肿瘤机制的检查节点，设计了一系列实验验证c-LAMs的抗肿瘤机理。研究结果表明，c-LAMs能在细胞线粒体内产生超氧阴离子，刺激线粒体膜渗透性转换孔开放从而引起膜电位降低，进一步释放线粒体内的细胞色素C于细胞质内，从而调控Caspase-3依赖的细胞凋亡途径，诱导细胞发生凋亡，且抗肿瘤活性相对于LA有一定的增强。具体实验如下：
线粒体内超氧阴离子（O2 -.）测定：取对数生长活跃期的SW480细胞，制备成细胞悬浮液并加入6孔板中，每孔细胞约5×105个。孵育24 h后，分别加入1 mM的c-LAMs和LA，并设置不加任何材料的空白对照组。孵育4 h后，移除旧的培养基，加入1 ml浓度为50 μM的荧光胺染料，孵育2 h后加入半胱氨酸使其最终浓度为200 μM，孵育0.5 h后，吸除旧的培养基，用Krebs缓冲液清洗3次，再加入线粒体红染料进行线粒体染色30 min后，采用37 ℃的培养基洗3次。最后通过激光共聚焦检测荧光胺在440-480 nm处的发射来定量O2 -.，检测线粒体红染料在590-650 nm处的发射来定位细胞内的线粒体。实验结果如图3b所示，c-LAMs和LA都能诱导细胞线粒体内产生O2 -.，且c-LAMs相对于LA在相同浓度下能更强地诱导产生O2 -.。
线粒体膜电位检测：取对数生长期活跃期的SW480细胞，制备成细胞悬浮液并加入6孔板中，每孔细胞约1×105个。孵育24 h后，分别加入1 mM的LA和c-LAMs，并设置不加任何材料的空白对照组。孵育24 h后，吸除旧的培养基，收集各组细胞并离心得到纯细胞。在收集到的细胞内加入1 ml线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1）工作液，充分混匀后培养箱内孵育20 min，然后4 ℃离心，除去线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1）工作液，在冰上用JC-1染色缓冲液（1x）洗涤2次，最后加入500 μl染色缓冲液分散得到细胞悬浮液，用流式细胞仪检测细胞膜电位的变化。结果如图3c所示，c-LAMs和LA都能引起线粒体的膜电位降低，且c-LAMs相对于LA在相同浓度下能更强地诱导线粒体膜电位降低。
细胞色素C释放检测：取对数生长活跃期的SW480细胞，制备成细胞悬浮液并加入6孔板中，每孔细胞约1×105个。孵育24 h后，分别加入1 mM的c-LAMs和LA，并设置不加任何材料的空白对照组。孵育4 h后，移除旧的培养基，收集细胞。将收集到的细胞在4 ℃条件下1200 rpm离心5 min，小心吸除上清液。再用冷的PBS洗涤细胞2次，每次尽可能吸尽上清液。在收集得到的细胞内加入100 μl含1 mM苯甲基磺酰氟（PMSF，蛋白酶抑制剂）的细胞裂解液，置于冰上30 min，每5 min涡旋振荡一次。于4 ℃条件下12000 rpm离心60 min，快速收集上清液于另一干净离心管中，取20 μl上清液，采用western blot分析细胞质内细胞色素C的含量。结果表明c-LAMs相对于LA能更强地诱导细胞色素C释放到细胞质内。
Caspase-3活力检测：取对数生长活跃期的SW480细胞，制备成细胞悬浮液并加入6孔板中，每孔细胞约1×105个。孵育24 h后，分别加入1 mM的c-LAMs和LA，并设置不加任何材料的空白对照组。孵育4 h后，移除旧的培养基，收集细胞。将收集到的细胞在4 ℃条件下1200 rpm离心5 min，小心吸除上清液。再用冷的PBS洗涤细胞2次，每次尽可能吸尽上清液。在收集得到的细胞内加入100 μl含1 mM苯甲基磺酰氟（PMSF，蛋白酶抑制剂）的细胞裂解液，置于冰上30 min，每5 min涡旋振荡一次。于4 ℃条件下12000 rpm离心60 min，快速收集上清液于另一干净离心管中，取20 μl上清液，用Caspase-3活力检测试剂盒进行检测，通过酶标仪测定A405 nm或A400 nm处的吸光值，根据材料组细胞与空白对照组细胞的吸光度比值，计算相对的Caspase-3的活性程度。实验结果如图3d所示，c-LAMs和LA都能刺激Caspase-3相对活力升高，且c-LAMs比LA能更强地激活Caspase-3诱导细胞凋亡。
在上述抗肿瘤机制研究方法中分别将硫辛酸胶束换成硫辛酸囊泡和聚集体，得到了相同的结果。
实施例3
硫辛酸多聚体与LA抗肿瘤活性评估。
选择硫辛酸胶束（c-LAMs）为例，评估硫辛酸多聚体与LA的抗肿瘤活性。
选择处于对数生长活跃期的人肝癌细胞（HepG2），分别接种于96孔板，培养24 h后，分别加入c-LAMs和LA。两种材料设置不同浓度梯度，每个浓度设置5个平行样，并设置对照组。培养72 h后，吸去旧的培养基，每孔加入100 μl含有10%（v/v）MTT的培养基，孵育2 h后吸去旧的培养基，每孔再加入150 μl DMSO，振荡器上振荡2 min后用酶标仪测定490 nm处的吸光值，计算细胞存活率，实验结果如图4所示，c-LAMs比LA具有更优的抗肿瘤活性，原因可能是c-LAMs以纳米粒子形式进入细胞，相对于LA，细胞内局部浓度较高，因此表现出较好的抗肿瘤效果。
在本实施例中，将所述的硫辛酸胶束换成硫辛酸囊泡或硫辛酸聚集体，得到了相同的结果。
实施例4
硫辛酸多聚体与LA分别负载于脂质体内，进行抗肿瘤活性评估。
选择硫辛酸胶束（c-LAMs）为例，与LA分别物理负载于脂质体内，制备得到两种纳米药物I和II，并进行抗肿瘤活性评估。
1、纳米药物I和II的制备：
将10 mg c-LAMs和10 mg LA分别溶于20 ml 去离子水中，再各自加入10 mg 脂质体，超声2 min后得到澄清透明溶液，脂质体挤压器过400 nm聚碳酯膜，各3次，再分别装入2KD透析袋，透析48h后冻干得到两种纳米药物。c-LAMs物理负载在脂质体内为纳米药物I，LA物理负载在脂质体内为纳米药物II。
2、纳米药物I和II的抗肿瘤效果评估：
选择处于对数生长活跃期的人肝癌细胞（HepG2），分别接种于96孔板，培养24 h后，分别加入纳米药物I和II。两种材料设置不同浓度梯度，每个浓度设置5个平行样，并设置对照组。培养72 h后，吸去旧的培养基，每孔加入100 μl含有10%（v/v）MTT的培养基，孵育2 h后吸去旧的培养基，每孔再加入150 μl DMSO，振荡器上振荡2 min后用酶标仪测定490nm处的吸光值，计算细胞存活率。实验结果如图5所示，纳米药物I比纳米药物II有更好的抗肿瘤活性。
在本实施例中，将所述的硫辛酸胶束换成硫辛酸囊泡或硫辛酸聚集体，得到了相同的结果。
实施例5
硫辛酸多聚体对正常细胞/机体毒性评估。
以硫辛酸胶束（c-LAMs）为例，评估硫辛酸多聚体对正常细胞/机体毒性。
正常细胞毒性：选择对数生长期的人肾上皮细胞（293T）和小鼠成纤维细胞（3T3），分别接种于96孔板，培养24 h后，分别加入c-LAMs，设置不同浓度梯度，每个浓度设置5个平行样，并设置对照组。培养48 h后，吸去旧的培养基，每孔加入100 μl含有10%（v/v）MTT的培养基，孵育2 h后吸去旧的培养基，每孔再加入150 μl DMSO，振荡器上振荡2 min后用酶标仪测定490 nm处的吸光值，计算细胞存活率。实验结果如图6所示，c-LAMs在一定浓度条件下对正常细胞293T和3T3无毒。
溶血评估：通过眼窝取血，收集正常小鼠新鲜血液3 ml，并加入12 ml生理盐水，4℃离心收集红细胞，将收集到的红细胞用生理盐水洗涤3次，制备成10%（v/v）的红细胞悬浮液。取50 μl 10%红细胞悬浮液于1.5 ml EP管中，共取7组，其中5组分别加入950 μl不同浓度的c-LAMs 生理盐水溶液，使其最终为30 mg/ml、20 mg/ml、10 mg/ml、5 mg/ml和1mg/ml，另外2组各自加入950 μl生理盐水和去离子水，分别作为阴性对照组作为阳性对照组。将上述样本在培养箱中孵育2 h后离心，每组取150 μl上清液于96孔板中，通过酶标仪检测452nm处的吸光值，用公式（1）计算溶血率。
Hemolysis ratio % = (Asample -Anegative)/(Apositive -Anegative)×100 （1）
其中Asample为材料组的吸光值，Anegative为阴性对照组的吸光值，Apositive为阳性对照组的吸光值。实验结果如图7a所示，当材料浓度升高，溶血率也相应升高，直到c-LAMs达到饱和浓度时，溶血率仍低于5%（小于5%视为正常），因此说明c-LAMs无溶血性。
凝血评估：配置浓度为2%的红细胞悬浮液，分别取50 μl细胞悬浮液于6孔板中，分别加入不同浓度的c-LAMs溶液，使其最终浓度分别为30 mg/ml、20 mg/ml、10 mg/ml、5 mg/ml和1mg/ml。室温放置2 h后，倒置荧光显微镜观察是否有凝血现象。实验结果如图7b所示，c-LAMs即使在高浓度的情况下，也无明显的凝血现象。
小鼠急毒性评估：15只四周龄的BALB/c小鼠（20 g/只），随机分为3组，每组5只，分别为空白对照组、生理盐水组以及c-LAMs组。通过尾静脉向c-LAMs组注射大剂量的c-LAMs（200 mg/kg）,同时向生理盐水组注射等体积的生理盐水，空白对照组不做任何处理。每2天监测1次小鼠的体重变化，给药两周后，通过眼窝取血收集小鼠血液，各组血液样本进行血常规检查和肝肾功能检查。实验结果如图8所示，c-LAMs组在大剂量给药后,小鼠体重仍保持正常，且小鼠血液和肝肾功能正常，与生理盐水组和空白组结果一致。
通过上述实验可证明c-LAMs对正常细胞及机体几乎无毒性作用，同时也有很好的生物相容性。
在本实施例中，将所述的硫辛酸胶束换成硫辛酸囊泡或硫辛酸聚集体，得到了相同的结果。
实施例6
硫辛酸多聚体和传统化疗药物对正常细胞的毒性评估。
选择硫辛酸胶束（c-LAMs）为例，对比传统化疗药物盐酸吉西他滨（Gem·HCl）和盐酸阿霉素（DOX·HCl）对正常细胞的毒性。
1、c-LAMs、Gem·HCl和DOX·HCl对正常细胞的毒性评估：
选择对数生长期活跃期的人牙龈成纤维细胞（HGF），接种于96孔板，培养24 h后，分别加入c-LAMs、Gem·HCl和DOX·HCl，设置不同浓度梯度，每个浓度设置5个平行样，并设置对照组。培养48 h后，吸去旧的培养基，每孔加入100 μl含有10%（v/v）MTT的培养基，孵育2 h后吸去旧的培养基，每孔再加入150 μl DMSO，振荡器上振荡2 min后用酶标仪测定490nm处的吸光值，计算细胞存活率。实验结果如图9所示，c-LAMs在较高剂量下对正常细胞无毒，而Gem·HCl和DOX·HCl在很低剂量下就能杀死正常细胞。
2、c-LAMs、Gem·HCl和DOX·HCl分别物理负载于脂质体内，制备成三种纳米药物，分别为纳米药物III、纳米药物IV和纳米药物V，并评估其对正常细胞的毒性：
选择对数生长活跃期的人牙龈成纤维细胞（HGF），接种于96孔板，培养24 h后，分别加入纳米药物III、纳米药物IV和纳米药物V。设置不同浓度梯度，每个浓度设置5个平行样，并设置对照组。培养48 h后，吸去旧的培养基，每孔加入100 μl含有10%（v/v）MTT的培养基，孵育2 h后吸去旧的培养基，每孔再加入150 μl DMSO，振荡器上振荡2 min后用酶标仪测定490 nm处的吸光值，计算细胞存活率。实验结果如图10所示，纳米药物III在高浓度时对正常细胞无毒，而纳米药物IV和V即使在较低浓度时对正常细胞的毒性都很大。
在本实施例中，将所述的硫辛酸胶束换成硫辛酸囊泡或硫辛酸聚集体，得到了相同的结果。
实施例7
c-LAMs和LA分别与疏水天然抗肿瘤活性物质姜黄素共同负载于脂质体中，制备得到两种纳米药物VI和VII，并进行协同抗肿瘤评估。
1、纳米药物VI和VII的制备：
将5 mg c-LAMs和5 mg LA分别溶于20 ml 去离子水中，再各自加入10 mg 脂质体，超声2 min后得到澄清透明溶液，脂质体挤压器过400 nm聚碳酯膜，各3次，得到分别包载c-LAMs和 LA的脂质体。将5 mg姜黄素溶于200 μl 二甲基亚砜（DMSO），再分别加入上述得到的脂质体，60℃水浴中振摇20 min后装入2 KD透析袋，透析48h后冻干得到两种纳米药物。其中c-LAMs和姜黄素物理负载于脂质体内为纳米药物VI，LA和姜黄素物理负载于脂质体内为纳米药物VII。
2、纳米药物VI和VII的联合抗肿瘤研究：
选择处于对数生长活跃期的人肝癌细胞（HepG2），接种于96孔板，培养24 h后，分别加入c-LAMs、LA、姜黄素、以及本实施例制备的纳米药物VI和VII。设置不同浓度梯度，每个浓度设置5个平行样，并设置对照组。培养72 h后，吸去旧的培养基，每孔加入100 μl含有10%（v/v）MTT的培养基，孵育2 h后吸去旧的培养基，每孔再加入150 μl DMSO，振荡器上振荡2 min后用酶标仪测定490 nm处的吸光值，计算细胞存活率。通过Chou-Talalay 联合指数公式计算出两种纳米药物的协同指数（Combination Index, CI），当CI<1表示协同，CI=1表示相加，CI>1表示拮抗。实验结果如图11所示，两种药物联用有较好的协同抗肿瘤效果，且纳米药物VI比VII有更好的协同效果，可能原因是c-LAMs比LA有更好的抗肿瘤效果，从而与姜黄素联合抗肿瘤表现出更好的协同效果。
实施例8
c-LAMs共价接连亲水化疗药物阿糖胞苷，并进行协同抗肿瘤评估。
1、纳米药物的制备：
取适量c-LAMs水溶液，加入1.2当量的1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDCI）和1.2当量N-羟基琥珀酰亚胺（NHS），待反应2 h后，加入1当量的阿糖胞苷，继续反应24 h后将反应液装入2 KD透析袋透析48 h，透析液冻干得到纳米药物。
2、纳米药物联合抗肿瘤研究：
选择处于对数生长活跃期的SW480细胞，接种于96孔板，培养24 h后，分别加入阿糖胞苷、c-LAMs、LA、阿糖胞苷+ c-LAMs、阿糖胞苷+ LA和本实施例制备的纳米药物。设置不同浓度梯度，每个浓度设置5个平行样，并设置对照组。培养48 h后，吸去旧的培养基，每孔加入100 μl含有10%（v/v）MTT的培养基，孵育2 h后吸去旧的培养基，每孔再加入150 μlDMSO，振荡器上振荡2 min后用酶标仪测定490 nm处的吸光值，计算细胞存活率。计算阿糖胞苷+ c-LAMs、阿糖胞苷+ LA和本实施例制备的纳米药物的CI值。实验结果如图12所示，两药联用能增加药物的毒性，其中阿糖胞苷+ c-LAMs、阿糖胞苷+ LA都有一定的协同功效，但本实施例制备的纳米药物协同抗肿瘤效果最好，主要是由于纳米药物中两药能以预定比例入胞，从而表现出较好的协同效果。
实施例9
硫辛酸与化疗药物羟基脲通过共价接连形成小分子单体，再通过共沉淀法制备成纳米粒子，进一步通过硫辛酸的二硫聚合得到纳米药物，并进行协同抗肿瘤评估。
1、小分子单体的制备：
将200 mg 硫辛酸，138 mg N-羟基丁二酰亚胺（HOSU），247 mg二环己基碳二亚胺（DCC）溶于7 ml四氢呋喃中，该混合体系在氮气保护下室温搅拌6 h，过滤除去沉淀物，滤液减压浓缩得到淡黄色粉末，该固体直接和76 mg 羟基脲一起溶于8 ml干燥的DMF，同时加入0.25 ml三乙胺，氮气保护下室温搅拌48 h，减压除去DMF，剩余固体通过柱层析（CH2Cl2:MeOH=10:1）纯化得到目标小分子。
2、纳米药物的制备：
称取20 mg上述小分子单体溶于200 μl 二甲基亚砜（DMSO）中，超声条件下将其滴加到20ml 去离子水中，直至形成澄清透明的体系，365 nm紫外光照引发硫辛酸二硫键自交联，反应2.5 h，透析48 h后，透析液冻干得到纳米药物。
3、联合抗肿瘤研究：
选择处于对数生长活跃期的HepG2细胞，接种于96孔板，培养24 h后，分别加入LA、羟基脲、LA+羟基脲和本实施例制备的纳米药物。设置不同浓度梯度，每个浓度设置5个平行样，并设置对照组。培养72 h后，吸去旧的培养基，每孔加入100 μl含有10%（v/v）MTT的培养基，孵育2 h后吸去旧的培养基，每孔再加入150 μl DMSO，振荡器上振荡2 min后用酶标仪测定490 nm处的吸光值，计算细胞存活率。计算LA+羟基脲和本实施例制备的纳米药物的CI值。实验结果如图13所示，LA+羟基脲和本实施例制备的纳米药物都具有一定的协同抗肿瘤效果，但本实施例制备的纳米药物效果更好，主要是由于纳米药物中两药能以预定比例入胞，从而表现出较好的协同效果。
实施例10
硫辛酸直接与天然抗肿瘤活性物质番茄素、花青素形成纳米粒子，硫辛酸进一步聚合形成纳米药物，进行协同抗肿瘤研究。
1、纳米药物的制备：
称取8.26 mg LA、3 mg番茄素和1 mg花青素溶于200 μl DMSO中，超声条件下将其滴加到20 ml 去离子水中，直至形成澄清透明的体系，365 nm紫外光照引发硫辛酸二硫键自交联，反应2.5 h，透析48 h后，透析液冻干得到纳米药物。
2、联合抗肿瘤研究：
选择处于对数生长活跃期的HepG2细胞，接种于96孔板，培养24 h后，分别加入番茄素、花青素、硫辛酸+番茄素+花青素和本实施例制备的纳米药物。设置不同浓度梯度，每个浓度设置5个平行样，并设置对照组。培养72 h后，吸去旧的培养基，每孔加入100 μl含有10%（v/v）MTT的培养基，孵育2 h后吸去旧的培养基，每孔再加入150 μl DMSO，振荡器上振荡2 min后用酶标仪测定490 nm处的吸光值，计算细胞存活率。计算硫辛酸+番茄素+花青素和本实施例制备的纳米药物的CI值。实验结果如图14所示，硫辛酸+番茄素+花青素和本实施例制备的纳米药物都具有一定的协同抗肿瘤效果，但本实施例制备的纳米药物效果更好，主要是由于纳米药物中三药能以预定比例入胞，从而表现出较好的协同效果。
实施例11
硫辛酸囊泡（c-LAVs）物理负载亲水化疗药物羟基脲，制备得到纳米药物，并进行协同抗肿瘤研究。
1、纳米药物制备：
向含有过饱和羟基脲的c-LAVs溶液中，调节溶液pH值至碱性，使囊泡溶胀后置于37 ℃恒温摇床中振荡过夜，再将溶液pH值调回中性，装入2 KD的透析袋中透析48 h，透析液冻干得到纳米药物。
2、联合抗肿瘤研究：
选择处于对数生长活跃期的SW480细胞，接种于96孔板，培养24 h后，分别加入羟基脲、LA、c-LAVs、羟基脲+LA、羟基脲+ c-LAVs和本实施例制备的纳米药物。设置不同浓度梯度，每个浓度设置5个平行样，并设置对照组。培养48 h后，吸去旧的培养基，每孔加入100μl含有10%（v/v）MTT的培养基，孵育2 h后吸去旧的培养基，每孔再加入150 μl DMSO，振荡器上振荡2 min后用酶标仪测定490 nm处的吸光值，计算细胞存活率。计算羟基脲+LA、羟基脲+ c-LAVs和本实施例制备的纳米药物的CI值。实验结果如图15所示，羟基脲+LA、羟基脲+c-LAVs和本实施例制备的纳米药物都具有一定的协同抗肿瘤效果，但本实施例制备的纳米药物效果更好，主要是由于纳米药物中两药能以预定比例入胞，从而表现出较好的协同效果。
实施例12
以c-LAVs包载羟基脲制备得到的纳米药物为例，研究其协同抗肿瘤机理。
线粒体内超氧阴离子（O2 -.）测定：取对数生长活跃期的SW480细胞，制备成细胞悬浮液并加入6孔板中，每孔细胞约5×105个。孵育24 h后，分别加入1 mM的羟基脲、c-LAVs和本实施例的纳米药物，并设置不加任何材料的空白对照组。孵育4 h后，移除旧的培养基，加入1 ml浓度为50 μM的荧光胺染料，孵育2 h后加入半胱氨酸使其最终浓度为200 μM，孵育0.5 h后，吸除旧的培养基，用Krebs缓冲液清洗3次，再加入线粒体红染料进行线粒体染色30 min后，采用37 ℃的培养基洗3次。最后通过激光共聚焦检测荧光胺在440-480 nm处的发射来定量O2 -.，检测线粒体红染料在590-650 nm处的发射来定位细胞内的线粒体。实验结果如图16a所示，羟基脲、c-LAVs和本实施例的纳米药物都能诱导细胞线粒体内产生O2 -.，本实施例的纳米药物在相同浓度下能更强地诱导产生O2 -.。
线粒体膜电位检测：取对数生长期活跃期的SW480细胞，制备成细胞悬浮液并加入6孔板中，每孔细胞约1×105个。孵育24 h后，分别加入1 mM的羟基脲、c-LAVs和本实施例的纳米药物，并设置不加任何材料的空白对照组。孵育24 h后，吸除旧的培养基，收集各组细胞并离心得到纯细胞。在收集到的细胞内加入1 ml线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1）工作液，充分混匀后培养箱内孵育20 min，然后4 ℃离心，除去线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1）工作液，在冰上用JC-1染色缓冲液（1x）洗涤2次，最后加入500 μl染色缓冲液分散得到细胞悬浮液，用流式细胞仪检测细胞膜电位的变化。结果如图16b所示，羟基脲、c-LAVs和本实施例的纳米药物都能引起线粒体的膜电位降低，且本实施例的纳米药物在相同浓度下能更强地诱导线粒体膜电位降低。
细胞色素C释放检测：取对数生长活跃期的SW480细胞，制备成细胞悬浮液并加入6孔板中，每孔细胞约1×105个。孵育24 h后，分别加入1 mM的羟基脲、c-LAVs和本实施例的纳米药物，并设置不加任何材料的空白对照组。孵育4 h后，移除旧的培养基，收集细胞。将收集到的细胞在4 ℃条件下1200 rpm离心5 min，小心吸除上清液。再用冷的PBS洗涤细胞2次，每次尽可能吸尽上清液。在收集得到的细胞内加入100 μl含1 mM苯甲基磺酰氟（PMSF，蛋白酶抑制剂）的细胞裂解液，置于冰上30 min，每5 min涡旋振荡一次。于4 ℃条件下12000 rpm离心60 min，快速收集上清液于另一干净离心管中，取20 μl上清液，采用western blot分析细胞质内细胞色素C的含量。结果表明本实施例的纳米药物能更强地诱导细胞色素C释放到细胞质内。
Caspase-3活力检测：取对数生长活跃期的SW480细胞，制备成细胞悬浮液并加入6孔板中，每孔细胞约1×105个。孵育24 h后，分别加入1 mM的羟基脲、c-LAVs和本实施例的纳米药物，并设置不加任何材料的空白对照组。孵育4 h后，移除旧的培养基，收集细胞。将收集到的细胞在4 ℃条件下1200 rpm离心5 min，小心吸除上清液。再用冷的PBS洗涤细胞2次，每次尽可能吸尽上清液。在收集得到的细胞内加入100 μl含1 mM苯甲基磺酰氟（PMSF，蛋白酶抑制剂）的细胞裂解液，置于冰上30 min，每5 min涡旋振荡一次。于4 ℃条件下12000 rpm离心60 min，快速收集上清液于另一干净离心管中，取20 μl上清液，用Caspase-3活力检测试剂盒进行检测，通过酶标仪测定A405 nm或A400 nm处的吸光值，根据材料组细胞与空白对照组细胞的吸光度比值，计算相对的Caspase-3的活性程度。实验结果如图16c所示，羟基脲、c-LAVs和本实施例的纳米药物都能刺激Caspase-3相对活力升高，且本实施例的纳米药物能更强地激活Caspase-3诱导细胞凋亡。
实验结果证明，羟基脲能与c-LAVs在线粒体内产生ROS，同时诱导线粒体膜电位降低，促使细胞色素C从线粒体内释放到细胞质内，进而调控Caspase-3依赖的凋亡途径。
实施例13
以c-LAVs包载羟基脲制备得到的纳米药物为例，评估纳米药物体内协同抗肿瘤效果。
在4周龄裸鼠（约20 g）皮下建立SW480肿瘤模型，待肿瘤长至100 mm3时，将裸鼠随机分成7组，每组5只，分别为硫辛酸组（LA，10 mg/kg）,硫辛酸囊泡组（c-LAVs，10 mg/kg），羟基脲组（Hydrea, 6 mg/kg），羟基脲+硫辛酸组（Hydrea +LA ，Hydrea：6 mg/kg；LA：10mg/kg），羟基脲+硫辛酸囊泡组（Hydrea + c-LAVs ，Hydrea：6 mg/kg；c-LAVs：10 mg/kg）以及硫辛酸囊泡包载羟基脲的纳米药物组（纳米药物，Hydrea： c-LAVs=1:1.67，Hydrea: 6mg/kg，c-LAVs：10 mg/kg），同时设置生理盐水组（saline）作为空白对照组。上述7组裸鼠，每3天尾静脉给药一次，共给药8次，期间记录小鼠的肿瘤体积以及体重。根据图17所示实验结果得到，硫辛酸囊泡组相对于硫辛酸组有明显的肿瘤抑制效果，说明硫辛酸制备成囊泡形式，能有效促进药物在肿瘤组织处的富集，进而提高硫辛酸的疗效；羟基脲组显示羟基脲单体具有较好的肿瘤抑制效果，主要是由于其为小分子化疗药物，能在较低浓度下较好地抑制肿瘤增长；羟基脲+硫辛酸组和羟基脲+硫辛酸囊泡组均有较好的抑制肿瘤效果，主要是由于羟基脲与LA和c-LAVs联用，表现出较好的联合抗肿瘤效果，且后者抗肿瘤效果更好，主要是由于c-LAVs相对于LA有更高的肿瘤富集量；本实施例中制备的纳米药物的肿瘤抑制效果最好，主要是由于纳米粒子能被动靶向于肿瘤组织处，且羟基脲和c-LAVs能以预定比例入胞。
实施例14
在实施例1中用(R)-(+)-硫辛酸与(S)-(-)-硫辛酸的混合物代替(R)-(+)-硫辛酸作为原料成功制得含R型手性结构的胶束、囊泡、聚集体等一系列硫辛酸多聚体。同时参照实施例2-13的方法对所得的硫辛酸多聚体及其与传统药物联用获得的抗肿瘤纳米药物的抗肿瘤效果进行评价，结果显示，本实施例所得的杂化硫辛酸多聚体与实施例1中完全由(R)-(+)-硫辛酸构筑的硫辛酸多聚体具有基本一致的有益效果，即两者相对于硫辛酸单体，都能够明显提高抗肿瘤活性。两者与几种传统药物联用，都能够达到“1+1大于2”的协同抗肿瘤效果。
实施例15
在实施例1中用0.1当量的二硫苏糖醇（Dithiothreitol，DTT）代替紫外光照引发二硫键开环聚合，经反应12 h，透析48 h后成功制得掺杂少量DTT的胶束、囊泡、聚集体等一系列杂化硫辛酸多聚体。同时参照实施例2-13的方法对所得的硫辛酸多聚体及其与传统药物联用获得的抗肿瘤纳米药物的抗肿瘤效果进行评价，结果显示，本实施例所得的杂化硫辛酸多聚体与实施例1中完全由(R)-(+)-硫辛酸构筑的硫辛酸多聚体具有基本一致的有益效果，即两者相对于硫辛酸单体，都能够明显提高抗肿瘤活性。两者与几种传统药物联用，都能够达到“1+1大于2”的协同抗肿瘤效果。
以上所述仅为本发明的优选实施例，对本发明而言仅是说明性的，而非限制性的；本领域普通技术人员理解，在本发明权利要求所限定的精神和范围内可对其进行许多改变，修改，甚至等效变更，但都将落入本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种抗肿瘤纳米药物，其特征在于，其发挥抗肿瘤活性的成分主要以硫辛酸多聚体形式存在，所述硫辛酸多聚体相对于硫辛酸单体具有更好的抗肿瘤活性。
2.根据权利要求1所述的纳米药物，其特征在于，所述硫辛酸多聚体的存在形式为链状聚合物、胶束、囊泡、聚集体中的至少一种。
3.根据权利要求1所述的纳米药物，其特征在于，所述硫辛酸多聚体能够与其它具有抗肿瘤活性的物质联合使用。
4.根据权利要求1所述的纳米药物，其特征在于，所述硫辛酸多聚体能够与其它具有抗肿瘤活性的物质协同抗肿瘤，起到“1+1大于2”的效果。
5.根据权利要求4所述的纳米药物，其特征在于，所述其它具有抗肿瘤活性的物质为任何能与硫辛酸多聚体产生协同抗肿瘤作用的物质。
6.根据权利要求4所述的纳米药物，其特征在于，所述其它具有抗肿瘤活性的物质具体为传统化疗药物，如喜树碱、羟基脲、匹杉琼、盐酸阿霉素、盐酸吉西他滨、阿糖胞苷，或天然具有抗肿瘤活性物质，如花青素、白藜芦醇、姜黄素、番茄素、茶多酚、虾青素中的至少一种。
7.根据权利要求1所述的纳米药物，其特征在于，所述硫辛酸多聚体负载于纳米药物载体中。
8.根据权利要求7所述的纳米药物，其特征在于，所述纳米药物载体具体为脂质体、树状分子、聚合物胶束、囊泡或硫辛酸多聚体。
9.根据权利要求1所述的纳米药物，其特征在于，所述硫辛酸多聚体同时还起到纳米药物载体的作用。
10.一种硫辛酸多聚体的应用，其特征在于，将其用于制备如权利要求1所述的抗肿瘤纳米药物。
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