CN108535478A - 一种b族链球菌的poct荧光定量检测方法和检测试剂盒 - Google Patents

一种b族链球菌的poct荧光定量检测方法和检测试剂盒 Download PDF

Info

Publication number
CN108535478A
CN108535478A CN201810170360.4A CN201810170360A CN108535478A CN 108535478 A CN108535478 A CN 108535478A CN 201810170360 A CN201810170360 A CN 201810170360A CN 108535478 A CN108535478 A CN 108535478A
Authority
CN
China
Prior art keywords
races
antibody
sample
poct
fluorescence quantitative
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
CN201810170360.4A
Other languages
English (en)
Inventor
乌月恒
张志伟
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
ZHUHAI MEIHUA BIO-MEDICAL TECHNOLOGY CO LTD
Original Assignee
ZHUHAI MEIHUA BIO-MEDICAL TECHNOLOGY CO LTD
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by ZHUHAI MEIHUA BIO-MEDICAL TECHNOLOGY CO LTD filed Critical ZHUHAI MEIHUA BIO-MEDICAL TECHNOLOGY CO LTD
Priority to CN201810170360.4A priority Critical patent/CN108535478A/zh
Publication of CN108535478A publication Critical patent/CN108535478A/zh
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56911—Bacteria
    • G01N33/56944—Streptococcus
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/58—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances
    • G01N33/582—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving labelled substances with fluorescent label
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/195—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria
    • G01N2333/315—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria from Streptococcus (G), e.g. Enterococci

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)

Abstract

本发明公开一种B族链球菌的POCT荧光定量检测方法和检测试剂盒，所述POCT荧光定量检测方法，包括如下步骤：制备B族链球菌裂解液，向装有阴道拭子样本的保存管中加入B族链球菌裂解液，涡旋震荡1～5min，室温静置5～10min，收集上清液，加入POCT荧光定量检测试剂盒中，然后将POCT荧光定量检测试剂盒置于荧光检测仪的孵育仓，10～15min后，荧光检测仪自动检测，读取荧光值；所述样本的荧光值大小与B族链球菌的含量呈正相关；当样本的荧光值大于预定值时，确实样本中B族链球菌呈阳性；当样本的荧光值小于预定值时，确定样本中B族链球菌呈阴性；所述预定值为0.37。本申请的检测方法操作简单、耗时少、且灵敏度高，经实验验证，本检测方法的检测准确率高达100％。

Description

一种B族链球菌的POCT荧光定量检测方法和检测试剂盒
技术领域
本申请涉及抗体领域，尤其是一种B族链球菌的POCT荧光定量检测方法和检测试剂盒。
背景技术
B族链球菌又称B群链球菌(group B streptococcus，GBS)，学名无乳链球菌(S.agalactiae)。GBS一般寄居于阴道和直肠，它是一种条件致病菌，一般正常健康人群感染GBS并不致病。据统计约10％～30％的孕妇阴道携带或感染GBS，其中半数左右会在分娩过程中传递给新生儿。如果新生儿带了这种菌，可能会导致早期(出生7天以内)或晚期(出生7天以后)侵入性感染，早期侵入性感染主要表现为败血症、肺炎、脑膜炎等，死亡率为5％左右。GBS感染还能引起胎膜早破和羊膜腔感染，研究表明，尿液中GBS阳性的孕妇胎膜早破的发病率为35％，绒毛膜羊膜炎和子宫内膜炎的发病率为21％左右。另外，GBS感染还会引起早产儿、低体重儿及极低体重儿的出生。
目前，预防新生儿感染GBS的方法主要是产前静脉滴注青霉素G，但若所有孕妇都在产前使用抗生素，势必会造成抗生素的滥用，而且还会增加胎儿畸形的风险。因此，最好的方法就是产前检测GBS，对于GBS阳性的孕妇进行针对性地滴注抗生素，预防新生儿感染GBS。
但是，目前我国对于GBS的检测主要依靠细菌培养法，需时约2～4天，无法及时诊断，且存在假阴性(即灵敏度不足)、操作复杂等缺陷。因此，建立一种简单快速灵敏特异的GBS检测方法迫在眉睫。
发明内容
本申请的目的在于，解决上述现有技术中存在的缺点和不足，提供一种B族链球菌的POCT荧光定量检测方法和检测试剂盒，以实现对B族链球菌的快速准确定量和定性检测，使临床针对性地对GBS阳性的孕妇进行抗生素治疗，预防新生儿感染GBS，减少抗生素滥用。
为达到其目的，本申请所采用的技术方案为：一种B族链球菌的POCT荧光定量检测方法，包括如下步骤：制备B族链球菌裂解液，向装有阴道拭子样本的保存管中加入B族链球菌裂解液，涡旋震荡1～5min，室温静置5～10min，收集上清液，加入POCT荧光定量检测试剂盒中，然后将POCT荧光定量检测试剂盒置于荧光检测仪的孵育仓，10～15min后，荧光检测仪自动检测，读取荧光值；
所述样本的荧光值大小与B族链球菌的含量呈正相关；
当样本的荧光值大于预定值时，确实样本中B族链球菌呈阳性；当样本的荧光值小于预定值时，确定样本中B族链球菌呈阴性；
所述预定值为0.37。
进一步地，所述POCT荧光定量检测试剂盒包括盒体和设于所述盒体内的免疫层析试纸条，所述免疫层析试纸条含有B族链球菌抗体和荧光微球标记抗体；
所述B族链球菌抗体为小鼠单克隆抗体或兔多克隆抗体。
所述荧光微球标记抗体为采用荧光微球标记所述B族链球菌抗体的偶联物。
优选地，所述B族链球菌裂解液于所述保存管中的添加量为0.1～0.5ml。
优选地，所述POCT荧光定量检测试剂盒的加样量为80～100ul。
优选地，所述免疫层析试纸条包括PVC粘性底板以及固定于PVC粘性底板上的样品垫、结合垫、NC膜和吸水垫，所述结合垫贴合固定于所述样品垫的下方，所述NC膜的一端贴合固定于所述结合垫的下方、另一端与所述吸水垫相连；
所述结合垫上喷涂有所述荧光微球标记抗体；
所述NC膜上包被有检测抗体，所述检测抗体包括所述B族链球菌抗体和羊抗鼠二抗，所述B族链球菌抗体用作检测线，所述羊抗鼠二抗用作质控线。
样本加入POCT荧光定量检测试剂盒后，经免疫层析试纸条的层析作用，B族链球菌抗原先后分别与结合垫的荧光微球标记抗体和NC膜的检测抗体结合，用荧光检测仪检测时，由于荧光信号与B族链球菌抗原含量呈正相关，检测荧光值大于预定值(即0.37)时，确定样本中B族链球菌抗原为阳性，且荧光值越大，说明样本中的B族链球菌抗原含量越多，由此，可为临床对GBS阳性的孕妇使用抗生素时提供依据，避免过度使用抗生素。
优选地，所述荧光微球为普通荧光微球、时间分辨荧光微球、量子点和上转发光微球中的至少一种。
优选地，所述结合垫上荧光微球标记抗体的喷涂量为0.05～0.5μg，所述NC膜上检测抗体的包被量为0.05～0.5μg。
优选地，所述免疫层析试纸条的制备方法为：用点膜仪将B族链球菌抗体及羊抗鼠二抗包被在NC膜上,所述B族链球菌抗体作为检测线，所述羊抗鼠二抗作为质控线,36～38℃干燥箱干燥过夜；将荧光微球标记抗体喷涂在结合垫上，常温下真空干燥2h；将NC膜、结合垫、样品垫、吸水纸及PVC粘性底板组装好后,切割成试纸条,加干燥剂于4～30℃密封保存。
优选地，所述荧光微球标记抗体的制备方法为：用活化液替换微球原有保存液；加入EDC和Sulfo-NHS进行活化：称取一定量的EDC和Sulfo-NHS，溶解后加入微球溶液中旋转反应15～20min；去除未反应或残余的反应物；用反应液超声重悬微球，然后加入一定量的待标记B族链球菌抗体，避光反应1～4小时；去除未偶联的B族链球菌抗体；封闭微球上未偶联的反应基团：用封闭液反应0.5～1小时或用封闭液重复进行去除未偶联的B族链球菌抗体操作；用保存液重悬微球至原体积，2～8℃保存备用。
优选地，所述B族链球菌裂解液的制备方法为：
(1)用浓度为1mM～100mM的缓冲液配置体积百分比为0.1％～5％的表面活性剂；
(2)用步骤(1)配得的表面活性剂配置浓度分别为1mM～100mM的醋酸溶液和10mM～1M的亚硝酸钠溶液；
(3)将步骤(2)配得的醋酸溶液和亚硝酸钠溶液等比例混合均匀，即得所述B族链球菌裂解液；
所述表面活性剂为Tween 20、Triton-100和十二烷基磺酸钠中的至少一种；
所述缓冲液为硼酸盐溶液、Tris-HCL或PBS溶液。
本申请的有益效果是：本申请的检测方法能快速、准确地对B族链球菌进行定量检测，使感染或携带GBS的孕妇能及时得到合理的抗生素治疗，有效地预防新生儿感染GBS，降低GBS对新生儿造成的危害，减少抗生素的过度使用。与现有的GBS检测方法相比，本申请的检测方法操作简单、耗时少、且灵敏度高，经实验验证，本检测方法的检测准确率高达100％。
附图说明
图1为本申请一种实施例的POCT荧光定量检测试剂盒的结构示意图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式结合附图对本发明作进一步详细说明。
本申请实施例提供一种B族链球菌的POCT荧光定量检测方法，包括如下步骤：制备B族链球菌裂解液，向装有阴道拭子样本的保存管中加入B族链球菌裂解液，涡旋震荡1～5min，室温静置5～10min，收集上清液，加入POCT荧光定量检测试剂盒中，然后将POCT荧光定量检测试剂盒置于荧光检测仪的孵育仓，10～15min后，荧光检测仪自动检测，读取荧光值；
所述样本的荧光值大小与B族链球菌的含量呈正相关；
当样本的荧光值大于预定值时，确实样本中B族链球菌呈阳性；当样本的荧光值小于预定值时，确定样本中B族链球菌呈阴性；所述预定值为0.37。
人体阴道拭子样本中B族链球菌检测结果 T/C(荧光值)
阴性 <0.37
阳性 >0.37
为使B族链球菌抗原得到充分裂解，所述B族链球菌裂解液于所述保存管中的添加量为0.1～0.5ml。
为保证样品加样充足，所述POCT荧光定量检测试剂盒的加样量为80～100ul。
本申请实施例提供一种POCT荧光定量检测试剂盒，如图1所示，包括盒体1和设于所述盒体1内的免疫层析试纸条，所述免疫层析试纸条含有B族链球菌抗体和荧光微球标记抗体；
所述B族链球菌抗体为小鼠单克隆抗体或兔多克隆抗体。
所述荧光微球标记抗体为采用荧光微球标记所述B族链球菌抗体的偶联物。
具体的，所述免疫层析试纸条包括PVC粘性底板2以及固定于PVC粘性底板2上的样品垫3、结合垫4、NC膜5和吸水垫6，所述结合垫4贴合固定于所述样品垫3的下方，所述NC膜5的一端贴合固定于所述结合垫4的下方、另一端与所述吸水垫6相连；
所述结合垫4上喷涂有所述荧光微球标记抗体；
具体的，所述盒体1的表面在样品垫3的上方开设有采样口7。
所述NC膜5上包被有检测抗体，所述检测抗体包括所述B族链球菌抗体和羊抗鼠二抗，所述B族链球菌抗体用作检测线8，所述羊抗鼠二抗用作质控线9。所述盒体1的表面在检测线8与质控线9上方开设有观察口10，通过该观察口10可观察到NC膜5上的反应结果。
样本加入POCT荧光定量检测试剂盒后，经免疫层析试纸条的层析作用，B族链球菌抗原先后分别与结合垫的荧光微球标记抗体和NC膜的检测抗体结合，用荧光检测仪检测时，由于荧光信号与B族链球菌抗原含量呈正相关，检测荧光值大于预定值(即0.37)时，确定样本中B族链球菌抗原为阳性，且荧光值越大，说明样本中的B族链球菌抗原含量越多，由此，可为临床对GBS阳性的孕妇使用抗生素时提供依据，避免过度使用抗生素。
所述荧光微球为上转发光微球，也可以是普通荧光微球、时间分辨荧光微球、量子点和上转发光微球中的至少一种。
具体的，为了保证反应的充分进行，使反应结果可见，所述结合垫上荧光微球标记抗体的喷涂量为0.05～0.5μg，所述NC膜上检测抗体的包被量为0.05～0.5μg。
在一种实施例中，所述免疫层析试纸条的制备方法为：用点膜仪将B族链球菌抗体及羊抗鼠二抗包被在NC膜上,所述B族链球菌抗体作为检测线，所述羊抗鼠二抗作为质控线,36～38℃干燥箱干燥过夜；将荧光微球标记抗体喷涂在结合垫上，常温下真空干燥2h；将NC膜、结合垫、样品垫、吸水纸及PVC粘性底板组装好后,切割成试纸条,加干燥剂于4～30℃密封保存。具体的，所述点膜仪可以是Bio-Dot XYZ3000型点膜仪，或者其他型号的点膜仪。NC膜的干燥温度可以选用近似人体体温的37℃。结合垫的干燥温度可以选用30℃左右的常温。
在一种实施例中，所述荧光微球标记抗体的制备方法为：用活化液替换微球原有保存液：依次进行离心、去上清和活化液超声重悬操作；加入EDC和Sulfo-NHS进行活化：称取一定量的EDC和Sulfo-NHS，溶解后加入微球溶液中旋转反应15～20min；去除未反应或残余的反应物：依次进行离心、去上清和活化液超声重悬操作；用反应液超声重悬微球，然后加入一定量的待标记B族链球菌抗体，避光反应1～4小时；去除未偶联的B族链球菌抗体：依次进行离心、去上清和活化液超声重悬操作；封闭微球上未偶联的反应基团：用封闭液反应0.5～1小时或用封闭液重复进行去除未偶联的B族链球菌抗体操作；用保存液重悬微球至原体积，2～8℃保存备用。
在一种实施例中，所述B族链球菌裂解液的制备方法为：
(1)用浓度为1mM～100mM的缓冲液配置体积百分比为0.1％～5％的表面活性剂；
(2)用步骤(1)配得的表面活性剂配置浓度分别为1mM～100mM的醋酸溶液和10mM～1M的亚硝酸钠溶液；
(3)将步骤(2)配得的醋酸溶液和亚硝酸钠溶液等比例混合均匀，即得所述B族链球菌裂解液；
所述表面活性剂为Tween 20、Triton-100和十二烷基磺酸钠中的至少一种；
所述缓冲液为硼酸盐溶液、Tris-HCL或PBS溶液。
用本发明的试剂盒和检测方法检测30名经临床确认B族链球菌为阴性的孕妇的阴道拭子样本(以下简称正常人阴道拭子样本)和15名经临床确认B族链球菌为阳性的孕妇的阴道拭子样本(以下简称病人阴道拭子样本)，具体操作如下：用浓度为100mM的PBS溶液配置体积百分比为1％的Triton-100，然后用配得的Triton-100溶液分别配置10mM的醋酸溶液和1M的亚硝酸钠溶液，然后将配得的醋酸溶液和亚硝酸钠溶液等比例混合均匀，得到B族链球菌裂解液；分别向每个装有阴道拭子样本的保存管中加入500ul的B族链球菌裂解液，涡旋震荡2min，室温静置10min，收集上清液进行检测。检测按照上述的POCT荧光定量检测方法进行，每个POCT荧光定量检测试剂盒的加样量为100ul，将加样后的试剂盒置于荧光检测仪的孵育仓，15min后，荧光检测仪自动检测，读取荧光值。
检测结果如表1和表2所示：
表1正常人阴道拭子样本的检测数据结果
表2病人阴道拭子样本的检测数据结果
数据分析：
1.根据表1的检测数据结果，计算出30份正常人阴道拭子样本的平均值和标准方差SD，然后依据以下公式计算出Cut-off值：
Cut-off＝平均值+3*标准方差SD
计算结果如下：
平均值 0.25
标准方差SD 0.04
Cut-off 0.37
本发明选择正常人阴道拭子样本检测结果的平均值与三倍的标准方差之和作为Cut-off值，判断检测样本中B族链球菌的阴阳性。当样本的检测荧光值大于Cut-off值时，判定检测样本中B族链球菌为阳性，当样本的检测荧光值小于Cut-off值时，判定检测样本中B族链球菌为阴性。
2.根据Cut-off值判断表2病人阴道拭子样本诊断结果(“+”表示检测结果阳性；“-”表示检测结果阴性)
表2病人阴道拭子样本的检测数据结果
从表2的Cut-off值判断结果可看出，15份病人阴道拭子样本的B族链球菌检测结果均为阳性，与临床检测结果的符合率为100％，说明本发明的检测试剂盒及检测方法的灵敏度高达100％。
通过上述实验验证可知，本申请的检测方法能快速、准确地对B族链球菌进行定量检测，使感染或携带GBS的孕妇能及时得到合理的抗生素治疗，有效地预防新生儿感染GBS，降低GBS对新生儿造成的危害，减少抗生素的过度使用。与现有的GBS检测方法相比，本申请的检测方法操作简单、耗时少、且灵敏度高，检测准确率高达100％。
以上内容是结合具体的实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换。

Claims (8)

1.一种B族链球菌的POCT荧光定量检测方法，其特征在于，包括如下步骤：制备B族链球菌裂解液，向装有阴道拭子样本的保存管中加入B族链球菌裂解液，涡旋震荡1～5min，室温静置5～10min，收集上清液，加入POCT荧光定量检测试剂盒中，然后将POCT荧光定量检测试剂盒置于荧光检测仪的孵育仓，10～15min后，荧光检测仪自动检测，读取荧光值；
所述样本的荧光值大小与B族链球菌的含量呈正相关；
当样本的荧光值大于预定值时，确实样本中B族链球菌呈阳性；当样本的荧光值小于预定值时，确定样本中B族链球菌呈阴性；
所述预定值为0.37。
2.如权利要求1所述的POCT荧光定量检测方法，其特征在于：所述POCT荧光定量检测试剂盒包括盒体和设于所述盒体内的免疫层析试纸条，所述免疫层析试纸条含有B族链球菌抗体和荧光微球标记抗体；
所述B族链球菌抗体为小鼠单克隆抗体或兔多克隆抗体。
所述荧光微球标记抗体为采用荧光微球标记所述B族链球菌抗体的偶联物。
3.如权利要求2所述的POCT荧光定量检测方法，其特征在于：所述免疫层析试纸条包括PVC粘性底板以及固定于PVC粘性底板上的样品垫、结合垫、NC膜和吸水垫，所述结合垫贴合固定于所述样品垫的下方，所述NC膜的一端贴合固定于所述结合垫的下方、另一端与所述吸水垫相连；
所述结合垫上喷涂有所述荧光微球标记抗体；
所述NC膜上包被有检测抗体，所述检测抗体包括所述B族链球菌抗体和羊抗鼠二抗，所述B族链球菌抗体用作检测线，所述羊抗鼠二抗用作质控线。
4.如权利要求2或3所述的POCT荧光定量检测方法，其特征在于：所述荧光微球为普通荧光微球、时间分辨荧光微球、量子点和上转发光微球中的至少一种。
5.如权利要求3所述的POCT荧光定量检测方法，其特征在于：所述结合垫上荧光微球标记抗体的喷涂量为0.05～0.5μg，所述NC膜上检测抗体的包被量为0.05～0.5μg。
6.如权利要求3所述的POCT荧光定量检测方法，其特征在于，所述免疫层析试纸条的制备方法为：用点膜仪将B族链球菌抗体及羊抗鼠二抗包被在NC膜上,所述B族链球菌抗体作为检测线，所述羊抗鼠二抗作为质控线,36～38℃干燥箱干燥过夜；将荧光微球标记抗体喷涂在结合垫上，常温下℃真空干燥2h；将NC膜、结合垫、样品垫、吸水纸及PVC粘性底板组装好后,切割成试纸条,加干燥剂于4～30℃密封保存。
7.如权利要求2所述的POCT荧光定量检测方法，其特征在于，所述荧光微球标记抗体的制备方法为：用活化液替换微球原有保存液；加入EDC和Sulfo-NHS进行活化：称取一定量的EDC和Sulfo-NHS，溶解后加入微球溶液中旋转反应15～20min；去除未反应或残余的反应物；用反应液超声重悬微球，然后加入一定量的待标记B族链球菌抗体，避光反应1～4小时；去除未偶联的B族链球菌抗体；封闭微球上未偶联的反应基团：用封闭液反应0.5～1小时或用封闭液重复进行去除未偶联的B族链球菌抗体操作；用保存液重悬微球至原体积，2～8℃保存备用。
8.如权利要求1所述的POCT荧光定量检测方法，其特征在于，所述B族链球菌裂解液的制备方法为：
(1)用浓度为1mM～100mM的缓冲液配置体积百分比为0.1％～5％的表面活性剂；
(2)用步骤(1)配得的表面活性剂配置浓度分别为1mM～100mM的醋酸溶液和10mM～1M的亚硝酸钠溶液；
(3)将步骤(2)配得的醋酸溶液和亚硝酸钠溶液等比例混合均匀，即得所述B族链球菌裂解液；
所述表面活性剂为Tween 20、Triton-100和十二烷基磺酸钠中的至少一种；
所述缓冲液为硼酸盐溶液、Tris-HCL或PBS溶液。
CN201810170360.4A 2018-03-01 2018-03-01 一种b族链球菌的poct荧光定量检测方法和检测试剂盒 Withdrawn CN108535478A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810170360.4A CN108535478A (zh) 2018-03-01 2018-03-01 一种b族链球菌的poct荧光定量检测方法和检测试剂盒

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810170360.4A CN108535478A (zh) 2018-03-01 2018-03-01 一种b族链球菌的poct荧光定量检测方法和检测试剂盒

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN108535478A true CN108535478A (zh) 2018-09-14

Family

ID=63486462

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810170360.4A Withdrawn CN108535478A (zh) 2018-03-01 2018-03-01 一种b族链球菌的poct荧光定量检测方法和检测试剂盒

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108535478A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110376374A (zh) * 2019-08-07 2019-10-25 厦门市妇幼保健院（厦门市计划生育服务中心） 一种b族链球菌快速血清学分型的检测试剂盒及其制备方法
CN114689854A (zh) * 2022-03-04 2022-07-01 北京泰格科信生物科技有限公司 一种b族链球菌抗原试纸条、检测卡、试剂盒及其制备方法和检测方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103926404A (zh) * 2014-04-29 2014-07-16 广州市微米生物科技有限公司 B族链球菌量子点免疫层析检测试剂卡及其制备方法
CN105606808A (zh) * 2016-03-30 2016-05-25 珠海华澳生物科技有限公司 一种a/b族链球菌胶体金免疫层析检测装置及其检测方法
CN107192830A (zh) * 2017-05-31 2017-09-22 珠海美华医疗科技有限公司 抗hpv16型e7蛋白的单克隆抗体、检测试纸和检测试剂盒

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103926404A (zh) * 2014-04-29 2014-07-16 广州市微米生物科技有限公司 B族链球菌量子点免疫层析检测试剂卡及其制备方法
CN105606808A (zh) * 2016-03-30 2016-05-25 珠海华澳生物科技有限公司 一种a/b族链球菌胶体金免疫层析检测装置及其检测方法
CN107192830A (zh) * 2017-05-31 2017-09-22 珠海美华医疗科技有限公司 抗hpv16型e7蛋白的单克隆抗体、检测试纸和检测试剂盒

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110376374A (zh) * 2019-08-07 2019-10-25 厦门市妇幼保健院（厦门市计划生育服务中心） 一种b族链球菌快速血清学分型的检测试剂盒及其制备方法
CN114689854A (zh) * 2022-03-04 2022-07-01 北京泰格科信生物科技有限公司 一种b族链球菌抗原试纸条、检测卡、试剂盒及其制备方法和检测方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2018120620A1 (zh) 荧光免疫层析检测卡及其制备方法和应用
Goldenberg et al. Vaginal fetal fibronectin measurements from 8 to 22 weeks' gestation and subsequent spontaneous preterm birth
Mayo et al. Validation of a chemical pregnancy test in dairy cows that uses whole blood, shortened incubation times, and visual readout
CN108931654A (zh) 以尿液为检测样本的早孕检测试剂盒、其生产方法及用途
CN107132353A (zh) 一种b族链球菌的检测试剂盒及其制备方法
CN108398565A (zh) 用于检测犬c-反应蛋白的免疫荧光层析检测卡与制备方法
CN108535478A (zh) 一种b族链球菌的poct荧光定量检测方法和检测试剂盒
CN107299127B (zh) B族链球菌鉴定和药敏检测卡、b族链球菌鉴定和药敏检测试剂盒及其使用方法
Kontnick et al. Direct detection of group B streptococci from vaginal specimens compared with quantitative culture
CN201047838Y (zh) 一种药物毒素残留快速检测试条
CN110487779A (zh) 一种化学发光法定量检测阴道毛滴虫的试剂盒及其检测方法
CN110376374A (zh) 一种b族链球菌快速血清学分型的检测试剂盒及其制备方法
CN108445211A (zh) 一种a族链球菌的poct荧光定量检测方法和检测试剂盒
CN106932574B (zh) B型链球菌感染的检测方法
CN207717780U (zh) 一种双标记胎膜早破检测试笔及试剂盒
CN207717783U (zh) 一种双标记胎膜早破检测试纸及试剂盒
CN106093389A (zh) 用于膀胱癌早期诊断的二联免疫试剂盒及其制备方法
Atkinson et al. A comparison between plasma oestrone sulphate concentration and doppler ultrasound as methods for pregnancy diagnosis in sows
CN113874729A (zh) 试验装置
CN101858917A (zh) 以Axl为检测指标的胎膜早破检测试剂盒及制备方法
Horteloup et al. The early conception factor (ECF™) lateral flow assay for non-pregnancy determination in the mare
CN111024947A (zh) 白色念珠菌荧光免疫层析测定试剂盒及其制备方法
CN108802371A (zh) Papp-a2化学发光定量检测试剂盒及在早期子痫前期筛查中的用途
US20120202297A1 (en) Gender determination method
CN108732342A (zh) 一种生殖能力的评估检测试剂盒

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WW01 Invention patent application withdrawn after publication
WW01 Invention patent application withdrawn after publication

Application publication date: 20180914