CN112540162A - 一种水质生物毒性检测方法 - Google Patents

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孙博超
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杨畅
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Abstract

本发明公开了一种水质生物毒性检测方法，包括以下步骤：收集待检测水，并对待检测水进行除氯处理；制备微生物菌液；生物毒性检测：检测微生物菌液的初始发光量，然后将微生物菌液投入待检测水质中，再次检测微生物菌液的发光量，并计算抑光率，实现待检测水质生物毒性的检测。本发明的有益效果为：本发明所述一种水质生物毒性检测方法能在短时间内将水质问题呈现出来，提高了生物监测预警的及时性、灵敏性和准确性，且该检测方法费时较少、操作简单、结果准确，为突发性水质污染和水厂的水处理技术提供支持，降低由于饮用水暴露导致的风险，保障供水水质安全。

Description

一种水质生物毒性检测方法
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种水质生物毒性检测方法。
背景技术
随着近代工业的发展，化学物质的使用日益增多，使人类赖以生存的水生生态系统受到了越来越严重的污染，而且突发性环境污染事故时有发生，如人为投毒、自然灾害引起的水质突变，尤其是石油化工原料、产品及有毒有害危险品的生产、储存和运输过程中发生的事故对环境水体所造成的污染等。这就要求我们要快速地应对各种突发性环境污染事故，尽量减少各种经济损失或社会影响。几十年来，各种理化分析手段的灵敏度越来越高，大多数研究者都是关注单一污染物对生物体和生态系统的毒性效应，但是，环境中的生物体常常暴露于多组分污染物共存的混合体系中，而非简单的单一体系。混合物体系产生的毒性效应是所有组分污染物拮抗、叠加、协同或抑制作用的综合结果，即使混合物体系中的单一组分处于无毒性效应浓度时，该组分对混合物的总毒性效应仍有一定的贡献。因此，发展新的快速、准确评价各类污染物毒性的有效方法显得非常迫切和必要。
发光菌毒性试验是经典的综合生物毒性评价方法之一，因细菌生长周期短，对环境变化敏感等特点，其发光强度的变化程度与毒物质量浓度在理论上呈线性相关。以发光菌为代表的细菌类试验在国内外得到广泛的应用，许多国家已将发光菌方法作为标准的毒性测试方法。目前也有发光菌毒性仪应用在了水质预警检测上，作为水质安全的有力屏障之一。
发明内容
本发明的目的在于提供一种可提高水质生物毒性检测，且在短时间内将水质状况呈现出来的水质生物毒性检测方法。
为实现本发明的上述目的，本发明采用以下技术方案：
一种水质生物毒性检测方法，包括以下步骤：
(1)收集待检测水，并对待检测水进行除氯处理；
(2)制备微生物菌液；
(3)生物毒性检测：检测微生物菌液的初始发光量，然后将微生物菌液投入待检测水质中，再次检测微生物菌液的发光量，并计算抑光率，实现待检测水质生物毒性的检测。
上述一种水质生物毒性检测方法，作为一种优选的实施方案，步骤(1)中，所述除氯处理为将待检测水通过除氯过滤器进行处理，优选地，所述除氯过滤器内填塞有除氯剂，所述除氯过滤器的顶端设置有进液口，所述除氯过滤器的底部设置有出液口。
上述一种水质生物毒性检测方法，作为一种优选的实施方案，所述除氯剂为纯度＞99.5％的氧化铋。
氧化铋一般指三氧化二铋，可以除去水中80％以上的氯，而且可以碱洗重复回收利用。
上述一种水质生物毒性检测方法，作为一种优选的实施方案，所述微生物菌液的制备方法为：将发光细菌接种到培养基内，待发光细菌培养到对数生长期时，使用分散液分散菌体，制成微生物菌液。
上述一种水质生物毒性检测方法，作为一种优选的实施方案，所述发光细菌为费氏弧菌或/和青海弧菌。
费氏弧菌是一类能够发射可见荧光的细菌，正常的发光细菌能发出波长在450-490nm的蓝绿色可见光，在一定的实验条件下发光强度是恒定的，由于毒物具有抑制发光的作用，在与受试物接触后，发光细菌的发光强度既有所改变，变化的程度与受试物的浓度在一定范围内呈相关关系。
青海弧菌是一株淡水发光细菌，能持续稳定地发射蓝绿光(最大发射波长485nm)，一旦遭遇有毒有害物质，很快会被抑制发光，其发光抑制程度与所受的有毒有害物质的毒性及浓度有对应关系。
上述一种水质生物毒性检测方法，作为一种优选的实施方案，所述培养基为含20-25ug/L卡那霉素的LB固体培养基。
上述一种水质生物毒性检测方法，作为一种优选的实施方案，所述培养基为含22ug/L卡那霉素的LB固体培养基。
上述一种水质生物毒性检测方法，作为一种优选的实施方案，将发光细菌接种到培养基上，在20-25℃下培养15-20h，待培养结束，用生理盐水将菌苔从培养基上冲刷下来，得微生物菌液。
上述一种水质生物毒性检测方法，作为一种优选的实施方案，步骤(3)中，将微生物菌液投入待检测水质中，15-30min后再次检测微生物菌液的发光量。
上述一种水质生物毒性检测方法，作为一种优选的实施方案，步骤(3)中，抑光率计算方法为I＝(R0-R)/R0×100％，其中R0为微生物菌液的初始发光量，R为投入水中后微生物菌液的发光量，I为抑光率。
相对于现有技术，本发明的有益效果为：本发明所述一种水质生物毒性检测方法能在短时间内将水质问题呈现出来，提高了生物监测预警的及时性、灵敏性和准确性，且该检测方法费时较少、操作简单、结果准确，为突发性水质污染和水厂的水处理技术提供支持，降低由于饮用水暴露导致的风险，保障供水水质安全。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明的技术方案进行详细的描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所得到的所有其它实施方式，都属于本发明所保护的范围。
实施例1
一种水质生物毒性检测方法，包括以下步骤：
(1)收集待检测水，并将待检测水通过除氯过滤器进行除氯处理；
作为一种优选的实施方案，除氯过滤器内填塞有除氯剂，除氯过滤器的顶端设置有进液口，除氯过滤器的底部设置有出液口；待检测水从除氯过滤器的进液口流入，从出液口流出，实现对待检测水的除氯；
作为一种优选的实施方案，除氯剂为纯度＞99.5％的氧化铋，氧化铋可除去水中80％以上的氯，消除了氯对水质生物毒性检测的影响，使检测结果更精准；
(2)制备微生物菌液：
将发光细菌青海弧菌接种到含20ug/L卡那霉素的LB固体培养基内，在20℃下培养20h，待发光细菌培养到对数生长期时，用生理盐水将菌苔从培养基上冲刷下来，制成微生物菌液；
(3)生物毒性检测：检测微生物菌液的初始发光量记为R0，然后将微生物菌液投入待检测水质中，15min后再次检测微生物菌液的发光量记为R，并计算抑光率I，抑光率计算方法为I＝(R0-R)/R0×100％，实现待检测水质生物毒性的检测。
实施例2
一种水质生物毒性检测方法，包括以下步骤：
(1)收集待检测水，并将待检测水通过除氯过滤器进行除氯处理；
作为一种优选的实施方案，除氯过滤器内填塞有除氯剂，除氯过滤器的顶端设置有进液口，除氯过滤器的底部设置有出液口；待检测水从除氯过滤器的进液口流入，从出液口流出，实现对待检测水的除氯；
作为一种优选的实施方案，除氯剂为纯度＞99.5％的氧化铋，氧化铋可除去水中80％以上的氯，消除了氯对水质生物毒性检测的影响，使检测结果更精准；
(2)制备微生物菌液：
将发光细菌费氏弧菌或和青海弧菌接种到含22ug/L卡那霉素的LB固体培养基内，在22℃下培养18h，待发光细菌培养到对数生长期时，用生理盐水将菌苔从培养基上冲刷下来，制成微生物菌液；
(3)生物毒性检测：检测微生物菌液的初始发光量记为R0，然后将微生物菌液投入待检测水质中，25min后再次检测微生物菌液的发光量记为R，并计算抑光率I，抑光率计算方法为I＝(R0-R)/R0×100％，实现待检测水质生物毒性的检测。
实施例3
一种水质生物毒性检测方法，包括以下步骤：
(1)收集待检测水，并将待检测水通过除氯过滤器进行除氯处理；
作为一种优选的实施方案，除氯过滤器内填塞有除氯剂，除氯过滤器的顶端设置有进液口，除氯过滤器的底部设置有出液口；待检测水从除氯过滤器的进液口流入，从出液口流出，实现对待检测水的除氯；
作为一种优选的实施方案，除氯剂为纯度＞99.5％的氧化铋，氧化铋可除去水中80％以上的氯，消除了氯对水质生物毒性检测的影响，使检测结果更精准；
(2)制备微生物菌液：
将发光细菌费氏弧菌接种到含25ug/L卡那霉素的LB固体培养基内，在20℃下培养20h，待发光细菌培养到对数生长期时，用生理盐水将菌苔从培养基上冲刷下来，制成微生物菌液；
(3)生物毒性检测：检测微生物菌液的初始发光量记为R0，然后将微生物菌液投入待检测水质中，30min后再次检测微生物菌液的发光量记为R，并计算抑光率I，抑光率计算方法为I＝(R0-R)/R0×100％，实现待检测水质生物毒性的检测。
以上所述仅为本申请的优选实施例而已，并不用于限制本申请，对于本领域的技术人员来说，本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种水质生物毒性检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)收集待检测水，并对待检测水进行除氯处理；
(2)制备微生物菌液；
(3)生物毒性检测：检测微生物菌液的初始发光量，然后将微生物菌液投入待检测水质中，再次检测微生物菌液的发光量，并计算抑光率，实现待检测水质生物毒性的检测。
2.根据权利要求1所述一种水质生物毒性检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述除氯处理为将待检测水通过除氯过滤器进行处理，优选地，所述除氯过滤器内填塞有除氯剂，所述除氯过滤器的顶端设置有进液口，所述除氯过滤器的底部设置有出液口。
3.根据权利要求2所述一种水质生物毒性检测方法，其特征在于，所述除氯剂为纯度＞99.5％的氧化铋。
4.根据权利要求1所述一种水质生物毒性检测方法，其特征在于，所述微生物菌液的制备方法为：将发光细菌接种到培养基内，待发光细菌培养到对数生长期时，使用分散液分散菌体，制成微生物菌液。
5.根据权利要求4所述一种水质生物毒性检测方法，其特征在于，所述发光细菌为费氏弧菌或/和青海弧菌。
6.根据权利要求4所述一种水质生物毒性检测方法，其特征在于，所述培养基为含20-25ug/L卡那霉素的LB固体培养基。
7.根据权利要求4所述一种水质生物毒性检测方法，其特征在于，所述培养基为含22ug/L卡那霉素的LB固体培养基。
8.根据权利要求4所述一种水质生物毒性检测方法，其特征在于，将发光细菌接种到培养基上，在20-25℃下培养15-20h，待培养结束，用生理盐水将菌苔从培养基上冲刷下来，得微生物菌液。
9.根据权利要求1所述一种水质生物毒性检测方法，其特征在于，步骤(3)中，将微生物菌液投入待检测水质中，15-30min后再次检测微生物菌液的发光量。
10.根据权利要求1所述一种水质生物毒性检测方法，其特征在于，步骤(3)中，抑光率计算方法为I＝(R0-R)/R0×100％，其中R0为微生物菌液的初始发光量，R为投入水中后微生物菌液的发光量，I为抑光率。
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