CN108507999A - 一种应用于生物技术中生物毒性检测方法 - Google Patents

一种应用于生物技术中生物毒性检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种应用于生物技术中生物毒性检测方法，包括如下步骤：目标水体取样；制备微生物菌液；生物毒性检测。通过发光细菌对目标水体进行检测，发光细菌生物毒性试验相对于水蚤生物毒性试验、藻类毒性试验和鱼类毒性试验，具有周期短、准确度好、监测范围宽、检测场所任意（现场、实验室）的优点，对于常见所有有毒有害的化合物及污染物的生物毒性均可进行测定，并且能有效快捷的指示突发性污染事故的发生，提高生物毒性检测效率。

Description

一种应用于生物技术中生物毒性检测方法
技术领域
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种应用于生物技术中生物毒性检测方法。
背景技术
随着科学技术的进步，工农业生产的发展，人类合成越来越多的化学品，水环境作为工农业废物的最终摊放点，突发性污染事故及水质突变现象时有发生，且呈现出明显的增加趋势，直接危害生活饮水和城市集中供水的安全。水环境中有毒污染已成为世界各国科学界和政府关注的新热点，对水质进行安全检测及预测控制势在必行。其中，当水体受到污染而使水环境改变时，各种不同的水生生物由于对环境的要求和适应能力不同而产生不同反应。利用生物受到污染物危害或毒害后所产生的反应或生理机能的变化来评价水体污染状况，称为生物监测技术，这能够确定毒物安全浓度，了解污染对水生生物的直接危害和影响，判断水体污染类型和程度。
随着社会的发展，生物毒性已经逐步成为评价污染的手段之一 ；目前生物毒性检测所采用的方法有：水蚤生物毒性试验、藻类毒性试验、鱼类毒性试验。
在对生物毒性检测不断的摸索，发光细菌生物毒性检测技术逐渐被广泛应用，为水质生物毒性检测提供重要数据，提高水质安全。
发明内容
本发明提出了一种应用于生物技术中生物毒性检测方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
本发明提出了一种应用于生物技术中生物毒性检测方法，包括如下步骤：
S1：目标水体取样：
(1)按照标准取样方法对目标水体进行取样，并对目标水体进行除杂处理，采用35mm的滤膜对目标水体进行过滤，取得过滤后的水体；
(2)设置实验组，将目标水体注入实验组的容器内，设置对照组，将去氯自来水注入对照组的容器内；
(3)将实验组和对照组进行保存，保存温度为2-5℃，保存时间为4-6h；
S2：制备微生物菌液：
(1)选择发光细菌冻干粉，对发光细菌冻干粉进行复苏处理；
(2)将复苏后的发光细菌接种到培养基内，在20-25℃的环境下，进行培养，培养时间为0.5-2h，待发光细菌培养到对数生长期时，收集菌体，获得菌体沉淀，使用分散液分散菌体，制成微生物菌液；
S3：生物毒性检测：
(1)取出实验组和对照组的容器，分别将实验组容器内的样本水体和对照组容器内的去氯自来水注入细胞培养板内的不同微孔内，确保样本水体和去氯自来水明确分开；
(2)将微生物菌液注入细胞培养板内，将细胞培养板置于120rpm振荡器内振荡，时间为30s，静置10-20min；
(3)使用发光检测仪检测细胞培养板内各个微孔的发光值，并记录；
(4) 计算发光抑制率，对比实验组和对照组的发光抑制率，得出实验结论 测得目标水体的生物毒性。
优选的，所述发光细菌冻干粉优选为青海弧菌冻干粉。
优选的，所述培养基中各成分的质量分数为：胰胨 0.5%、酵母膏 0.5%、甘 油0.3%、MgCl2 0.32%、KBr 0.02%、CaSO4 0.01%、NaCl 0.4%、KCl 0.4%。
优选的，所述发光抑制率计算方法为I = (R 0 -R)/ R 0 ×100%，其中R0为对照组的发光强度平均值，R为实验组的发光强度平均值，I为发光抑制率。
优选的，所述发光检测仪采用微孔板式发光检测仪，具体型号为LB960。
本发明提出的一种应用于生物技术中生物毒性检测方法，有益效果在于：通过对比实验组和对照组的发光抑制率，完成目标水体的毒性检测，发光细菌生物毒性试验相对于水蚤生物毒性试验、藻类毒性试验和鱼类毒性试验，具有周期短、准确度好、监测范围宽、检测场所任意（现场、实验室）的优点，能够快速的完成对目标水体进行测定。
具体实施方式
下面结合具体实施例来对本发明做进一步说明。
实施例1
本发明提出了一种应用于生物技术中生物毒性检测方法，包括如下步骤：
S1：目标水体取样：
(1)按照标准取样方法对目标水体进行取样，并对目标水体进行除杂处理，采用35mm的滤膜对目标水体进行过滤，取得过滤后的水体；
(2)设置实验组，将目标水体注入实验组的容器内，设置对照组，将去氯自来水注入对照组的容器内；
(3)将实验组和对照组进行保存，保存温度为2℃，保存时间为4h；
S2：制备微生物菌液：
(1)选择发光细菌冻干粉，对发光细菌冻干粉进行复苏处理；
(2)将复苏后的发光细菌接种到培养基内，在22℃的环境下，进行培养，培养时间为0.5h，待发光细菌培养到对数生长期时，收集菌体，获得菌体沉淀，使用分散液分散菌体，制成微生物菌液；
S3：生物毒性检测：
(1)取出实验组和对照组的容器，分别将实验组容器内的样本水体和对照组容器内的去氯自来水注入细胞培养板内的不同微孔内，确保样本水体和去氯自来水明确分开；
(2)将微生物菌液注入细胞培养板内，将细胞培养板置于120rpm振荡器内振荡，时间为30s，静置15min；
(3)使用发光检测仪检测细胞培养板内各个微孔的发光值，并记录；
(4) 计算发光抑制率，对比实验组和对照组的发光抑制率，得出实验结论 测得目标水体的生物毒性。
发光细菌冻干粉优选为青海弧菌冻干粉，青海弧菌冻干粉不需要将样品水体添加NaCl至3%的浓度就可以检测，这就避免了海洋发光菌可能受到NaCl影响的缺点。
培养基中各成分的质量分数为：胰胨 0.5%、酵母膏 0.5%、甘 油0.3%、MgCl20.32%、KBr 0.02%、CaSO4 0.01%、NaCl 0.4%、KCl 0.4%。
发光抑制率计算方法为I = (R0-R)/ R0 ×100%，其中R0为对照组的发光强度平均值，R为实验组的发光强度平均值，I为发光抑制率。
发光检测仪采用微孔板式发光检测仪，具体型号为LB960。
实施例2
本发明提出了一种应用于生物技术中生物毒性检测方法，包括如下步骤：
S1：目标水体取样：
(1)按照标准取样方法对目标水体进行取样，并对目标水体进行除杂处理，采用35mm的滤膜对目标水体进行过滤，取得过滤后的水体；
(2)设置实验组，将目标水体注入实验组的容器内，设置对照组，将去氯自来水注入对照组的容器内；
(3)将实验组和对照组进行保存，保存温度为3℃，保存时间为4.5h；
S2：制备微生物菌液：
(1)选择发光细菌冻干粉，对发光细菌冻干粉进行复苏处理；
(2)将复苏后的发光细菌接种到培养基内，在22℃的环境下，进行培养，培养时间为1h，待发光细菌培养到对数生长期时，收集菌体，获得菌体沉淀，使用分散液分散菌体，制成微生物菌液；
S3：生物毒性检测：
(1)取出实验组和对照组的容器，分别将实验组容器内的样本水体和对照组容器内的去氯自来水注入细胞培养板内的不同微孔内，确保样本水体和去氯自来水明确分开；
(2)将微生物菌液注入细胞培养板内，将细胞培养板置于120rpm振荡器内振荡，时间为30s，静置16min；
(3)使用发光检测仪检测细胞培养板内各个微孔的发光值，并记录；
(4) 计算发光抑制率，对比实验组和对照组的发光抑制率，得出实验结论 测得目标水体的生物毒性。
发光细菌冻干粉优选为青海弧菌冻干粉，青海弧菌冻干粉不需要将样品水体添加NaCl至3%的浓度就可以检测，这就避免了海洋发光菌可能受到NaCl影响的缺点。
培养基中各成分的质量分数为：胰胨 0.5%、酵母膏 0.5%、甘 油0.3%、MgCl20.32%、KBr 0.02%、CaSO4 0.01%、NaCl 0.4%、KCl 0.4%。
发光抑制率计算方法为I = (R0-R)/ R0 ×100%，其中R0为对照组的发光强度平均值，R为实验组的发光强度平均值，I为发光抑制率。
发光检测仪采用微孔板式发光检测仪，具体型号为LB960。
实施例3
本发明提出了一种应用于生物技术中生物毒性检测方法，包括如下步骤：
S1：目标水体取样：
(1)按照标准取样方法对目标水体进行取样，并对目标水体进行除杂处理，采用35mm的滤膜对目标水体进行过滤，取得过滤后的水体；
(2)设置实验组，将目标水体注入实验组的容器内，设置对照组，将去氯自来水注入对照组的容器内；
(3)将实验组和对照组进行保存，保存温度为4℃，保存时间为5h；
S2：制备微生物菌液：
(1)选择发光细菌冻干粉，对发光细菌冻干粉进行复苏处理；
(2)将复苏后的发光细菌接种到培养基内，在23℃的环境下，进行培养，培养时间为1.5h，待发光细菌培养到对数生长期时，收集菌体，获得菌体沉淀，使用分散液分散菌体，制成微生物菌液；
S3：生物毒性检测：
(1)取出实验组和对照组的容器，分别将实验组容器内的样本水体和对照组容器内的去氯自来水注入细胞培养板内的不同微孔内，确保样本水体和去氯自来水明确分开；
(2)将微生物菌液注入细胞培养板内，将细胞培养板置于120rpm振荡器内振荡，时间为30s，静置18min；
(3)使用发光检测仪检测细胞培养板内各个微孔的发光值，并记录；
(4) 计算发光抑制率，对比实验组和对照组的发光抑制率，得出实验结论 测得目标水体的生物毒性。
发光细菌冻干粉优选为青海弧菌冻干粉，青海弧菌冻干粉不需要将样品水体添加NaCl至3%的浓度就可以检测，这就避免了海洋发光菌可能受到NaCl影响的缺点。
培养基中各成分的质量分数为：胰胨 0.5%、酵母膏 0.5%、甘 油0.3%、MgCl20.32%、KBr 0.02%、CaSO4 0.01%、NaCl 0.4%、KCl 0.4%。
发光抑制率计算方法为I = (R0-R)/ R0 ×100%，其中R0为对照组的发光强度平均值，R为实验组的发光强度平均值，I为发光抑制率。
发光检测仪采用微孔板式发光检测仪，具体型号为LB960。
实施例4
本发明提出了一种应用于生物技术中生物毒性检测方法，包括如下步骤：
S1：目标水体取样：
(1)按照标准取样方法对目标水体进行取样，并对目标水体进行除杂处理，采用35mm的滤膜对目标水体进行过滤，取得过滤后的水体；
(2)设置实验组，将目标水体注入实验组的容器内，设置对照组，将去氯自来水注入对照组的容器内；
(3)将实验组和对照组进行保存，保存温度为4℃，保存时间为6h；
S2：制备微生物菌液：
(1)选择发光细菌冻干粉，对发光细菌冻干粉进行复苏处理；
(2)将复苏后的发光细菌接种到培养基内，在24℃的环境下，进行培养，培养时间为2h，待发光细菌培养到对数生长期时，收集菌体，获得菌体沉淀，使用分散液分散菌体，制成微生物菌液；
S3：生物毒性检测：
(1)取出实验组和对照组的容器，分别将实验组容器内的样本水体和对照组容器内的去氯自来水注入细胞培养板内的不同微孔内，确保样本水体和去氯自来水明确分开；
(2)将微生物菌液注入细胞培养板内，将细胞培养板置于120rpm振荡器内振荡，时间为30s，静置18min；
(3)使用发光检测仪检测细胞培养板内各个微孔的发光值，并记录；
(4) 计算发光抑制率，对比实验组和对照组的发光抑制率，得出实验结论 测得目标水体的生物毒性。
发光细菌冻干粉优选为青海弧菌冻干粉，青海弧菌冻干粉不需要将样品水体添加NaCl至3%的浓度就可以检测，这就避免了海洋发光菌可能受到NaCl影响的缺点。
培养基中各成分的质量分数为：胰胨 0.5%、酵母膏 0.5%、甘 油0.3%、MgCl20.32%、KBr 0.02%、CaSO4 0.01%、NaCl 0.4%、KCl 0.4%。
发光抑制率计算方法为I = (R0-R)/ R0 ×100%，其中R0为对照组的发光强度平均值，R为实验组的发光强度平均值，I为发光抑制率。
发光检测仪采用微孔板式发光检测仪，具体型号为LB960。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种应用于生物技术中生物毒性检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：目标水体取样：
(1)按照标准取样方法对目标水体进行取样，并对目标水体进行除杂处理，采用35mm的滤膜对目标水体进行过滤，取得过滤后的水体；
(2)设置实验组，将目标水体注入实验组的容器内，设置对照组，将去氯自来水注入对照组的容器内；
(3)将实验组和对照组进行保存，保存温度为2-5℃，保存时间为4-6h；
S2：制备微生物菌液：
(1)选择发光细菌冻干粉，对发光细菌冻干粉进行复苏处理；
(2)将复苏后的发光细菌接种到培养基内，在20-25℃的环境下，进行培养，培养时间为0.5-2h，待发光细菌培养到对数生长期时，收集菌体，获得菌体沉淀，使用分散液分散菌体，制成微生物菌液；
S3：生物毒性检测：
(1)取出实验组和对照组的容器，分别将实验组容器内的样本水体和对照组容器内的去氯自来水注入细胞培养板内的不同微孔内，确保样本水体和去氯自来水明确分开；
(2)将微生物菌液注入细胞培养板内，将细胞培养板置于120rpm振荡器内振荡，时间为30s，静置10-20min；
(3)使用发光检测仪检测细胞培养板内各个微孔的发光值，并记录；
(4) 计算发光抑制率，对比实验组和对照组的发光抑制率，得出实验结论 测得目标水体的生物毒性。
2.根据权利要求1所述的一种应用于生物技术中生物毒性检测方法，其特征在于：所述发光细菌冻干粉优选为青海弧菌冻干粉。
3.根据权利要求1所述的一种应用于生物技术中生物毒性检测方法，其特征在于：所述培养基中各成分的质量分数为：胰胨 0.5%、酵母膏 0.5%、甘 油0.3%、MgCl2 0.32%、KBr0.02%、CaSO4 0.01%、NaCl 0.4%、KCl 0.4%。
4.根据权利要求1所述的一种应用于生物技术中生物毒性检测方法，其特征在于：所述发光抑制率计算方法为I = (R0 -R)/ R 0 ×100%，其中R0为对照组的发光强度平均值，R为实验组的发光强度平均值，I为发光抑制率。
5.根据权利要求1所述的一种应用于生物技术中生物毒性检测方法，其特征在于：所述发光检测仪采用微孔板式发光检测仪，具体型号为LB960。
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