CN108546656B - 一株耐盐性交替假单胞菌及其应用 - Google Patents

一株耐盐性交替假单胞菌及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一株耐盐性交替假单胞菌及其应用，属于海岸带微生物技术与海产养殖废水处理技术领域。本发明的菌株为交替假单胞菌S2‑M‑5菌株（Pseudoalteromonas hodoensis S2M5），分离自山东省威海市金海湾海滩排污口附近底泥，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.14429。将本发明的交替假单胞菌S2‑M‑5菌株接种于适宜的发酵培养基中摇床发酵培养后，菌体处理悬液的絮凝率达到78.20%，COD去除率50%以上，氨氮去除率21.27%，亚硝态氮去除率40.19%。本发明所述的菌株由于其耐盐性及安全性，可应用于海产养殖废水的处理。

Description

一株耐盐性交替假单胞菌及其应用
技术领域
本发明属于海岸带微生物技术与海产养殖废水处理技术领域，具体的说是一株可应用于海产养殖废水处理的交替假单胞菌。
背景技术
中国是目前最大的海产养殖国家，2013年海水养殖总量达到世界总量的80%，2016年海产养殖总量达到1875.63万吨。我国海水养殖业虽然产量巨大，但养殖技术、模式与国际先进水平相比仍存在一定差距，主要问题之一就是对环境影响严重。
我国目前的近海养殖模式需要投加大量的饵料和药物，虽然可以节省人工、提高经济效益，但是这种传统的养殖模式对。大量的含有氮磷元素的剩余饵料和代谢产物积存在养殖废水中。研究表明，水产养殖废水对近海水域生态系统的营养物质负荷比存呈逐年增大的趋势，排出的氮、磷等营养物质成为水域生态系统富营养化的主要污染因子。2015年，我国海水重点养殖区监测面积为76万公顷，无机氮、活性磷酸盐、石油类和化学需氧量超标面积的比例分别为68.1%、52.1%、36.3%和0.5%。
水产养殖会对水环境产生影响，主要表现在水体理化性质的转变和底泥环境的恶化。原因主要包括：药物的累积和饵料的残留；养殖密度过高，养殖排泄物超出了环境承载力；养殖模式简单，废水未经处理直接排放，导致水体中氮、磷元素增加。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是现在水产养殖废水对近海水域生态系统污染严重的问题，提供了一株耐盐性交替假单胞菌及其应用。
本发明解决上述技术问题采用的技术方案是：一株耐盐性交替假单胞菌
为交替假单胞菌（Pseudoalteromonas hodoensis）S2-M-5，并已于2017年7月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.14429，保藏地址为北京市朝阳区北辰路1号院3号。
本发明的S2-M-5菌株分离自山东省威海市金海湾海滩排污口附近底泥，通过以下方法分离获得：新鲜的底泥经10倍系列稀释后，取100微升浓度梯度为10-1-10-5的稀释液涂布于M2培养基，28度下恒温培养，及时挑取单菌落，并经进一步划线纯化，获得纯菌种S2-M-5菌株；
本发明的S2-M-5菌株经16S rRNA基因分子鉴定为交替假单胞菌的一个新菌株，菌体呈杆状，无芽孢，革兰氏染色阴性；
本发明的交替假单胞菌S2-M-5菌株应用于海产养殖废水处理；将本发明的交替假单胞菌S2-M-5菌株接种于适宜的发酵培养基中摇床发酵培养后，接种量为1%~10%；菌体处理悬液的絮凝率达到78.20%，COD去除率50%以上，氨氮去除率21.27%，亚硝态氮去除率40.19%。
本发明的交替假单胞菌S2-M-5菌株由于其耐盐性及安全性，可应用于海产养殖废水的处理。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步说明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。
一株耐盐性交替假单胞菌为交替假单胞菌（Pseudoalteromonas hodoensis）S2-M-5，已于2017年7月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.14429，保藏地址为北京市朝阳区北辰路1号院3号；应用于海产养殖废水处理；接种量为1%~10%；
本实施方式的S2-M-5菌株分离自山东省威海市金海湾海滩排污口附近底泥，通过以下方法分离获得：新鲜的底泥经10倍系列稀释后，取100微升浓度梯度为10-1-10-5的稀释液涂布于M2培养基，28度下恒温培养，及时挑取单菌落，并经进一步划线纯化，获得纯菌种S2-M-5菌株；
本实施方式的S2-M-5菌株经16S rRNA基因分子鉴定为交替假单胞菌的一个新菌株，菌体呈杆状，无芽孢，革兰氏染色阴性。
实施例1：交替假单胞菌S2-M-5菌株的絮凝作用
按10%的接种量将S2-M-5菌株的种子液接入装有100 ml LB液体培养基的250 ml锥形瓶中，30℃、160 r/min培养72 h。将10 ml菌液和1.5 ml 10%（w/v）的CaCl2溶液加入到1 L 4 g/L的高岭土悬液中，调pH至7.5。采用ZR4-6六联混凝实验搅拌机，分段搅拌：400 r/min 30 s，150 r/min 5 min，70 r/min 10 min，静置5 min后，测定上清液在550 nm下的吸光值，计算絮凝率可达到78.20%，混凝时矾花明显、沉降速度快。
实施例2：交替假单胞菌S2-M-5菌株的COD降解作用
按1%的接种量将S2-M-5菌株的种子液接入装有100 ml 模拟海水养殖废水培养基的250 ml锥形瓶中，其中COD 800 mg/L的模拟废水配方为：葡萄糖0.1700 g，可溶性淀粉0.1600 g，CH3COONa 0.2330 g，NH4Cl 0.0255 g，蛋白胨0.1580 g，牛肉膏0.0600 g，(NH4)2SO4 0.0284 g，KH2PO4 0.0700 g，Na2CO3 0.0600 g，海水晶33 g，去离子水1.0 L，pH 5.5-6.0。COD 400 mg/L的模拟废水配方为：葡萄糖0.0850 g，可溶性淀粉0.0800 g，CH3COONa0.1165 g，NH4Cl 0.01275 g，蛋白胨0.0790 g，牛肉膏0.0300 g，(NH4)2SO4 0.0284 g，KH2PO4 0.0700 g，Na2CO3 0.0600 g，海水晶33 g，去离子水1.0 L，pH 5.5-6.0。于25℃、150r/min，培养96 h后将发酵培养液5000r/min离心25min。取上清液测定COD计算S2-M-5菌株对COD降解作用，COD 400 mg/L的模拟废水COD降解率为57.8%，COD 800 mg/L的模拟废水COD降解率为58.2%。
实施例3：交替假单胞菌S2-M-5菌株的氨氮降解作用
按2%的接种量将S2-M-5菌株的种子液接入装有100 ml 氨氮培养基的250 ml 锥形瓶中，28℃，150 r/min培养。其中氨氮培养基配方为：(NH4)2SO4 0.5 g，柠檬酸钠2.36 g，MgSO4·7H2O 0.05 g，KH2PO4 0.2 g，FeSO4·7H2O 0.01 g，MnSO4·4H2O 0.01 g，NaCl 33 g，pH 7.0-7.3。取发酵液2 ml于5 ml离心管中，5000 r/min离心25 min后测定氨氮降解率为21.27%。

Claims (2)

1.一株耐盐性交替假单胞菌，其特征在于它为交替假单胞菌 （Pseudoalteromonashodoensis）S2-M-5，已于2017年7月14日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生中心，保藏编号为CGMCC No.14429，保藏地址为北京市朝阳区北辰路1号院3号。
2.权利要求1所述一株耐盐性交替假单胞菌在海产养殖废水处理中微生物絮凝以及COD降解和氨氮去除中的应用，其特征在于交替假单胞菌S2-M-5的接种量为1%~10%。
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