CN108495685A - 针对艰难梭菌感染的基于酵母的免疫疗法 - Google Patents

针对艰难梭菌感染的基于酵母的免疫疗法 Download PDF

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Abstract

描述了衍生自人类和骆驼科动物免疫球蛋白的基于抗体的结合剂，以及工程化以分泌结合剂的酵母菌株，以及使用工程化酵母菌株治疗和预防艰难梭菌感染的方法。这些结合剂识别并特异性结合艰难梭菌毒素A和/或毒素B，并且在一些情况下显示出毒素中和活性。结合剂包括骆驼科VHH肽单体、VHH肽单体的连接基团、连接到抗体Fc结构域的VHH肽单体和连接到IgG抗体的VHH肽单体。

Description

针对艰难梭菌感染的基于酵母的免疫疗法
联邦政府赞助研究与发展的声明
本发明是在国立卫生研究院授予的基金号DK084509和AI109776的政府支持下完成的。政府对本发明享有一定的权利。
序列表
电子(ASCII文本文件)格式的序列表与本申请一起提交，并且通过引用并入本文。ASCII文件的名称是“2016_1343A_ST25.txt”；该文件于2016年10月13日创建；该文件的大小是407KB。
背景技术
细菌艰难梭菌(Clostridium difficile)是医院内抗生素相关性腹泻的最常见原因以及假膜性结肠炎(pseudomembranous colitis)的病原体[1]。据估计，美国每年有超过500,000例艰难梭菌相关性疾病(CDI)发生，取决于菌株，每年的死亡率约为3-17％。随着高毒性和抗生素耐药菌株的出现，CDI患者的死亡率迅速增加[2]。
CDI主要由两种艰难梭菌外毒素TcdA和TcdB引起(因为TcdA-TcdB-菌株是无毒的)[21,22]。这两种毒素在结构上相似，并且对宿主细胞表现出类似的作用模式。这两种毒素都将宿主Rho GTP酶作为目标，导致它们失活以及细胞骨架破坏。两种毒素在CDI发病机制中的相关作用尚未得到很好的理解，但很明显任一种毒素单独地在动物中可引起CDI[22,23]。
治疗CDI患者的选择是有限的，且复发率高(20-35％的患者)。目前使用抗生素治疗CDI的标准治疗会导致微生物群的破坏并导致复发率接近35％[3,13]。尽管已经尝试了其他干预措施(例如益生菌、吸收毒素的聚合物和类毒素疫苗)，但预防和治疗策略都没有跟上这种感染的发病率和严重程度的增加。在复发患者中进一步发作CDI的风险可能超过50％[14]，并且一部分患者会有多次复发。CDI的复发可能由同一株或新定殖菌株所引起[15-18]。
已经表明较新的基于免疫的疗法在临床试验中稍微有效，包括针对严重CDI[4-8]的静脉内免疫球蛋白(IVIG)和针对复发性CDI的人单克隆抗体[9]。非达霉素(Fidaxomicin)，一种窄谱大环抗生素，在CDI上显示类似于口服万古霉素的效果，但在降低复发率方面效果更加显著[10]。粪便移植对顽固性和复发性CDI有效，但难以标准化，且与风险相关[11,12]。
CDI是一种令人沮丧的疾病，难以治疗，可能影响患者数月甚至数年，从而造成巨大的发病率和死亡率[19]。因此，需要针对CDI的新疗法以及用于预防有发展为CDI风险的受试者中的原发性和复发性CDI的手段。
发明内容
本文提供选择性结合艰难梭菌毒力因子TcdA和TcdB的基于抗体的融合蛋白结合剂，以及基因工程改造以表达和分泌这些艰难梭菌毒素结合剂的益生酵母酵母属(Saccharomyces)菌株。酵母和结合剂都显示出治疗和预防受试者中的原发性和复发性CDI的实用性。在宿主肠中分泌结合剂的口服施用酵母属可以减轻进行中的CDI并防止复发。
因此，本发明涉及艰难梭菌毒素结合剂，酵母属的菌株，包括但不限于工程化以产生结合剂的布拉酵母(Saccharomyces boulardii)，涉及制备酵母的工程菌株的方法，以及使用结合剂和酵母的工程菌株以及其他重要特征来治疗和预防原发性和复发性CDI的方法。
结合剂
本发明的结合剂包括简单的VHH肽单体和VHH肽单体的连接基团(包括2、3、4或更多个单体)以及包括连接至抗体Fc结构域的VHH肽单体以及连接至部分或完整IgG抗体的VHH肽单体的更复杂的结合剂。
在第一实施例中，本发明涉及包括VHH肽单体和包括2、3、4或更多个单体的VHH肽单体的连接基团的结合剂，其中的每一个结合TcdA和/或TcdB，优选具有特异性。因此，本发明涵盖包括至少一个VHH肽单体的VHH肽结合剂，其中每个VHH肽单体对艰难梭菌毒素A(TcdA)或毒素B(TcdB)的表位具有结合特异性。在某些方面，这些结合剂包括2、3、4或更多个连接的VHH肽单体。VHH肽单体包括但不限于VHH肽单体5D(SEQ ID NO：1)、E3(SEQ ID NO：3)、AA6(SEQ ID NO：5)和AH3(SEQ ID NO：7)。
在其中两个或更多个单体连接的该实施例的多个方面，单体可以通过柔性肽接头连接，通常包含10-20个氨基酸。合适的接头包括但不限于接头-1(SEQ ID NO：9)、接头-2(SEQ ID NO：11)和接头-3(SEQ ID NO：13)。
在该实施例的某些方面，结合剂以特异性结合TcdA和/或TcdB。在该实施例的某些方面，结合剂显示TcdA和/或TcdB中和活性。
在该实施例的具体方面，结合剂包含四个连接的VHH肽单体，其中两个单体对TcdA的表位具有结合特异性，两个单体对TcdB的表位具有结合特异性。TcdA的表位可以相同或不同。TcdB的表位可以相同或不同。
在该实施例的具体方面，结合剂包括SEQ ID NO：19所示的氨基酸序列或其与其具有至少95％序列同一性的序列变体，并且其中所述序列变体保留TcdA和/或TcdB的结合特异性，或序列变体保留毒素中和活性，或保留两者。在一些情况下，序列变体的变体氨基酸位于VHH肽单体的框架区中。
在第二实施例中，本发明涉及包括连接至IgG抗体的VHH肽单体的结合剂，其中所述结合剂结合TcdA和/或TcdB。在这些基于IgG的结合剂中，IgG抗体的轻链和重链的可变区被1、2、3、4个或更多个VHH肽单体替换。
在该实施例的某些方面，这些结合剂包含连接到IgG轻链和重链的氨基末端以代替可变区的2、3、4或更多个连接的VHH肽单体。VHH肽单体包括但不限于VHH肽单体5D(SEQ IDNO：1)、E3(SEQ ID NO：3)、AA6(SEQ ID NO：5)和AH3(SEQ ID NO：7)。
在其中两个或更多个单体连接的该实施例的多个方面，单体可以通过柔性肽接头连接，通常包含10-20个氨基酸。合适的接头包括但不限于接头-1(SEQ ID NO：9)、接头-2(SEQ ID NO：11)和接头-3(SEQ ID NO：13)。
在第一子实施例中，本发明涉及包括IgG抗体、两组连接的第一和第二VHH肽单体和两组连接的第三和第四VHH肽单体的四特异性八聚体结合剂，其中所述IgG抗体包含两个臂，每个臂包括缺少可变区的轻链和缺少可变区的重链，并且每条链具有氨基末端，其中对于抗体的每个臂，一组连接的第一和第二VHH肽单体连接到轻链的氨基末端，并且一组连接的第三和第四VHH肽单体连接到重链的氨基末端，以及其中VHH肽单体对艰难梭菌毒素A(TcdA)或毒素B(TcdB)的表位具有结合特异性。这种结合剂因其识别四种不同的毒素表位而称为“四特异性”。由于它携带八个VHH肽单体(第一单体的两个拷贝、第二单体的两个拷贝、第三单体的两个拷贝和第四单体的两个拷贝)，因此它被称为“八聚体”。
在该子实施例中，第一、第二、第三和第四VHH肽单体各自具有对不同表位的结合特异性。
在该子实施例的某些方面，两个VHH肽单体对TcdA的表位具有结合特异性，并且两个VHH肽单体对TcdB的表位具有结合特异性。
在该子实施例的某些方面，VHH肽单体独立地对TcdA或TcdB的葡糖基转移酶结构域、半胱氨酸蛋白酶结构域、易位结构域或受体结合结构域中的表位具有结合特异性。
在该子实施例的具体方面，结合剂的轻(kappa)链包括SEQ ID NO：46(AA6/E3kappa)所示的氨基酸序列或与其具有至少95％序列同一性的序列变体，以及结合剂的重链包括SEQ ID NO：44(AH3/5D重)所示的氨基酸序列或与其具有至少95％序列同一性的序列变体。由于这种结合剂是基于IgG的结合剂，技术人员清楚，具有所述氨基酸序列的两个重链多肽和两个轻链多肽将通过二硫键组装以提供完整的结合剂。序列变体保留TcdA和/或TcdB结合特异性，或序列变体保留毒素中和活性或保留两者。序列变体的变体氨基酸可以位于VHH肽单体的框架区中。
在第二子实施例中，本发明涉及包括IgG抗体和第一、第二、第三和第四VHH肽单体的双特异性或四特异性的四聚体结合剂，其中IgG抗体包括两个臂，每个臂包括缺少可变区的重链和缺少可变区的轻链，并且每条链具有氨基末端，其中对于抗体的第一臂，第一VHH肽单体连接至轻链的氨基末端，并且第二VHH肽单体连接至重链的氨基末端，其中对于抗体的第二臂，第三VHH肽单体连接至轻链的氨基末端，并且第四VHH肽单体连接至重链的氨基末端，以及其中VHH肽单体对艰难梭菌毒素A(TcdA)或毒素B(TcdB)的表位具有结合特异性。当结合剂是“四特异性”时，它识别四种不同的毒素表位；当“双特异性”时，它识别两种不同的毒素表位。由于它们带有四个VHH肽单体，结合剂是“四聚的”(当双特异性时，第一和第三单体具有相同的序列并结合相同的表位，并且第二和第四单体具有相同的序列并结合相同的表位；当四特异性时，每个单体具有不同的序列并结合不同的表位)。
当结合剂是双特异性时，第一和第二单体对不同表位具有结合特异性，第一和第三单体具有相同的氨基酸序列，并且第二和第四单体可以具有相同的氨基酸序列。VHH肽单体中的一个可以对TcdA的表位具有结合特异性，并且VHH肽单体中的一个可以对TcdB的表位具有结合特异性。
当结合剂是四特异性时，每个VHH肽单体对不同表位具有结合特异性。两个VHH肽单体可以对TcdA的表位具有结合特异性，并且两个VHH肽单体可以对TcdB的表位具有结合特异性。
在该子实施例的某些方面，每个VHH肽单体对TcdA的表位具有结合特异性。
在该子实施例的某些方面，每个VHH肽单体对TcdB的表位具有结合特异性。
在该子实施例的某些方面，VHH肽单体独立地对TcdA或TcdB的葡糖基转移酶结构域、半胱氨酸蛋白酶结构域、易位结构域或受体结合结构域中的表位具有结合特异性。
在该子实施例的具体方面，结合剂的轻(kappa)链包括SEQ ID NO：40(AA6kappa)所示的氨基酸序列或与其具有至少95％序列同一性的序列变体，以及结合剂的重链包括SEQ ID NO：36(AH3重)所示的氨基酸序列或与其具有至少95％序列同一性的序列变体。由于这种结合剂是基于IgG的结合剂，技术人员清楚，具有所述氨基酸序列的两个重链多肽和两个轻链多肽将通过二硫键组装以提供完整的结合剂。序列变体保留TcdA和/或TcdB结合特异性，或序列变体保留毒素中和活性或保留两者。序列变体的变体氨基酸可以位于VHH肽单体的框架区中。
在该子实施例的另一具体方面，结合剂的轻(kappa)链包括SEQ ID NO：42(E3kappa)所示的氨基酸序列或与其具有至少95％序列同一性的序列变体，以及结合剂的重链包括SEQ ID NO：38(5D重)所示的氨基酸序列或与其具有至少95％序列同一性的序列变体。由于这种结合剂是基于IgG的结合剂，技术人员清楚，具有所述氨基酸序列的两个重链多肽和两个轻链多肽将通过二硫键组装以提供完整的结合剂。序列变体保留TcdA和/或TcdB结合特异性，或序列变体保留毒素中和活性或保留两者。序列变体的变体氨基酸可以位于VHH肽单体的框架区中。
在该实施例和子实施例的某些方面，结合剂以特异性结合TcdA和/或TcdB。在该实施例的某些方面，结合剂显示TcdA和/或TcdB中和活性。
在第三实施例中，本发明涉及包含连接至抗体Fc结构域的VHH肽单体的结合剂，其中结合剂结合TcdA和/或TcdB。在这些基于Fc结构域的结合剂中，1、2、3、4或更多个VHH肽单体连接至抗体重链的Fc结构域的每个臂的铰链、CH2和CH3区。因此，肽单体取代抗体的Fab区域。
在该实施例的某些方面，这些结合剂包含连接至Fc结构域的臂的氨基末端的2、3、4或更多个连接的VHH肽单体。VHH肽单体包括但不限于VHH肽单体5D(SEQ ID NO：1)、E3(SEQID NO：3)、AA6(SEQ ID NO：5)和AH3(SEQ ID NO：7)。
在其中两个或更多个单体连接的该实施例的方面，单体可以通过柔性肽接头连接，通常包括10-20个氨基酸。合适的接头包括但不限于接头-1(SEQ ID NO：9)、接头-2(SEQID NO：11)和接头-3(SEQ ID NO：13)。
在第一子实施例中，本发明涉及包含抗体Fc结构域和两组连接的第一、第二、第三和第四VHH肽单体的四特异性八聚体结合剂，其中抗体Fc结构域包括两个臂，每个臂包括抗体重链的铰链、CH2和CH3区，以及每个臂具有氨基末端，其中对于Fc结构域的每个臂，将一组连接的第一、第二、第三和第四VHH肽单体连接至臂的氨基末端，并且其中VHH肽单体对艰难梭菌毒素A(TcdA)或毒素B(TcdB)的表位具有结合特异性。这种结合剂因其识别四种不同的毒素表位而称为“四特异性”。由于它携带八个VHH肽单体(第一单体的两个拷贝、第二单体的两个拷贝、第三单体的两个拷贝以及第四单体的两个拷贝)，因此它被称为“八聚体”。
在该子实施例的某些方面，第一、第二、第三和第四VHH肽单体各自具有针对不同表位的结合特异性。
在该子实施例的某些方面，两个VHH肽单体对TcdA的表位具有结合特异性，并且两个VHH肽单体对TcdB的表位具有结合特异性。
在该子实施例的某些方面，VHH肽单体独立地对TcdA或TcdB的葡糖基转移酶结构域、半胱氨酸蛋白酶结构域、易位结构域或受体结合结构域中的表位具有结合特异性。
在该子实施例的具体方面，结合剂包括SEQ ID NO：22(ABAB-Fc)中所示的氨基酸序列或与其具有至少95％序列同一性的序列变体，其中序列变体保留TcdA和/或TcdB结合特异性，或序列变体保留毒素中和活性，或保留两者。由于这种结合剂是基于Fc结构域的结合剂，技术人员将清楚，具有所述氨基酸序列的两个相同多肽充当结合剂的臂，并且臂将通过二硫键组装以提供完整的结合剂。序列变体的变体氨基酸可以位于VHH肽单体的框架区中。
在第二子实施例中，本发明涉及包含抗体Fc结构域和两组连接的第一和第二VHH肽单体的双特异性四聚体结合剂，其中抗体Fc结构域包括两个臂，每个臂包括抗体重链的铰链、CH2和CH3区，以及每个臂具有氨基末端，其中对于Fc结构域的每个臂，将一组连接的第一和第二VHH肽单体连接至臂的氨基末端，并且其中VHH肽单体对艰难梭菌毒素A(TcdA)或毒素B(TcdB)的表位具有结合特异性。这种结合剂因其识别两种不同的毒素表位而称为“双特异性”。由于它携带四个VHH肽单体(第一单体的两个拷贝以及第二单体的两个拷贝)，因此它被称为“四聚体”。
在该子实施例的某些方面，第一和第二VHH肽单体对相同或不同的表位具有结合特异性。
在该子实施例的某些方面，VHH肽单体独立地对TcdA或TcdB的葡糖基转移酶结构域、半胱氨酸蛋白酶结构域、易位结构域或受体结合结构域中的表位具有结合特异性。
在该子实施例的具体方面，结合剂包括SEQ ID NO：32(AH3/5D-Fc)中所示的氨基酸序列或与其具有至少95％序列同一性的序列变体，其中序列变体保留TcdA和/或TcdB结合特异性，或序列变体保留毒素中和活性，或保留两者。由于这种结合剂是基于Fc结构域的结合剂，技术人员将清楚，具有所述氨基酸序列的两个相同多肽充当结合剂的臂，并且臂将通过二硫键组装以提供完整的结合剂。序列变体的变体氨基酸可以位于VHH肽单体的框架区中。
在该子实施例的另一具体方面，结合剂包括SEQ ID NO：34(AA6/E3-Fc)中所示的氨基酸序列或与其具有至少95％序列同一性的序列变体，其中序列变体保留TcdA和/或TcdB结合特异性，或序列变体保留毒素中和活性，或保留两者。由于这种结合剂是基于Fc结构域的结合剂，技术人员将清楚，具有所述氨基酸序列的两个相同多肽充当结合剂的臂，并且臂将通过二硫键组装以提供完整的结合剂。序列变体的变体氨基酸可以位于VHH肽单体的框架区中。
在该实施例和子实施例的某些方面，结合剂以特异性结合TcdA和/或TcdB。在该实施例的某些方面，结合剂显示TcdA和/或TcdB中和活性。
本发明包括在本文定义的各种实施例和方面提供的每种结合剂的人源化变体。同样，本发明包括本文定义的各种实施例和方面提供的每种结合剂的表位结合片段。
多核苷酸、表达载体和宿主细胞
本发明包括包含编码本文定义的各种实施例和方面提供的每种结合剂的核苷酸序列的多核苷酸及其互补链。本发明还包括包含所述多核苷酸的表达载体(例如细菌和酵母)以及包含所述表达载体的宿主细胞(例如细菌、酵母、哺乳动物、昆虫)。本发明进一步包括产生本文定义的结合剂的方法，包括在促进由表达载体编码的结合剂表达的条件下培养宿主细胞，并从细胞培养物中回收结合剂。
布拉酵母(S.boulardii)的工程菌株
在第四实施例中，本发明涉及酵母属(Saccharomyces)酵母菌株，例如酿酒酵母(S.cerevisiae)和布拉酵母(S.boulardii)，其经工程改造以产生一种或多种本文所定义的结合剂。在优选的方面，酵母属酵母的工程菌株分泌结合剂。
酵母属酵母菌株的身份仅限于其可工程化以产生并优选分泌一种或多种本发明的结合剂。在本发明的优选方面，工程化以产生一种或多种结合剂的酵母属酵母的菌株是酿酒酵母或布拉酵母。因此，本发明包括产生一种或多种本文定义的结合剂的酿酒酵母的工程菌株，以及分泌一种或多种本文定义的结合剂的酿酒酵母的工程菌株。本发明还包括产生一种或多种本文定义的结合剂的布拉酵母的工程菌株，以及分泌一种或多种本文定义的结合剂的布拉酵母的工程菌株。
在该实施例的示例中，本发明涉及产生结合剂的酿酒酵母的工程菌株，所述结合剂VHH肽单体或包括2、3、4或更多个单体的VHH肽单体的连接基团，每个单体优选地以特异性结合TcdA和/或TcdB。因此，本发明包括产生VHH肽结合剂的酿酒酵母工程菌株，所述VHH肽结合剂包括至少一个VHH肽单体，其中每个VHH肽单体对艰难梭菌毒素A(TcdA)或毒素B(TcdB)的表位具有结合特异性。在某些方面，这些结合剂包括2、3、4或更多个连接的VHH肽单体。VHH肽单体包括但不限于VHH肽单体5D(SEQ ID NO：1)、E3(SEQ ID NO：3)、AA6(SEQ ID NO：5)和AH3(SEQ ID NO：7)。
在该实施例的另一示例中，本发明涉及产生结合剂的酿酒酵母工程菌株，所述结合剂包括连接至IgG抗体的VHH肽单体，其中所述结合剂结合本文定义的TcdA和/或TcdB。在这些基于IgG的结合剂中，IgG抗体的轻链和重链的可变区被1、2、3、4个或更多个VHH肽单体替换。
在该实施例的另一示例中，本发明涉及产生结合剂的酿酒酵母工程菌株，所述结合剂包含连接至抗体Fc结构域的VHH肽单体，其中所述结合剂结合如本文所定义的TcdA和/或TcdB。在这些基于Fc结构域的结合剂中，1、2、3、4个或更多个VHH肽单体连接至抗体重链的Fc结构域的每个臂的铰链区、CH2和CH3区。因此，肽单体取代抗体的Fab区域。
在该实施例的又一示例中，本发明涉及产生四特异性四聚体结合剂的酿酒酵母工程菌株，其中所述结合剂包含连接的第一、第二、第三和第四VHH肽单体，并且其中VHH肽单体独立地对艰难梭菌毒素A(TcdA)或毒素B(TcdB)的表位具有结合特异性。在某些方面，第一、第二、第三和第四VHH肽单体各自对不同表位具有结合特异性。在某些方面，两个VHH肽单体对TcdA的表位具有结合特异性，并且两个VHH肽单体对TcdB的表位具有结合特异性。在某些方面，VHH肽单体独立地对TcdA或TcdB的葡糖基转移酶结构域、半胱氨酸蛋白酶结构域、易位结构域或受体结合结构域中的表位具有结合特异性。
在该实施例的优选示例中，本发明涉及工程酵母菌株，其中结合剂是ABAB，其中第一和第三单体对TcdA的表位具有结合特异性以及第一和第三单体分别是VHH肽单体AH3(SEQ ID NO：7)和AA6(SEQ ID NO：5)，并且其中第二和第四单体对TcdB表位具有结合特异性以及第二和第四单体分别是VHH肽单体5D(SEQ ID NO：1)和E3(SEQ ID NO：3)。在某些方面，ABAB结合剂包括SEQ ID NO：19所示的氨基酸序列或与其具有至少95％序列同一性的序列变体，其中所述序列变体保留TcdA和/或TcdB结合特异性，或所述序列变体保留毒素中和活性或保留两者。在某些方面，ABAB结合剂还包括选自AT分泌信号(MRFPSIFTAVLFAASSALA(SEQ ID NO：99))和IVS分泌信号(MLLQAFLFLLAGFAAKISA(SEQ ID NO：103))的N端分泌信号。
在某些方面，ABAB结合剂由酵母内的质粒表达，其中ABAB结合剂包括SEQ ID NO：107所示的氨基酸序列或与其具有至少95％序列同一性的序列变体，并且其中所述序列变体保留TcdA和/或TcdB结合特异性，或所述序列变体保留毒素中和活性或保留两者。质粒可以是但不限于pCEV-URA3-TEF-AT-yABAB-cMyc(SEQ ID NO：88)。
在某些方面，将ABAB结合剂编码序列整合到酵母菌株的染色体中，其中ABAB结合剂包含SEQ ID NO：109所示的氨基酸序列或与其具有至少95％序列同一性的序列变体，并且其中所述序列变体保留TcdA和/或TcdB结合特异性，或所述序列变体保留毒素中和活性或保留两者。
该实施例的方面包括产生对艰难梭菌毒素A(TcdA)或毒素B(TcdB)或两者的独特表位具有结合特异性的治疗性蛋白质的酵母属酵母的工程菌株。优选地，酵母属的工程菌株是酿酒酵母或布拉酵母。治疗性蛋白质是可以在受试者的医学状况中带来改善或治愈，或者可以抑制或预防受试者中医学状况发展的任何蛋白质。合适的治疗性蛋白质包括但不限于能够(a)代替缺陷或异常的蛋白质；(b)增加现有途径；(c)提供新颖的功能或活动；(d)干扰分子或生物体；和(e)传递其他化合物或蛋白质，如放射性核素、细胞毒性药物或效应蛋白质的蛋白质。治疗性蛋白质还包括抗体和基于抗体的药物、Fc融合蛋白质、抗凝血剂、血液因子、骨形态发生蛋白质、工程蛋白质支架、酶、生长因子、激素、干扰素、白细胞介素和溶栓剂。治疗性蛋白质进一步包括双特异性单克隆抗体(mAb)和多特异性融合蛋白质，与小分子药物缀合的mAb以及具有优化药代动力学的蛋白质。
制备布拉酵母(S.boulardii)工程菌株的方法
本发明还涉及制备经工程化以产生一种或多种本文所定义的结合剂的酵母属酵母菌株的方法。
因此，本发明包括制备工程化以产生一种或多种本文定义的结合剂的酵母属酵母菌株的方法，包括(a)用编码结合剂的表达载体转化酵母属酵母菌株，和(b)筛选(a)的酵母以产生结合剂。在某一方面，表达载体是质粒pCEV-URA3-TEF-AT-yABAB-cMyc(SEQ ID NO：88)。
因此，本发明包括制备工程化产生一种或多种本文定义的结合剂的酵母属酵母菌株的方法，其包括(a)将编码结合剂的多核苷酸序列染色体整合到酵母属酵母菌株的基因组中，和(b)筛选(a)的酵母以产生结合剂。在某些方面，染色体整合通过以下方式进行：
(a)使用引物从质粒pCEV-G4-Km-TEF-AT-yABAB hAA6T83N-tagless(SEQ ID NO：90)扩增编码ABAB结合剂的多核苷酸序列以产生整合盒，所述引物含有(i)与选择的酵母染色体整合位点同源的核酸序列和(ii)与质粒的ABAB结合剂编码序列的5'和3'区域同源的核酸序列，
(b)在促进整合盒自发整合到双链断裂位点的条件下，将(a)中产生的整合盒用pCRI-Sb-δ1(SEQ ID NO：91)或pCRI-Sb-δ2(SEQ ID NO：92)转化酵母以诱导相应酵母染色体δ位点内的双链断裂，
(c)筛选(b)中的转化酵母以产生ABAB结合剂。
在这些方法的某些方面，工程化以产生结合剂的酵母属酵母菌株是酵母属酵母的营养缺陷型菌株，例如酵母的ura3-菌株。可以在ura3选择下使用酵母的ura3-菌株。
在这些方法的某些方面，工程化以产生结合剂的酵母属酵母的菌株是酿酒酵母或布拉酵母。
在这些方法的某些方面，筛选使用免疫测定如ELISA进行。
药物制剂
本发明包括含有一种或多种本文定义的结合剂和药学上可接受的载体或稀释剂的药物制剂。本发明还包括药物制剂，其包含一种或多种本文定义的酵母属酵母的工程菌株和药学上可接受的载体或稀释剂。在某些方面，酵母属酵母是酿酒酵母或布拉酵母。
治疗和预防的方法
在第六实施例中，本发明涉及在受试者中治疗或预防由艰难梭菌诱导的疾病症状的方法，其包括向患有艰难梭菌感染或发展成艰难梭菌感染的受试者施用治疗有效量的如本文所定义的一种或多种结合剂和/或一种或多种酵母属酵母的工程菌株。在优选的方面，酵母属酵母是酿酒酵母或布拉酵母。
在该实施例的某些方面，由艰难梭菌诱发的疾病症状是腹泻。
在第七实施例中，本发明涉及在由艰难梭菌感染的受试者中中和艰难梭菌毒素TcdA和/或TcdB的方法，其包括向患有艰难梭菌感染的受试者施用治疗有效量的如本文所定义的一种或多种结合剂和/或一种或多种酵母属酵母的工程菌株。在优选的方面，酵母属酵母是酿酒酵母或布拉酵母。
在第八实施例中，本发明涉及在受试者中治疗或预防艰难梭菌感染的方法，其包括向患有艰难梭菌感染或发展成艰难梭菌感染的受试者施用治疗有效量的如本文所定义的一种或多种结合剂和/或一种或多种酵母属酵母的工程菌株。在优选的方面，酵母属酵母是酿酒酵母或布拉酵母。在第八实施例的某些方面，该方法进一步包括向受试者施用治疗有效量的抗生素。
在第九实施例中，本发明涉及在患有艰难梭菌感染的受试者中维持正常肠功能的方法，其包括向患有艰难梭菌感染或发展成艰难梭菌感染的受试者施用治疗有效量的如本文所定义的一种或多种结合剂和/或一种或多种酵母属酵母的工程菌株。在优选的方面，酵母属酵母是酿酒酵母或布拉酵母。在第九实施例的某些方面，该方法进一步包括向受试者施用治疗有效量的抗生素。
在该方法的某些方面，结合剂处于包括结合剂和药学上可接受的载体或稀释剂的药物制剂中。
在该方法的某些方面，结合剂的治疗有效量为每个受试者体重10μg/kg至100mg/kg的药剂。
在该方法的某些方面，将药剂经口服、胃肠外或直肠施用于受试者。
在该方法的某些方面，酵母属酵母的工程菌株处于包括工程菌株和药学上可接受的载体或稀释剂的药物制剂中。在优选的方面种，酵母属酵母是酿酒酵母或布拉酵母。
在该方法的某些方面，酵母属酵母的工程菌株的治疗有效量为每个受试者体重10ug/kg至100mg/kg工程菌株。在优选的方面，酵母属酵母是酿酒酵母或布拉酵母。
在该方法的某些方面，将酵母菌酵母的工程菌株经口服、经鼻或直肠施用于受试者。在优选的方面，酵母属酵母是酿酒酵母或布拉酵母。
前面已经相当广泛地概述了本发明的特征和技术优点，以便可以更好地理解随后的本发明的详细描述。本文将描述本发明的附加特征和优点，其形成本发明权利要求的主题。本领域技术人员应该理解，本文公开的任何概念和具体实施例可以容易地用作修改或设计用于实现本发明的相同目的的其他结构的基础。本领域技术人员还应该认识到，这样的等同构造不脱离如所附权利要求书中阐述的本发明的精神和范围。结合附图考虑下面的描述，将更好地理解被认为是本发明的特征的新颖特征(无论是其组织和操作方法)以及其他目的和优点。然而，要明确理解的是，仅出于说明和描述的目的而提供任何描述、附图、示例等，而绝非意在限定本发明的限制。
附图说明
图1.用于制备本发明的结合剂的策略的说明。
图2.艰难梭菌毒素TcdA和TcdB的图示，示出每种毒素的葡糖基转移酶结构域(GT)、半胱氨酸蛋白酶结构域(CPD)、易位结构域(TD)和受体结合结构域(RBD)。示出了识别和结合不同毒素结构域的VHH。有下划线的是具有毒素中和活性的VHH。
图3A-3F.单体或二聚体VHH具有有效的中和活性。在nM浓度下，VHH阻断由TcdA(图3A)或TcdB(图3B)诱导的细胞变圆。(图3C)针对TcdA或TcdB两个异二聚体的图示。在N端的His(6)标签便于纯化；柔性间隔区(FS)将两个VHH分开。(图3D)二聚体5D/E3比两个VHH的简单混合物增加至少10倍的中和活性。异二聚体完全保护小鼠免受TcdB(图3E)或TcdA(图3F)的致死性ip攻击。
图4.ABAB的图示。His-标签和E-标签分别是用于纯化和检测的表位标签。FS：柔性接头；ABP：白蛋白结合肽。
图5A-5B.ABAB在保护小鼠免受艰难梭菌孢子(图5A)和毒素(图5B)攻击方面非常有效。MK HuMabs：正在进行临床试验的Merck抗-TcdA(actoxumab)和抗TcdB(bezlotoxumab)人单克隆抗体的混合物。
图6A-6B.针对这两种毒素的抗毒素血清保护小鼠免受CDI的伤害。在艰难梭菌孢子(UK1菌株，106孢子/小鼠)接种之前，向小鼠腹膜内注射50ul针对TcdA(“抗-A”)、TcdB(“抗-B”)、TcdA+TcdB(“抗-A+抗-B”)的羊驼抗血清或100ul presera或PBS(“CTR”)4小时。举例说明了小鼠存活(图6A；抗-A+抗-B vs.PBS，p＝0.006)和体重减轻(图6B)(*，在抗-A+抗-B vs.对照组之间p<0.05)
图7.ABAB和ABAB-IgG分子的图示。
图8A-8B.与各个VHH与各毒素的结合相比，ABAB-IgG与TcdA(图8A)和TcdB(图8B)的结合的ELISA分析。
图9A-9B.同时结合四特异性抗体IgG-ABAB和TcdA和TcdB的夹心ELISA分析。图9A示出了添加到用TcdA(TxA)涂布，然后是TcdB(TxB)涂布的ELISA板中连续稀释的ABAB-IgG。图9B示出了添加到用TcdB(TxB)涂布，然后是TcdA(TxA)涂布的ELISA板中连续稀释的ABAB-IgG。
图10A-10B.针对TcdA(图10A)和TcdB(图10B)的ABAB-IgG中和活性。
图11.该图示出了小鼠中针对艰难梭菌感染的ABAB-IgG和针对TcdA和TcdB(actoxumab和bezlotoxumab)的Merck抗体的体内中和活性的比较。
图12.针对艰难梭菌感染的预防性ABAB-IgG影响的研究设计。
图13A-13B.双特异性夹心ELISA。(图13A)ELISA中建立的毒素和抗体的图示。(图13B)不同TcdA浓度的O.D.读数；选择125ng/ml的TcdA用于亚序列ELISA。
图14A-14B.由Sc-ABAB分泌的ABAB的活性。(图14A)分泌的ABAB在酿酒酵母培养物上清液中的中和作用。Sc：酿酒酵母(BY4741)；Sc-ABAB：酿酒酵母(BY4741)-pD1214-FAKS-ABAB；r-ABAB：重组ABAB。Sc-ABAB上清中的ABAB能够充分保护细胞免于中毒。来自单个Sc-ABAB克隆的上清液的ELISA O.D.读数(图14B)。
图15A-15B.带有各种分泌信号的ABAB分泌水平。(图15A)通过ELISA测量ABAB分泌并基于在酿酒酵母中O.D.600归一化细胞密度。统计显著性通过Kruskal-Walls检验然后进行Dunn's多重比较检验来确定。*p<0.05**p<0.01(图15B)通过ELISA测量ABAB分泌并基于在布拉酵母中O.D.600归一化细胞密度。统计显著性由Mann Whitney检验确定。****p<0.0001。
图16.布拉酵母中通过同源重组靶向缺失染色体编码基因的图示。
图17A-17D.表达ABAB的布拉酵母URA3Δ/Δ。(图17A)在含有万古霉素(1mg/ml)和不含的情况下YPD的生长比较。(图17B)通过ELISA确定培养2小时后布拉酵母培养物上清液中ABAB的稳定性。(图17C)来自表达ABAB的布拉酵母URA3Δ/Δ培养物上清液中ABAB的中和活性。(图17D)通过蛋白质印迹在表达ABAB培养物上清液的布拉酵母URA3Δ/Δ中的ABAB检测。富集：ABAB在C-末端包含c-Myc标签，并使用α-c-Myc标签抗体进一步浓缩。
图18A-18C.在小鼠CDI预防中表达ABAB的布拉酵母的保护作用。(图18A)存活率，(图18B)体重减轻，(图18C)记录并呈现整个感染过程中的腹泻事件。具有双尾和95％置信区间的Fisher精确检验确定显著性*；对于图18A，p值是0.0108，以及对于图18B和图18C，使用常规双向方差分析(ANOVA)(不重复测量)，然后使用Dunnett的多重比较检验，*P≤0.05。“Sb：EP”是具有空质粒的布拉酵母；“Sb：ABAB”是表达ABAB的布拉酵母。
图19A-19C.在治疗CDI小鼠中表达ABAB的布拉酵母的保护。(图19A)存活率，(图19B)体重减轻，(图19C)记录并呈现整个感染过程中的腹泻事件。具有双尾和95％置信区间的Fisher精确检验确定显著性*；对于图19A，p值是0.0256；对于图19B和图19C，使用常规双向方差分析(不重复测量)，然后使用Dunnett的多重比较检验。对于图19B和图19C，*P≤0.05**P≤0.01****P≤0.0001。“Sb：EP”是具有空质粒的布拉酵母；“Sb：ABAB”是表达ABAB的布拉酵母。
图20A-20C.在CDI复发小鼠中表达ABAB的布拉酵母的保护作用。(图20A)存活率，(图20B)体重减轻，(图20C)记录并呈现整个感染过程中的腹泻事件。具有双尾和95％置信区间的Fisher精确检验确定显著性*；对于图20A，p值是0.017；对于图20B和图20C，使用常规双向方差分析(不重复测量)，然后使用Dunnett的多重比较检验。对于图20B和图20C，*P≤0.05***P≤0.001****P≤0.0001。“Sb：EP”是具有空质粒的布拉酵母；“Sb：ABAB”是表达ABAB的布拉酵母。
图21.使用CRISPR的δ位点靶向染色体整合的图示。使用Ty1-H3(Genbank登录号M18706)针对MYA796的草图基因组进行blast以获得δ位点序列。编译序列用于鉴定共同的原型间隔子邻接基序(PAM)位点和原型间隔子。基于对位于原型间隔子和PAM位点上游和下游的多个位点和常见同源序列的最佳覆盖范围选择两个PAM位点序列，以便简单整合ABAB表达盒。PAM位点“I”在SEQ ID NO：93中提供；PAM位点“II”在SEQ ID NO：94中提供。下划线标出了用于通过PCR产生ABAB表达盒的引物中使用的同源重组序列。
图22A-22B.利用基于CRISPR的靶向δ位点染色体整合的布拉酵母的ABAB分泌。(图22A)通过ELISA测量ABAB分泌。ITG：ABAB整合盒。低：CRISPR质粒与ITG比率为2；高：CRISPR质粒与ITG比率为0.25。(图22B)ABAB分泌量比较。M-/-Cir0：pKC、M-/-Cir+：ABAB、M-/-Cir0：ABAB是基于质粒的。ChIns：通过常规同源重组将单个位点靶向ABAB盒的染色体整合。CRISPR1-2：在位点I处的ABAB盒整合。CRISPR3-4：在位点II处的ABAB盒整合。
图23A-23C.在治疗CDI小鼠中表达ABAB的布拉酵母的保护作用。(图23A)存活率，(图23B)体重减轻，(图23C)记录并呈现整个感染过程中的腹泻事件。具有双尾和95％置信区间的Fisher精确检验确定显著性*；对于图23A，p值是0.0325；对于图23B和图23C，使用常规双向方差分析(不重复测量)，然后使用Dunnett的多重比较检验。对于图23B和图23C，*P≤0.05**P≤0.01。
具体实施方式
I.定义
除非另有说明，否则根据常规用法使用技术术语。分子生物学中常用术语的定义可见于例如由牛津大学出版社于2000年出版的Benjamin Lewin，Genes VII(ISBN019879276X)；Kendrew et al.(编辑)；由Blackwell Publishers于1994年出版的TheEncyclopedia of Molecular Biology(ISBN 0632021829)以及由Wiley，John&Sons，Inc.于1995出版的Robert A.Meyers(编辑)，Molecular Biology and Biotechnology：aComprehensive Desk Reference(ISBN 0471186341)；和其他类似的技术参考文献。
如本文所使用的，“一”或“一个”可以表示一个或多个。如本文所使用的，当与单词“包括”一起使用时，单词“一”或“一个”可以表示一个或多于一个。如本文所使用的，“另一个”可以表示至少第二个或更多个。此外，除非上下文另有要求，否则单数术语包括复数，复数术语包括单数。
如本文所使用的，“约”是指数值，包括例如整数、分数和百分比，无论是否明确指出。术语“约”通常是指本领域普通技术人员认为等同于所述值(例如，具有相同的功能或结果)的数值范围(例如，所述值的+/-5-10％)。在一些情况下，术语“约”可以包括四舍五入到最接近的有效数字的数值。
II.本发明
艰难梭菌相关性疾病(CDI)主要由两种大的外毒素引起，即由细菌产生的毒素A(TcdA)和毒素B(TcdB)。这些毒素是结构上相似的大单链蛋白(TcdA约为300kD；TcdB约为270kD)，其对宿主细胞表现出类似的作用模式。这两种毒素都靶向宿主Rho GTP酶，导致酶失活，接着细胞骨架解体和细胞凋亡。在肠上皮细胞中，TcdA催化Rho GTP酶的葡糖基化，从而导致肌动蛋白细胞骨架的重组，伴随形态变化，例如细胞完全变圆和破坏肠屏障功能。毒素可以在动物中单独引起CDI，并且TcdA-TcdB-菌株是无毒的。
许多独立研究已经证明中和抗毒素的抗体赋予针对CDI的保护作用[24-33]。因为TcdA和TcdB是艰难梭菌的基本毒力因子，所以针对这两种毒素产生的中和抗体在动物模型中防止产生毒素的艰难梭菌感染[30-33]。在人体中，高血清抗毒素抗体水平与疾病严重程度和复发率降低有关[9,25,29]。
因此，存在全身和口服施用的抗毒素抗体的预防性理由。然而，靶向单个表位的单克隆抗体通常是低亲和力的，并且使用这样的抗体具有在毒素表位内诱导突变的风险，从而产生额外的毒株。因此，中和靶向多个、关键和保守毒素表位的抗毒素是非常需要的。
本发明基于关于用于治疗和预防CDI以及CDI症状的抗-TcdA和抗-TcdB抗体的现有知识。本文提供了衍生自人和骆驼科动物免疫球蛋白的基于抗体的融合蛋白结合剂，其任选由受试者中的益生酵母酵母属菌株表达。这些结合剂识别并特异性结合艰难梭菌TcdA和/或TcdB。这些结合剂中的一些显示出毒素中和活性。这些基于酵母的免疫治疗剂可用于治疗或预防原发CDI和复发性CDI，以及原发性和复发性CDI的症状。在优选的方面，酵母属酵母是酿酒酵母或布拉酵母。
如下面详细讨论的，骆驼科动物(单峰骆驼、双峰骆驼、野生双峰骆驼、美洲驼、羊驼、骆马骆驼和栗色羊驼)产生一类缺乏轻链的功能性免疫球蛋白，因此是仅有重链的抗体(HCAbs)[34]，其结合特性与常规IgG所达到的结合特性相当[35]。HCAbs的VH结构域称为VHH，与传统的人VH结构域相似，但具有独特的序列和结构特征[36]。编码该结构域的DNA可以容易地克隆并在微生物中表达以产生保留亲本HCAb的抗原结合性质的可溶性蛋白质单体。这些VHH肽单体结合剂很小(～15kDa)，易于生产，并且通常比常规抗体片段更稳定[37-39]。正在探索VHH治疗肠道疾病，因为它们对蛋白酶具有相对抗性，并且可以进一步工程化以提高这些性质[40]。它们也可以作为具有人抗体如IgG的融合蛋白和人抗体的片段如Fc结构域产生。
本发明利用HCAb在制备可用于治疗和预防CDI的结合剂的有利特征。如本文所公开的，筛选VHH肽单体，用于TcdA和TcdB表位识别和结合。显示表位结合并具有毒素中和活性的那些单体被连接以产生本发明的结合剂。结合剂包括简单VHH肽单体和VHH肽单体的连接基团(包括2、3、4或更多个单体)以及更复杂的结合剂，其包括连接至抗体Fc结构域的VHH肽单体以及连接到IgG抗体的VHH肽单体(参见图1)。
此外，FDA通常认为安全(GRAS)生物的布拉酵母(Saccharomyces boulardii)通常在非处方可用于促进肠道健康和由于腹泻疾病引起的胃肠疾病的改善。这种酵母菌株已经在多项随机双盲安慰剂对照临床试验中进行了研究，以确定其针对包括CDI在内的肠道疾病的安全性和有效性[42-46]。布拉酵母治疗可显着减少CDI复发[44-46]，而那些复发患者粪便中布拉酵母明显少于非复发患者[43]。已经描述了布拉酵母对抗艰难梭菌毒素诱导的炎症提供保护的免疫调节作用[47-49]。此外，布拉酵母可能有助于维持正常的微生物群[50]；最近的一项临床试验(NCT01473368)发现布拉酵母的治疗可以预防一些抗生素诱导的微生物组的变化，同时可以减少抗生素相关的腹泻。
酿酒酵母(通常称为“啤酒酵母”)，其与布拉酵母遗传上有关，已成功用于以高产率表达VHH[51]。布拉酵母在生理学上与酿酒酵母不同，尽管基因组分析显示两种基因组在核苷酸水平上都非常相似[52,53]。因此，之前开发用于酿酒酵母的分子遗传工具现在已经与布拉酵母一起使用[54-56]，使得该益生菌成为CDI治疗剂的候选工程。
有几个额外的代谢特征使布拉酵母理想地用作口服治疗剂。与酿酒酵母相反，布拉酵母在37℃时生长良好，对酸性环境条件更具抗性[57]，使得该菌株特别适用于口服后更好的存活和持续存在于人体肠道中。此外，一个带有酵母属的实验性的鼠类口腔定殖模型已被很好地表征[58]；使用该模型，已经报道了在用布拉酵母口服治疗的常规小鼠中用肠道病原体例如鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella Typhimurium)[58,59]和肠炎沙门氏菌[60]口服攻击的保护作用，以及在预处理的无菌动物中防止CDI攻击[58,61]。通过基因工程化以分泌能够中和艰难梭菌TcdA和TcdB两者的VHH结合剂的益生菌布拉酵母可以显着提高该益生菌治疗正在进行的和复发性CDI的能力。
鉴于布拉酵母的特殊特征，表达本文所定义的结合剂(其中产生和测试的)的布拉酵母菌株。如示例中所述，这些基于酵母的免疫治疗剂可用于治疗或预防原发性和复发性CDI以及原发性和复发性CDI的症状。
VHH单体&VHH异型二聚体
如WO 16/127104中最初报道的，本发明人建立了筛选针对艰难梭菌毒素的特定结构域的VHH单体的有效平台。使用高度免疫原性的无毒全毒素用于免疫，和生物活性嵌合毒素(具有正常的功能域功能)用于筛选，制备与TcdA或TcdB的不同结构域结合的VHH单体组。这些VHH单体中的大多数具有有效的中和活性，并确定了它们与TcdA和TcdB的特定结构域的结合(图2)。
几种VHH单体结合高度保守的TcdA/TcdB表位。例如，E3 VHH单体结合Rho GTP酶结合位点并阻断葡糖基化；AH3 VHH单体结合毒素的GT结构域；7F VHH单体结合半胱氨酸蛋白酶切割位点并阻断GT结构域切割和释放。一些VHH单体具有有效的毒素中和活性，能够在nM浓度下阻断毒素细胞毒性活性(图2中加下划线的单体；也参见图3A和3B)。表1对于这些VHH肽单体中的一些，包括野生型和密码子优化版本，都参考序列表中的氨基酸和核酸序列。虽然优化和未优化的版本均可用于生产本发明的各种结合剂，但密码子优化版本优选用于在哺乳动物细胞中表达。
本发明包括表1中提及的每个VHH肽单体及其序列变体，其在肽序列的整个长度上具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性并保留野生型肽的毒素结合和/或中和活性。本发明还包括编码表1中每个VHH肽单体及其序列变体以及其互补链的多核苷酸序列。
表1
为了增强肽单体的结合活性，产生了VHH肽同型和异型二聚体结合剂，其中连接了两个VHH肽单体(图3C)。同型二聚体结合剂包括两个相同的单体，其结合两个不同毒素上的相同表位。异型二聚体结合剂包含两个不同的单体，其结合相同毒素的两个不同表位或两个不同毒素上的不同表位。与包括异型二聚体的单个VHH肽单体的等摩尔混合物相比，发现VHH异型二聚体具有显着增强的中和活性(图3D)。实际上，发现异型二聚体5D/E3和AH3/AA6分别完全保护小鼠免受致死性全身TcdB或TcdA攻击，而混合的5D和E3或AA6单独仅部分保护(图3E和3F)。
使用10至20个氨基酸的短的柔性接头连接同型和异型二聚体中的VHH单体。适合的接头包括表2中提供的那些。表2还包括三个接头的密码子优化版本。虽然优化和未优化的版本均可用于生产本发明的各种结合剂，但密码子优化版本优选用于在哺乳动物细胞中表达。
表2
本领域技术人员将理解，可以在不脱离肽的性质的情况下对柔性接头的序列进行微小改变。因此可以使用它们所基于的接头的在肽序列的整个长度上具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性的和保留特性的柔性接头序列变体。
本发明包括VHH肽同型二聚体结合剂，其包括通过如上所定义的柔性接头连接的表1中所列的任何单体对。本发明还包括VHH肽异型二聚体结合剂，其包含通过如上定义的柔性接头连接的表1中所列的两种单体的任何组合。示例性的异型二聚体在表3中提供。
表3
名称 氨基酸序列的SEQ ID NO 核酸序列的SEQ ID NO
AH3-5D 15 16
AA6-E3 17 18
5D-E3 62 63
AH3-AA6 64 65
本发明还包括在蛋白质序列的整个长度上具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性并保留野生型蛋白质的毒素结合和/或中和活性的VHH肽同型二聚体和异型二聚体的序列变体。本发明还包括编码每个VHH肽同型和异型二聚体及其序列变体及其互补链的多核苷酸序列。
本发明还包括VHH肽同型和异型三聚体结合剂，其中三个单体使用上面表2中定义的柔性接头连接。可以使用表1的单体的任何组合，包括包含相同单体的三个拷贝的三聚体，包含一个单体的两个拷贝和另一个单体的三个拷贝的三聚体，以及包含三个不同单体的三聚体。本发明包括VHH肽同型和异型三聚体的序列变体，其在蛋白质序列的整个长度上具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性并保留野生型蛋白质的毒素结合和/或中和活性。本发明进一步包括编码每个VHH肽同型和异型三聚体及其序列变体以及其互补链的多核苷酸序列。
ABAB
肽单体和异型二聚体的成功允许发明人开发包含四个连接的VHH肽单体的结合剂。这是该研究的一个目标，因为早期的研究表明，在治疗和预防CDI中最有用的药剂将是单一抗体，其可同时中和TcdA和TcdB两者，因为这是传递针对大多数致病性艰难梭菌菌株的完全保护所必需的。通过产生识别和结合每个毒素上的两个表位的四特异性结合剂，可以加强蛋白质的结合和中和活性。因此，产生了四种结构域(四特异性)VHH结合剂。
四特异性四聚体结合剂可由表1的单体的任何组合制备，其中单体使用表2的柔性接头连接。这些结合剂包括具有相同单体的四个拷贝的那些，具有相同单体的三个拷贝的那些，具有相同单体的两个拷贝的那些，具有四个独特单体的那些以及其中的变体。本发明包括四聚体的序列变体，其在蛋白质序列的整个长度上具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性并保留野生型蛋白质的毒素结合和/或中和活性。本发明进一步包括编码每个四聚体及其序列变体以及其互补链的多核苷酸序列。
ABBA是本发明的特定结合剂，其包括四个连接的VHH单体AH3-E3-E3-AA6。因此ABBA具有两个相同的单体(E3)和两个另外的不同单体(AH3和AA6)(参见表1)。
ABAB是本发明的另一特定结合剂，其包括四个连接的VHH单体，每个单体对TcdA或TcdB的不同表位具有结合特异性。ABAB因此是四特异性四聚体结合剂，其由四个不同的中和VHH单体组成，两个针对TcdA而两个针对TcdB。该结构特征允许ABAB同时结合每个毒素上的两个不同的中和表位。如下所述，ABAB的亲和力/亲合力和中和活性比目前正在接受治疗CDI的临床试验的人单克隆抗体(HuMabs)高3个数量级以上。
通过使用柔性接头(表2)连接VHH单体AH3、5D、AA6和E3(表1)来制备ABAB结合剂。这种结合剂靶向保守的非重叠表位并具有优异的毒素中和活性。在ABAB的设计中(图4)，由于AH3和AA6分别与GT和TD结合(图2)，因此VHH肽单体AH3和AA6通过放置它们之间的5D进行分离(图2)，其在空间上彼此相距很远。这种设计允许AH3和AA6同时结合TcdA。
包括ABAB的完整氨基酸序列在SEQ ID NO：19中提供；编码蛋白质的核酸序列在SEQ ID NO：20中提供。因此，本发明包括SEQ ID NO：19中提供的ABAB结合剂，以及ABAB结合剂的序列变体，其在蛋白质序列的整个长度上具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性并保留野生型蛋白质的毒素结合和/或中和活性。序列变体包括其中变体是人源化的变体和/或其中将氨基酸优化用于酵母的生产和分泌。
本发明进一步包括编码ABAB结合剂(例如，SEQ ID NO：20)及其序列变体以及其互补链的多核苷酸序列。
本发明所涵盖的ABAB结合剂的修饰版本包括具有以下一种或多种的修饰版本：(i)位于蛋白质氨基末端处的His(6)标签(HHHHHH；SEQ ID NO：66)以帮助纯化，(ii)位于蛋白质的羧基末端处的E标签(GAPVPYPDPLEPR；SEQ ID NO：67)以帮助检测；(iii)位于构建体的羧基末端处的白蛋白结合肽(ABP)(DICLPRWGCLWD；SEQ ID NO：21)以增加蛋白质的血清半衰期，因为VHH单体具有2-3小时的半衰期并且包含ABP可将血清半衰期增加至10小时(参见图4)；和位于蛋白质的羧基末端的D7标签(SSAPTKAKRRVVQREKT；SEQ ID NO：112)。本发明包括具有这些标签和肽中的1、2、3、4个的ABAB结合剂的版本。包含His标签和D7标签的示例性修饰的ABAB结合剂包括SEQ ID NO：113所示的氨基酸序列(编码序列如SEQ ID NO：114所示)。
当酵母菌株工程化以产生ABAB时，也可以修饰蛋白质以在蛋白质的氨基末端包含分泌信号。分泌信号可以是但不限于表4所示的序列之一。
表4-酵母中蛋白质分泌的分泌序列
包括氨基末端分泌信号的示例性修饰的ABAB结合剂包括AT-ABAB和IVS-ABAB。
从酵母或细菌中的质粒表达的示例性修饰的ABAB结合剂包括SEQ ID NO：107所示的ABAB结合剂，其由SEQ ID NO：108中所示的多核苷酸序列编码。
在染色体整合后在酵母中表达的示例性修饰的ABAB结合剂包括SEQ ID NO：109所示的ABAB结合剂，其由SEQ ID NO：110所示的多核苷酸序列编码。
本发明的每种结合剂以特异性结合TcdA和/或TcdB。在本发明的某些方面，结合剂表现出TcdA和/或TcdB中和活性。
为了清楚起见，可以注意到，如本文所使用的，“单特异性”、“双特异性”、“三特异性”，“四特异性”等意指特定的结合剂分别与1、2、3、4等不同的表位结合。如本文所使用的，“单体”、“二聚体”、“三聚体”、“四聚体”等意指特定结合剂具有分别与表位结合的1、2、3、4等单独的VHH肽单体。因此，单特异性二聚体结合剂将显示结合相同表位的两个VHH肽单体(例如同型二聚体)，并且双特异性二聚体结合剂将具有结合两个不同表位的两个VHH肽单体(例如，异型二聚体)。四特异性八聚体结合剂具有识别四个不同表位的八个VHH肽单体。
VHH-FC
众所周知嵌合Fc融合蛋白具有增加蛋白体内半衰期的潜力。这种策略已经应用于几种FDA批准的药物，如依那西普。原理研究的证据表明，单链抗体可以被携带编码单峰驼VHH的mini-Ig构建体和人IgG的Fc结构域的转基因小鼠的B细胞正确组装和表达。EG2-Fc，一种嵌合抗-EGFR/EGFRvIII VHH，在体内表现出优异的肿瘤积累并具有可改善成胶质细胞瘤靶向的药代动力学性质。
本发明包括包含连接至抗体Fc结构域(VHH-Fc)的VHH肽单体的结合剂，其中结合剂结合TcdA和/或TcdB。在这些基于Fc结构域的结合剂中，1、2、3、4或更多个VHH肽单体连接至抗体重链的Fc结构域的铰链区、CH2和CH3区。因此，肽单体取代抗体的Fab区域。
VHH肽单体可以是上表1中提供的那些中的任一种，并且包括5D(SEQ ID NO：1)、E3(SEQ ID NO：3)、AA6(SEQ ID NO：5)和AH3(SEQ ID NO：7)VHH肽单体。当两个或更多个单体连接时，单体可以通过柔性肽接头连接，通常包含10-20个氨基酸。合适的接头包括表2中提供的接头，例如接头-1(SEQ ID NO：9)、接头-2(SEQ ID NO：11)和接头-3(SEQ ID NO：13)。
尽管VHH-Fc通常由两个在产生后在细胞内自组装的相同链组成，但本发明还包括包含两个不同Fc链的VHH-Fc结合剂。在这种情况下，单独的VHH单体的序列可以在两条Fc链之间不同，或者Fc链本身可以在序列上不同，或者VHH单体和Fc链两者可以在序列上不同。
一种类型的VHH-Fc结合剂是包括抗体Fc结构域和第一、第二、第三和第四VHH肽单体的八聚体结合剂，其中VHH肽单体对TcdA或毒素B TcdB的表位具有结合特异性，其中第一、第二、第三和第四VHH肽单体连接在一起并连接到两个抗体Fc结构域的氨基末端，并且其中抗体Fc结构域包含抗体重链的铰链区、CH2和CH3区。因为这种结合剂具有四个VHH肽单体，所以它可以是单特异性的(其中所有单体结合相同的表位)、双特异性(其中单体结合两个不同的表位)、三特异性(其中单体结合三个不同的表位)或四特异性(其中单体结合四个不同的表位)。
四特异性VHH-Fc结合剂的具体示例是ABAB-Fc结合剂，包括抗体Fc结构域和两组连接的第一、第二、第三和第四VHH肽单体的四特异性八聚体结合剂，其中抗体Fc结构域包括两个臂，每个臂包括抗体重链的铰链区、CH2和CH3区，并且每个臂具有氨基末端，其中对于Fc结构域的每个臂，一组连接的第一、第二、第三和第四VHH肽单体连接到臂的氨基末端，并且其中VHH肽单体对TcdA或TcdB的表位具有结合特异性(参见图1)。这种结合剂因其识别四个不同的毒素表位而称为“四特异性”。由于它携带八个VHH肽单体(第一单体的两个拷贝、第二单体的两个拷贝、第三单体的两个拷贝以及第四单体的两个拷贝)，因此它被称为“八聚体”。发现ABAB-Fc表现出特异性结合和中和活性。
通过产生编码与人IgG1Fc结构域连接的VHH肽单体AH3/5D/AA6/E3(以所示顺序连接)的表达载体来制备ABAB-Fc结合剂。VHH肽单体通过表2的柔性接头分离。编码每条链的核酸序列在SEQ ID NO：23中提供。每条链的氨基酸序列在SEQ ID NO：22中提供。在表达后自我组装成对链时，产生四特异性八聚体结合剂。本发明包括SEQ ID NO：22的ABAB-Fc结合剂，如上定义的ABAB结合剂的修饰版本及其在蛋白质序列的整个长度上具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性并保留野生型蛋白质的毒素结合和/或中和活性的序列变体。本发明进一步包括编码这些序列变体及其互补链的多核苷酸序列。
单特异性VHH-Fc结合剂(AH3-Fc、5D-Fc、E3-Fc、AA6-Fc)和双特异性VHH-Fc结合剂(例如AH3/5D-Fc和AA6/E3-Fc)也使用该Fc融合系统制备。关于单特异性结合剂，将单个VHH肽单体连接至人IgG1Fc结构域。在表达和组装时，成对的链产生单特异性二聚体结合剂(当链相同时)或双特异性二聚体结合剂(当链不同时)。关于双特异性结合剂，将两个连接的VHH肽单体(VHH同型或异型二聚体)连接至人IgG1Fc结构域。在表达和组装时，成对的链产生双特异性四聚体结合剂(当链相同时)或四特异性四聚体结合剂(当链不同时)。表5提供了一些这些结合剂的序列。
表5
名称 氨基酸序列的SEQ ID NO 核酸序列的SEQ ID NO
5D-Fc 24 25
E3-Fc 26 27
AA6-Fc 28 29
AH3-Fc 30 31
AH3-5D-Fc 32 33
AA6-E3-Fc 34 35
与一种单体的特异性配对包括：5D-Fc+5D-Fc；E3-Fc+E3-Fc；AA6-Fc+AA6-Fc；AH3-Fc+AH3-Fc；5D-Fc+E3-Fc；5D-Fc+AA6-Fc；5D-Fc+AH3-Fc；E3-Fc+AA6-Fc；E3-Fc+AH3-Fc和AA6-Fc+AH3-Fc。与两种单体的特异性配对包括：AH3-5D-Fc+AH3-5D-Fc；AA6-E3-Fc+AA6-E3-Fc和AH3-5D-Fc+AA6-E3-Fc。
产生包括抗体Fc结构域和两组连接的第一和第二VHH肽单体的双特异性四聚体VHH-Fc结合剂，其中抗体Fc结构域包括两个臂，每个臂包括抗体重链的铰链区、CH2和CH3区，并且每个臂具有氨基末端，其中对于Fc结构域的每个臂，一组连接的第一和第二VHH肽单体连接到臂的氨基末端，并且其中VHH肽单体对TcdA或TcdB的表位具有结合特异性。这种结合剂因其识别两种不同的毒素表位而称为“双特异性”。因为它携带四个VHH肽单体(第一单体的两个拷贝和第二单体的两个拷贝)，所以它被称为“四聚体”。第一和第二VHH肽单体可以对相同或不同表位具有结合特异性。VHH肽单体可独立地对TcdA或TcdB的葡糖基转移酶结构域、半胱氨酸蛋白酶结构域、易位结构域或受体结合结构域中的表位具有结合特异性。
双特异性四聚体VHH-Fc结合剂的具体示例包括SEQ ID NO：32(AH3/5D-Fc)所示的氨基酸序列。本发明还包括具有至少95％序列同一性的序列变体，其中序列变体保持毒素中和活性。序列变体的变体氨基酸可以位于VHH肽单体的框架区中。
双特异性四聚体VHH-Fc结合剂的具体示例包括SEQ ID NO：34(AA6/E3-Fc)所示的氨基酸序列。本发明还包括具有至少95％序列同一性的序列变体，其中序列变体保持毒素中和活性。序列变体的变体氨基酸可以位于VHH肽单体的框架区中。
VHH-Fc结合剂以特异性结合TcdA和/或TcdB。在本发明的某些方面，结合剂表现出TcdA和/或TcdB中和活性。
VHH-IgG
本发明还包括包含VHH肽单体的结合剂，所述VHH肽单体连接至更多的单独Fc结构域的抗体。包括1、2、3、4或更多个VHH肽单体的VHH-IgG结合剂与缺少抗体可变区的IgG抗体的轻链(kappa或lambda)和重链连接。因此，肽单体取代抗体的可变区。
VHH肽单体可以是上表1中提供的那些中的任一种，并且包括5D(SEQ ID NO：1)、E3(SEQ ID NO：3)、AA6(SEQ ID NO：5)和AH3(SEQ ID NO：7)VHH肽单体。当两个或更多个单体连接时，单体可以通过柔性肽接头连接，通常包括10至20个氨基酸。合适的接头包括表2中提供的接头，例如接头-1(SEQ ID NO：9)、接头-2(SEQ ID NO：11)和接头-3(SEQ ID NO：13)。
VHH-IgG结合剂包括包含IgG抗体和第一、第二、第三和第四VHH肽单体的八聚体结合剂，其中VHH肽单体对TcdA或TcdB的表位具有结合特异性，其中第一和第二VHH肽单体连接在一起并连接至抗体两条轻链的氨基末端，其中轻链缺少抗体可变区，并且其中第三和第四VHH肽单体连接在一起并连接至抗体两条重链的氨基末端，其中重链缺少抗体可变区。因为这种结合剂具有四个VHH肽单体，所以它可以是单特异性的(其中所有单体结合相同的表位)、双特异性(其中单体结合两个不同的表位)、三特异性(其中单体结合三个不同的表位)或四特异性(其中单体结合四个不同的表位)。
四特异性VHH-IgG结合剂的具体示例是ABAB-IgG结合剂，包括IgG抗体、两组连接的第一和第二VHH肽单体和两组连接的第三和第四VHH肽单体的四特异性八聚体结合剂，其中IgG抗体包括两个臂，每个臂包含缺乏可变区的轻链和缺少可变区的重链，并且每条链具有氨基末端，其中对于抗体的每个臂，将一组连接的第一和第二VHH肽单体连接至轻链的氨基末端，并将一组连接的第三和第四VHH肽单体连接至重链的氨基末端，并且其中VHH肽单体对TcdA或TcdB的表位具有结合特异性(参见图1)。这种结合剂因其识别四个不同的毒素表位而称为“四特异性”。由于它携带八个VHH肽单体(第一单体的两个拷贝、第二单体的两个拷贝、第三单体的两个拷贝以及第四单体的两个拷贝)，因此被称为“八聚体”。在某些方面，第一、第二、第三和第四VHH肽单体可各自具有针对不同表位的结合特异性。在某些方面，两个VHH肽单体可以对TcdA的表位具有结合特异性，并且两个VHH肽单体可以对TcdB的表位具有结合特异性。在某些方面，VHH肽单体独立地针对TcdA或TcdB的葡糖基转移酶结构域、半胱氨酸蛋白酶结构域、易位结构域或受体结合结构域中的表位具有结合特异性。
四特异性八聚体ABAB-IgG结合剂的具体示例包括具有SEQ ID NO：46所示氨基酸序列(AA6/E3 kappa)的轻(kappa)链或与其具有至少95％序列同一性的序列变体，以及具有SEQ ID NO：44所示氨基酸序列(AH3/5D重)的重链或与其具有至少95％序列同一性的序列变体。在这方面，序列变体保留毒素中和活性。序列变体的变体氨基酸可以位于VHH肽单体的框架区中。这种结合剂通过制备两种分开的表达载体来制备，第一种编码VHH肽单体AH3/5D(按照所述顺序连接)与缺乏可变区的人IgG1抗体重链连接，第二种编码VHH肽单体AA6/E3(按照所述顺序连接)与缺乏可变区的人IgG1抗体轻(kappa)链连接。编码AA6/E3-IgG1轻(kappa)链的核苷酸序列在SEQ ID NO：47中提供。编码AH3/5D-IgG1重链的核苷酸序列在SEQ ID NO：45中提供。本发明包括在蛋白质序列的整个长度上具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的序列同一性并保留野生型蛋白质的毒素结合和/或中和活性的ABAB-IgG的序列变体。本发明进一步包括编码这些序列变体及其互补链的多核苷酸序列。
双特异性或四特异性四聚体IgG结合剂包括在本发明中。这样的结合剂包括IgG抗体和第一、第二、第三和第四VHH肽单体，其中IgG抗体包含两个臂，每个臂包含缺乏可变区的重链和缺少可变区的轻链，并且每条链具有氨基末端，其中对于抗体的第一臂，第一VHH肽单体连接至轻链的氨基末端，并且第二VHH肽单体连接至重链的氨基末端，其中对于抗体的第二臂，第三VHH肽单体连接至轻链的氨基末端，并且第四VHH肽单体连接至重链的氨基末端，并且其中VHH肽单体对TcdA或TcdB的表位具有结合特异性。当结合剂是“四特异性”时，它识别四个不同的毒素表位；当是“双特异性”时，它识别两个不同的毒素表位。由于结合剂具有四个VHH肽单体，结合剂是“四聚体”(当双特异性时，第一和第二单体具有相同的序列并结合相同的表位，并且第三和第四单体具有相同的序列并结合相同的表位；当四特异性时，每个单体具有不同的序列并结合不同的表位)。
当结合剂是双特异性时，第一和第三单体对不同表位具有结合特异性，第一和第二单体具有相同的氨基酸序列，并且第三和第四单体具有相同的氨基酸序列。在某些方面，VHH肽单体中的一个对TcdA的表位具有结合特异性，并且VHH肽单体中的一个对TcdB的表位具有结合特异性。
当结合剂是四特异性时，每个VHH肽单体对不同表位具有结合特异性。在某些方面，两个VHH肽单体对TcdA的表位具有结合特异性和两个VHH肽单体对TcdB的表位具有结合特异性。
在某些方面，每个VHH肽单体对TcdA的表位具有结合特异性。在其他方面，每个VHH肽单体对TcdB的表位具有结合特异性。
在某些方面，VHH肽单体独立地针对TcdA或TcdB的葡糖基转移酶结构域、半胱氨酸蛋白酶结构域、易位结构域或受体结合结构域中的表位具有结合特异性。
双特异性四聚体IgG结合剂的具体示例包括具有SEQ ID NO：40(AA6kappa)所示氨基酸序列的轻(kappa)链和具有SEQ ID NO：36(AH3重)所示的氨基酸序列的重链。本发明还包括具有至少95％序列同一性的序列变体，其中序列变体保持毒素中和活性。序列变体的变体氨基酸可以位于VHH肽单体的框架区中。
双特异性四聚体IgG结合剂的另一个具体示例包括具有SEQ ID NO：42(E3 kappa)所示氨基酸序列的轻(kappa)链和具有SEQ ID NO：38(5D重)所示的氨基酸序列的重链。本发明还包括具有至少95％序列同一性的序列变体，其中序列变体保持毒素中和活性。序列变体的变体氨基酸可以位于VHH肽单体的框架区中。
表6提供了用于产生双特异性和四特异性VHH-IgG结合剂的序列。其他合适的配对包括(i)5D-IgG1-重链+AA6-轻(kappa或lambda)链，和(ii)AH3-IgG1-重链+E3-轻(kappa或lambda)链。
表6
然而，本发明包括与AH3、5D、AA6和E3中的任何一个连接的IgG1重链，以及与AH3、5D、AA6和E3中的任何一个连接的IgG1轻(kappa或lambda)链。此外，本文涵盖重链和轻(kappa或lambda)链的所有可能的组合。
人源化结合剂
由于它们的框架尺寸小并且它们与家族III的人VH框架具有高度的同一性，因此预期VHH肽单体在施用于人时表现出低免疫原性。尽管小单价VHH单体的系统应用看起来几乎不引起中和抗体应答，但蛋白质免疫原性通常随着尺寸和复杂性而增加。重复和/或长期体内使用VHH单体的两个主要障碍是它们可能很短的半衰期和潜在的免疫原性。为了增加效价和循环半衰期，可以将VHH单体与本文讨论的人IgG和Fc结构域融合。为了解决可能的免疫原性，可以根据需要将VHH单体人源化而不损害它们的表达水平、亲和力、溶解度和稳定性。这些策略应导致人源化VHH单体(hVHH单体)的良好表达、稳定性和溶解性，同时保持环供体VHH的抗原特异性和亲和力。
选择与人VH基因具有最高同一性并具有最高结合/中和活性的hVHH单体，然后将它们转移到VHH多聚体(例如ABAB)、VHH-Fc和VHH-IgG构建体中以产生完全人源化的结合剂，例如完全人源化的ABAB、ABAB-IgG和ABAB-Fc结合剂。这些人源化结合剂的蛋白质序列可以与人类抗体变体的蛋白质序列基本上相同，尽管其负责抗体结合其靶抗原的能力的一些CDR区段的非人来源。因此，这种策略降低了体内潜在的免疫原性的机会，从而增加了它们在体内的安全性和半衰期。
因此，本发明的结合剂涵盖包括hVHH肽单体的本文定义的每种结合剂的人源化版本。
表位结合片段
本发明的结合剂包括本文定义的每个VHH-Fc和VHH-IgG结合剂的表位结合片段。由于VHH-Fc和VHH-IgG结合剂在结构上与人IgG抗体相当，其中可变区被VHH单体取代，所以人抗体片段的术语也适用于这样的结合剂。片段包括但不限于Fab片段、F(ab')2片段，单链Fv(scFv)抗体和由Fab表达文库产生的片段以及双特异性抗体和三特异性抗体。
本发明的VHH-Fc和VHH-IgG结合剂包括完全人源化的、人源化的和嵌合的结合剂。结合剂可以是单克隆或多克隆的。此外，结合剂可以是重组结合剂。
虽然优选来自哺乳动物如人、猿、小鼠、大鼠、兔、豚鼠、马、牛、绵羊、山羊、猪、狗或猫，但可以在任何动物物种中产生结合剂。例如，结合剂可以是人的或人源化的，或适合于施用于人的任何结合剂制剂。
多核苷酸、表达载体、宿主细胞和制备方法
本发明包括含有编码本文提供的每种结合剂的核苷酸序列的多核苷酸以及其互补链。
本发明还包括包括多核苷酸的表达载体和包含表达载体的宿主细胞。合适的表达载体包括例如pcDNA3.1和pSec-His，以及用于将酵母细胞转化为本发明结合剂的生产者和分泌者的质粒。合适的宿主细胞包括例如中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)、人胚肾细胞293(HEK 293细胞)、酵母细胞和昆虫细胞。
本发明进一步包括产生本文定义的结合剂的方法，包括在促进由表达载体编码的结合剂表达的条件下培养宿主细胞，并从细胞培养物中回收结合剂。
酵母的工程菌株
本发明的每种结合剂也可以通过酵母属酵母的工程菌株生产。因此，本发明还涉及酿酒酵母属酵母的菌株(例如酿酒酵母和布拉酵母)，其工程化以产生一种或多种本文所定义的结合剂，包括但不限于VHH单体结合剂(参见表1)、VHH同型二聚体结合剂、VHH异型二聚体结合剂(参见表3)、ABAB结合剂、VHH-Fc结合剂(参见表5)、VHH-IgG结合剂(参见表6)及其表位结合片段。在优选的方面，酵母属酵母的工程菌株分泌结合剂。
酵母属酵母菌株的身份仅限于其可工程化以产生并优选分泌一种或多种本发明的结合剂。在本发明的优选方面，工程化以产生一种或多种结合剂的酵母属酵母的菌株是酿酒酵母或布拉酵母。因此，本发明包括产生一种或多种本文定义的结合剂的酿酒酵母的工程菌株，以及分泌一种或多种本文定义的结合剂的酿酒酵母的工程菌株。本发明还包括产生一种或多种本文定义的结合剂的布拉酵母的工程菌株，以及分泌一种或多种本文定义的结合剂的布拉酵母的工程菌株。酵母的合适菌株还包括粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)、奇异酿酒酵母(Saccharomyces paradoxus)和单孢酵母(Saccharomyces unisporus)。
布拉酵母是FDA指定的通常被视为安全(GRAS)的生物体，并且其通常可在非处方用于促进肠道健康和改善由于腹泻疾病引起的胃肠疾病。已对这种酵母菌种进行了多项随机双盲安慰剂对照临床试验，以对包括CDI在内的肠道疾病的安全性和有效性进行研究[42-46]。布拉酵母的合适菌株为布拉酵母菌株MYA796(ATCC，Manassas，VA)。
本发明的酵母属酵母工程菌株的具体示例是酵母属酵母的工程菌株，其产生包括VHH肽单链连接的包括2、3、4或更多个单体的VHH肽单体基团的结合剂，它们中的每一个优选地以特异性结合TcdA和/或TcdB。因此，本发明包括产生VHH肽结合剂的酵母属酵母工程菌株，所述VHH肽结合剂包括至少一种VHH肽单体，其中每个VHH肽单体对艰难梭菌毒素A(TcdA)或毒素B(TcdB)的表位具有结合特异性。在某些方面，这些结合剂包括2、3、4或更多个连接的VHH肽单体。VHH肽单体包括但不限于VHH肽单体5D(SEQ ID NO：1)、E3(SEQ ID NO：3)、AA6(SEQ ID NO：5)和AH3(SEQ ID NO：7)。
本发明的酵母属酵母的工程菌株的另一个具体示例是酵母属酵母的工程菌株，其产生包括与IgG抗体连接的VHH肽单体的结合剂，其中所述结合剂结合如本文所定义的TcdA和/或TcdB。在这些基于IgG的结合剂中，IgG抗体的轻链和重链的可变区被1、2、3、4或更多个VHH肽单体替换。
本发明的酵母属酵母的工程菌株的另一个具体示例是酵母属酵母的工程菌株，其产生包括连接至抗体Fc结构域的VHH肽单体的结合剂，其中所述结合剂结合如本文所定义的TcdA和/或TcdB。在这些基于Fc结构域的结合剂中，1、2、3、4或更多个VHH肽单体连接至抗体重链的Fc结构域的每个臂的铰链区、CH2和CH3区。因此，肽单体取代抗体的Fab区域。
本发明的酵母属酵母的工程菌株的另一个具体示例是产生四特异性四聚体结合剂的酵母属酵母的工程菌株，其中所述结合剂包括连接的第一、第二、第三和第四VHH肽单体，并且其中所述VHH肽单体独立地对艰难梭菌毒素A(TcdA)或毒素B(TcdB)的表位具有结合特异性。在某些方面，第一、第二、第三和第四VHH肽单体各自对不同表位具有结合特异性。在某些方面，两个VHH肽单体对TcdA的表位具有结合特异性，并且两个VHH肽单体对TcdB的表位具有结合特异性。在某些方面，VHH肽单体独立地针对TcdA或TcdB的葡糖基转移酶结构域、半胱氨酸蛋白酶结构域、易位结构域或受体结合结构域中的表位具有结合特异性。合适的VHH肽单体包括AH3单体(SEQ ID NO：7)、AA6单体(SEQ ID NO：5)、5D单体(SEQ ID NO：1)和E3单体(SEQ ID NO：3)。其他单体包括但不限于表1中提供的那些单体。
在优选的示例中，本发明涉及酵母的工程菌株，其中结合剂是ABAB，其中第一和第三单体对TcdA的表位具有结合特异性，第一和第三单体分别是VHH肽单体AH3(SEQ ID NO：7)和AA6(SEQ ID NO：5)，并且其中第二和第四单体对TcdB的表位具有结合特异性，第二和第四单体分别是VHH肽单体5D(SEQ ID NO：1)和E3(SEQ ID NO：3)。
ABAB结合剂可以包括SEQ ID NO：19所示的氨基酸序列或与其具有至少95％序列同一性的序列变体，其中所述序列变体保留TcdA和/或TcdB结合特异性，或序列变体保留毒素中和活性或保留两者。
ABAB结合剂还可以包含选自表4中提供的分泌信号的N端分泌信号。在优选的方面，N端分泌信号是AT分泌信号(MRFPSIFTAVLFAASSALA(SEQ ID NO：99))或IVS分泌信号(MLLQAFLFLLAGFAAKISA(SEQ ID NO：103))。
ABAB结合剂可以从酵母内的质粒表达。质粒可以是但不限于pCEV-URA3-TEF-AT-yABAB-cMyc(SEQ ID NO：88)。由质粒编码的ABAB结合剂可以包括SEQ ID NO：107所示的氨基酸序列或与其具有至少95％序列同一性的序列变体，并且其中所述序列变体保留TcdA和/或TcdB结合特异性，或序列变体保留毒素中和活性，或保留两者。
ABAB结合剂也可以从整合到酵母染色体中的编码序列表达。从整合到酵母染色体中的编码序列表达的ABAB结合剂可以包括SEQ ID NO：109所示的氨基酸序列或与其具有至少95％序列同一性的序列变体，并且其中所述序列变体保留TcdA和/或TcdB结合特异性，或序列变体保留毒素中和活性，或保留两者。
本发明还涉及产生对艰难梭菌毒素A(TcdA)或毒素B(TcdB)或两者的独特表位具有结合特异性的治疗性蛋白的酵母属酵母的工程菌株。优选地，酵母属酵母的工程菌株是酿酒酵母或布拉酵母。治疗性蛋白质是可以在受试者的医学状况中带来改善或治愈，或者可以抑制或预防受试者的医学状况发展的任何蛋白质。合适的治疗性蛋白质包括但不限于能够(a)代替缺陷或异常的蛋白质；(b)增加现有途径；(c)提供新颖的功能或活动；(d)干扰分子或生物体；和(e)传递其他化合物或蛋白质，如放射性核素、细胞毒性药物或效应蛋白质。治疗性蛋白质还包括抗体和基于抗体的药物、Fc融合蛋白质、抗凝血剂、血液因子、骨形态发生蛋白质、工程蛋白质支架、酶、生长因子、激素、干扰素、白细胞介素和溶栓剂。治疗性蛋白质进一步包括双特异性单克隆抗体(mAb)和多特异性融合蛋白质，与小分子药物缀合的mAb以及具有优化药代动力学的蛋白质。
制备工程化酵母菌株的方法
本发明还涉及工程化酵母属酵母的菌株以产生本文定义的一种或多种结合剂的方法。用于生产酵母的工程菌株的手段没有特别限制，并且存在许多用于工程化酵母以产生本领域技术人员已知的同源和异源蛋白质的已知技术。在这些方法的某些方面，酿酒酵母或布拉酵母菌经工程化以产生结合剂。
作为示例，可以通过(a)用编码结合剂的表达载体转化酵母属酵母菌株，和(b)筛选产生的酵母，将酵母属酵母工程化以产生本文定义的一种或多种结合剂用于生产结合剂。在某一方面，表达载体是质粒pCEV-URA3-TEF-AT-yABAB-cMyc(SEQ ID NO：88)。虽然该质粒编码特定的ABAB结合剂，但这种结合剂的编码区可被本文定义的任何结合剂的编码区取代。
作为进一步的示例，可以通过(a)将编码结合剂的多核苷酸序列染色体整合到酵母属酵母菌株的基因组中，和(b)筛选(a)中的酵母将酵母属酵母工程化以产生本文定义的一种或多种结合剂用于生产结合剂。在某些方面，使用CRISPR技术进行染色体整合[85-88]。作为示例，这样的方法可以包括以下步骤：(a)使用引物从质粒pCEV-G4-Km-TEF-AT-yABAB hAA6T83N-tagless(SEQ ID NO：90)扩增编码ABAB结合剂的多核苷酸序列，所述引物包含(i)与选择的酵母染色体整合位点同源的核酸序列和(ii)与质粒的ABAB结合剂编码序列的5'和3'区域同源的核酸序列，以产生整合盒，(b)在促进整合盒自发整合到双链断裂位点的条件下，将(a)中产生的整合盒用pCRI-Sb-δ1(SEQ ID NO：91)或pCRI-Sb-δ2(SEQ IDNO：92)转化酵母以诱导相应酵母染色体δ位点内的双链断裂，(c)筛选(b)中的转化酵母以产生ABAB结合剂。
虽然质粒pCEV-G4-Km-TEF-AT-yABAB hAA6T83N-tagless编码特定的ABAB结合剂，但这种结合剂的编码区可由本文定义的任何结合剂的编码区取代。
筛选用于产生结合剂的酵母的合适手段对于本领域技术人员将是显而易见的，并且包括但不限于免疫测定法，例如ELISA或蛋白质印迹。
治疗和预防的方法
本发明的结合剂和酵母属酵母的工程菌株可以用于治疗或预防受试者中由艰难梭菌诱导的疾病症状的方法。这些方法通常包括向患有艰难梭菌感染或发展艰难梭菌感染风险的受试者施用治疗有效量的如本文定义的一种或多种结合剂和/或一种或多种酵母属酵母的工程菌株。在该实施例的某些方面，由艰难梭菌诱发的疾病症状是腹泻。
本发明的结合剂和酵母属酵母的工程菌株也可用于在艰难梭菌感染的受试者中中和艰难梭菌毒素TcdA和/或TcdB。这些方法通常包括向患有艰难梭菌感染的受试者施用治疗有效量的如本文定义的一种或多种结合剂和/或一种或多种酵母属酵母的工程菌株。
本发明的结合剂和酵母属酵母的工程菌株可以进一步用于治疗受试者的艰难梭菌感染的方法中。这些方法通常包括向患有艰难梭菌感染的受试者施用治疗有效量的如本文所定义的一种或多种结合剂和/或一种或多种酵母属酵母的工程菌株。如本文所定义的，这些相同的方法可以用于治疗CDI。
本发明的结合剂和酵母属酵母的工程菌株也可用于在患有艰难梭菌感染的受试者中维持正常肠功能的方法中。这些方法通常包括向患有艰难梭菌感染或患有发生艰难梭菌感染的风险的受试者施用治疗有效量的如本文所定义的一种或多种结合剂和/或一种或多种酵母属酵母的工程菌株。
结合剂和酵母属酵母的工程菌株也可以用于免疫预防以防止立即的CDI威胁。另外，被动免疫预防可以用来预防直接和长期的CDI威胁。每种方法都有其特殊的优势，适合针对特定的高风险人群。这些方法通常包括向患有艰难梭菌感染风险的受试者施用治疗有效量的如本文所定义的一种或多种结合剂和/或一种或多种酵母属酵母的工程菌株。
在本发明方法的优选方面，酵母属酵母是酿酒酵母或布拉酵母。
本发明的每种方法可以包括在一种或多种药物制剂中施用一种或多种结合剂和/或一种或多种酵母属酵母的工程菌株，所述药物制剂包括结合剂和/或酵母属酵母的工程菌株和药学上可接受的载体或稀释剂。在优选的方面，酵母属酵母是酿酒酵母或布拉酵母。
如本文所使用的，术语“治疗”(treat、treating和treatment)具有其普通和习惯的含义，并且包括以下的一种或多种：在受试者中阻断、改善或降低艰难梭菌感染或艰难梭菌相关性疾病(CDI)的症状的严重程度和/或频率；和/或在感染艰难梭菌的受试者中部分或完全抑制生物活性和/或促进艰难梭菌TcdA和/或TcdB的免疫清除；和/或在受试者中艰难梭菌细胞或艰难梭菌感染的生长、分裂、扩散或增殖。治疗意指相对于尚未实施本发明的方法的受试者阻断、改善、降低或抑制约为1％至约100％。优选地，与其中尚未实施本发明的方法的受试者相比较，阻断、改善、降低或抑制约为100％、99％、98％、97％、96％、95％、90％、80％、70％、60％、50％、40％、30％、20％、10％、5％或1％。
如本文所使用的，术语“预防”(prevent、preventing和prevention)具有其普通和习惯的含义，并且包括以下的一种或多种：在受试者中阻止、防止、避免，缓解或阻断艰难梭菌定殖化、发展或进展；和/或部分或完全抑制感染艰难梭菌的受试者中TcdA和/或TcdB的生物学活性和/或毒性作用；和/或阻止、防止、避免、缓解或阻断受试者中细菌细胞或细菌感染的生长、分裂、扩散或增殖。预防意味着相对未预防给药的受试者阻止至少约95％。优选地，阻止为约100％、约99％、约98％、约97％、约96％或约95％。预防的结果可以持续数天(例如1、2、3、4、5、6或7天)，数周(例如1、2、3或4周)或数月(例如1、2、3、4、5、6或更多个月)。
本文提供的治疗和预防方法可通过还向受试者施用治疗有效量的抗生素来补充。优选地，抗生素将具有针对艰难梭菌的抗菌活性。
药物制剂
尽管结合剂和酵母属酵母的工程菌株可以直接施用于受试者，但本发明的方法优选基于施用包含一种或多种结合剂和/或一种或多种酵母属酵母的工程菌株，以及药学上可接受的载体或稀释剂。因此，本发明包括药物制剂，其包含本文定义的一种或多种结合剂和/或一种或多种酵母属酵母的工程菌株以及药学上可接受的载体或稀释剂。
药学上可接受的载体和稀释剂通常是已知的，并且将根据施用的特定的结合剂或酵母属酵母的工程菌株和施用模式而变化。通常使用的载体和稀释剂的示例包括但不限于盐水、缓冲盐水、右旋糖、注射用水、甘油、乙醇及其组合，稳定剂、增溶剂和表面活性剂，缓冲剂和防腐剂，张力剂、填充剂和润滑剂。包括结合剂和/或酵母属酵母的工程菌株的制剂通常将在没有任何非人组分，诸如动物血清(例如牛血清白蛋白)的情况下制备和培养。
可以使用本领域技术人员已知的模式和技术将包含一种或多种结合剂和/或一种或多种酵母属酵母的工程菌株的药物制剂给予受试者。CDI疾病的特征可使其更适合于使用治疗剂的结肠递送(即将结合剂靶向递送至下胃肠道，例如大肠或结肠)进行治疗和预防。其他递送模式包括但不限于口服、鼻腔、肛门和通过静脉注射或气雾剂给药。其他模式包括但不限于皮内、皮下(s.c.、s.q.、sub-Q、Hypo)、肌内(i.m.)、腹膜内(i.p.)、动脉内、髓内、心内、关节内(关节)、滑膜内(关节流体区域)、颅内、脊柱内和鞘内(脊髓液)。
取决于给药方式，剂量可一次全部给药，例如在胶囊或液体中的口服制剂，或缓慢地通过一段时间给药，例如肌内或静脉内给药。
给受试者单独或在药物制剂中的结合剂的量是有效治疗或预防感染的量。因此，当实施本发明的方法时，将治疗有效量施用于受试者。通常，每个受试者体重施用约1ug/kg至约1000mg/kg的结合剂。合适的范围还包括约50ug/kg至约500mg/kg之间，以及约10ug/kg至约100mg/kg之间。然而，根据感染的部位、来源、程度和严重程度，待治疗的受试者的年龄和状况、给药方式等，给予受试者的结合剂的量将在宽的范围内变化。医师将最终确定使用的适当剂量。
给受试者单独或在药物制剂中的酵母属酵母的工程菌株的量是有效治疗或预防感染的量。因此，当实施本发明的方法时，将治疗有效量施用于受试者。通常，每个受试者体重施用约1ug/kg至约1000mg/kg的酵母属酵母的工程菌株。合适的范围还包括约50ug/kg至约500mg/kg之间，以及约10ug/kg至约100mg/kg之间。然而，根据感染的部位、来源、程度和严重程度，待治疗的受试者的年龄和状况、给药方式等，给予受试者的酵母属酵母的工程菌株的量将在宽的范围内变化。医师将最终确定使用的适当剂量。
结合剂、酵母属酵母的工程菌株和包括结合剂和/或酵母属酵母的工程菌株的药物制剂的施用频率将根据包括细菌感染的位置，待治疗或预防的感染的细节以及施用模式的因素而变化。每种制剂可以每天4、3、2或一次、隔日一次、每三天一次、每四天一次、每五天一次、每六天一次、每周一次、每八天一次、每九天一次、每十天一次、双周、每月和双月独立施用。
治疗或预防的持续时间将基于所治疗感染的位置和严重程度或感染的相对风险，并由主治医师最好地确定。但是，继续治疗预计会持续数天、数周或数月。
在本发明的每个实施例和方面中，受试者是人、非人灵长类动物、鸟、马、牛、山羊、绵羊、伴侣动物，例如狗、猫或啮齿动物或其他哺乳动物。可以应用本发明方法的受试者包括具有使其更容易感染艰难梭菌的潜在疾病或病症的受试者。
本发明还提供了一种试剂盒，其包括一个或多个装有一种或多种结合剂、一种或多种酵母属酵母的工程菌株或一种或多种包括结合剂和/或酵母属酵母的工程菌株的药物制剂的容器。该试剂盒还可能包含使用说明。与试剂盒相关的进一步信息可能是政府机构规定的关于制造、使用或销售药品或生物制品的规定的通知，该通知反映了制造、使用或销售机构对人类管理的批准。
III.示例
VHH单体和异型二聚体结合剂
建立了筛选针对毒素TcdA和TcdB的特定结构域的单结构域(单体)，单特异性VHH肽单体的有效平台。使用高度免疫原性的无毒全毒素用于免疫，和生物活性嵌合毒素(具有正常的功能域功能)用于筛选，制备与TcdA或TcdB的不同结构域结合的VHH单体组。这些VHH单体中的大多数具有有效的中和活性，并确定了它们与特定结构域的结合(图2)。如前所述，无毒全毒素在其酶促葡糖基转移酶结构域处有点突变[33]。生物活性嵌合毒素是通过在TcdA和TcdB之间转换功能域而产生的，这在之前也有介绍[33]。
几种VHH单体结合高度保守的TcdA/TcdB表位。例如，VHH E3结合到Rho GTP酶结合位点并阻断葡糖基化；VHH AH3结合毒素的GT结构域；VHH 7F结合半胱氨酸蛋白酶切割位点并阻断GT结构域切割和释放。一些VHH单体具有有效的中和活性，能够在nM浓度下阻断毒素细胞毒活性(参见表1；图3A和3B)。
为了增强结合活性，产生了两个结构域(二聚体)，双特异性VHH异型二聚体(表3；图3C)，允许单一蛋白质靶向毒素的两个不同表位。与相同的两个VHH单体的等摩尔混合物相比，这些双特异性VHH异型二聚体具有显着增强的中和活性(图3D)。发现异型二聚体5D/E3和AH3/AA6分别完全保护小鼠免受致死性全身TcdB或TcdA攻击，而混合的5D和E3或AA6单独仅部分保护(图3E和3F)。
通过遗传融合具有靶向保守、非重叠表位(AH3/E3/E3/AA6)的最高中和活性的VHH，产生四价三特异性VHH结合剂(ABA)[41]。这种合理设计的毒素结合剂实现了对各单体的显着增强的结合亲和力和中和活性以及对暴发性CDI的有效治疗效力。ABA能够广泛地中和来自11种不同TcdA+TcdB+艰难梭菌临床分离株的毒素，但不能中和来源于两个TcdA-TcdB+菌株的TcdB。ABA的氨基酸序列示于SEQ ID NO：111。
使用选自SEQ ID NO：9-13(表2)的柔性接头连接包括异型二聚体的VHH单体。
ABAB结合剂
通过连接VHH单体AH3、5D、E3和AA6，即ABBA(AH3/5D/E3/AA6)和ABAB(AH3/5D/AA6/E3)，产生四个结构域(四聚体)四特异性VHH结合剂。这些四特异性四聚体结合剂靶向保守的非重叠表位并具有优异的毒素中和活性。在ABAB的设计中(图4)，通过将5D单体置于它们之间来分离VHH肽单体AH3和AA6，因为AH3和AA6分别结合GT和TD(图2)，它们在空间上彼此相距很远。这种设计允许AH3和AA6同时结合TcdA。
在ABAB结合剂的构建中，柔性接头置于VHH单体之间(参见图4)。编码ABAB的完整核酸序列在SEQ ID NO：20中提供；该蛋白质的氨基酸序列在SEQ ID NO：19中提供。
在某些变体中，在蛋白质的氨基末端提供His(6)标签以帮助纯化，在蛋白质的羧基末端提供E标签以帮助检测，和/或白蛋白结合肽(ABP，DICLPRWGCLWD；SEQ ID NO：21)置于构建体的羧基末端以增加蛋白质的血清半衰期(参见图4)。
发现ABAB对单个单体和ABA表现出显着提高的结合亲和力(表7)和中和活性(表8)。在表8中，在连续稀释的AA6、AH3、ABAB或Merck抗-TcdA HuMab存在下，将Vero细胞暴露于5ng/ml的TcdA [9]。显示了保护细胞免受TcdA诱导的细胞变圆破坏的抗体的最小剂量。
表7
表8
AA6 AH3 ABAB Merck抗-TcdA HuMab
8nM 8nM 0.25nM >10nM
还发现ABAB在竞争性ELISA中与全部四种单独的VHH肽单体竞争，并且可以同时结合TcdA和TcdB，如通过夹心ELISA所测定的。此外，ABAB具有广泛的反应性，能够中和来自代表大多数当前流行毒株的13种不同艰难梭菌菌株的毒素(表9)。
表9
由于ABAB在结合和中和两种毒素方面表现出高效力，因此评估了其治疗暴发性CDI的功效。在小鼠中，艰难梭菌芽孢攻击后一天低至40μg/kg的ABAB单次注射可以使暴发性CDI逆转。感染后3天，ABAB处理的小鼠没有一只死亡，而50％的对照小鼠濒死(图5A)。TcdA和TcdB系统攻击后ABAB的预防死亡率比Merck HuMabs高4个数量级(图5B)[9]。因此，ABAB对艰难梭菌毒素和孢子攻击具有非凡的体内效力。
动物和人体研究表明，被动施用的抗毒素抗体提供针对CDI的保护。这里的初步研究还显示抗毒素polysera保护小鼠免于原发性CDI(图6A和6B)和复发性/再发性CDI。图5A和5B的这些发现和结果支持该假设并提供了开发用于预防CDI的肠胃外ABAB免疫策略的基本原理。为了实现优化ABAB用于全身递送的目标，如图1所示生成嵌合和人源化ABAB，即VHH-Fc和VHH-IgG结合剂以及人源化蛋白hVHH-Fc和hVHH-IgG，之后评估主要蛋白质在动物模型中的体内中和活性和保护作用。在以下段落中提供了关于附加结合剂的制备和测试的细节。
ABAB-Fc
通过产生编码与人IgG1Fc结构域连接的VHH肽单体AH3/5D/AA6/E3(以所述顺序连接)的表达载体来制备ABAB-Fc结合剂。VHH肽单体通过表2的柔性接头分离。编码蛋白质的核酸序列提供于SEQ ID NO：23中。在允许二硫键形成和二价分子产生的条件下，使用蛋白质A珠从稳定转染的HEK293细胞系培养物上清液中表达和纯化ABAB-Fc。表达水平为约20mg/L培养物上清液。ABAB-Fc在结合和中和TcdA和TcdB方面具有完全功能(数据未显示)。ABAB-Fc的氨基酸序列在SEQ ID NO：22中提供。
单特异性VHH-Fc结合剂(AH3-Fc、5D-Fc、E3-Fc和AA6-Fc)和双特异性VHH-Fc结合剂(AH3/5D-Fc)和AA6/E3-Fc)也使用该Fc-融合系统制成。上表5提供了这些额外的结合剂的序列。
ABAB-IgG
如图1中所示，双特异性VHH-IgG(AH3/5D-IgG和E3/AA6-IgG)可通过将单体分别与人IgG重链和轻(kappa或lambda)链融合而产生。四聚体特异性VHH-IgG(ABAB-IgG)结合剂可通过将二聚体分别与人IgG重链和轻链融合来产生。共转染重链和轻链构建体产生AH3/5D-IgG、E3/AA6-IgG和ABAB-IgG嵌合蛋白。将两个VHH分离成重链和轻链可能会提高双特异性和四特异性VHH嵌合蛋白的产量和稳定性。这可以确定VHH-人IgG嵌合抗体是否有助于体内ABAB的稳定性和功效。类似地，ABAB-IgG的体内半衰期的进一步改善也可以在对FcRn受体具有增强的结合亲和力的ABAB-IgG变体中测试。
通过共转染编码每种结合剂的重链和轻(kappa)链的表达载体来制备双特异性(AH3/5D-IgG1和E3/AA6-IgG1)和四特异性(ABAB-IgG1)IgG1结合剂。VHH肽单体通过表2的柔性接头分离。
双特异性四聚体VHH-IgG1结合剂通过制备两种分开的表达载体来产生，第一种编码与缺少重链可变区的人IgG1抗体重链(CH1-铰链-CH2-CH3)连接的VHH肽单体，并且第二种编码与缺少轻链可变区的人IgG1抗体轻(kappa)链(CK)连接的VHH肽单体。这些结合剂是双特异性和四聚体的，因为所得结合剂的每条轻链连接至第一VHH单体，并且所得结合剂的每条重链连接至第二VHH单体。上表6提供了这些另外的结合剂的序列。合适的配对包括(i)AH3-IgG1-重链+AA6-轻(kappa或lambda)链，(ii)5D-IgG1-重链+E3-轻(kappa或lambda)链，(iii)5D-IgG1-重链+AA6-轻(kappa或lambda)链，和(iv)AH3-IgG1-重链+E3-轻(kappa或lambda)链。
制备了四特异性八聚体ABAB-IgG结合剂。这些结合剂是四特异性和八聚体的，因为所得结合剂的每个轻(kappa或lambda)链连接到两个(第一和第二)连接的VHH单体，并且所得结合剂的每条重链连接至两个(第三和第四)连接的VHH单体，其中第一、第二、第三和第四单体结合不同的表位。
通过制备两种分开的表达载体来产生特定的四特异性八聚体ABAB-IgG(图7)结合剂，第一种编码与缺少重链可变区的人IgG1抗体重链(CH1-铰链-CH2-CH3)连接的VHH肽单体AH3/5D(按上述顺序连接)，并且第二种编码与缺少轻链可变区的人IgG1抗体轻(kappa)链(CK)连接的VHH肽单体AA6/E3(按上述顺序连接)。编码AH3/5D-IgG1重链的核苷酸序列在SEQ ID NO：45中提供；氨基酸序列在SEQ ID NO：44中提供。编码AA6/E3-IgG1 kappa链的核苷酸序列在SEQ ID NO：47中提供；氨基酸序列在SEQ ID NO：46中提供。
在允许二硫键形成和二价分子生产的条件下，使用蛋白A珠在稳定转染的HEK293细胞系培养物上清液中表达和纯化双特异性(AH3/5D-IgG1和E3/AA6-IgG1)和四特异性(ABAB-IgG1)IgG1结合剂。SDS-PAGE显示纯化的ABAB-IgG1的纯度在非还原凝胶上在218KDa附近具有总分子量(轻链和重链一起)的超过90％的纯度(数据未显示)。在还原的凝胶上显示重链的分子量为68KDa，轻链为41KDa。
测定了ABAB-IgG1与TcdA和TcdB的结合。图8A-8B示出了ABAB-IgG1与两种毒素的结合与单独组分(AH3、AA6、E3和5D)的比较。图8A显示了其中平板用1ug/ml TcdA(TxA)涂布的实验结果。以0、0.64、3.2、16、80、400和2,000ng/ml的浓度添加连续稀释的ABAB-IgG。洗涤平板并以指定量(ng/ml)加入Merck Ab(抗TcdA)、Fc-ABBA(ABAB-Fc)、Habab(ABAB-IgG)和VHH抗TcdB单体AA6和AH3。使用适当的标记抗体用于检测。图8B显示了其中平板用1ug/mlTcdB(TxB)涂布的实验结果。以0、0.64、3.2、16、80和400ng/ml的浓度添加连续稀释的ABAB-IgG。洗涤平板并以指定量(ng/ml)加入Merck Ab(抗TcdA)、Fc-abba(ABAB-Fc)、Habab(ABAB-IgG)和VHH抗TcdB单体E3和5D。使用适当的标记抗体用于检测。
如所预期的，如通过夹心ELISA(图9A-9B)所确定的，四特异性抗体可以同时结合TcdA和TcdB。在第一组实验中，用1ug/ml TcdA(TxA)涂布平板。以0、1.6、8、40、200和1000ng/ml的浓度添加连续稀释的ABAB-IgG(Habab)。洗涤平板并加入下列量的TcdB：1.6、8、40、200和1000ng/ml。使用小鼠抗TxB抗体(500x)和山羊抗小鼠IgG-HRP(3000x)抗体用于检测。图9A中提供的结果显示通过涂布TxA检测TxB，表明IgG-ABAB同时结合TxA/B。在第二组实验中，用1ug/ml TcdB(TxB)涂布平板。以0、1.6、8、40、200和1000ng/ml的浓度添加连续稀释的ABAB-IgG(Habab)。洗涤平板并加入下列量的TcdA：1.6、8、40、200和1000ng/ml。使用小鼠抗TxA抗体(500x)和山羊抗小鼠IgG-HRP(3000x)抗体进行检测。图9B中提供的结果显示通过涂布TxB检测TxA，再次表明IgG-ABAB同时结合TxA/B。
还检测了ABAB-IgG1对于毒素对培养细胞的致细胞病变作用的中和活性。在加入100ul培养基中的Vero细胞单层之前，将TcdA(100ng/ml，图10A)与连续稀释的Merck抗-TcdA人单克隆抗体ABAB-IgG1(Hababa)和VHH抗-TcdA单体AA6和AH3混合，并在37℃温育24小时。图10A中提供的结果显示ABAB-IgG1在中和TcdA方面比Merck抗体有效至少1000倍。在类似的实验中，在加入100ul培养基中的Vero细胞单层之前，将TcdB(10pg/ml，图10B)与连续稀释的Merck抗-TcdB人单克隆抗体ABAB-IgG1(Hababa)和VHH抗-TcdB单体E3和5D混合，并在37℃温育24小时。图10B中提供的结果显示ABAB-IgG1在中和TcdB方面比Merck抗体有效至少1000倍。
在小鼠CDI模型中研究了ABAB-IgG1的体内中和活性，其结果显示在图11中。用致死剂量的混合TcdA和TcdB(每只小鼠每种毒素25ng)和4小时后将ABAB-IgG(10、30或100ug/kg)，Merck抗毒素A和抗毒素B抗体(10mg/kg)的混合物或PBS施用给小鼠。结果表明ABAB-IgG的中和活性比Merck抗体大得多，并且在较低的浓度下。
ABAB-IgG的动物测试
在预防性治疗和再次攻击存活测定中都测试了ABAB-IgG结合剂。图12提供了这两项研究的实验设计。使用6-8周龄的雌性C57小鼠，条件包括PBS：10ml/kg，i.p.，n＝14；ABAB-IgG：200ug/kg，i.p.，n＝10；ABAB-IgG：1mg/kg，i.p.，n＝10；ABAB-IgG：5mg/kg，i.p.，n＝10。
表10提供了针对艰难梭菌芽孢预防性治疗小鼠(UK1，027/BI/NAP1流行菌株)所见结果的总结。在施用艰难梭菌孢子之前一天施用ABAB-IgG或PBS。可以看出，ABAB-IgG显示剂量相关的抗CDI预防性保护，其中5mg/kg显示对所有检查参数的完全保护，并且发现200ug/kg比200ug/kg双特异性VHH融合抗体ABA更有效[41]。
表10
表11提供了小鼠针对艰难梭菌孢子的再次攻击所见的结果的总结。在施用艰难梭菌孢子之前15天施用ABAB-IgG或PBS。可以看出，一次剂量的ABAB-IgG显示出一些针对由孢子再次攻击引起的CDI的保护作用，但与初次攻击相比，保护效率低得多。这可能是由于随着时间的推移，抗体水平的下降以及初次攻击后PBS组中抗体的产生。
表11
还测试了IgG-ABAB的肠道递送保护小鼠免受暴发性CDI的影响。在剖腹术后将单个IgG-ABAB注射入小鼠ceca后，完全保护小鼠免受死亡结果的暴发性CDI，而50％的对照小鼠死亡(数据未显示)。疾病的进展和严重程度每天使用从先前的出版物修改的临床评分系统评估[62]，其包括四个标准(活动水平、姿势、毛发(coat)和腹泻)，每个标准以0-4的等级进行分级并且加在一起以产生最高值为16的分数。一只正常小鼠得分为0，一只发现死亡的小鼠得分为16。得分等于或高于11的小鼠应该安乐死。在IgG-ABAB治疗组中只有一只小鼠出现短暂性腹泻，而用PBS注射的小鼠产生严重的CDI疾病症状(数据未显示)。因此，通过注射手动递送到小鼠肠中的Ig-ABAB显示出有效的治疗效果。
结合剂的表达、纯化和评估
使用多种选择标准来选择在本文方法中描述的实验中产生的结合剂。首先，本文定义的每种构建体可用于瞬时转染293T细胞以通过蛋白A亲和层析来制备小规模重组蛋白质。每种构建体的产量可以通过定量ELISA确定。其次，可以使用ELISA和表面等离子体共振(SPR)来筛选重组蛋白质的结合活性，以选择保留其对毒素的原始结合活性的构建体。第三，在体外测定中评估蛋白质的中和活性(图3)。
积累的观察表明体内重组结合剂的多反应性和/或自体反应性是与它们的体内安全性和半衰期有关的潜在问题。选择的ABAB结合剂作为全身性结合剂预防原发性急性CDI的应用可能需要嵌合和人源化ABAB蛋白限制多反应性和/或自体反应性。蛋白质蛋白组学的进展使得可以在体外筛选重组抗体的多反应性和自体反应性，这是用来替代治疗性抗体的很好工具。因此，使用自身抗原微阵列测试和ProtoArray蛋白质微阵列(Invitrogen)，可以进一步测试具有良好收率、高结合亲和力和有效中和活性的所选人源化结合剂的潜在多反应性和自体反应性。
从以上体外测定中，可评估候选ABAB-Fc和ABAB-IgG结合剂的体内毒性、血清半衰期和免疫原性。
分泌ABAB的酿酒酵母的产生(Sc-ABAB)
开发了用于体内生产和递送结合剂至患有CDI或有发展为CDI风险的受试者的肠道的手段。由于酿酒酵母与布拉酵母在遗传上相似[52,53]，并且遗传工具容易用于酿酒酵母，酿酒酵母首先用于ABAB分泌验证。
首先开发了新的双特异性夹心ELISA方法来评估ABAB分泌。该设置利用纯化的TcdA和TcdB作为用于ABAB双特异性的结合抗原和用于检测的α-TcdA抗体(图13A)。为了标准化，将平板用TcdB(1ug/ml)涂布，向其中加入连续稀释的ABBA((AH3-E3-E3-AA6))标准品。然后加入连续稀释的rTcdA(1ug/ml至7.8ng/ml)。然后通过加入针对TcdA的单克隆抗体，然后加入HRP缀合的第二抗体来测量TcdA的捕获。标准曲线的结果显示在图13B中。基于这些结果，选择使用125ng/ml rTcdA得到的标准曲线来确定酵母培养物上清液中ABAB的分泌水平，并用于所有随后的ELISA。
含有来自大肠杆菌(pUC)和酵母(2微米环)两者的复制起点的穿梭质粒(pD1214-FAKS)以及酵母营养缺陷型选择标记URA3(赋予合成尿嘧啶的能力)从DNA 2.0(Newark，CA)获得。将分别在ABAB的N端和C端编码ABAB(SEQ ID NO：20)和His标签(SEQ ID NO：66)和D7标签(SEQ ID NO：112)的序列插入到该质粒主链，其中转录受强组成型酵母翻译延伸因子启动子(PTEF)控制，并通过与α交配因子分泌信号前导序列(FAKS)融合而提供细胞外分泌。所得质粒(pD1214-FAKS-His-hABAB-D7)的序列在SEQ ID NO：68中提供。
将质粒pD1214-FAKS-His-hABAB-D7转化进入酿酒酵母菌株BY4741(MATahis3Δ1leu2Δ0Met15Δ0ura3Δ0)、URA3敲除S288C衍生物实验室菌株。然后将酵母转化体在无尿嘧啶的含脱落混合物的YNB培养基中(在1L无菌ddH2O中，6.8g YNB，20g葡萄糖，2g脱落混合物)在摇床中在30℃以250rpm过夜培养以达到O.D.1。然后将细胞离心并在1X SDS上样缓冲液中超声裂解。超声处理后，将总细胞裂解物在98℃下处理5分钟，然后加载到SDS凝胶上。除了对照细胞在没有尿嘧啶的YNB培养基中不存活，因此在与尿嘧啶相配的YNB中培养外，将等量的酵母对照细胞裂解物加载到每个孔中。
将来自25个酵母转化体以及3个酵母对照菌落的培养物上清液离心以分离细胞，然后将无细胞上清液用含有0.05％吐温20的PBS中的2.5％牛奶以1：3的比例稀释并在摇床中以250rpm和30℃温育24小时后通过如上所述的ELISA筛选。图14B显示与来自酵母对照菌落的培养物上清液相比，所有酵母转化体在培养物上清液中分泌ABAB。
使用基于细胞的中和测定来评估培养物上清液中分泌的ABAB的生物学活性。在该测定中，向在4小时内引起100％细胞变圆的足够量的毒素A或毒素B添加来自BY4741对照菌落或BY4741-ABAB菌落的无细胞培养物上清液。重组ABAB用作阳性对照。通过中和活性以防止细胞变圆的水平确定培养物上清液中分泌的ABAB的生物学活性。与纯化的重组ABAB相比，从酿酒酵母分泌的全长ABAB确实保持其中和活性(图14A)。这些综合结果意味着布拉酵母ABAB分泌的合理性。
在进一步的实验中，证明了在剂量为1010CFU下的Sc-ABAB对小鼠进行口服灌胃对小鼠没有副作用，并且通过在Sabouraud CAF琼脂上涂覆粪便确定小鼠脱落的活Sc-ABAB(数据未显示)。使用上述测定法从小鼠回收的分离物保留了其产生功能性ABAB的能力。
ABAB分泌优化
ABAB分泌水平与体内治疗功效紧密相关。因此，探索了通过用许多市售的分泌信号代替现有的FAKS分泌信号来进一步优化ABAB分泌的可能性。在细胞外输出之前，分泌序列促进异源蛋白质的共翻译或翻译后易位进入内质网和高尔基隔室。尽管α-交配因子是异源蛋白质分泌的常用信号序列，通常在酿酒酵母中产生高分泌蛋白质的产量[69,70]，但研究表明来自其他蛋白质的其他分泌序列如菊粉酶或转化酶可能更适合分泌某些异源蛋白质[71,72]。
在同一pD1214质粒主链中，在TEF启动子的控制下，11种不同的可商购的分泌信号(表4；DNA 2.0，Newark，CA)分别与ABAB在基因上融合。编码具有可选分泌信号的ABAB的质粒包括以下质粒，其中FAKS分泌信号被来自表4的所述新分泌信号所取代，并且其中去除了his标签和D7标签：
质粒pD1214-AKS-hABAB(SEQ ID NO：70)
质粒pD1214-AK-hABAB(SEQ ID NO：71)
质粒pD1214-AT-hABAB(SEQ ID NO：72)
质粒pD1214-AA-hABAB(SEQ ID NO：73)
质粒pD1214-GA-hABAB(SEQ ID NO：74)
质粒pD1214-IN-hABAB(SEQ ID NO：75)
质粒pD1214-IVS-hABAB(SEQ ID NO：76)
质粒pD1214-KP-hABAB(SEQ ID NO：77)
质粒pD1214-LZ-hABAB(SEQ ID NO：78)
质粒pD1214-SA-hABAB(SEQ ID NO：79)
此外，除去原始ABAB构建体(pD1214-FAKS-His-hABAB-D7)中的his标签和D7标签以产生质粒pD1214-FAKS-hABAB(SEQ ID NO：69)并将培养温育温度升高至37℃以便更好地适应体内和临床测试相关情况。然后将所有11个质粒转化进BY4741中，选择来自每个选择平板的5个独立菌落以产生培养物上清液。如上所述通过相同的ELISA测定分泌的ABAB的量。此外，E/O值用于提供所有组的公平比较。E/O值由ELISA O.D.值针对培养O.D.值进行标准化而定义。发现ABAB的两种最佳分泌信号是AT和IVS(表4；图15A)。
由于布拉酵母营养缺陷型突变菌株的缺乏，使用另一种携带编码对G418的抗性的aphA1基因(PCEV-G4-Km；SEQ ID NO：80；来自Lars Nielsen&Claudia Vickers的礼物(Addgene质粒#46819))的基于2um的质粒代替pD1214质粒以确认布拉氏酵母中的ABAB分泌。将酿酒酵母的最佳两种分泌信号(AT和IVS)与ABAB基因上融合并插入pCEV-G4-Km质粒主链中以产生质粒pCEV-G4-Km-TEF-AT-hABAB*(SEQ ID NO：81)和pCEV-G4-Km-TEF-IVS-hABAB*(SEQ ID NO：82)。通过ELISA确定，两种质粒都用于转化布拉酵母(菌株MYA796)并且布拉酵母中的AT和IVS的ABAB分泌与酿酒酵母相当(图15B)。制备与pCEV-G4-Km-TEF-AT-hABAB*不同的另一构建体(pCEV-G4-Km-TEF-AT-hABAB(SEQ ID NO：83))，因为它含有AT和hABAB序列之间的分子克隆位点。
然后通过在具有AT分泌信号的构建体中的核苷酸水平上的酵母密码子优化(yABAB)进一步优化ABAB分泌，产生质粒pCEV-G4-Km-TEF-AT-yABAB(SEQ ID NO：84)。还发现在PTEF和ABAB编码序列之间含有40个核苷酸的序列对于ABAB分泌是不必要的并且被去除，从而产生质粒pCEV-G4-Km-TEF-X40-AT-yABAB(SEQ ID NO：85)。发现在AT和ABAB序列之间含有两个限制性克隆位点的进一步序列负面影响ABAB分泌，因此该序列也被省略(质粒pCEV-G4-Km-TEF-AT-RSyABAB；SEQ ID NO：115)用于随后的研究以最大化ABAB分泌。
接下来，测量单个单体的分泌量，发现AA6分泌最少。为了改善AA6分泌，并由此进一步优化ABAB分泌，使用了一组关键氨基酸残基。发现T83N突变可改善AA6分泌。另外，发现携带hAA6序列的布拉酵母比携带酵母优化的yAA6序列的菌株分泌更多的AA6。因此，在携带AA6中的T83N突变的ABAB(AT-yABAB T83N；质粒pCEV-G4-Km-TEF-AT-yABAB AA6T83N；SEQID NO：116)和其中yAA6序列被hAA6T83N序列替换的ABAB(AT-yABAB hAA6 T83N；质粒pCEV-G4-Km-TEF-AT-yABAB hAA6T83N，其具有SEQ ID NO：90的序列，但缺少c-Myc的编码序列)之间进行比较，以确定哪个序列表现出更好的分泌。发现这些构建体与AT-yABAB hAA6T83N之间没有显着性差异，作为最终序列前进的结论。在质粒pCEV-G4-Km-TEF-AT-yABABhAA6T83N-tagless(SEQ ID NO：90)中提供编码AT-yABAB hAA6 T83N的核苷酸序列。AT-yABAB hAA6T83N的氨基酸序列在SEQ ID NO：117中提供。
营养缺陷型布拉酵母菌株的产生
编码ABAB的表达质粒可以克隆到布拉酵母菌株中。布拉酵母菌株可以比酿酒酵母更好地耐受正常体温和酸性条件，这可以提高作为基于口服酵母的新型治疗策略的功效。可以对野生型布拉酵母菌株进行两种修饰以保持由酵母URA3代谢选择标记赋予的表达质粒的体内稳定性：1)可以在URA3的两个染色体等位基因中构建携带缺失的二倍体营养缺陷型突变体，并且2)可以从布拉酵母中治愈内源性2微米环以防止意外重组干扰ABAB表达。
用于在野生型酵母属菌株中构建营养缺陷型突变体的最直接且有效的方法包括通过同源重组靶向缺失染色体编码的基因，其在酵母属中以非常高的频率发生。靶向基因的完全缺失优于选择可恢复为野生型的自发突变。因此，对于酿酒酵母中的单倍体状态优选基因缺失，其通常通过使用营养差的生长培养基并在低温(30℃)下温育通过孢子形成从野生型二倍体诱导。然而，布拉酵母孢子形成不足并且在正常产孢条件下难以形成单倍体细胞[64,65]。使用缺失染色体基因等位基因(例如URA3)的两步法，其中可以选择每个缺失步骤。该过程在图16中示意性地概述。
通过线性DNA缺失盒的乙酸锂促进的遗传转化[73]进行所有染色体缺失。基于乙酸锂的转化起源于酿酒酵母协议，并发现它与布拉氏菌相容，尽管发现布拉酵母很难转化[55,56]。差距约为100倍。通过调整葡萄糖浓度和热休克时间可以提高酿酒酵母的转化效率[74]。因此，各种葡萄糖浓度和热休克时间引入布拉酵母转化用于优化。布拉酵母测试的最佳条件是预培养时葡萄糖含量为2％，42℃时为20分钟热休克时间，这些条件用于所有研究中的所有转化过程。
使用pCEV-G4-Km(SEQ ID NO：80)和pCEV-G4-Ph(SEQ ID NO：86)(来自LarsNielsen&Claudia Vickers的礼物(Addgene质粒#46820))作为模板，通过PCR产生了含有分别对G418和酵母中腐草霉素赋予抗性的基因aphA1和ble的两个缺失盒。两个缺失盒都在相同方向上侧接两个X超过P1(loxP)的基因座，从而允许使用Cre重组酶去除抗生素抗性基因。将URA3启动子上游(PURA3)和URA3终止密码子下游的40个碱基对的同源序列整合到PCR引物中以产生用于布拉酵母中用于位点特异性基因缺失的两个最终缺失盒(参见图16)。使用来自酵母属基因组数据库(SGD)的在线发表的序列的URA3基因注释来映射布拉酵母的V染色体上的URA3基因的确切序列和位置。选择用aphA1缺失盒取代第一URA3等位基因的交叉(crossover)1的选择用于使用对G418的抗性[66]；选择用ble缺失盒取代第二URA3等位基因的第二交叉用于使用对腐草霉素的抗性[75](图16)。用aphA1和ble缺失盒取代两个URA3等位基因由两种抗生素的抗性(数据未显示)以及在缺少尿嘧啶的最小合成培养基平板上缺乏生长证明(数据未显示)。用氯霉素(100ug/ml)在Sabouraud平板上生长也证实了酵母表型(数据未显示)。此外，设计了三组靶向URA3染色体区域中的URA3、aphA1或ble基因的独特引物，并使用野生型(WT)、URA3Δ::aphA/URA3(第一交叉)和URA3Δ::aphA1/Δ::ble(第二交叉)基因组DNA作为模板进行PCR。靶向URA3染色体区域中的URA3、aphA1或ble基因的预期PCR产物大小分别为766bp、1183bp和662bp。使用这三组独特引物，来自WT、第一交叉和第二交叉克隆的PCR产物的DNA电泳证实了URA3等位基因的缺失以及第二交叉株的aphA1和ble缺失盒的整合。
然后用pPL5071_TEF1-Cre_URA3(pPL5071；SEQ ID NO：95)[76]转化第二交叉菌株以去除aphA1和ble缺失盒。在PTEF Cre重组酶下菌株携带pPL5071组成型表达Cre重组酶，然后靶向aphA1和ble缺失盒侧翼的loxp序列；这导致aphA1和ble删除盒的切除，在URA3染色体区域仅留下一个loxp位点。经历成功切除aphA1和ble缺失盒的菌株不能在G418或腐草霉素存在下生长；但仍保留两个URA3等位基因的损失，因此只能在尿嘧啶存在下在最小合成培养基平板上生长，并且在没有尿嘧啶补充物的最小合成培养基平板上不显示生长。
通过在YPD中生长并选择稍后在含有尿嘧啶和嘧啶类似物5-氟-乳清酸(5-FOA)的最小合成培养基上生长的菌落来实现pPL5071的去除[77]。拥有pPL5071的菌株携带URA3基因，该基因可以合成有毒的中间体5-氟脱氧尿苷，这是一种胸苷酸合成酶的有效抑制剂，其中断DNA合成并导致细胞死亡并允许选择已经失去pPL5071的菌株。pPL5071的缺失也通过PCR和PCR产物的DNA电泳由pPL5071特异性引物证实。
2um质粒是在酵母属菌株中无处不在的非常稳定的6.1kb质粒。该质粒对酵母宿主生物体没有选择性优势，并且由于存在有效的REP1-REP2-STB质粒分配系统而显着稳定[68]。使用的布拉酵母菌株也含有通过PCR确认的该质粒。为除去2um质粒，用pBIS-GALkFLP-URA3(SEQ ID NO：87)[67]固化2um质粒，随后用尿嘧啶和5-FOA去除。使用对复制起点特异性的引物通过PCR证实2um质粒的丢失。
由这些操作产生的布拉酵母的营养缺陷型菌株命名为布拉酵母URA3Δ/Δ。
用于原位ABAB递送的营养缺陷型布拉酵母菌株
为了构建用于原位ABAB递送的营养缺陷型布拉酵母菌株，用来自pD质粒的URA3盒取代质粒pCEV-G4-Km-TEF-X40-AT-yABAB(SEQ ID NO：85)的aphA1盒以产生质粒pCEV-URA3-TEF-AT-yABAB-cMyc(SEQ ID NO：88)。该质粒然后用来转化为布拉酵母URA3Δ/Δ。在细胞毒性测定中，与纯化的ABAB相比，所得菌株分泌完全功能的ABAB(图17C)。蛋白质印迹使用缀合有HRP的α-Llama抗体，显示来自布拉酵母培养物上清液的相应ABAB条带(图17D)。ABAB的C-末端含有c-Myc标签，并且可以被α-c-Myc抗体进一步拉下(图17D)。
对于空质粒(EP)对照，稍后从pCEV-URA3-TEF-AT-yABAB-cMyc(SEQ ID NO：88)中除去AT-yABAB序列以产生pCEV-URA3-TEF-cMyc(SEQ ID NO：89)。用该质粒转化的布拉酵母URA3Δ/Δ菌株产生与URA3互补的菌株，但不分泌ABAB。分泌ABAB的布拉酵母URA3Δ/Δ菌株当在含有万古霉素(1mg/ml)的YPD中培养时也显示没有生长抑制(图17A)。这表明布拉酵母可以与通常用于治疗CDI患者的万古霉素共同施用并分泌ABAB以治疗正在进行的CDI。另外，在O.D.为10的超过2小时从布拉酵母收集的培养物上清液中纯化的ABAB稳定表明分泌的ABAB可能从布拉酵母扩散出来而不降解。
布拉酵母对抗生素治疗小鼠的口服安全性评估
在评估表达ABAB的布拉酵母URA3Δ/Δ是否可以保护CDI模型中的小鼠之前[20,33,62,78]，进行安全评估以确定抗生素处理的小鼠中布拉酵母的安全剂量。在该安全评估中，首先小鼠在其日常饮用水中被给予抗生素混合物三天，然后转换为普通水。口服布拉酵母前一天，小鼠腹腔注射克林霉素。这完成了对小鼠的抗生素治疗，然后将布拉酵母经口服递送给小鼠进行安全评估，其包括监测这些抗生素处理的小鼠的每日重量的变化和粪便样品布拉酵母的持久性。小鼠在监测6天期间没有表现出疾病迹象和稳定的体重增加，其中口服布拉酵母的1010个细胞符合布拉酵母作为GRAS生物体的想法。然而，对于随后的CDI小鼠研究，由于颗粒再悬浮的容易性和对小鼠的给药量变化较小，只有109个布拉酵母细胞被给予，这可能在再悬浮中存在高粘度时发生。布拉酵母在这些抗生素处理的小鼠胃肠道中也显示有限的定殖；最后一次灌胃后三天，从Sabouroud平板上未检测到布拉酵母(数据未显示)。
表达ABAB的布拉酵母针对小鼠中原发性CDI的保护作用
使用建立的原发性小鼠CDI模型评估表达ABAB的布拉酵母的保护作用。递送表达ABAB的布拉酵母作为针对小鼠中原发性CDI的预防或治疗。简而言之，通过将抗生素混合物补充到其饮用水中三天，然后在艰难梭菌孢子攻击前24小时腹膜内注射克林霉素，在小鼠中建立了原发性CDI。将105艰难梭菌孢子(UK1，027/BI/NAP1流行株)灌胃给小鼠以诱导CDI。对于预防性评估，在转换为常规饮用水后的第二天，小鼠开始接受口服剂量的布拉酵母，其每天进行持续7天。对于治疗性评估，小鼠在孢子攻击后6、24、48和72小时接受口服剂量的布拉酵母。对照包括PBS和用空质粒转化的布拉酵母。在两种方法中，接收表达ABAB的布拉酵母的小鼠显着受保护免于CDI诱导的死亡(图18A和19A；PBS；阴性对照；Sb：EP：用空质粒转化的布拉酵母；Sb：BAB：分泌ABAB的布拉酵母)。CDI小鼠典型地遭受体重减轻，由于腹泻而在第2天至第3天大部分体重下降并且逐渐恢复。接受表达ABAB的布拉酵母的小鼠体重迅速恢复(图18B和19B)，攻击后第2天腹泻事件的百分比显着降低(图18C和19C)。
表达ABAB的布拉酵母针对小鼠中复发性CDI的保护作用
针对小鼠中的复发性CDI评估表达ABAB的布拉酵母的保护作用。为了诱发复发性CDI，小鼠在其日常饮用水中被给予抗生素混合物三天。经过三天的抗生素水后，小鼠然后被转回饮用普通水。在口服105艰难梭菌孢子(UK1，027/BI/NAP1流行株)前一天，小鼠腹腔注射克林霉素。孢子攻击后6小时，将普通水换成含有0.5mg/ml万古霉素的水6天，并在剩余的研究中再转回到普通水。万古霉素停用4天后，小鼠典型地发生CDI征象，而没有另外的艰难梭菌孢子攻击。在复发模型过程中，布拉酵母每天一次与万古霉素水一起口服，持续12天。该模型用于评估表达ABAB的布拉酵母防止小鼠CDI复发的保护效力。每天监测这些小鼠的存活率、体重减轻和腹泻事件。对照包括PBS和用空质粒转化的布拉酵母。接受表达ABAB的布拉酵母的小鼠显著受保护以防止复发诱导的CDI死亡(图20A；PBS；阴性对照；Sb：EP：用空质粒转化的布拉酵母；Sb：BAB：分泌ABAB的布拉酵母)。与原发性CDI小鼠类似，复发性CDI小鼠也通常在万古霉素水停用后大约第4天至第5天大部分体重下降时体重下降。接受表达ABAB的布拉酵母的小鼠显著受到保护免于体重减轻(图20B)并且具有显著降低的腹泻复发事件百分比(图20C)。
通过染色体整合ABAB盒的稳定性优化
最近在酿酒酵母和布拉酵母中都证明了使用基于CRISPR-Cas9的系统的基因组编辑[79-81]。此外，通过同时靶向两个指导序列可以实现大片段缺失[82]。当没有选择压力时，与通过质粒引入相比，整合到染色体中时，外源基因通常更稳定地维持。然而，染色体整合通常需要多轮整合来获得高拷贝。最近发表的一项方案克服了这一障碍，通过CRISPR诱导的双染色破坏靶向酿酒酵母基因组中常见序列的多个拷贝，例如δ位点，实现了在这些位点大片段的同时整合[83]。DNA双链断裂可以通过非同源末端连接或同源重组来修复；然而，当存在内源同源序列时，宿主优先使用同源序列通过同源重组修复DNA双链断裂[83]。
δ位点是长末端重复序列(LTR)属于Ty元件I和II，并且是酿酒酵母中最丰富的LTR。有以II型转座子(逆转录转座子)为代表的五种类型的Ty元件(1-5)，这在酿酒酵母中更常见。据估计，酿酒酵母基因组中约有51个反转录转座子(Ty1-5)和251个δ位点[84]。这些δ位点是吸引ABAB表达盒整合到布拉酵母染色体中的靶序列。然而，关于布拉酵母中δ位点的知识要少得多。因此，Ty1-H3(Genbank登录号M18706)[84]首先用作调查布拉酵母菌株MYA796(ATCC，Manassas，VA)(来自NCBI的基因组草图)中Ty1-2元件的探针，以鉴定布拉酵母基因组中可能的Ty1-2元件及其δ位点。令人惊讶的是，在MYA796中没有发现完整的Ty1-2元件。共发现57个δ站点；这包括44个完整δ位点和12个部分位点以及在所有16个染色体中鉴定的含有1个完整δ位点的部分Ty元件(表12)。
表12-在MYA796染色体上δ位点的数目及其分布
由于布拉酵母二倍体状态；布拉酵母基因组中有大约114个δ位点。为了允许通过CRISPR进行简单的多重δ位点靶向，使用MUSCLE将所有57个δ位点序列编译成多序列比对以鉴定在57个δ序列中存在大数目的原型间隔子邻接基序(PAM)位点。根据原型间隔子中具有均匀性的最高数量的δ序列作为上游和下游序列而选择两个PAM位点。这些PAM位点的序列如图21所示，具体序列如下：
PAM位点I
PAM位点II
在Pam位点I和Pam位点II中，由虚线所下划的序列对应于上游同源序列；由一条线所下划的序列对应于20bp的原型间隔子；由双线所下划的序列对应于PAM序列；由波浪线所下划的序列对应于下游同源序列。
这两个PAM位点伴随着它们在δ位点内的共同的上游和下游同源序列，允许将ABAB表达盒中简单的染色体整合到布拉酵母基因组中。使用引物通过PCR产生含有同源重组序列的ABAB整合盒，所述引物包含在3'末端去除最后三个核苷酸的上游同源序列和在5'末端去除前两个核苷酸的下游同源序列和使用质粒pCEV-G4-Km-TEF-AT-yABAB hAA6T83N-tagless作为模板(SEQ ID NO：90)进行PCR所需的相应退火序列。
具有CRISPR质粒的ABAB整合盒的PCR产物含有相应的引导序列(pCRI-Sb-δ1(SEQID NO：91)和pCRI-Sb-δ2(SEQ ID NO：92))，然后与布拉酵母共转化用于ABAB整合到染色体中，独立并顺序地靶向PAM位点I和PAM位点II。发现PCR产物与CRISPR质粒的比例对于产生成功的整合克隆是重要的(图22A；ITG低对ITG高)。另外，来自具有相同整合盒和CRISPR质粒的ITG高组的最高ABAB分泌克隆的重复转化不会进一步改善独立克隆的整体ABAB分泌(图22A；2nd ITG高)。通过在CRISPR质粒靶向位点II中共转化含有同源重组序列及其相应引导序列的第二套ABAB整合盒(图22A)，进一步提高来自ITG高组的最高ABAB分泌克隆(CRISPR-2)的ABAB分泌。选择两个最高的ABAB分泌克隆CRISP-3和CRISPR-4。图22B中显示了这四个代表性克隆的ABAB分泌量和随时间的稳定性。进行初步的小鼠CDI研究。然而，发现CRISPR-4并不比先前的M-/-：ABAB克隆好，它在许多小鼠CDI模型中显示出保护作用(图23)。
虽然已经参照本发明的某些特定实施例描述了本发明，但是本领域技术人员将会理解，可以在不脱离本发明的精神和范围的情况下进行各种修改。所附权利要求的范围不限于所描述的具体实施例。
参考文献
本说明书中提及的所有专利和出版物指示了本发明所属领域的技术人员的技术水平。每个引用的专利和出版物都通过引用整体并入本文。本申请中引用了以下所有参考文献：
1.Cloud,J.&Kelly,C.P.Update on Clostridium difficile associateddisease.Curr Opin Gastroenterol 23,4-9(2007).
2.Kelly,C.P.&LaMont,J.T.Clostridium difficile--more difficult thanever.N Engl J Med 359,1932-1940(2008).
3.Barbut,F.,et al.Epidemiology of recurrences or reinfections ofClostridium difficile-associated diarrhea.J Clin Microbiol 38,2386-2388(2000).
4.Hassoun,A.&Ibrahim,F.Use of intravenous immunoglobulin for thetreatment of severe Clostridium difficile colitis.Am J Geriatr Pharmacother5,48-51(2007).
5.Shahani,L.&Koirala,J.Intravenous immunoglobulin in treatment ofClostridium difficile colitis.BMJ Case Rep 2012(2012).
6.Saito,T.,et al.Evidence of intravenous immunoglobulin as a criticalsupportive therapy against Clostridium difficile toxin-mediated lethality inmice.J Antimicrob Chemother 66,1096-1099(2011).
7.Abougergi,M.S.&Kwon,J.H.Intravenous immunoglobulin for thetreatment of Clostridium difficile infection:a review.Dig Dis Sci 56,19-26(2011).
8.Sokol,H.,Maury,E.,Seksik,P.,Cosnes,J.&Beaugerie,L.Singleimmunoglobulin infusion can reverse hemodynamic failure associated withsevere Clostridium difficile colitis.Am J Gastroenterol 104,2649-2650(2009).
9.Lowy,I.,et al.Treatment with monoclonal antibodies againstClostridium difficile toxins.N Engl J Med 362,197-205(2010).
10.Louie,T.J.,et al.Fidaxomicin versus vancomycin for Clostridiumdifficile infection.The New England journal of medicine 364,422-431(2011).
11.Rao,K.&Young,V.B.Fecal Microbiota Transplantation for theManagement of Clostridium difficile Infection.Infectious disease clinics ofNorth America 29,109-122(2015).
12.Vyas,D.,Aekka,A.&Vyas,A.Fecal transplant policy andlegislation.World journal of gastroenterology:WJG 21,6-11(2015).
13.Tonna,I.&Welsby,P.D.Pathogenesis and treatment of Clostridiumdifficile infection.Postgrad Med J 81,367-369(2005).
14.McFarland,L.V.,Elmer,G.W.&Surawicz,C.M.Breaking the cycle:treatment strategies for 163 cases of recurrent Clostridium difficiledisease.The American journal of gastroenterology 97,1769-1775(2002).
15.O'Neill,G.L.,Beaman,M.H.&Riley,T.V.Relapse versus reinfection withClostridium difficile.Epidemiol Infect 107,627-635(1991).
16.Wilcox,M.H.,Fawley,W.N.,Settle,C.D.&Davidson,A.Recurrence ofsymptoms in Clostridium difficile infection--relapse or reinfection？J HospInfect 38,93-100(1998).
17.Johnson,S.,Adelmann,A.,Clabots,C.R.,Peterson,L.R.&Gerding,D.N.Recurrences of Clostridium difficile diarrhea not caused by the originalinfecting organism.J Infect Dis 159,340-343(1989).
18.Tang-Feldman,Y.,Mayo,S.,Silva Jr,J.,Jr.&Cohen,S.H.Molecularanalysis of Clostridium difficile strains isolated from 18 cases of recurrentclostridium difficile-associated diarrhea.J Clin Microbiol 41,3413-3414(2003).
19.Johnson,S.Recurrent Clostridium difficile infection:causality andtherapeutic approaches.Int J Antimicrob Agents 33 Suppl 1,S33-36(2009).
20.Sun,X.,et al.Mouse relapse model of Clostridium difficileinfection.Infection and immunity 79,2856-2864(2011).
21.Seal,D.,et al.Treatment of relapsing Clostridium difficilediarrhoea by administration of a non-toxigenic strain.Eur J Clin Microbiol 6,51-53(1987).
22.Kuehne,S.A.,et al.The role of toxin A and toxin B in Clostridiumdifficile infection.Nature(2010).
23.Lyras,D.,et al.Toxin B is essential for virulence of Clostridiumdifficile.Nature 458,1176-1179(2009).
24.Libby,J.M.&Wilkins,T.D.Production of antitoxins to two toxins ofClostridium difficile and immunological comparison of the toxins by cross-neutralization studies.Infection and immunity 35,374-376(1982).
25.Katchar,K.,et al.Association between IgG2 and IgG3 subclassresponses to toxin A and recurrent Clostridium difficile-associateddisease.Clinical gastroenterology and hepatology:the official clinicalpractice journal of the American Gastroenterological Association 5,707-713(2007).
26.Ghose,C.,et al.Transcutaneous immunization with Clostridiumdifficile toxoid A induces systemic and mucosal immune responses and toxin A-neutralizing antibodies in mice.Infection and immunity 75,2826-2832(2007).
27.Sougioultzis,S.,et al.Clostridium difficile toxoid vaccine inrecurrent C.difficile-associated diarrhea.Gastroenterology 128,764-770(2005).
28.Kyne,L.,Warny,M.,Qamar,A.&Kelly,C.P.Association between antibodyresponse to toxin A and protection against recurrent Clostridium difficilediarrhoea.Lancet 357,189-193(2001).
29.Leav,B.A.,et al.Serum anti-toxin B antibody correlates withprotection from recurrent Clostridium difficile infection(CDI).Vaccine 28,965-969(2010).
30.Fernie,D.S.,Thomson,R.O.,Batty,I.&Walker,P.D.Active and passiveimmunization to protect against antibiotic associated caecitis inhamsters.Dev Biol Stand 53,325-332(1983).
31.Kim,P.H.,Iaconis,J.P.&Rolfe,R.D.Immunization of adult hamstersagainst Clostridium difficile-associated ileocecitis and transfer ofprotection to infant hamsters.Infection and immunity 55,2984-2992(1987).
32.Lyerly,D.M.,Bostwick,E.F.,Binion,S.B.&Wilkins,T.D.Passiveimmunization of hamsters against disease caused by Clostridium difficile byuse of bovine immunoglobulin G concentrate.Infection and immunity 59,2215-2218(1991).
33.Wang,H.,et al.A chimeric toxin vaccine protects against primaryand recurrent Clostridium difficile infection.Infection and immunity 80,2678-2688(2012).
34.Hamers-Casterman,C.,et al.Naturally occurring antibodies devoid oflight chains.Nature 363,446-448(1993).
35.van der Linden,R.,et al.Induction of immune responses andmolecular cloning of the heavy chain antibody repertoire of Lama glama.JImmunol Methods 240,185-195(2000).
36.Harmsen,M.M.&De Haard,H.J.Properties,production,and applicationsof camelid single-domain antibody fragments.Appl Microbiol Biotechnol 77,13-22(2007).
37.Arbabi Ghahroudi,M.,Desmyter,A.,Wyns,L.,Hamers,R.&Muyldermans,S.Selection and identification of single domain antibody fragments from camelheavy-chain antibodies.FEBS Lett 414,521-526(1997).
38.van der Linden,R.H.,et al.Comparison of physical chemicalproperties of llama VHH antibody fragments and mouse monoclonalantibodies.Biochim Biophys Acta 1431,37-46(1999).
39.Dumoulin,M.,et al.Single-domain antibody fragments with highconformational stability.Protein Sci 11,500-515(2002).
40.Hussack,G.,Hirama,T.,Ding,W.,Mackenzie,R.&Tanha,J.Engineeredsingle-domain antibodies with high protease resistance and thermalstability.PloS one 6,e28218(2011).
41.Yang,Z.,et al.A novel multivalent,single-domain antibody targetingTcdA and TcdB prevents fulminant Clostridium difficile infection in mice.TheJournal of infectious diseases 210,964-972(2014).
42.McFarland,L.V.Systematic review and meta-analysis of Saccharomycesboulardii in adult patients.World J.Gastroenterol.16,2202-2222(2010).
43.Elmer,G.W.,McFarland,L.V.,Surawicz,C.M.,Danko,L.&Greenberg,R.N.Behaviour of Saccharomyces boulardii in recurrent Clostridium difficiledisease patients.Aliment.Pharmacol.Ther.13,1663-1668(1999).
44.Surawicz,C.M.,et al.The search for a better treatment forrecurrent Clostridium difficile disease:use of high-dose vancomycin combinedwith Saccharomyces boulardii.Clin.Infect.Dis.31,1012-1017(2000).
45.McFarland,L.V.,et al.A randomized placebo-controlled trial ofSaccharomyces boulardii in combination with standard antibiotics forClostridium difficile disease.Jama 271,1913-1918(1994).
46.Czerucka,D.,Piche,T.&Rampal,P.Review article:yeast as probiotics--Saccharomyces boulardii.Alimentary pharmacology&therapeutics 26,767-778(2007).
47.Sougioultzis,S.,et al.Saccharomyces boulardii produces a solubleanti-inflammatory factor that inhibits NF-kappaB-mediated IL-8 geneexpression.Biochemical and biophysical research communications 343,69-76(2006).
48.Qamar,A.,et al.Saccharomyces boulardii stimulates intestinalimmunoglobulin A immune response to Clostridium difficile toxin A inmice.Infection and immunity 69,2762-2765(2001).
49.Chen,X.,et al.Saccharomyces boulardii inhibits ERK1/2 mitogen-activated protein kinase activation both in vitro and in vivo and protectsagainst Clostridium difficile toxin A-induced enteritis.The Journal ofbiological chemistry281,24449-24454(2006).
50.Barc,M.C.,et al.Molecular analysis of the digestive microbiota ina gnotobiotic mouse model during antibiotic treatment:Influence ofSaccharomyces boulardii.Anaerobe 14,229-233(2008).
51.Gorlani,A.,de Haard,H.&Verrips,T.Expression of VHHs inSaccharomyces cerevisiae.Methods in molecular biology 911,277-286(2012).
52.Khatri,I.,et al.Gleaning evolutionary insights from the genomesequence of a probiotic yeast Saccharomyces boulardii.Gut Pathog.5,30(2013).
53.Batista,T.M.,Marques,E.T.,Jr.,Franco,G.R.&Douradinha,B.DraftGenome Sequence of the Probiotic Yeast Saccharomyces cerevisiae var.boulardiiStrain ATCC MYA-796.Genome announcements 2,578-579(2014).
54.Hamedi,H.,et al.Generation of a uracil auxotroph strain of theprobiotic yeast Saccharomyces boulardii as a host for the recombinant proteinproduction.Avicenna journal of medical biotechnology 5,29-34(2013).
55.Hudson,L.E.,et al.Functional heterologous protein expression bygenetically engineered probiotic yeast Saccharomyces boulardii.PLoS One 9,e112660(2014).
56.Douradinha,B.,et al.Novel insights in genetic transformation ofthe probiotic yeast Saccharomyces boulardii.Bioengineered 5,21-29(2014).
57.Fietto,J.L.,et al.Molecular and physiological comparisons betweenSaccharomyces cerevisiae and Saccharomyces boulardii.Canadian journal ofmicrobiology 50,615-621(2004).
58.Martins,F.S.,et al.Screening of yeasts as probiotic based oncapacities to colonize the gastrointestinal tract and to protect againstenteropathogen challenge in mice.The Journal of general and appliedmicrobiology 51,83-92(2005).
59.Martins,F.S.,Veloso,L.C.,Arantes,R.M.&Nicoli,J.R.Effects of yeastprobiotic formulation on viability,revival and protection against infectionwith Salmonella enterica ssp.enterica serovar Typhimurium inmice.Lett.Appl.Microbiol.49,738-744(2009).
60.Wu,D.,Teng,D.,Wang,X.,Dai,C.&Wang,J.Saccharomyces boulardiiprevention of the hepatic injury induced by Salmonella Enteritidisinfection.Can.J.Microbiol.60,681-686(2014).
61.Elmer,G.W.&Corthier,G.Modulation of Clostridium difficile inducedmortality as a function of the dose and the viability of the Saccharomycesboulardii used as a preventative agent in gnotobioticmice.Can.J.Microbiol.37,315-317(1991).
62.Chen,X.,et al.A mouse model of Clostridium difficile-associateddisease.Gastroenterology 135,1984-1992(2008).
63.Pawlowski,S.W.,et al.Murine model of Clostridium difficileinfection with agedgnotobiotic C57BL/6 mice and a BI/NAP1 strain.The Journalof infectious diseases 202,1708-1712(2010).
64.McFarland,L.V.Saccharomyces boulardii is not Saccharomycescerevisiae.Clin.Infect.Dis.22,200-201(1996).
65.Edwards-Ingram,L.,et al.Genotypic and physiologicalcharacterization of Saccharomyces boulardii,the probiotic strain ofSaccharomyces cerevisiae.Appl.Environ.Microbiol.73,2458-2467(2007).
66.Panchal,C.J.,Whitney,G.K.&Stewart,G.G.Susceptibility ofSaccharomyces spp.and Schwanniomyces spp.to the aminoglycoside antibioticG418.Appl.Environ.Microbiol.47,1164-1166(1984).
67.Tsalik,E.L.&Gartenberg,M.R.Curing Saccharomyces cerevisiae of the2 micron plasmid by targeted DNA damage.Yeast 14,847-852(1998).
68.Chan,K.M.,Liu,Y.T.,Ma,C.H.,Jayaram,M.&Sau,S.The 2 micron plasmidof Saccharomyces cerevisiae:a miniaturized selfish genome with optimizedfunctional competence.Plasmid 70,2-17(2013).
69.Brake,A.J.,et al.Alpha-factor-directed synthesis and secretion ofmature foreign proteins in Saccharomyces cerevisiae.Proceedings of theNational Academy of Sciences of the United States of America 81,4642-4646(1984).
70.Porro,D.,Sauer,M.,Branduardi,P.&Mattanovich,D.Recombinant proteinproduction in yeasts.Molecular biotechnology 31,245-259(2005).
71.Chung,B.H.,Nam,S.W.,Kim,B.M.&Park,Y.H.Highly efficient secretionof heterologous proteins from Saccharomyces cerevisiae using inulinase signalpeptides.Biotechnology and bioengineering 49,473-479(1996).
72.Hahm,M.S.&Chung,B.H.Secretory expression of human growth hormonein Saccharomyces cerevisiae using three different leadersequences.Biotechnology and Bioprocess Engineering 6,306-309(2001).
73.Gietz,R.D.&Schiestl,R.H.High-efficiency yeast transformation usingthe LiAc/SS carrier DNA/PEG method.Nat.Protoc.2,31–4(2007).
74.Konishi,T.&Harata,M.Improvement of the transformation efficiencyof Sacchaaromyces cerevisiae by altering carbon sources in pre-culture.Biosci.Biotechnol.Biochem.78,1090–1093(2014).
75.Gatignol,A.,Baron,M.&Tiraby,G.Phleomycin resistance encoded by theble gene from transposon Tn 5 as a dominant selectable marker inSaccharomyces cerevisiae.MGG Mol.Gen.Genet.207,342–348(1987).
76.Macdonald,C.&Piper,R.C.Puromycin-and methotrexate-resistancecassettes and optimized Cre-recombinase expression plasmids for use inyeast.Yeast 32,423–438(2015).
77.Boeke,J.D.,LaCroute,F.&Fink,G.R.A positive selection for mutantslacking orotidine-5’-phosphate decarboxylase activity in yeast:5-fluoro-orotic acid resistance.Mol Gen Genet 197,345–346(1984).
78.Yang,Z.et al.Intravenous adenovirus expressing a multi-specific,single-domain antibody neutralizing TcdA and TcdB protects mice fromClostridium difficile infection.Pathog.Dis.74,ftw078(2016).
79.DiCarlo,J.E.et al.Genome engineering in Saccharomyces cerevisiaeusing CRISPR-Cas systems.Nucleic Acids Res.41,4336–43(2013).
80.Bao,Z.et al.Homology-Integrated CRISPR-Cas(HI-CRISPR)System forOne-Step Multigene Disruption in Saccharomyces cerevisiae.ACS Synth.Biol.4,585–594(2015).
81.Liu,J.-J.et al.Metabolic engineering of a probiotic Saccharomycesboulardii.Appl.Environ.Microbiol.AEM.00057-16(2016).doi:10.1128/AEM.00057-16
82.Hao,H.et al.Large fragment deletion using a CRISPR/Cas9 system inSaccharomyces cerevisiae.(2016).doi:10.1016/j.ab.2016.07.008.This
83.Shi,S.,Liang,Y.,Zhang,M.M.,Ang,E.L.&Zhao,H.A highly efficientsingle-step,markerless strategy for multi-copy chromosomal integration oflarge biochemical pathways in Saccharomyces cerevisiae.Metab.Eng.33,19–27(2016).
84.Kim,J.M.et al.Transposable Elements and Genome Organization:AComprehensive Survey of Retrotransposons Revealed by the CompleteSaccharomyces cerevisiae.Genome Research.8(5):464–478(1998).
85.Bao Z,Xiao H,Liang J,Zhang L,Xiong X,Sun N,Si T,Zhao H.Homology-Integrated CRISPR-Cas(HI-CRISPR)System for One-Step Multigene Disruption inSaccharomyces cerevisiae.ACS Synth Biol.4(5):585-94(2015).
86.DiCarlo JE,Norville JE,Mali P,Rios X,Aach J,Church GM.Genomeengineering in Saccharomyces cerevisiae using CRISPR-Cas systems.NucleicAcids Res 41:4336–43(2013).
87.Liu J-J,Kong II,Zhang G-C,Jayakody LN,Kim H,Xia P-F,Kwak S,SungBH,Sohn J-H,Walukiewicz HE,Rao C V.,Jin Y-S.Metabolic engineering of aprobiotic Saccharomyces boulardii.Appl Environ Microbiol.82(8):2280-7(2016).
88.Shi S,Liang Y,Zhang MM,Ang EL,Zhao H.A highly efficient single-step,markerless strategy for multi-copy chromosomal integration of largebiochemical pathways in Saccharomyces cerevisiae.Metab Eng 33:19–27(2016).
序列表（SEQUENCE LISTING）
<110> 冯汉平（ FENG, Hanping）
J·盖伦（GALEN, James）
J·A·卡拉斯科洛佩兹（CARRASCO LOPEZ, Jose Antonio）
K·陈（ CHEN, Kevin）
<120> 针对艰难梭菌感染的基于酵母的免疫疗法（YEAST-BASED IMMUNOTHERAPYAGAINST CLOSTRIDIUM DIFFICILE INFECTION）
<130> 2016-1343A
<150> US 62/240,810
<151> 2015-10-13
<160> 117
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 密码子优化的VHH肽单体5D（Codon-optimized VHH peptide monomer 5D）
<400> 1
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr
20 25 30
Gly Ile Gly Trp Phe Arg Gln Pro Pro Gly Lys Glu Arg Glu Ala Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ala Ser Ala Arg Thr Ile Leu Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ala Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Arg Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Arg Phe Ser Ala Ser Ser Val Asn Arg Trp Leu Ala Asp
100 105 110
Asp Tyr Asp Val Trp Gly Arg Gly Thr Gln Val Ala Val Ser Ser
115 120 125
<210> 2
<211> 381
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 密码子优化的VHH肽单体5D（Codon-optimized VHH peptide monomer 5D）
<400> 2
caggtgcaac tggttgaatc tgggggaggc ttggtacaac ctgggggatc cctgagactc 60
tcttgcgagg cctccggatt caccttggac tactatggca tcggctggtt ccgccagccc 120
ccagggaagg agcgggaggc cgtttcatac attagtgcca gtgcccggac catactgtac 180
gcagactctg tgaagggacg ctttaccatc tctagggaca atgccaaaaa tgctgtgtac 240
ctgcaaatga acagcctcaa gcgggaggat accgcagtgt actactgcgc gagacggcgc 300
ttctccgctt ctagcgtgaa tagatggctg gccgacgact acgacgtgtg gggacggggc 360
acacaggtgg ctgtctcgag c 381
<210> 3
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 密码子优化的VHH肽单体E3（Codon-optimized VHH peptide monomer E3）
<400> 3
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Thr Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ser Ser Gly Ser Ile Ala Gly Phe Glu
20 25 30
Thr Val Thr Trp Ser Arg Gln Ala Pro Gly Lys Ser Leu Gln Trp Val
35 40 45
Ala Ser Met Thr Lys Thr Asn Asn Glu Ile Tyr Ser Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys Lys
85 90 95
Gly Pro Glu Leu Arg Gly Gln Gly Ile Gln Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 4
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 密码子优化的VHH肽单体E3（Codon-optimized VHH peptide monomer E3）
<400> 4
caagttcagc tggtcgaatc cgggggcgga ctggtccaga cagggggctc cctgaggctc 60
tcctgtgcat cttccggaag catcgccggc ttcgagaccg tgacctggtc tcgccaggct 120
cccgggaagt ctctgcagtg ggtcgcttcc atgactaaga ctaacaacga gatctactct 180
gactcagtga aaggccgctt catcatttct agagataacg ctaaaaacac agtgtatctg 240
cagatgaata gtctcaaacc tgaagacaca ggcgtgtatt tctgtaaggg tcctgagctg 300
aggggccagg gcatccaggt aacagtctcg agt 333
<210> 5
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 密码子优化的VHH肽单体AA6（Codon-optimized VHH peptide monomer AA6）
<400> 5
Gln Leu Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Val Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Ile
35 40 45
Ala Thr Ile Asn Thr Asp Gly Ser Thr Met Arg Asp Asp Ser Thr Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Thr Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Arg Val Ile Ser Ala Ser Ala Ile Arg Gly Ala Val Arg Gly
100 105 110
Pro Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 6
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 密码子优化的VHH肽单体AA6（Codon-optimized VHH peptide monomer AA6）
<400> 6
caactgcagc tggtagagac agggggcggc ttagttcagc ctggagggtc tctcagactg 60
tcatgcgctg cctctggctt taccttcagt gactacgtga tgacatgggt ccgccaagct 120
ccagggaagg ggcctgagtg gatcgctact attaatacag atggcagcac aatgcgggac 180
gactccacaa aggggcggtt caccatttcc agagacaacg ccaagaatac tctgtacctt 240
cagatgacca gtctgaaacc cgaggacact gctctgtact attgtgcaag aggccgggtg 300
atctctgctt ccgctatcag aggcgcagta aggggccctg gaacacaagt aactgtctcg 360
agc 363
<210> 7
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 密码子优化的VHH肽单体AH3（Codon-optimized VHH peptide monomer AH3）
<400> 7
Gln Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
1 5 10 15
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Ser Ser
20 25 30
Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val Ser
35 40 45
Cys Ile Ser Ser Ser Gly Asp Ser Thr Lys Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Thr Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Ala Phe Arg Ala Thr Met Cys Gly Val Phe Pro Leu Ser Pro Tyr Gly
100 105 110
Lys Asp Asp Trp Gly Lys Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 8
<211> 378
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 密码子优化的VHH肽单体AH3（Codon-optimized VHH peptide monomer AH3）
<400> 8
caggtacagc tggtggagac gggggggctg gtacaaccag gcgggtcact gaggctttcc 60
tgtgccgcat ctgggttcac actggattat tcgtccatag ggtggtttcg gcaggctcct 120
ggcaaagagc gtgagggggt ctcatgtatt agtagtagtg gtgatagcac aaagtacgcc 180
gattccgtaa agggccggtt tacaacctcc agggataatg ctaagaacac cgtatatctc 240
cagatgaact ctctgaagcc cgacgatacg gccgtatatt actgtgcggc tttcagggcg 300
actatgtgcg gcgtgttccc tctgagccct tacggcaagg acgactgggg caaggggacc 360
ctggtgaccg tctcgagt 378
<210> 9
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 密码子优化的柔性接头1（Codon-optimized Flexible linker 1）
<400> 9
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 10
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 密码子优化的柔性接头1（Codon-optimized Flexible linker 1）
<400> 10
ggcggtggag ggtctggtgg gggaggctca gggggtggag gcagc 45
<210> 11
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 密码子优化的柔性接头2（Codon-optimized flexible linker 2）
<400> 11
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 12
<211> 48
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 密码子优化的柔性接头2（Codon-optimized flexible linker 2）
<400> 12
ggtggcggaa gcggaggggg cagcgggggt gggagcggtg ggggcagc 48
<210> 13
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 密码子优化的柔性接头3（Codon-optimized flexible linker 3）
<400> 13
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 14
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 密码子优化的柔性接头3（Codon-optimized flexible linker 3）
<400> 14
gggggaggcg gttcaggcgg tgggggatct ggcgggggtg gatcc 45
<210> 15
<211> 269
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AH3-5D异型二聚体（AH3-5D heterodimer）
<400> 15
Gln Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Ser
20 25 30
Ser Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val
35 40 45
Ser Cys Ile Ser Ser Ser Gly Asp Ser Thr Lys Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Thr Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Phe Arg Ala Thr Met Cys Gly Val Phe Pro Leu Ser Pro Tyr
100 105 110
Gly Lys Asp Asp Trp Gly Lys Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val
130 135 140
Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu
145 150 155 160
Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr Gly Ile
165 170 175
Gly Trp Phe Arg Gln Pro Pro Gly Lys Glu Arg Glu Ala Val Ser Tyr
180 185 190
Ile Ser Ala Ser Ala Arg Thr Ile Leu Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
195 200 205
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ala Val Tyr Leu Gln
210 215 220
Met Asn Ser Leu Lys Arg Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
225 230 235 240
Arg Arg Phe Ser Ala Ser Ser Val Asn Arg Trp Leu Ala Asp Asp Tyr
245 250 255
Asp Val Trp Gly Arg Gly Thr Gln Val Ala Val Ser Ser
260 265
<210> 16
<211> 807
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AH3-5D异型二聚体（AH3-5D heterodimer）
<400> 16
caggtacagc tggtggagac ggggggaggg ctggtacaac caggcgggtc actgaggctt 60
tcctgtgccg catctgggtt cacactggat tattcgtcca tagggtggtt tcggcaggct 120
cctggcaaag agcgtgaggg ggtctcatgt attagtagta gtggtgatag cacaaagtac 180
gccgattccg taaagggccg gtttacaacc tccagggata atgctaagaa caccgtatat 240
ctccagatga actctctgaa gcccgacgat acggccgtat attactgtgc ggctttcagg 300
gcgactatgt gcggcgtgtt ccctctgagc ccttacggca aggacgactg gggcaagggg 360
accctggtga ccgtatcctc aggcggtgga gggtctggtg ggggaggctc agggggtgga 420
ggcagccagg tgcaactggt tgaatctggg ggaggcttgg tacaacctgg gggatccctg 480
agactctctt gcgaggcctc cggattcacc ttggactact atggcatcgg ctggttccgc 540
cagcccccag ggaaggagcg ggaggccgtt tcatacatta gtgccagtgc ccggaccata 600
ctgtacgcag actctgtgaa gggacgcttt accatctcta gggacaatgc caaaaatgct 660
gtgtacctgc aaatgaacag cctcaagcgg gaggataccg cagtgtacta ctgcgcgaga 720
cggcgcttct ccgcttctag cgtgaataga tggctggccg acgactacga cgtgtgggga 780
cggggcacac aggtggctgt ctcgagc 807
<210> 17
<211> 247
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AA6-E3异型二聚体（AA6-E3 heterodimer）
<400> 17
Gln Leu Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Val Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Ile
35 40 45
Ala Thr Ile Asn Thr Asp Gly Ser Thr Met Arg Asp Asp Ser Thr Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Thr Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Arg Val Ile Ser Ala Ser Ala Ile Arg Gly Ala Val Arg Gly
100 105 110
Pro Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly
130 135 140
Gly Gly Leu Val Gln Thr Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ser
145 150 155 160
Ser Gly Ser Ile Ala Gly Phe Glu Thr Val Thr Trp Ser Arg Gln Ala
165 170 175
Pro Gly Lys Ser Leu Gln Trp Val Ala Ser Met Thr Lys Thr Asn Asn
180 185 190
Glu Ile Tyr Ser Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp
195 200 205
Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu
210 215 220
Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys Lys Gly Pro Glu Leu Arg Gly Gln Gly
225 230 235 240
Ile Gln Val Thr Val Ser Ser
245
<210> 18
<211> 741
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AA6-E3异型二聚体（AA6-E3 heterodimer）
<400> 18
caactgcagc tggtagagac agggggcggc ttagttcagc ctggagggtc tctcagactg 60
tcatgcgctg cctctggctt taccttcagt gactacgtga tgacatgggt ccgccaagct 120
ccagggaagg ggcctgagtg gatcgctact attaatacag atggcagcac aatgcgggac 180
gactccacaa aggggcggtt caccatttcc agagacaacg ccaagaatac tctgtacctt 240
cagatgacca gtctgaaacc cgaggacact gctctgtact attgtgcaag aggccgggtg 300
atctctgctt ccgctatcag aggcgcagta aggggccctg gaacacaggt aaccgtttca 360
tccgggggag gcggttcagg cggtggggga tctggcgggg gtggatccca agttcagctg 420
gtcgaatccg ggggcggact ggtccagaca gggggctccc tgaggctctc ctgtgcatct 480
tccggaagca tcgccggctt cgagaccgtg acctggtctc gccaggctcc cgggaagtct 540
ctgcagtggg tcgcttccat gactaagact aacaacgaga tctactctga ctcagtgaaa 600
ggccgcttca tcatttctag agataacgct aaaaacacag tgtatctgca gatgaatagt 660
ctcaaacctg aagacacagg cgtgtatttc tgtaagggtc ctgagctgag gggccagggc 720
atccaggtaa cagtctcgag t 741
<210> 19
<211> 532
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> ABAB结合剂（ABAB binding agent）
<400> 19
Gln Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Ser
20 25 30
Ser Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val
35 40 45
Ser Cys Ile Ser Ser Ser Gly Asp Ser Thr Lys Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Thr Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Phe Arg Ala Thr Met Cys Gly Val Phe Pro Leu Ser Pro Tyr
100 105 110
Gly Lys Asp Asp Trp Gly Lys Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val
130 135 140
Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu
145 150 155 160
Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr Gly Ile
165 170 175
Gly Trp Phe Arg Gln Pro Pro Gly Lys Glu Arg Glu Ala Val Ser Tyr
180 185 190
Ile Ser Ala Ser Ala Arg Thr Ile Leu Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
195 200 205
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ala Val Tyr Leu Gln
210 215 220
Met Asn Ser Leu Lys Arg Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
225 230 235 240
Arg Arg Phe Ser Ala Ser Ser Val Asn Arg Trp Leu Ala Asp Asp Tyr
245 250 255
Asp Val Trp Gly Arg Gly Thr Gln Val Ala Val Ser Ser Gly Gly Gly
260 265 270
Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gln Leu Gln
275 280 285
Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg
290 295 300
Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Val Met Thr
305 310 315 320
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Ile Ala Thr Ile
325 330 335
Asn Thr Asp Gly Ser Thr Met Arg Asp Asp Ser Thr Lys Gly Arg Phe
340 345 350
Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Thr
355 360 365
Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Arg
370 375 380
Val Ile Ser Ala Ser Ala Ile Arg Gly Ala Val Arg Gly Pro Gly Thr
385 390 395 400
Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
405 410 415
Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu
420 425 430
Val Gln Thr Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ser Ser Gly Ser
435 440 445
Ile Ala Gly Phe Glu Thr Val Thr Trp Ser Arg Gln Ala Pro Gly Lys
450 455 460
Ser Leu Gln Trp Val Ala Ser Met Thr Lys Thr Asn Asn Glu Ile Tyr
465 470 475 480
Ser Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys
485 490 495
Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Gly
500 505 510
Val Tyr Phe Cys Lys Gly Pro Glu Leu Arg Gly Gln Gly Ile Gln Val
515 520 525
Thr Val Ser Ser
530
<210> 20
<211> 1596
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> ABAB结合剂（ABAB binding agent）
<400> 20
caggtacagc tggtggagac ggggggaggg ctggtacaac caggcgggtc actgaggctt 60
tcctgtgccg catctgggtt cacactggat tattcgtcca tagggtggtt tcggcaggct 120
cctggcaaag agcgtgaggg ggtctcatgt attagtagta gtggtgatag cacaaagtac 180
gccgattccg taaagggccg gtttacaacc tccagggata atgctaagaa caccgtatat 240
ctccagatga actctctgaa gcccgacgat acggccgtat attactgtgc ggctttcagg 300
gcgactatgt gcggcgtgtt ccctctgagc ccttacggca aggacgactg gggcaagggg 360
accctggtga ccgtatcctc aggcggtgga gggtctggtg ggggaggctc agggggtgga 420
ggcagccagg tgcaactggt tgaatctggg ggaggcttgg tacaacctgg gggatccctg 480
agactctctt gcgaggcctc cggattcacc ttggactact atggcatcgg ctggttccgc 540
cagcccccag ggaaggagcg ggaggccgtt tcatacatta gtgccagtgc ccggaccata 600
ctgtacgcag actctgtgaa gggacgcttt accatctcta gggacaatgc caaaaatgct 660
gtgtacctgc aaatgaacag cctcaagcgg gaggataccg cagtgtacta ctgcgcgaga 720
cggcgcttct ccgcttctag cgtgaataga tggctggccg acgactacga cgtgtgggga 780
cggggcacac aggtggctgt gtcttccggt ggcggaagcg gagggggcag cgggggtggg 840
agcggtgggg gcagccaact gcagctggta gagacagggg gcggcttagt tcagcctgga 900
gggtctctca gactgtcatg cgctgcctct ggctttacct tcagtgacta cgtgatgaca 960
tgggtccgcc aagctccagg gaaggggcct gagtggatcg ctactattaa tacagatggc 1020
agcacaatgc gggacgactc cacaaagggg cggttcacca tttccagaga caacgccaag 1080
aatactctgt accttcagat gaccagtctg aaacccgagg acactgctct gtactattgt 1140
gcaagaggcc gggtgatctc tgcttccgct atcagaggcg cagtaagggg ccctggaaca 1200
caggtaaccg tttcatccgg gggaggcggt tcaggcggtg ggggatctgg cgggggtgga 1260
tcccaagttc agctggtcga atccgggggc ggactggtcc agacaggggg ctccctgagg 1320
ctctcctgtg catcttccgg aagcatcgcc ggcttcgaga ccgtgacctg gtctcgccag 1380
gctcccggga agtctctgca gtgggtcgct tccatgacta agactaacaa cgagatctac 1440
tctgactcag tgaaaggccg cttcatcatt tctagagata acgctaaaaa cacagtgtat 1500
ctgcagatga atagtctcaa acctgaagac acaggcgtgt atttctgtaa gggtcctgag 1560
ctgaggggcc agggcatcca ggtaacagtc tcgagt 1596
<210> 21
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 白蛋白结合肽（Albumin-binding peptide）
<400> 21
Asp Ile Cys Leu Pro Arg Trp Gly Cys Leu Trp Asp
1 5 10
<210> 22
<211> 761
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> ABAB-Fc结合剂（ABAB-Fc binding agent）
<400> 22
Gln Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Ser
20 25 30
Ser Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val
35 40 45
Ser Cys Ile Ser Ser Ser Gly Asp Ser Thr Lys Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Thr Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Phe Arg Ala Thr Met Cys Gly Val Phe Pro Leu Ser Pro Tyr
100 105 110
Gly Lys Asp Asp Trp Gly Lys Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val
130 135 140
Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu
145 150 155 160
Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr Gly Ile
165 170 175
Gly Trp Phe Arg Gln Pro Pro Gly Lys Glu Arg Glu Ala Val Ser Tyr
180 185 190
Ile Ser Ala Ser Ala Arg Thr Ile Leu Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
195 200 205
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ala Val Tyr Leu Gln
210 215 220
Met Asn Ser Leu Lys Arg Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
225 230 235 240
Arg Arg Phe Ser Ala Ser Ser Val Asn Arg Trp Leu Ala Asp Asp Tyr
245 250 255
Asp Val Trp Gly Arg Gly Thr Gln Val Ala Val Ser Ser Gly Gly Gly
260 265 270
Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gln Leu Gln
275 280 285
Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg
290 295 300
Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Val Met Thr
305 310 315 320
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Ile Ala Thr Ile
325 330 335
Asn Thr Asp Gly Ser Thr Met Arg Asp Asp Ser Thr Lys Gly Arg Phe
340 345 350
Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Thr
355 360 365
Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Arg
370 375 380
Val Ile Ser Ala Ser Ala Ile Arg Gly Ala Val Arg Gly Pro Gly Thr
385 390 395 400
Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
405 410 415
Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu
420 425 430
Val Gln Thr Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ser Ser Gly Ser
435 440 445
Ile Ala Gly Phe Glu Thr Val Thr Trp Ser Arg Gln Ala Pro Gly Lys
450 455 460
Ser Leu Gln Trp Val Ala Ser Met Thr Lys Thr Asn Asn Glu Ile Tyr
465 470 475 480
Ser Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys
485 490 495
Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Gly
500 505 510
Val Tyr Phe Cys Lys Gly Pro Glu Leu Arg Gly Gln Gly Ile Gln Val
515 520 525
Thr Val Ser Ser Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
530 535 540
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
545 550 555 560
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
565 570 575
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
580 585 590
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
595 600 605
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
610 615 620
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
625 630 635 640
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
645 650 655
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
660 665 670
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
675 680 685
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
690 695 700
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
705 710 715 720
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
725 730 735
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
740 745 750
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
755 760
<210> 23
<211> 2286
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> ABAB-Fc结合剂（ABAB-Fc binding agent）
<400> 23
caggtacagc tggtggagac ggggggaggg ctggtacaac caggcgggtc actgaggctt 60
tcctgtgccg catctgggtt cacactggat tattcgtcca tagggtggtt tcggcaggct 120
cctggcaaag agcgtgaggg ggtctcatgt attagtagta gtggtgatag cacaaagtac 180
gccgattccg taaagggccg gtttacaacc tccagggata atgctaagaa caccgtatat 240
ctccagatga actctctgaa gcccgacgat acggccgtat attactgtgc ggctttcagg 300
gcgactatgt gcggcgtgtt ccctctgagc ccttacggca aggacgactg gggcaagggg 360
accctggtga ccgtatcctc aggcggtgga gggtctggtg ggggaggctc agggggtgga 420
ggcagccagg tgcaactggt tgaatctggg ggaggcttgg tacaacctgg gggatccctg 480
agactctctt gcgaggcctc cggattcacc ttggactact atggcatcgg ctggttccgc 540
cagcccccag ggaaggagcg ggaggccgtt tcatacatta gtgccagtgc ccggaccata 600
ctgtacgcag actctgtgaa gggacgcttt accatctcta gggacaatgc caaaaatgct 660
gtgtacctgc aaatgaacag cctcaagcgg gaggataccg cagtgtacta ctgcgcgaga 720
cggcgcttct ccgcttctag cgtgaataga tggctggccg acgactacga cgtgtgggga 780
cggggcacac aggtggctgt gtcttccggt ggcggaagcg gagggggcag cgggggtggg 840
agcggtgggg gcagccaact gcagctggta gagacagggg gcggcttagt tcagcctgga 900
gggtctctca gactgtcatg cgctgcctct ggctttacct tcagtgacta cgtgatgaca 960
tgggtccgcc aagctccagg gaaggggcct gagtggatcg ctactattaa tacagatggc 1020
agcacaatgc gggacgactc cacaaagggg cggttcacca tttccagaga caacgccaag 1080
aatactctgt accttcagat gaccagtctg aaacccgagg acactgctct gtactattgt 1140
gcaagaggcc gggtgatctc tgcttccgct atcagaggcg cagtaagggg ccctggaaca 1200
caggtaaccg tttcatccgg gggaggcggt tcaggcggtg ggggatctgg cgggggtgga 1260
tcccaagttc agctggtcga atccgggggc ggactggtcc agacaggggg ctccctgagg 1320
ctctcctgtg catcttccgg aagcatcgcc ggcttcgaga ccgtgacctg gtctcgccag 1380
gctcccggga agtctctgca gtgggtcgct tccatgacta agactaacaa cgagatctac 1440
tctgactcag tgaaaggccg cttcatcatt tctagagata acgctaaaaa cacagtgtat 1500
ctgcagatga atagtctcaa acctgaagac acaggcgtgt atttctgtaa gggtcctgag 1560
ctgaggggcc agggcatcca ggtaacagtc tcgagcggat ccgacaaaac tcacacatgc 1620
ccaccgtgcc cagcacctga actcctgggg ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa 1680
cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc cctgaggtca catgcgtggt ggtggacgtg 1740
agccacgaag accctgaggt caagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat 1800
gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac aacagcacgt accgtgtggt cagcgtcctc 1860
accgtcctgc accaggactg gctgaatggc aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa 1920
gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc tccaaagcca aagggcagcc ccgagaacca 1980
caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc 2040
tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag 2100
ccggagaaca actacaagac cacgcctccc gtgctggact ccgacggctc cttcttcctc 2160
tatagcaagc tcaccgtgga caagagcagg tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc 2220
gtgatgcatg aggctctgca caaccactac acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt 2280
aaatga 2286
<210> 24
<211> 356
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5D-Fc结合剂（5D-Fc binding agent）
<400> 24
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr
20 25 30
Gly Ile Gly Trp Phe Arg Gln Pro Pro Gly Lys Glu Arg Glu Ala Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ala Ser Ala Arg Thr Ile Leu Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ala Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Arg Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Arg Phe Ser Ala Ser Ser Val Asn Arg Trp Leu Ala Asp
100 105 110
Asp Tyr Asp Val Trp Gly Arg Gly Thr Gln Val Ala Val Ser Ser Gly
115 120 125
Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
130 135 140
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
145 150 155 160
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
165 170 175
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
180 185 190
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
195 200 205
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
210 215 220
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
225 230 235 240
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
245 250 255
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
260 265 270
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
275 280 285
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
290 295 300
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
305 310 315 320
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
325 330 335
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
340 345 350
Ser Pro Gly Lys
355
<210> 25
<211> 1071
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5D-Fc结合剂（5D-Fc binding agent）
<400> 25
caggtgcaac tggttgaatc tgggggaggc ttggtacaac ctgggggatc cctgagactc 60
tcttgcgagg cctccggatt caccttggac tactatggca tcggctggtt ccgccagccc 120
ccagggaagg agcgggaggc cgtttcatac attagtgcca gtgcccggac catactgtac 180
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ctgcaaatga acagcctcaa gcgggaggat accgcagtgt actactgcgc gagacggcgc 300
ttctccgctt ctagcgtgaa tagatggctg gccgacgact acgacgtgtg gggacggggc 360
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cctgaactcc tggggggacc gtcagtcttc ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc 480
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cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag 660
gactggctga atggcaagga gtacaagtgc aaggtctcca acaaagccct cccagccccc 720
atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg 780
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ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac 900
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gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct 1020
ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc tccctgtctc cgggtaaatg a 1071
<210> 26
<211> 340
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> E3-Fc结合剂（E3-Fc binding agent）
<400> 26
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Thr Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ser Ser Gly Ser Ile Ala Gly Phe Glu
20 25 30
Thr Val Thr Trp Ser Arg Gln Ala Pro Gly Lys Ser Leu Gln Trp Val
35 40 45
Ala Ser Met Thr Lys Thr Asn Asn Glu Ile Tyr Ser Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys Lys
85 90 95
Gly Pro Glu Leu Arg Gly Gln Gly Ile Gln Val Thr Val Ser Ser Gly
100 105 110
Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
115 120 125
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
130 135 140
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
145 150 155 160
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
165 170 175
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
180 185 190
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
195 200 205
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
210 215 220
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
225 230 235 240
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
245 250 255
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
260 265 270
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
275 280 285
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
290 295 300
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
305 310 315 320
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
325 330 335
Ser Pro Gly Lys
340
<210> 27
<211> 1023
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> E3-Fc结合剂（E3-Fc binding agent）
<400> 27
caagttcagc tggtcgaatc cgggggcgga ctggtccaga cagggggctc cctgaggctc 60
tcctgtgcat cttccggaag catcgccggc ttcgagaccg tgacctggtc tcgccaggct 120
cccgggaagt ctctgcagtg ggtcgcttcc atgactaaga ctaacaacga gatctactct 180
gactcagtga aaggccgctt catcatttct agagataacg ctaaaaacac agtgtatctg 240
cagatgaata gtctcaaacc tgaagacaca ggcgtgtatt tctgtaaggg tcctgagctg 300
aggggccagg gcatccaggt aacagtctcg agcggatccg acaaaactca cacatgccca 360
ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc 420
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aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc 600
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tga 1023
<210> 28
<211> 350
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AA6-Fc结合剂（AA6-Fc binding agent）
<400> 28
Gln Leu Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Val Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Ile
35 40 45
Ala Thr Ile Asn Thr Asp Gly Ser Thr Met Arg Asp Asp Ser Thr Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Thr Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Arg Val Ile Ser Ala Ser Ala Ile Arg Gly Ala Val Arg Gly
100 105 110
Pro Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Asp Lys Thr His Thr
115 120 125
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
130 135 140
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
145 150 155 160
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
165 170 175
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
180 185 190
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
195 200 205
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
210 215 220
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
225 230 235 240
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
245 250 255
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
260 265 270
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
275 280 285
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
290 295 300
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
305 310 315 320
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
325 330 335
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
340 345 350
<210> 29
<211> 1053
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AA6-Fc结合剂（AA6-Fc binding agent）
<400> 29
caactgcagc tggtagagac agggggcggc ttagttcagc ctggagggtc tctcagactg 60
tcatgcgctg cctctggctt taccttcagt gactacgtga tgacatgggt ccgccaagct 120
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gactccacaa aggggcggtt caccatttcc agagacaacg ccaagaatac tctgtacctt 240
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ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 480
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aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag 780
atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 840
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 900
ctggactccg acggctcctt cttcctctat agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 960
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 1020
cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa tga 1053
<210> 30
<211> 356
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AH3-Fc结合剂（AH3-Fc binding agent）
<400> 30
Gln Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Ser
20 25 30
Ser Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val
35 40 45
Ser Cys Ile Ser Ser Ser Gly Asp Ser Thr Lys Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Thr Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
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100 105 110
Gly Lys Asp Asp Trp Gly Lys Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly
115 120 125
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130 135 140
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
145 150 155 160
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165 170 175
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180 185 190
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
195 200 205
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
210 215 220
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
225 230 235 240
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
245 250 255
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
260 265 270
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
275 280 285
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
290 295 300
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
305 310 315 320
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
325 330 335
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
340 345 350
Ser Pro Gly Lys
355
<210> 31
<211> 1071
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AH3-Fc结合剂（AH3-Fc binding agent）
<400> 31
caggtacagc tggtggagac ggggggaggg ctggtacaac caggcgggtc actgaggctt 60
tcctgtgccg catctgggtt cacactggat tattcgtcca tagggtggtt tcggcaggct 120
cctggcaaag agcgtgaggg ggtctcatgt attagtagta gtggtgatag cacaaagtac 180
gccgattccg taaagggccg gtttacaacc tccagggata atgctaagaa caccgtatat 240
ctccagatga actctctgaa gcccgacgat acggccgtat attactgtgc ggctttcagg 300
gcgactatgt gcggcgtgtt ccctctgagc ccttacggca aggacgactg gggcaagggg 360
accctggtga ccgtctcgag cggatccgac aaaactcaca catgcccacc gtgcccagca 420
cctgaactcc tggggggacc gtcagtcttc ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc 480
atgatctccc ggacccctga ggtcacatgc gtggtggtgg acgtgagcca cgaagaccct 540
gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg 600
cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag 660
gactggctga atggcaagga gtacaagtgc aaggtctcca acaaagccct cccagccccc 720
atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg 780
cccccatccc gggaggagat gaccaagaac caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc 840
ttctatccca gcgacatcgc cgtggagtgg gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac 900
aagaccacgc ctcccgtgct ggactccgac ggctccttct tcctctatag caagctcacc 960
gtggacaaga gcaggtggca gcaggggaac gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct 1020
ctgcacaacc actacacgca gaagagcctc tccctgtctc cgggtaaatg a 1071
<210> 32
<211> 498
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AH3-5D-Fc结合剂（AH3-5D-Fc binding agent）
<400> 32
Gln Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Ser
20 25 30
Ser Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val
35 40 45
Ser Cys Ile Ser Ser Ser Gly Asp Ser Thr Lys Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Thr Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Phe Arg Ala Thr Met Cys Gly Val Phe Pro Leu Ser Pro Tyr
100 105 110
Gly Lys Asp Asp Trp Gly Lys Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val
130 135 140
Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu
145 150 155 160
Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr Gly Ile
165 170 175
Gly Trp Phe Arg Gln Pro Pro Gly Lys Glu Arg Glu Ala Val Ser Tyr
180 185 190
Ile Ser Ala Ser Ala Arg Thr Ile Leu Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
195 200 205
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ala Val Tyr Leu Gln
210 215 220
Met Asn Ser Leu Lys Arg Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
225 230 235 240
Arg Arg Phe Ser Ala Ser Ser Val Asn Arg Trp Leu Ala Asp Asp Tyr
245 250 255
Asp Val Trp Gly Arg Gly Thr Gln Val Ala Val Ser Ser Gly Ser Asp
260 265 270
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
275 280 285
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
290 295 300
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
305 310 315 320
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
325 330 335
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
340 345 350
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
355 360 365
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
370 375 380
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
385 390 395 400
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
405 410 415
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
420 425 430
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
435 440 445
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
450 455 460
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
465 470 475 480
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
485 490 495
Gly Lys
<210> 33
<211> 1497
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AH3-5D-Fc结合剂（AH3-5D-Fc binding agent）
<400> 33
caggtacagc tggtggagac ggggggaggg ctggtacaac caggcgggtc actgaggctt 60
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gtgtacctgc aaatgaacag cctcaagcgg gaggataccg cagtgtacta ctgcgcgaga 720
cggcgcttct ccgcttctag cgtgaataga tggctggccg acgactacga cgtgtgggga 780
cggggcacac aggtggctgt ctcgagcgga tccgacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc 840
ccagcacctg aactcctggg gggaccgtca gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac 900
accctcatga tctcccggac ccctgaggtc acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa 960
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accctgcccc catcccggga ggagatgacc aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc 1260
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<210> 34
<211> 476
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AA6-E3-Fc结合剂（AA6-E3-Fc binding agent）
<400> 34
Gln Leu Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Val Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Ile
35 40 45
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50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
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Arg Gly Arg Val Ile Ser Ala Ser Ala Ile Arg Gly Ala Val Arg Gly
100 105 110
Pro Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly
130 135 140
Gly Gly Leu Val Gln Thr Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ser
145 150 155 160
Ser Gly Ser Ile Ala Gly Phe Glu Thr Val Thr Trp Ser Arg Gln Ala
165 170 175
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180 185 190
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Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu
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Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys Lys Gly Pro Glu Leu Arg Gly Gln Gly
225 230 235 240
Ile Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
245 250 255
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260 265 270
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275 280 285
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325 330 335
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
340 345 350
Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
355 360 365
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370 375 380
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
385 390 395 400
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
405 410 415
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420 425 430
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
435 440 445
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Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470 475
<210> 35
<211> 1431
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AA6-E3-Fc结合剂（AA6-E3-Fc binding agent）
<400> 35
caactgcagc tggtagagac agggggcggc ttagttcagc ctggagggtc tctcagactg 60
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gaggtcaagt tcaactggta cgtggacggc gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagccg 960
cgggaggagc agtacaacag cacgtaccgt gtggtcagcg tcctcaccgt cctgcaccag 1020
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atcgagaaaa ccatctccaa agccaaaggg cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg 1140
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<210> 36
<211> 457
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AH3-IgG1-重链（AH3-IgG1-heavy chain）
<400> 36
Gln Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Ser
20 25 30
Ser Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val
35 40 45
Ser Cys Ile Ser Ser Ser Gly Asp Ser Thr Lys Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Thr Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Phe Arg Ala Thr Met Cys Gly Val Phe Pro Leu Ser Pro Tyr
100 105 110
Gly Lys Asp Asp Trp Gly Lys Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
115 120 125
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
130 135 140
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
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Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
165 170 175
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180 185 190
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195 200 205
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210 215 220
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
225 230 235 240
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
245 250 255
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260 265 270
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
275 280 285
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290 295 300
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305 310 315 320
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
325 330 335
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
340 345 350
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355 360 365
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370 375 380
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
385 390 395 400
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
405 410 415
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
420 425 430
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435 440 445
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 37
<211> 1374
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AH3-IgG1-重链（AH3-IgG1-heavy chain）
<400> 37
caggtacagc tggtggagac ggggggaggg ctggtacaac caggcgggtc actgaggctt 60
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<210> 38
<211> 457
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5D-IgG1-重链（5D-IgG1-heavy chain）
<400> 38
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
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Gly Ile Gly Trp Phe Arg Gln Pro Pro Gly Lys Glu Arg Glu Ala Val
35 40 45
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65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
145 150 155 160
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
165 170 175
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
180 185 190
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
195 200 205
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg
210 215 220
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
225 230 235 240
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
245 250 255
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
260 265 270
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
275 280 285
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
290 295 300
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
305 310 315 320
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
325 330 335
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
340 345 350
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
355 360 365
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
370 375 380
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
385 390 395 400
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
405 410 415
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
420 425 430
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435 440 445
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 39
<211> 1374
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5D-IgG1-重链（5D-IgG1-heavy chain）
<400> 39
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tcctccaaga gcacctctgg gggcacagcg gccctgggct gcctggtcaa ggactacttc 480
cccgaacctg tgacggtctc gtggaactca ggcgccctga ccagcggcgt gcacaccttc 540
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cctgaggtca agttcaactg gtacgtggac ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag 900
ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgtac cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac 960
caggactggc tgaatggcaa ggagtacaag tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc 1020
cccatcgaga aaaccatctc caaagccaaa gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc 1080
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<210> 40
<211> 228
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AA6-IgG1-kappa链（AA6-IgG1-kappa chain）
<400> 40
Gln Leu Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
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20 25 30
Val Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Ile
35 40 45
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50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Thr Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Arg Val Ile Ser Ala Ser Ala Ile Arg Gly Ala Val Arg Gly
100 105 110
Pro Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser
115 120 125
Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala
130 135 140
Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val
145 150 155 160
Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser
165 170 175
Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr
180 185 190
Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys
195 200 205
Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn
210 215 220
Arg Gly Glu Cys
225
<210> 41
<211> 687
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AA6-IgG1-kappa链（AA6-IgG1-kappa chain）
<400> 41
caactgcagc tggtagagac agggggcggc ttagttcagc ctggagggtc tctcagactg 60
tcatgcgctg cctctggctt taccttcagt gactacgtga tgacatgggt ccgccaagct 120
ccagggaagg ggcctgagtg gatcgctact attaatacag atggcagcac aatgcgggac 180
gactccacaa aggggcggtt caccatttcc agagacaacg ccaagaatac tctgtacctt 240
cagatgacca gtctgaaacc cgaggacact gctctgtact attgtgcaag aggccgggtg 300
atctctgctt ccgctatcag aggcgcagta aggggccctg gaacacaagt aactgtctcg 360
agccgtacgg tggctgcacc atctgtcttc atcttcccgc catctgatga gcagttgaaa 420
tctggaactg cctctgttgt gtgcctgctg aataacttct atcccagaga ggccaaagta 480
cagtggaagg tggataacgc cctccaatcg ggtaactccc aggagagtgt cacagagcag 540
gacagcaagg acagcaccta cagcctcagc agcaccctga cgctgagcaa agcagactac 600
gagaaacaca aagtctacgc ctgcgaagtc acccatcagg gcctgagctc gcccgtcaca 660
aagagcttca acaggggaga gtgttga 687
<210> 42
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> E3-IgG1-kappa链（E3-IgG1-kappa chain）
<400> 42
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Thr Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ser Ser Gly Ser Ile Ala Gly Phe Glu
20 25 30
Thr Val Thr Trp Ser Arg Gln Ala Pro Gly Lys Ser Leu Gln Trp Val
35 40 45
Ala Ser Met Thr Lys Thr Asn Asn Glu Ile Tyr Ser Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys Lys
85 90 95
Gly Pro Glu Leu Arg Gly Gln Gly Ile Gln Val Thr Val Ser Ser Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 43
<211> 657
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> E3-IgG1-kappa链（E3-IgG1-kappa chain）
<400> 43
caagttcagc tggtcgaatc cgggggcgga ctggtccaga cagggggctc cctgaggctc 60
tcctgtgcat cttccggaag catcgccggc ttcgagaccg tgacctggtc tcgccaggct 120
cccgggaagt ctctgcagtg ggtcgcttcc atgactaaga ctaacaacga gatctactct 180
gactcagtga aaggccgctt catcatttct agagataacg ctaaaaacac agtgtatctg 240
cagatgaata gtctcaaacc tgaagacaca ggcgtgtatt tctgtaaggg tcctgagctg 300
aggggccagg gcatccaggt aacagtctcg agccgtacgg tggctgcacc atctgtcttc 360
atcttcccgc catctgatga gcagttgaaa tctggaactg cctctgttgt gtgcctgctg 420
aataacttct atcccagaga ggccaaagta cagtggaagg tggataacgc cctccaatcg 480
ggtaactccc aggagagtgt cacagagcag gacagcaagg acagcaccta cagcctcagc 540
agcaccctga cgctgagcaa agcagactac gagaaacaca aagtctacgc ctgcgaagtc 600
acccatcagg gcctgagctc gcccgtcaca aagagcttca acaggggaga gtgttga 657
<210> 44
<211> 599
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AH3-5D-IgG1重链（AH3-5D-IgG1 heavy chain）
<400> 44
Gln Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Ser
20 25 30
Ser Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val
35 40 45
Ser Cys Ile Ser Ser Ser Gly Asp Ser Thr Lys Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Thr Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Phe Arg Ala Thr Met Cys Gly Val Phe Pro Leu Ser Pro Tyr
100 105 110
Gly Lys Asp Asp Trp Gly Lys Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val
130 135 140
Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu
145 150 155 160
Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr Gly Ile
165 170 175
Gly Trp Phe Arg Gln Pro Pro Gly Lys Glu Arg Glu Ala Val Ser Tyr
180 185 190
Ile Ser Ala Ser Ala Arg Thr Ile Leu Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
195 200 205
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ala Val Tyr Leu Gln
210 215 220
Met Asn Ser Leu Lys Arg Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
225 230 235 240
Arg Arg Phe Ser Ala Ser Ser Val Asn Arg Trp Leu Ala Asp Asp Tyr
245 250 255
Asp Val Trp Gly Arg Gly Thr Gln Val Ala Val Ser Ser Ala Ser Thr
260 265 270
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
275 280 285
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
290 295 300
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
305 310 315 320
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
325 330 335
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
340 345 350
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu
355 360 365
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
370 375 380
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
385 390 395 400
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
405 410 415
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
420 425 430
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
435 440 445
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
450 455 460
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
465 470 475 480
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
485 490 495
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
500 505 510
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
515 520 525
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
530 535 540
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
545 550 555 560
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
565 570 575
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
580 585 590
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
595
<210> 45
<211> 1800
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AH3-5D-IgG1重链（AH3-5D-IgG1 heavy chain）
<400> 45
caggtacagc tggtggagac ggggggaggg ctggtacaac caggcgggtc actgaggctt 60
tcctgtgccg catctgggtt cacactggat tattcgtcca tagggtggtt tcggcaggct 120
cctggcaaag agcgtgaggg ggtctcatgt attagtagta gtggtgatag cacaaagtac 180
gccgattccg taaagggccg gtttacaacc tccagggata atgctaagaa caccgtatat 240
ctccagatga actctctgaa gcccgacgat acggccgtat attactgtgc ggctttcagg 300
gcgactatgt gcggcgtgtt ccctctgagc ccttacggca aggacgactg gggcaagggg 360
accctggtga ccgtatcctc aggcggtgga gggtctggtg ggggaggctc agggggtgga 420
ggcagccagg tgcaactggt tgaatctggg ggaggcttgg tacaacctgg gggatccctg 480
agactctctt gcgaggcctc cggattcacc ttggactact atggcatcgg ctggttccgc 540
cagcccccag ggaaggagcg ggaggccgtt tcatacatta gtgccagtgc ccggaccata 600
ctgtacgcag actctgtgaa gggacgcttt accatctcta gggacaatgc caaaaatgct 660
gtgtacctgc aaatgaacag cctcaagcgg gaggataccg cagtgtacta ctgcgcgaga 720
cggcgcttct ccgcttctag cgtgaataga tggctggccg acgactacga cgtgtgggga 780
cggggcacac aggtggctgt ctcgagcgcg tcgaccaagg gcccatcggt cttcccgcta 840
gcaccctcct ccaagagcac ctctgggggc acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac 900
tacttccccg aacctgtgac ggtctcgtgg aactcaggcg ccctgaccag cggcgtgcac 960
accttcccgg ctgtcctaca gtcctcagga ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg 1020
ccctccagca gcttgggcac ccagacctac atctgcaacg tgaatcacaa gcccagcaac 1080
accaaggtgg acaagagagt tgagcccaaa tcttgtgaca aaactcacac atgcccaccg 1140
tgcccagcac ctgaactcct ggggggaccg tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag 1200
gacaccctca tgatctcccg gacccctgag gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac 1260
gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag 1320
acaaagccgc gggaggagca gtacaacagc acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc 1380
ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc 1440
ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa gccaaagggc agccccgaga accacaggtg 1500
tacaccctgc ccccatcccg ggaggagatg accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg 1560
gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag 1620
aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg gactccgacg gctccttctt cctctatagc 1680
aagctcaccg tggacaagag caggtggcag caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg 1740
catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag aagagcctct ccctgtcccc gggtaaatga 1800
<210> 46
<211> 354
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AA6-E3-IgG1轻链（AA6-E3-IgG1 light chain）
<400> 46
Gln Leu Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Val Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Ile
35 40 45
Ala Thr Ile Asn Thr Asp Gly Ser Thr Met Arg Asp Asp Ser Thr Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Thr Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Arg Val Ile Ser Ala Ser Ala Ile Arg Gly Ala Val Arg Gly
100 105 110
Pro Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly
130 135 140
Gly Gly Leu Val Gln Thr Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ser
145 150 155 160
Ser Gly Ser Ile Ala Gly Phe Glu Thr Val Thr Trp Ser Arg Gln Ala
165 170 175
Pro Gly Lys Ser Leu Gln Trp Val Ala Ser Met Thr Lys Thr Asn Asn
180 185 190
Glu Ile Tyr Ser Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp
195 200 205
Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu
210 215 220
Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys Lys Gly Pro Glu Leu Arg Gly Gln Gly
225 230 235 240
Ile Gln Val Thr Val Ser Ser Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe
245 250 255
Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val
260 265 270
Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp
275 280 285
Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr
290 295 300
Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr
305 310 315 320
Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val
325 330 335
Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly
340 345 350
Glu Cys
<210> 47
<211> 1065
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AA6-E3-IgG1轻链（AA6-E3-IgG1 light chain）
<400> 47
caactgcagc tggtagagac agggggcggc ttagttcagc ctggagggtc tctcagactg 60
tcatgcgctg cctctggctt taccttcagt gactacgtga tgacatgggt ccgccaagct 120
ccagggaagg ggcctgagtg gatcgctact attaatacag atggcagcac aatgcgggac 180
gactccacaa aggggcggtt caccatttcc agagacaacg ccaagaatac tctgtacctt 240
cagatgacca gtctgaaacc cgaggacact gctctgtact attgtgcaag aggccgggtg 300
atctctgctt ccgctatcag aggcgcagta aggggccctg gaacacaggt aaccgtttca 360
tccgggggag gcggttcagg cggtggggga tctggcgggg gtggatccca agttcagctg 420
gtcgaatccg ggggcggact ggtccagaca gggggctccc tgaggctctc ctgtgcatct 480
tccggaagca tcgccggctt cgagaccgtg acctggtctc gccaggctcc cgggaagtct 540
ctgcagtggg tcgcttccat gactaagact aacaacgaga tctactctga ctcagtgaaa 600
ggccgcttca tcatttctag agataacgct aaaaacacag tgtatctgca gatgaatagt 660
ctcaaacctg aagacacagg cgtgtatttc tgtaagggtc ctgagctgag gggccagggc 720
atccaggtaa cagtctcgag ccgtacggtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca 780
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 840
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 900
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 960
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 1020
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gttga 1065
<210> 48
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> VHH肽单体5D（VHH peptide monomer 5D）
<400> 48
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr
20 25 30
Gly Ile Gly Trp Phe Arg Gln Pro Pro Gly Lys Glu Arg Glu Ala Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ala Ser Ala Arg Thr Ile Leu Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ala Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Arg Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Arg Arg Phe Ser Ala Ser Ser Val Asn Arg Trp Leu Ala Asp
100 105 110
Asp Tyr Asp Val Trp Gly Arg Gly Thr Gln Val Ala Val Ser Ser
115 120 125
<210> 49
<211> 381
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> VHH肽单体5D（VHH peptide monomer 5D）
<400> 49
caggtgcagc tcgtggagtc aggtggaggc ttggtgcagc ctggggggtc tctgagactc 60
tcctgtgaag cctctggatt cactttggat tattatggta taggctggtt ccgccagccc 120
ccagggaagg agcgcgaggc ggtctcatat attagtgcca gtgcccgtac gatattgtat 180
gcagattccg tgaagggccg atttaccatc tccagagaca atgccaagaa cgcggtgtat 240
ctacaaatga acagcctgaa acgtgaggac acggctgtct attactgtgc gaggcggcga 300
ttctccgcgt ctagtgttaa tagatggctt gccgacgact atgacgtctg gggtcggggg 360
acccaggtcg cggtgtcctc a 381
<210> 50
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> VHH肽单体E3（VHH peptide monomer E3）
<400> 50
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Thr Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ser Ser Gly Ser Ile Ala Gly Phe Glu
20 25 30
Thr Val Thr Trp Ser Arg Gln Ala Pro Gly Lys Ser Leu Gln Trp Val
35 40 45
Ala Ser Met Thr Lys Thr Asn Asn Glu Ile Tyr Ser Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys Lys
85 90 95
Gly Pro Glu Leu Arg Gly Gln Gly Ile Gln Val Thr Val Ser Ser
100 105 110
<210> 51
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> VHH肽单体E3（VHH peptide monomer E3）
<400> 51
caggtgcagc tcgtggagtc gggcggaggc ttggtgcaga ctggggggtc tctgagactc 60
tcctgtgcat cctctggaag tatcgccggt ttcgaaaccg tgacctggtc ccgccaggct 120
cctggaaagt cgctccagtg ggtcgcatcg atgactaaaa ctaataacga gatctattca 180
gactccgtga agggccgatt catcatctcc agagacaacg ccaagaatac ggtgtatcta 240
caaatgaaca gcctgaaacc tgaggacaca ggcgtctatt tttgtaaagg tcctgagttg 300
aggggccagg ggatccaggt caccgtctcc tcg 333
<210> 52
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> VHH肽单体AA6（VHH peptide monomer AA6）
<400> 52
Gln Leu Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Val Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Ile
35 40 45
Ala Thr Ile Asn Thr Asp Gly Ser Thr Met Arg Asp Asp Ser Thr Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Thr Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Arg Val Ile Ser Ala Ser Ala Ile Arg Gly Ala Val Arg Gly
100 105 110
Pro Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 53
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> VHH肽单体AA6（VHH peptide monomer AA6）
<400> 53
cagttgcagc tcgtggagac agggggaggc ttggtgcagc ctggggggtc tctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacgttcagt gactacgtca tgacctgggt ccgccaggct 120
ccaggaaagg ggcccgaatg gatcgcaact attaatacgg acggtagcac gatgcgtgat 180
gactccacaa aaggccgatt caccatctcc agagacaacg ccaagaacac actgtatctg 240
caaatgacca gcctgaaacc ggaggacacg gccctgtatt actgtgcgag aggccgcgtg 300
atctccgcct ccgcgataag aggggcggtt aggggcccgg ggacccaggt caccgtctcc 360
tca 363
<210> 54
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> VHH肽单体AH3（VHH peptide monomer AH3）
<400> 54
Gln Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
1 5 10 15
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Ser Ser
20 25 30
Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val Ser
35 40 45
Cys Ile Ser Ser Ser Gly Asp Ser Thr Lys Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Thr Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Ala Phe Arg Ala Thr Met Cys Gly Val Phe Pro Leu Ser Pro Tyr Gly
100 105 110
Lys Asp Asp Trp Gly Lys Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 55
<211> 378
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> VHH肽单体AH3（VHH peptide monomer AH3）
<400> 55
caggtgcagc tcgtggagac ggggggcttg gtgcagcctg gggggtctct gagactctcc 60
tgtgcagcct ctggattcac tttggattat tcgtccatag gctggttccg ccaggcccca 120
gggaaggagc gtgagggggt ctcatgtatt agtagtagtg gtgatagcac aaagtatgca 180
gactccgtga agggccgatt caccacctcc agagacaacg ccaagaacac ggtgtatctg 240
caaatgaaca gcctgaaacc tgacgacaca gccgtttatt actgtgcagc ttttagggcg 300
actatgtgcg gcgtgttccc ccttagcccc tacggcaagg acgactgggg caaagggacc 360
ctggtcaccg tctcctca 378
<210> 56
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 柔性接头1（Flexible linker 1）
<400> 56
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 57
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 柔性接头1（Flexible linker 1）
<400> 57
ggcggtggtg gctctggtgg cggcggttcc ggtggcggtg gcagc 45
<210> 58
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 柔性接头2（Flexible linker 2）
<400> 58
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 59
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 柔性接头2（Flexible linker 2）
<400> 59
ggtggaggcg gttcaggcgg aggtggctct ggcggtggcg gttcc 45
<210> 60
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 柔性接头3（Flexible linker 3）
<400> 60
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 61
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 柔性接头3（Flexible linker 3）
<400> 61
ggcggtggtg gctctggtgg cggcggttcc ggtggcggtg gcagc 45
<210> 62
<211> 259
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5D-E3异型二聚体（5D-E3 heterodimer）
<400> 62
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr
20 25 30
Gly Ile Gly Trp Phe Arg Gln Pro Pro Gly Lys Glu Arg Glu Ala Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ala Ser Ala Arg Thr Ile Leu Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ala Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Glu Thr Asn Ser Leu Lys Arg Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Arg Arg Phe Ser Ala Ser Ser Val Asn Arg Trp Leu
100 105 110
Ala Asp Asp Tyr Asp Val Trp Gly Arg Gly Thr Gln Val Ala Val Ser
115 120 125
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
130 135 140
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Thr Gly Gly
145 150 155 160
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ser Ser Gly Ser Ile Ala Gly Phe Glu
165 170 175
Thr Val Thr Trp Ser Arg Gln Ala Pro Gly Lys Ser Leu Gln Trp Val
180 185 190
Ala Ser Met Glu Thr Thr Lys Thr Asn Asn Glu Ile Tyr Ser Asp Ser
195 200 205
Val Lys Gly Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val
210 215 220
Tyr Leu Gln Met Glu Thr Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Gly Val
225 230 235 240
Tyr Phe Cys Lys Gly Pro Glu Leu Arg Gly Gln Gly Ile Gln Val Thr
245 250 255
Val Ser Ser
<210> 63
<211> 759
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5D-E3异型二聚体（5D-E3 heterodimer）
<400> 63
caggtgcagc tcgtggagtc aggtggaggc ttggtgcagc ctggggggtc tctgagactc 60
tcctgtgaag cctctggatt cactttggat tattatggta taggctggtt ccgccagccc 120
ccagggaagg agcgcgaggc ggtctcatat attagtgcca gtgcccgtac gatattgtat 180
gcagattccg tgaagggccg atttaccatc tccagagaca atgccaagaa cgcggtgtat 240
ctacaaatga acagcctgaa acgtgaggac acggctgtct attactgtgc gaggcggcga 300
ttctccgcgt ctagtgttaa tagatggctt gccgacgact atgacgtctg gggtcggggg 360
acccaggtcg cggtgtcctc aggcggtggt ggctctggtg gcggcggttc cggtggcggt 420
ggcagccagg tgcagctcgt ggagtcgggc ggaggcttgg tgcagactgg ggggtctctg 480
agactctcct gtgcatcctc tggaagtatc gccggtttcg aaaccgtgac ctggtcccgc 540
caggctcctg gaaagtcgct ccagtgggtc gcatcgatga ctaaaactaa taacgagatc 600
tattcagact ccgtgaaggg ccgattcatc atctccagag acaacgccaa gaatacggtg 660
tatctacaaa tgaacagcct gaaacctgag gacacaggcg tctatttttg taaaggtcct 720
gagttgaggg gccaggggat ccaggtcacc gtctcctcg 759
<210> 64
<211> 272
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AH3-AA6异型二聚体（AH3-AA6 heterodimer）
<400> 64
Gln Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
1 5 10 15
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Ser Ser
20 25 30
Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val Ser
35 40 45
Cys Ile Ser Ser Ser Gly Asp Ser Thr Lys Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Thr Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Glu Thr Asn Ser Leu Lys Pro Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Ala Phe Arg Ala Thr Met Glu Thr Cys Gly Val Phe Pro Leu
100 105 110
Ser Pro Tyr Gly Lys Asp Asp Trp Gly Lys Gly Thr Leu Val Thr Val
115 120 125
Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
130 135 140
Ser Gln Leu Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
145 150 155 160
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp
165 170 175
Tyr Val Met Glu Thr Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro
180 185 190
Glu Trp Ile Ala Thr Ile Asn Thr Asp Gly Ser Thr Met Glu Thr Arg
195 200 205
Asp Asp Ser Thr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys
210 215 220
Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Glu Thr Thr Ser Leu Lys Pro Glu Asp
225 230 235 240
Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Arg Val Ile Ser Ala Ser Ala
245 250 255
Ile Arg Gly Ala Val Arg Gly Pro Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
260 265 270
<210> 65
<211> 786
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AH3-AA6异型二聚体（AH3-AA6 heterodimer）
<400> 65
caggtgcagc tcgtggagac ggggggcttg gtgcagcctg gggggtctct gagactctcc 60
tgtgcagcct ctggattcac tttggattat tcgtccatag gctggttccg ccaggcccca 120
gggaaggagc gtgagggggt ctcatgtatt agtagtagtg gtgatagcac aaagtatgca 180
gactccgtga agggccgatt caccacctcc agagacaacg ccaagaacac ggtgtatctg 240
caaatgaaca gcctgaaacc tgacgacaca gccgtttatt actgtgcagc ttttagggcg 300
actatgtgcg gcgtgttccc ccttagcccc tacggcaagg acgactgggg caaagggacc 360
ctggtcaccg tctcctcagg cggtggtggc tctggtggcg gcggttccgg tggcggtggc 420
agccagttgc agctcgtgga gacaggggga ggcttggtgc agcctggggg gtctctgaga 480
ctctcctgtg cagcctctgg attcacgttc agtgactacg tcatgacctg ggtccgccag 540
gctccaggaa aggggcccga atggatcgca actattaata cggacggtag cacgatgcgt 600
gatgactcca caaaaggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa cacactgtat 660
ctgcaaatga ccagcctgaa accggaggac acggccctgt attactgtgc gagaggccgc 720
gtgatctccg cctccgcgat aagaggggcg gttaggggcc cggggaccca ggtcaccgtc 780
tcctca 786
<210> 66
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> six-histidine标签（six-histidine tag）
<400> 66
His His His His His His
1 5
<210> 67
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 用于蛋白质纯化的E标签（E-tag for protein purification）
<400> 67
Gly Ala Pro Val Pro Tyr Pro Asp Pro Leu Glu Pro Arg
1 5 10
<210> 68
<211> 6985
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 质粒pD1214-FAKS-His-hABAB-D7（Plasmid pD1214-FAKS-His-hABAB-D7）
<400> 68
tcagaattgg ttaattggtt gtaacactga cccctatttg tttatttttc taaatacatt 60
caaatatgta tccgctcatg agacaataac cctgataaat gcttcaataa tattgaaaaa 120
ggaagaatat gagtattcaa catttccgtg tcgcccttat tccctttttt gcggcatttt 180
gccttcctgt ttttgctcac ccagaaacgc tggtgaaagt aaaagatgct gaagatcagt 240
tgggtgcacg agtgggttac atcgaactgg atctcaacag cggtaagatc cttgagagtt 300
ttcgccccga agaacgtttt ccaatgatga gcacttttaa agttctgcta tgtggcgcgg 360
tattatcccg tattgacgcc gggcaagagc aactcggtcg ccgcatacac tattctcaga 420
atgacttggt tgagtactca ccagtcacag aaaagcatct tacggatggc atgacagtaa 480
gagaattatg cagtgctgcc ataaccatga gtgataacac tgcggccaac ttacttctga 540
caacgatcgg aggaccgaag gagctaaccg cttttttgca caacatgggg gatcatgtaa 600
ctcgccttga tcgttgggaa ccggagctga atgaagccat accaaacgac gagcgtgaca 660
ccacgatgcc tgtagcgatg gcaacaacgt tgcgcaaact attaactggc gaactactta 720
ctctagcttc ccggcaacaa ttaatagact ggatggaggc ggataaagtt gcaggaccac 780
ttctgcgctc ggcccttccg gctggctggt ttattgctga taaatccgga gccggtgagc 840
gtggttctcg cggtatcatc gcagcgctgg ggccagatgg taagccctcc cgtatcgtag 900
ttatctacac gacggggagt caggcaacta tggatgaacg aaatagacag atcgctgaga 960
taggtgcctc actgattaag cattggtaac tcatgaccaa aatcccttaa cgtgagttac 1020
gcgcgcgtcg ttccactgag cgtcagaccc cgtagaaaag atcaaaggat cttcttgaga 1080
tccttttttt ctgcgcgtaa tctgctgctt gcaaacaaaa aaaccaccgc taccagcggt 1140
ggtttgtttg ccggatcaag agctaccaac tctttttccg aaggtaactg gcttcagcag 1200
agcgcagata ccaaatactg ttcttctagt gtagccgtag ttagcccacc acttcaagaa 1260
ctctgtagca ccgcctacat acctcgctct gctaatcctg ttaccagtgg ctgctgccag 1320
tggcgataag tcgtgtctta ccgggttgga ctcaagacga tagttaccgg ataaggcgca 1380
gcggtcgggc tgaacggggg gttcgtgcac acagcccagc ttggagcgaa cgacctacac 1440
cgaactgaga tacctacagc gtgagctatg agaaagcgcc acgcttcccg aagggagaaa 1500
ggcggacagg tatccggtaa gcggcagggt cggaacagga gagcgcacga gggagcttcc 1560
agggggaaac gcctggtatc tttatagtcc tgtcgggttt cgccacctct gacttgagcg 1620
tcgatttttg tgatgctcgt caggggggcg gagcctatgg aaaaacgcca gcaacgcggc 1680
ctttttacgg ttcctggcct tttgctggcc ttttgctcac atgttctttc ctgcgttatc 1740
ccctgattct gtggataacc gtattaccgc ctttgagtga gctgataccg ctcggggtcg 1800
tgcaggtata gcttcaaaat gtttctactc cttttttact cttccagatt ttctcggact 1860
ccgcgcatcg ccgtaccact tcaaaacacc caagcacagc atactaaatt tcccctcttt 1920
cttcctctag ggtgtcgtta attacccgta ctaaaggttt ggaaaagaaa aaagtgaccg 1980
cctcgtttct ttttcttcgt cgaaaaaggc aataaaaatt tttatcacgt ttctttttct 2040
tgaaaatttt tttttttgat ttttttctct ttcgatgacc tcccattgat atttaagtta 2100
ataaacggac ttcaatttct caagtttcag tttcattttt cttgttctat tacaactttt 2160
tttacttctt gctcattaga aagaaagcat agcaatctaa tctaagttta aatgagattc 2220
ccatctattt tcaccgctgt cttgttcgct gcctcctctg cattggctgc ccctgttaac 2280
actaccactg aagacgagac tgctcaaatt ccagctgaag cagttatcgg ttactctgac 2340
cttgagggtg atttcgacgt cgctgttttg cctttctcta actccactaa caacggtttg 2400
ttgttcatta acaccactat cgcttccatt gctgctaagg aagagggtgt ctctctcgag 2460
aaaagagagg ccgaagctat gcatcatcat catcatcatc aggtacagct ggtggagacg 2520
gggggagggc tggtacaacc aggcgggtca ctgaggcttt cctgtgccgc atctgggttc 2580
acactggatt attcgtccat agggtggttt cggcaggctc ctggcaaaga gcgtgagggg 2640
gtctcatgta ttagtagtag tggtgatagc acaaagtacg ccgattccgt aaagggccgg 2700
tttacaacct ccagggataa tgctaagaac accgtatatc tccagatgaa ctctctgaag 2760
cccgacgata cggccgtata ttactgtgcg gctttcaggg cgactatgtg cggcgtgttc 2820
cctctgagcc cttacggcaa ggacgactgg ggcaagggga ccctggtgac cgtatcctca 2880
ggcggtggag ggtctggtgg gggaggctca gggggtggag gcagccaggt gcaactggtt 2940
gaatctgggg gaggcttggt acaacctggg ggatccctga gactctcttg cgaggcctcc 3000
ggattcacct tggactacta tggcatcggc tggttccgcc agcccccagg gaaggagcgg 3060
gaggccgttt catacattag tgccagtgcc cggaccatac tgtacgcaga ctctgtgaag 3120
ggacgcttta ccatctctag ggacaatgcc aaaaatgctg tgtacctgca aatgaacagc 3180
ctcaagcggg aggataccgc agtgtactac tgcgcgagac ggcgcttctc cgcttctagc 3240
gtgaatagat ggctggccga cgactacgac gtgtggggac ggggcacaca ggtggctgtg 3300
tcttccggtg gcggaagcgg agggggcagc gggggtggga gcggtggggg cagccaactg 3360
cagctggtag agacaggggg cggcttagtt cagcctggag ggtctctcag actgtcatgc 3420
gctgcctctg gctttacctt cagtgactac gtgatgacat gggtccgcca agctccaggg 3480
aaggggcctg agtggatcgc tactattaat acagatggca gcacaatgcg ggacgactcc 3540
acaaaggggc ggttcaccat ttccagagac aacgccaaga atactctgta ccttcagatg 3600
accagtctga aacccgagga cactgctctg tactattgtg caagaggccg ggtgatctct 3660
gcttccgcta tcagaggcgc agtaaggggc cctggaacac aggtaaccgt ttcatccggg 3720
ggaggcggtt caggcggtgg gggatctggc gggggtggat cccaagttca gctggtcgaa 3780
tccgggggcg gactggtcca gacagggggc tccctgaggc tctcctgtgc atcttccgga 3840
agcatcgccg gcttcgagac cgtgacctgg tctcgccagg ctcccgggaa gtctctgcag 3900
tgggtcgctt ccatgactaa gactaacaac gagatctact ctgactcagt gaaaggccgc 3960
ttcatcattt ctagagataa cgctaaaaac acagtgtatc tgcagatgaa tagtctcaaa 4020
cctgaagaca caggcgtgta tttctgtaag ggtcctgagc tgaggggcca gggcatccag 4080
gtaacagtct cgagtgctcc tacaaaagcc aaacggagag tggtccagag agagaagacc 4140
taataaggtt gaatcatgta attagttatg tcacgcttac attcacgccc tccccccaca 4200
tccgctctaa ccgaaaagga aggagttaga caacctgaag tctaggtccc tatttatttt 4260
tttatagtta tgttagtatt aagaacgtta tttatatttc aaatttttct tttttttctg 4320
tacagacgcg tgtacgcatg taacattata ctgaaaacct tgcttgagaa ggttttggga 4380
cgctcgaagg ctttaatttg cggcccctca cctgcacgca aaaagctttt caattcaatt 4440
catcattttt tttttattct tttttttgat ttcggtttct ttgaaatttt tttgattcgg 4500
taatctccga acagaaggaa gaacgaagga aggagcacag acttagattg gtatatatac 4560
gcatatgtag tgttgaagaa acatgaaatt gcccagtatt cttaacccaa ctgcacagaa 4620
caaaaaccag caggaaacga agataaatca tgtcgaaagc tacatataag gaacgtgctg 4680
ctactcatcc tagtcctgtt gctgccaagc tatttaatat catgcacgaa aagcaaacaa 4740
acttgtgtgc ttcattggat gttcgtacca ccaaggaatt actggagtta gttgaagcat 4800
taggtcccaa aatttgttta ctaaaaacac atgtggatat cttgactgat ttttccatgg 4860
agggcacagt taagccgcta aaggcattat ccgccaagta caatttttta ctcttcgaag 4920
atagaaaatt tgctgacatt ggtaatacag tcaaattgca gtactctgcg ggtgtataca 4980
gaatagcaga atgggcagac attacgaatg cacacggtgt ggtgggccca ggtattgtta 5040
gcggtttgaa gcaggcggca gaagaagtaa caaaggaacc tagaggcctt ttgatgttag 5100
cagaattgtc atgcaagggc tccctatcta ctggagaata tactaagggt actgttgaca 5160
ttgcgaaaag cgacaaagat tttgttatcg gctttattgc tcaaagagac atgggtggaa 5220
gagatgaagg ttacgattgg ttgattatga cacccggtgt gggtttagat gacaagggag 5280
atgcattggg tcaacagtat agaaccgtgg atgatgttgt ctctacagga tctgacatta 5340
ttattgttgg aagaggacta tttgcaaagg gaagggatgc taaggtagag ggtgaacgtt 5400
acagaaaagc aggctgggaa gcatatttga gaagatgcgg ccagcaaaac taaaaaactg 5460
tattataagt aaatgcatgt atactaaact cacaaattag agcttcaatt taattatatc 5520
agttattacc cacgctatga tccaatatca aaggaaatga tagcattgaa ggatgagact 5580
aatccaattg aggagtggca gcatatagaa cagctaaagg gtagtgctga aggaagcata 5640
cgataccccg catggaatgg gataatatca caggaggtac tagactacct ttcatcctac 5700
ataaatagac gcatataagt acgcatttaa gcataaacac gcactatgcc gttcttctca 5760
tgtatatata tatacaggca acacgcagat ataggtgcga cgtgaacagt gagctgtatg 5820
tgcgcagctc gcgttgcatt ttcggaagcg ctcgttttcg gaaacgcttt gaagttccta 5880
ttccgaagtt cctattctct agaaagtata ggaacttcag agcgcttttg aaaaccaaaa 5940
gcgctctgaa gtcgcacttt caaaaaacca aaaacgcacc ggactgtaac gagctactaa 6000
aatattgcga ataccgcttc cacaaacatt gctcaaaagt atctctttgc tatatatctc 6060
tgtgctatat ccctatataa cctacccatc cacctttcgc tccttgaact tgcatctaaa 6120
ctcgacctct acatttttta tgtttatctc tagtattact ctttagacaa aaaaattgta 6180
gtaagaacta ttcatagagt gaatcgaaaa caatacgaaa atgtaaacat ttcctatacg 6240
tagtatatag agacaaaata gaagaaaccg ttcataattt tctgaccaat gaagaatcat 6300
caacgctatc actttctgtt cacaaagtat gcgcaatcca catcggtata gaatataatc 6360
ggggatgcct ttatcttgaa aaaatgcacc cgcagcttcg ctagtaatca gtaaacgcgg 6420
gaagtggagt caggcttttt ttatggaaga gaaaatagac accaaagtag ccttcttcta 6480
accttaacgg acctacagtg caaaaagtta tcaagagact gcattataga gcgcacaaag 6540
gagaaaaaaa gtaatctaag atgctttgtt agaaaaatag cgctctcggg atgcattttt 6600
gtagaacaaa aaagaagtat agattctttg ttggtaaaat agcgctctcg cgttgcattt 6660
ctgttctgta aaaatgcagc tcagattctt tgtttgaaaa attagcgctc tcgcgttgca 6720
tttttgtttt acaaaaatga agcacagatt cttcgttggt aaaatagcgc tttcgcgttg 6780
catttctgtt ctgtaaaaat gcagctcaga ttctttgttt gaaaaattag cgctctcgcg 6840
ttgcattttt gttctacaaa atgaagcaca gatgcttcgt tcaggtggca cttttcgggg 6900
aaatgtgcgc ggaaccccta tttgtttatt tttctaaata cattcaaata tgtatccgct 6960
catgagacaa taaccctgat attgg 6985
<210> 69
<211> 6916
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 质粒pD1214-FAKS-hABAB（Plasmid pD1214-FAKS-hABAB）
<400> 69
tcagaattgg ttaattggtt gtaacactga cccctatttg tttatttttc taaatacatt 60
caaatatgta tccgctcatg agacaataac cctgataaat gcttcaataa tattgaaaaa 120
ggaagaatat gagtattcaa catttccgtg tcgcccttat tccctttttt gcggcatttt 180
gccttcctgt ttttgctcac ccagaaacgc tggtgaaagt aaaagatgct gaagatcagt 240
tgggtgcacg agtgggttac atcgaactgg atctcaacag cggtaagatc cttgagagtt 300
ttcgccccga agaacgtttt ccaatgatga gcacttttaa agttctgcta tgtggcgcgg 360
tattatcccg tattgacgcc gggcaagagc aactcggtcg ccgcatacac tattctcaga 420
atgacttggt tgagtactca ccagtcacag aaaagcatct tacggatggc atgacagtaa 480
gagaattatg cagtgctgcc ataaccatga gtgataacac tgcggccaac ttacttctga 540
caacgatcgg aggaccgaag gagctaaccg cttttttgca caacatgggg gatcatgtaa 600
ctcgccttga tcgttgggaa ccggagctga atgaagccat accaaacgac gagcgtgaca 660
ccacgatgcc tgtagcgatg gcaacaacgt tgcgcaaact attaactggc gaactactta 720
ctctagcttc ccggcaacaa ttaatagact ggatggaggc ggataaagtt gcaggaccac 780
ttctgcgctc ggcccttccg gctggctggt ttattgctga taaatccgga gccggtgagc 840
gtggttctcg cggtatcatc gcagcgctgg ggccagatgg taagccctcc cgtatcgtag 900
ttatctacac gacggggagt caggcaacta tggatgaacg aaatagacag atcgctgaga 960
taggtgcctc actgattaag cattggtaac tcatgaccaa aatcccttaa cgtgagttac 1020
gcgcgcgtcg ttccactgag cgtcagaccc cgtagaaaag atcaaaggat cttcttgaga 1080
tccttttttt ctgcgcgtaa tctgctgctt gcaaacaaaa aaaccaccgc taccagcggt 1140
ggtttgtttg ccggatcaag agctaccaac tctttttccg aaggtaactg gcttcagcag 1200
agcgcagata ccaaatactg ttcttctagt gtagccgtag ttagcccacc acttcaagaa 1260
ctctgtagca ccgcctacat acctcgctct gctaatcctg ttaccagtgg ctgctgccag 1320
tggcgataag tcgtgtctta ccgggttgga ctcaagacga tagttaccgg ataaggcgca 1380
gcggtcgggc tgaacggggg gttcgtgcac acagcccagc ttggagcgaa cgacctacac 1440
cgaactgaga tacctacagc gtgagctatg agaaagcgcc acgcttcccg aagggagaaa 1500
ggcggacagg tatccggtaa gcggcagggt cggaacagga gagcgcacga gggagcttcc 1560
agggggaaac gcctggtatc tttatagtcc tgtcgggttt cgccacctct gacttgagcg 1620
tcgatttttg tgatgctcgt caggggggcg gagcctatgg aaaaacgcca gcaacgcggc 1680
ctttttacgg ttcctggcct tttgctggcc ttttgctcac atgttctttc ctgcgttatc 1740
ccctgattct gtggataacc gtattaccgc ctttgagtga gctgataccg ctcggggtcg 1800
tgcaggtata gcttcaaaat gtttctactc cttttttact cttccagatt ttctcggact 1860
ccgcgcatcg ccgtaccact tcaaaacacc caagcacagc atactaaatt tcccctcttt 1920
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cctcgtttct ttttcttcgt cgaaaaaggc aataaaaatt tttatcacgt ttctttttct 2040
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<211> 6833
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 质粒pD1214-AKS-hABAB（Plasmid pD1214-AKS-hABAB）
<400> 70
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<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 质粒pD1214-AK-hABAB（Plasmid pD1214-AK-hABAB）
<400> 71
ggttaaatca tgtaattagt tatgtcacgc ttacattcac gccctccccc cacatccgct 60
ctaaccgaaa aggaaggagt tagacaacct gaagtctagg tccctattta tttttttata 120
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<211> 6707
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 质粒pD1214-AT-hABAB（Plasmid pD1214-AT-hABAB）
<400> 72
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<220>
<223> 质粒pD1214-GA-hABAB（Plasmid pD1214-GA-hABAB）
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 质粒pD1214-IVS-hABAB（Plasmid pD1214-IVS-hABAB）
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<223> 质粒pD1214-KP-hABAB（Plasmid pD1214-KP-hABAB）
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<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
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<223> 质粒pCEV-G4-Km-TEF-AT-hABAB*（Plasmid pCEV-G4-Km-TEF-AT-hABAB*）
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agtcagaggt ggcgaaaccc gacaggacta taaagatacc aggcgtttcc ccctggaagc 2220
tccctcgtgc gctctcctgt tccgaccctg ccgcttaccg gatacctgtc cgcctttctc 2280
ccttcgggaa gcgtggcgct ttctcatagc tcacgctgta ggtatctcag ttcggtgtag 2340
gtcgttcgct ccaagctggg ctgtgtgcac gaaccccccg ttcagcccga ccgctgcgcc 2400
ttatccggta actatcgtct tgagtccaac ccggtaagac acgacttatc gccactggca 2460
gcagccactg gtaacaggat tagcagagcg aggtatgtag gcggtgctac agagttcttg 2520
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<210> 84
<211> 8190
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 质粒pCEV-G4-Km-TEF-AT-yABAB（Plasmid pCEV-G4-Km-TEF-AT-yABAB）
<400> 84
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<211> 6861
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 质粒pBIS-GALkFLP-URA3（Plasmid pBIS-GALkFLP-URA3）
<400> 87
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<400> 88
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<213> 人工序列（Artificial Sequence）
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<223> 质粒pCEV-URA3-TEF-cMyc（Plasmid pCEV-URA3-TEF-cMyc）
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<211> 7208
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 质粒pCEV-G4-Km-TEF-AT-yABAB hAA6T83N-tagless（Plasmid pCEV-G4-Km-TEF-AT-yABAB hAA6T83N-tagless）
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<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
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<223> 质粒pCRI-Sb-delta1（Plasmid pCRI-Sb-delta1）
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tcgcgcgaac ccaactgcac agaacaaaaa cctgcaggaa acgaagataa atcatgtcga 60
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aaagataaat gatcgggttt tagagctatg ctgttttgaa tggtcccaaa actactagta 1260
tattatcata tagttttaga gctatgctgt tttgaatggt cccaaaactt tttttgtttt 1320
ttatgtctgc atagcttcaa aatgtttcta ctcctttttt actcttccag attttctcgg 1380
actccgcgca tcgccgtacc acttcaaaac acccaagcac agcatactaa atttcccctc 1440
tttcttcctc tagggtgtcg ttaattaccc gtactaaagg tttggaaaag aaaaaagagg 1500
ccgcctcgtt tctttttctt cgtcgaaaaa ggcaataaaa atttttatca cgtttctttt 1560
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tcaataggct tagatatcgg cacaaatagc gtcggatggg cggtgatcac tgatgaatat 1860
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cggacagctc gtagaaggta tacacgtcgg aagaatcgta tttgttatct acaggagatt 2040
ttttcaaatg agatggcgaa agtagatgat agtttctttc atcgacttga agagtctttt 2100
ttggtggaag aagacaagaa gcatgaacgt catcctattt ttggaaatat agtagatgaa 2160
gttgcttatc atgagaaata tccaactatc tatcatctgc gaaaaaaatt ggtagattct 2220
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ggtcattttt tgattgaggg agatttaaat cctgataata gtgatgtgga caaactattt 2340
atccagttgg tacaaaccta caatcaatta tttgaagaaa accctattaa cgcaagtgga 2400
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ctgctcctct gaatcgagtc cctcgatatt tctcatacta gttctagaga tctgccaatt 6240
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aaactatctg aattacgaat tacatatatt ggtcataaaa atcaatcaat catcgtgtgt 6360
tttatatgtc tcttatctaa gtataagaat atccatagtt aatattcact tacgctacct 6420
tttaacctgt aatcattgtc aacaggatat gttaacgacc cacattgata aacgctagta 6480
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tcgtttcgat tgttttacgt ttgaggcctc gtggcgcaca tggtacgctg tggtgctcgc 6600
ggctgggaac gaaactctgg gagctgcgat tggcaggaac cattcaaaac agcatagcaa 6660
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gctgcggcga gcggtatcag ctcactcaaa ggcggtaata cggttatcca cagaatcagg 7140
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atctcaagaa gatcctttga tcttttctac ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc 7860
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ttaaaaatga agttttaaat caatctaaag tatatatgag taaacttggt ctgacagtta 7980
ccaatgctta atcagtgagg cacctatctc agcgatctgt ctatttcgtt catccatagt 8040
tgcctgactc cccgtcgtgt agataactac gatacgggag ggcttaccat ctggccccag 8100
tgctgcaatg ataccgcggc tcccacgctc accggctcca gatttatcag caataaacca 8160
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tattaattgt tgccgggaag ctagagtaag tagttcgcca gttaatagtt tgcgcaacgt 8280
tgttgccatt gctacaggca tcgtggtgtc acgctcgtcg tttggtatgg cttcattcag 8340
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tagctccttc ggtcctccga tcgttgtcag aagtaagttg gccgcagtgt tatcactcat 8460
ggttatggca gcactgcata attctcttac tgtcatgcca tccgtaagat gcttttctgt 8520
gactggtgag tactcaacca agtcattctg agaatagtgt atgcggcgac cgagttgctc 8580
ttgcccggcg tcaatacggg ataataccgc gccacatagc agaactttaa aagtgctcat 8640
cattggaaaa cgttcttcgg ggcgaaaact ctcaaggatc ttaccgctgt tgagatccag 8700
ttcgatgtaa cccactcgtg cacccaactg atcttcagca tcttttactt tcaccagcgt 8760
ttctgggtga gcaaaaacag gaaggcaaaa tgccgcaaaa aagggaataa gggcgacacg 8820
gaaatgttga atactcatac tcttcctttt tcaatattat tgaagcattt atcagggtta 8880
ttgtctcatg agcggataca tatttgaatg tatttagaaa aataaacaaa taggggttcc 8940
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aacagaaatg caacgcgaaa gcgctatttt accaacgaag aatctgtgct tcatttttgt 9120
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tttgttctac aaaaatgcat cccgagagcg ctatttttct aacaaagcat cttagattac 9300
tttttttctc ctttgtgcgc tctataatgc agtctcttga taactttttg cactgtaggt 9360
ccgttaaggt tagaagaagg ctactttggt gtctattttc tcttccataa aaaaagcctg 9420
actccacttc ccgcgtttac tgattactag cgaagctgcg ggtgcatttt ttcaagataa 9480
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tagttcttac tacaattttt ttgtctaaag agtaatacta gagataaaca taaaaaatgt 9720
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atatagcaca gagatatata gcaaagagat acttttgagc aatgtttgtg gaagcggtat 9840
tcgcaatatt ttagtagctc gttacagtcc ggtgcgtttt tggttttttg aaagtgcgtc 9900
ttcagagcgc ttttggtttt caaaagcgct ctgaagttcc tatactttct agagaatagg 9960
aacttcggaa taggaacttc aaagcgtttc cgaaaacgag cgcttccgaa aatgcaacgc 10020
gagctgcgca catacagctc actgttcacg tcgcacctat atctgcgtgt tgcctgtata 10080
tatatataca tgagaagaac ggcatagtgc gtgtttatgc ttaaatgcgt acttatatgc 10140
gtctatttat gtaggatgaa aggtagtcta gtacctcctg tgatattatc ccattccatg 10200
cggggtatcg tatgcttcct tcagcactac cctttagctg ttctatatgc tgccactcct 10260
caattggatt agtctcatcc ttcaatgcta tcatttcctt tgatattgga tcatctaaga 10320
aaccattatt atcatgacat taacctataa aaataggcgt atcacgaggc cctttcgtc 10379
<210> 92
<211> 10379
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 质粒pCRI-Sb-delta2（Plasmid pCRI-Sb-delta2）
<400> 92
tcgcgcgaac ccaactgcac agaacaaaaa cctgcaggaa acgaagataa atcatgtcga 60
aagctacata taaggaacgt gctgctactc atcctagtcc tgttgctgcc aagctattta 120
atatcatgca cgaaaagcaa acaaacttgt gtgcttcatt ggatgttcgt accaccaagg 180
aattactgga gttagttgaa gcattaggtc ccaaaatttg tttactaaaa acacatgtgg 240
atatcttgac tgatttttcc atggagggca cagttaagcc gctaaaggca ttatccgcca 300
agtacaattt tttactcttc gaagacagaa aatttgctga cattggtaat acagtcaaat 360
tgcagtactc tgcgggtgta tacagaatag cagaatgggc agacattacg aatgcacacg 420
gtgtggtggg cccaggtatt gttagcggtt tgaagcaggc ggcagaagaa gtaacaaagg 480
aacctagagg ccttttgatg ttagcagaat tgtcatgcaa gggctcccta tctactggag 540
aatatactaa gggtactgtt gacattgcga agagcgacaa agattttgtt atcggcttta 600
ttgctcaaag agacatgggt ggaagagatg aaggttacga ttggttgatt atgacacccg 660
gtgtgggttt agatgacaag ggagacgcat tgggtcaaca gtatagaacc gtggatgatg 720
tcgtttctac aggatctgac attattattg ttggaagagg actatttgca aagggaaggg 780
atgctaaggt agagggtgaa cgttacagaa aagcaggctg ggaagcatat ttgagaagat 840
gcggccagca aaactaaaaa actgtattat aagtaaatgc atgtatacta aactcacaaa 900
ttagagcttc aatttaatta tatcagttat taccctgtgc tcgagtcttt gaaaagataa 960
tgtatgatta tgctttcact catatttata cagaaacttg atgttttctt tcgagtatat 1020
acaaggtgat tacatgtacg tttgaagtac aactctagat tttgtagtgc cctcttgggc 1080
tagcggtaaa ggtgcgcatt ttttcacacc ctacaatgtt ctgttcaaaa gattttggtc 1140
aaacgctgta gaagtgaaag ttggtgcgca tgtttcggcg ttcgaaactt ctccgcagtg 1200
aaagataaat gatcgggttt tagagctatg ctgttttgaa tggtcccaaa actatggatt 1260
cctaaatcct cggttttaga gctatgctgt tttgaatggt cccaaaactt tttttgtttt 1320
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tcttgaaaat tttttttttt gatttttttc tctttcgatg acctcccatt gatatttaag 1620
ttaataaacg gtcttcaatt tctcaagttt cagtttcatt tttcttgttc tattacaact 1680
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tcaataggct tagatatcgg cacaaatagc gtcggatggg cggtgatcac tgatgaatat 1860
aaggttccgt ctaaaaagtt caaggttctg ggaaatacag accgccacag tatcaaaaaa 1920
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cggacagctc gtagaaggta tacacgtcgg aagaatcgta tttgttatct acaggagatt 2040
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ttgggtttga cccctaattt taaatcaaat tttgatttgg cagaagatgc taaattacag 2580
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aaggtcaaat atgttactga aggaatgcga aaaccagcat ttctttcagg tgaacagaag 3420
aaagccattg ttgatttact cttcaaaaca aatcgaaaag taaccgttaa gcaattaaaa 3480
gaagattatt tcaaaaaaat agaatgtttt gatagtgttg aaatttcagg agttgaagat 3540
agatttaatg cttcattagg tacctaccat gatttgctaa aaattattaa agataaagat 3600
tttttggata atgaagaaaa tgaagatatc ttagaggata ttgttttaac attgacctta 3660
tttgaagata gggagatgat tgaggaaaga cttaaaacat atgctcacct ctttgatgat 3720
aaggtgatga aacagcttaa acgtcgccgt tatactggtt ggggacgttt gtctcgaaaa 3780
ttgattaatg gtattaggga taagcaatct ggcaaaacaa tattagattt tttgaaatca 3840
gatggttttg ccaatcgcaa ttttatgcag ctgatccatg atgatagttt gacatttaaa 3900
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caagaattag atattaatcg tttaagtgat tatgatgtcg atcacattgt tccacaaagt 4320
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aaatcggata acgttccaag tgaagaagta gtcaaaaaga tgaaaaacta ttggagacaa 4440
cttctaaacg ccaagttaat cactcaacgt aagtttgata atttaacgaa agctgaacgt 4500
ggaggtttga gtgaacttga taaagctggt tttatcaaac gccaattggt tgaaactcgc 4560
caaatcacta agcatgtggc acaaattttg gatagtcgca tgaatactaa atacgatgaa 4620
aatgataaac ttattcgaga ggttaaagtg attaccttaa aatctaaatt agtttctgac 4680
ttccgaaaag atttccaatt ctataaagta cgtgagatta acaattacca tcatgcccat 4740
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tcggagtttg tctatggtga ttataaagtt tatgatgttc gtaaaatgat tgctaagtct 4860
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ttcaaaacag aaattacact tgcaaatgga gagattcgca aacgccctct aatcgaaact 4980
aatggggaaa ctggagaaat tgtctgggat aaagggcgag attttgccac agtgcgcaaa 5040
gtattgtcca tgccccaagt caatattgtc aagaaaacag aagtacagac aggcggattc 5100
tccaaggagt caattttacc aaaaagaaat tcggacaagc ttattgctcg taaaaaagac 5160
tgggatccaa aaaaatatgg tggttttgat agtccaacgg tagcttattc agtcctagtg 5220
gttgctaagg tggaaaaagg gaaatcgaag aagttaaaat ccgttaaaga gttactaggg 5280
atcacaatta tggaaagaag ttcctttgaa aaaaatccga ttgacttttt agaagctaaa 5340
ggatataagg aagttaaaaa agacttaatc attaaactac ctaaatatag tctttttgag 5400
ttagaaaacg gtcgtaaacg gatgctggct agtgccggag aattacaaaa aggaaatgag 5460
ctggctctgc caagcaaata tgtgaatttt ttatatttag ctagtcatta tgaaaagttg 5520
aagggtagtc cagaagataa cgaacaaaaa caattgtttg tggagcagca taagcattat 5580
ttagatgaga ttattgagca aatcagtgaa ttttctaagc gtgttatttt agcagatgcc 5640
aatttagata aagttcttag tgcatataac aaacatagag acaaaccaat acgtgaacaa 5700
gcagaaaata ttattcattt atttacgttg acgaatcttg gagctcccgc tgcttttaaa 5760
tattttgata caacaattga tcgtaaacga tatacgtcta caaaagaagt tttagatgcc 5820
actcttatcc atcaatccat cactggtctt tatgaaacac gcattgattt gagtcagcta 5880
ggaggtgacc ctccaaaaaa gaagagaaag gtctgagcgg atctcttatg tctttacgat 5940
ttatagtttt cattatcaag tatgcctata ttagtatata gcatctttag atgacagtgt 6000
tcgaagtttc acgaataaaa gataatattc tactttttgc tcccaccgcg tttgctagca 6060
cgagtgaaca ccatccctcg cctgtgagtt gtacccattc ctctaaactg tagacatggt 6120
agcttcagca gtgttcgtta tgtacggcat cctccaacaa acagtcggtt atagtttgtc 6180
ctgctcctct gaatcgagtc cctcgatatt tctcatacta gttctagaga tctgccaatt 6240
gaacataaca tggtagttac atatactagt aatatggttc ggcacacatt aaaagtataa 6300
aaactatctg aattacgaat tacatatatt ggtcataaaa atcaatcaat catcgtgtgt 6360
tttatatgtc tcttatctaa gtataagaat atccatagtt aatattcact tacgctacct 6420
tttaacctgt aatcattgtc aacaggatat gttaacgacc cacattgata aacgctagta 6480
tttctttttc ctcttcttat tggccggctg tctctatact cccctatagt ctgtttcttt 6540
tcgtttcgat tgttttacgt ttgaggcctc gtggcgcaca tggtacgctg tggtgctcgc 6600
ggctgggaac gaaactctgg gagctgcgat tggcaggaac cattcaaaac agcatagcaa 6660
gttaaaataa ggctagtccg ttatcaactt gaaaaagtgg caccgagtcg gtgctttttt 6720
tccatatcca acttccaatt taatctttct tttttaattt tcacttattt gcgatacaga 6780
aagaccctgc aggcatgcaa gcttggcgta atcatggtca tagctgtttc ctgtgtgaaa 6840
ttgttatccg ctcacaattc cacacaacat acgagccgga agcataaagt gtaaagcctg 6900
gggtgcctaa tgagtgagct aactcacatt aattgcgttg cgctcactgc ccgctttcca 6960
gtcgggaaac ctgtcgtgcc agctgcatta atgaatcggc caacgcgcgg ggagaggcgg 7020
tttgcgtatt gggcgctctt ccgcttcctc gctcactgac tcgctgcgct cggtcgttcg 7080
gctgcggcga gcggtatcag ctcactcaaa ggcggtaata cggttatcca cagaatcagg 7140
ggataacgca ggaaagaaca tgtgagcaaa aggccagcaa aaggccagga accgtaaaaa 7200
ggccgcgttg ctggcgtttt tccataggct ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg 7260
acgctcaagt cagaggtggc gaaacccgac aggactataa agataccagg cgtttccccc 7320
tggaagctcc ctcgtgcgct ctcctgttcc gaccctgccg cttaccggat acctgtccgc 7380
ctttctccct tcgggaagcg tggcgctttc tcatagctca cgctgtaggt atctcagttc 7440
ggtgtaggtc gttcgctcca agctgggctg tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg 7500
ctgcgcctta tccggtaact atcgtcttga gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc 7560
actggcagca gccactggta acaggattag cagagcgagg tatgtaggcg gtgctacaga 7620
gttcttgaag tggtggccta actacggcta cactagaaga acagtatttg gtatctgcgc 7680
tctgctgaag ccagttacct tcggaaaaag agttggtagc tcttgatccg gcaaacaaac 7740
caccgctggt agcggtggtt tttttgtttg caagcagcag attacgcgca gaaaaaaagg 7800
atctcaagaa gatcctttga tcttttctac ggggtctgac gctcagtgga acgaaaactc 7860
acgttaaggg attttggtca tgagattatc aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa 7920
ttaaaaatga agttttaaat caatctaaag tatatatgag taaacttggt ctgacagtta 7980
ccaatgctta atcagtgagg cacctatctc agcgatctgt ctatttcgtt catccatagt 8040
tgcctgactc cccgtcgtgt agataactac gatacgggag ggcttaccat ctggccccag 8100
tgctgcaatg ataccgcggc tcccacgctc accggctcca gatttatcag caataaacca 8160
gccagccgga agggccgagc gcagaagtgg tcctgcaact ttatccgcct ccatccagtc 8220
tattaattgt tgccgggaag ctagagtaag tagttcgcca gttaatagtt tgcgcaacgt 8280
tgttgccatt gctacaggca tcgtggtgtc acgctcgtcg tttggtatgg cttcattcag 8340
ctccggttcc caacgatcaa ggcgagttac atgatccccc atgttgtgca aaaaagcggt 8400
tagctccttc ggtcctccga tcgttgtcag aagtaagttg gccgcagtgt tatcactcat 8460
ggttatggca gcactgcata attctcttac tgtcatgcca tccgtaagat gcttttctgt 8520
gactggtgag tactcaacca agtcattctg agaatagtgt atgcggcgac cgagttgctc 8580
ttgcccggcg tcaatacggg ataataccgc gccacatagc agaactttaa aagtgctcat 8640
cattggaaaa cgttcttcgg ggcgaaaact ctcaaggatc ttaccgctgt tgagatccag 8700
ttcgatgtaa cccactcgtg cacccaactg atcttcagca tcttttactt tcaccagcgt 8760
ttctgggtga gcaaaaacag gaaggcaaaa tgccgcaaaa aagggaataa gggcgacacg 8820
gaaatgttga atactcatac tcttcctttt tcaatattat tgaagcattt atcagggtta 8880
ttgtctcatg agcggataca tatttgaatg tatttagaaa aataaacaaa taggggttcc 8940
gcgcacattt ccccgaaaag tgccacctga acgaagcatc tgtgcttcat tttgtagaac 9000
aaaaatgcaa cgcgagagcg ctaatttttc aaacaaagaa tctgagctgc atttttacag 9060
aacagaaatg caacgcgaaa gcgctatttt accaacgaag aatctgtgct tcatttttgt 9120
aaaacaaaaa tgcaacgcga gagcgctaat ttttcaaaca aagaatctga gctgcatttt 9180
tacagaacag aaatgcaacg cgagagcgct attttaccaa caaagaatct atacttcttt 9240
tttgttctac aaaaatgcat cccgagagcg ctatttttct aacaaagcat cttagattac 9300
tttttttctc ctttgtgcgc tctataatgc agtctcttga taactttttg cactgtaggt 9360
ccgttaaggt tagaagaagg ctactttggt gtctattttc tcttccataa aaaaagcctg 9420
actccacttc ccgcgtttac tgattactag cgaagctgcg ggtgcatttt ttcaagataa 9480
aggcatcccc gattatattc tataccgatg tggattgcgc atactttgtg aacagaaagt 9540
gatagcgttg atgattcttc attggtcaga aaattatgaa cggtttcttc tattttgtct 9600
ctatatacta cgtataggaa atgtttacat tttcgtattg ttttcgattc actctatgaa 9660
tagttcttac tacaattttt ttgtctaaag agtaatacta gagataaaca taaaaaatgt 9720
agaggtcgag tttagatgca agttcaagga gcgaaaggtg gatgggtagg ttatataggg 9780
atatagcaca gagatatata gcaaagagat acttttgagc aatgtttgtg gaagcggtat 9840
tcgcaatatt ttagtagctc gttacagtcc ggtgcgtttt tggttttttg aaagtgcgtc 9900
ttcagagcgc ttttggtttt caaaagcgct ctgaagttcc tatactttct agagaatagg 9960
aacttcggaa taggaacttc aaagcgtttc cgaaaacgag cgcttccgaa aatgcaacgc 10020
gagctgcgca catacagctc actgttcacg tcgcacctat atctgcgtgt tgcctgtata 10080
tatatataca tgagaagaac ggcatagtgc gtgtttatgc ttaaatgcgt acttatatgc 10140
gtctatttat gtaggatgaa aggtagtcta gtacctcctg tgatattatc ccattccatg 10200
cggggtatcg tatgcttcct tcagcactac cctttagctg ttctatatgc tgccactcct 10260
caattggatt agtctcatcc ttcaatgcta tcatttcctt tgatattgga tcatctaaga 10320
aaccattatt atcatgacat taacctataa aaataggcgt atcacgaggc cctttcgtc 10379
<210> 93
<211> 126
<212> DNA
<213> 布拉酵母（Saccharomyces boulardii）
<400> 93
tgttggaata aaaatcaact atcatctact aactagtatt tacgttacta gtatattatc 60
atatacggtg ttagaagatg acgcaaatga tgagaaatag tcatctaaat tagtggaagc 120
tgaaac 126
<210> 94
<211> 105
<212> DNA
<213> 布拉酵母（Saccharomyces boulardii）
<400> 94
aatatttata gaattgtgta gaattgcaga ttccctttta tggattccta aatcctcgag 60
gagaacttct agtatatcta catacctaat attatagcct taatc 105
<210> 95
<211> 6919
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 质粒pPL5071_TEF1-Cre_URA3（Plasmid pPL5071_TEF1-Cre_URA3）
<220>
<221> misc_feature
<222> (2382)..(2382)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 95
agaaaccatt attatcatga cattaaccta taaaaatagg cgtatcacga ggccctttcg 60
tctcgcgcgt ttcggtgatg acggtgaaaa cctctgacac atgcagctcc cggagacggt 120
cacagcttgt ctgtaagcgg atgccgggag cagacaagcc cgtcagggcg cgtcagcggg 180
tgttggcggg tgtcggggct ggcttaacta tgcggcatca gagcagattg tactgagagt 240
gcaccatacc acagcttttc aattcaattc atcatttttt ttttattctt ttttttgatt 300
tcggtttctt tgaaattttt ttgattcggt aatctccgaa cagaaggaag aacgaaggaa 360
ggagcacaga cttagattgg tatatatacg catatgtagt gttgaagaaa catgaaattg 420
cccagtattc ttaacccaac tgcacagaac aaaaacctgc aggaaacgaa gataaatcat 480
gtcgaaagct acatataagg aacgtgctgc tactcatcct agtcctgttg ctgccaagct 540
atttaatatc atgcacgaaa agcaaacaaa cttgtgtgct tcattggatg ttcgtaccac 600
caaggaatta ctggagttag ttgaagcatt aggtcccaaa atttgtttac taaaaacaca 660
tgtggatatc ttgactgatt tttccatgga gggcacagtt aagccgctaa aggcattatc 720
cgccaagtac aattttttac tcttcgaaga cagaaaattt gctgacattg gtaatacagt 780
caaattgcag tactctgcgg gtgtatacag aatagcagaa tgggcagaca ttacgaatgc 840
acacggtgtg gtgggcccag gtattgttag cggtttgaag caggcggcag aagaagtaac 900
aaaggaacct agaggccttt tgatgttagc agaattgtca tgcaagggct ccctatctac 960
tggagaatat actaagggta ctgttgacat tgcgaagagc gacaaagatt ttgttatcgg 1020
ctttattgct caaagagaca tgggtggaag agatgaaggt tacgattggt tgattatgac 1080
acccggtgtg ggtttagatg acaagggaga cgcattgggt caacagtata gaaccgtgga 1140
tgatgtggtc tctacaggat ctgacattat tattgttgga agaggactat ttgcaaaggg 1200
aagggatgct aaggtagagg gtgaacgtta cagaaaagca ggctgggaag catatttgag 1260
aagatgcggc cagcaaaact aaaaaactgt attataagta aatgcatgta tactaaactc 1320
acaaattaga gcttcaattt aattatatca gttattaccc tatgcggtgt gaaataccgc 1380
acagatgcgt aaggagaaaa taccgcatca ggaaattgta aacgttaata ttttgttaaa 1440
attcgcgtta aatttttgtt aaatcagctc attttttaac caataggccg aaatcggcaa 1500
aatcccttat aaatcaaaag aatagaccga gatagggttg agtgttgttc cagtttggaa 1560
caagagtcca ctattaaaga acgtggactc caacgtcaaa gggcgaaaaa ccgtctatca 1620
gggcgatggc ccactacgtg aaccatcacc ctaatcaagt tttttggggt cgaggtgccg 1680
taaagcacta aatcggaacc ctaaagggag cccccgattt agagcttgac ggggaaagcc 1740
ggcgaacgtg gcgagaaagg aagggaagaa agcgaaagga gcgggcgcta gggcgctggc 1800
aagtgtagcg gtcacgctgc gcgtaaccac cacacccgcc gcgcttaatg cgccgctaca 1860
gggcgcgtcg cgccattcgc cattcaggct gcgcaactgt tgggaagggc gatcggtgcg 1920
ggcctcttcg ctattacgcc agctggcgaa agggggatgt gctgcaaggc gattaagttg 1980
ggtaacgcca gggttttccc agtcacgacg ttgtaaaacg acggccagtg agcgcgcgta 2040
atacgactca ctatagggcg aattgggtac cggccgcaaa ttaaagcctt cgagcgtccc 2100
aaaaccttct caagcaaggt tttcagtata atgttacatg cgtacacgcg tctgtacaga 2160
aaaaaaagaa aaatttgaaa tataaataac gttcttaata ctaacataac tataaaaaaa 2220
taaataggga cctagacttc aggttgtcta actccttcct tttcggttag agcggatgtg 2280
gggggagggc gtgaatgtaa gcgtgacata actaattaca tgactcgagg tcgacaattc 2340
caaccttacc caagagttcg ccaaactcag acatcacttt angcaaaacc gcgccgtgct 2400
tcttcctcgg tggcattcat cacgaaatgt tcagcactac gcatactttt gacaggaaac 2460
gcaacggata ttgagtcaat atcaggcatt ctatcgctca gctttacagt gacaatgacg 2520
gctggcgact gaatattagt gcttacagac agcactacat attttccgtc gatgttgaaa 2580
tcctttctca tatgtcacca taaatatcaa ataattatag caatcattta cgcgttaatg 2640
gctaatcgcc atcttccagc aggcgcacca ttgcccctgt ttcactatcc agggtacgga 2700
tatagttcat gacaatattt acattggtcc agccaccagc ttgcatgatc tccggtattg 2760
aaactccagc gcgggccata tctcgcgcgg ctccgacacg ggcactgtgt ccagaccagg 2820
ccaggtatct ctgaccagag tcatccttag cgccgtaaat caatcgatga gttgcttcaa 2880
aaatcccttc cagggcgcga gttgatagct ggctggtggc agatggcgcg gcaacaccat 2940
tttttctgac ccggcaaaac aggtagttat tcggatcatc agctacacca gagacggaaa 3000
tccatcgctc gaccagttta gttaccccca ggctaagtgc cttctctaca cctgcggtgc 3060
taaccagcgt tttcgttctg ccaatatgga ttaacattct cccaccgtca gtacgtgaga 3120
tatctttaac cctgatcctg gcaatttcgg ctatacgtaa cagggtgtta taagcaatcc 3180
ccagaaatgc cagattacgt atatcctggc agcgatcgct attttccatg agtgaacgaa 3240
cctggtcgaa atcagtgcgt tcgaacgcta gagcctgttt tgcacgttca ccggcatcaa 3300
cgttttcttt tcggatccgc cgcataacca gtgaaacagc attgctgtca cttggtcgtg 3360
gcagcccgga ccgacgatga agcatgttta gctggcccaa atgttgctgg atagttttta 3420
ctgccagacc gcgcgcctga agatatagaa gataatcgcg aacatcttca ggttctgcgg 3480
gaaaccattt ccggttattc aacttgcacc atgccgccca cgaccggcaa acggacagaa 3540
gcattttcca ggtatgctca gaaaacgcct ggcgatccct gaacatgtcc atcaggttct 3600
tgcgaacctc atcactcgtt gcatcgaccg gtaatgcagg caaattttgg tgtacggtca 3660
gtaaattgga catttaacac tcagataatg gttttaagta aagtgtacag gatcggctct 3720
gcccctcgac ggtatcgata agcttgatat cgaattcctg cagcccgggg gatccactag 3780
tttttgtaat taaaacttag attagattgc tatgctttct ttccaatgag caagaagtaa 3840
aaaaagttgt aatagaacag gaaaaatgaa gctgaaactt gagaaattga agaccgtttg 3900
ttaactcaaa tatcaatggg aggtcgtcga aagagaacaa aatcgaaaaa aaagttttca 3960
agagaaagaa acgtgataaa aatttttatt gccttctccg acgaagaaaa agggacgagg 4020
cggtctcttt ttccttttcc aaacctttag tacgggtaat taacggcacc ctagaggaag 4080
gaggaggggg aatttagtat gctgtgcttg ggtgttttga agtggtacgg cggtgcgcgg 4140
agtccgagaa aatctggaag agtaaaaaag gagtagagac attttgaagc tatccagctt 4200
ttgttccctt tagtgagggt taattgcgcg cttggcgtaa tcatggtcat agctgtttcc 4260
tgtgtgaaat tgttatccgc tcacaattcc acacaacata ggagccggaa gcataaagtg 4320
taaagcctgg ggtgcctaat gagtgaggta actcacatta attgcgttgc gctcactgcc 4380
cgctttccag tcgggaaacc tgtcgtgcca gctgcattaa tgaatcggcc aacgcgcggg 4440
gagaggcggt ttgcgtattg ggcgctcttc cgcttcctcg ctcactgact cgctgcgctc 4500
ggtcgttcgg ctgcggcgag cggtatcagc tcactcaaag gcggtaatac ggttatccac 4560
agaatcaggg gataacgcag gaaagaacat gtgagcaaaa ggccagcaaa aggccaggaa 4620
ccgtaaaaag gccgcgttgc tggcgttttt ccataggctc cgcccccctg acgagcatca 4680
caaaaatcga cgctcaagtc agaggtggcg aaacccgaca ggactataaa gataccaggc 4740
gtttccccct ggaagctccc tcgtgcgctc tcctgttccg accctgccgc ttaccggata 4800
cctgtccgcc tttctccctt cgggaagcgt ggcgctttct catagctcac gctgtaggta 4860
tctcagttcg gtgtaggtcg ttcgctccaa gctgggctgt gtgcacgaac cccccgttca 4920
gcccgaccgc tgcgccttat ccggtaacta tcgtcttgag tccaacccgg taagacacga 4980
cttatcgcca ctggcagcag ccactggtaa caggattagc agagcgaggt atgtaggcgg 5040
tgctacagag ttcttgaagt ggtggcctaa ctacggctac actagaagga cagtatttgg 5100
tatctgcgct ctgctgaagc cagttacctt cggaaaaaga gttggtagct cttgatccgg 5160
caaacaaacc accgctggta gcggtggttt ttttgtttgc aagcagcaga ttacgcgcag 5220
aaaaaaagga tctcaagaag atcctttgat cttttctacg gggtctgacg ctcagtggaa 5280
cgaaaactca cgttaaggga ttttggtcat gagattatca aaaaggatct tcacctagat 5340
ccttttaaat taaaaatgaa gttttaaatc aatctaaagt atatatgagt aaacttggtc 5400
tgacagttac caatgcttaa tcagtgaggc acctatctca gcgatctgtc tatttcgttc 5460
atccatagtt gcctgactcc ccgtcgtgta gataactacg atacgggagg gcttaccatc 5520
tggccccagt gctgcaatga taccgcgaga cccacgctca ccggctccag atttatcagc 5580
aataaaccag ccagccggaa gggccgagcg cagaagtggt cctgcaactt tatccgcctc 5640
catccagtct attaattgtt gccgggaagc tagagtaagt agttcgccag ttaatagttt 5700
gcgcaacgtt gttgccattg ctacaggcat cgtggtgtca cgctcgtcgt ttggtatggc 5760
ttcattcagc tccggttccc aacgatcaag gcgagttaca tgatccccca tgttgtgcaa 5820
aaaagcggtt agctccttcg gtcctccgat cgttgtcaga agtaagttgg ccgcagtgtt 5880
atcactcatg gttatggcag cactgcataa ttctcttact gtcatgccat ccgtaagatg 5940
cttttctgtg actggtgagt actcaaccaa gtcattctga gaatagtgta tgcggcgacc 6000
gagttgctct tgcccggcgt caatacggga taataccgcg ccacatagca gaactttaaa 6060
agtgctcatc attggaaaac gttcttcggg gcgaaaactc tcaaggatct taccgctgtt 6120
gagatccagt tcgatgtaac ccactcgtgc acccaactga tcttcagcat cttttacttt 6180
caccagcgtt tctgggtgag caaaaacagg aaggcaaaat gccgcaaaaa agggaataag 6240
ggcgacacgg aaatgttgaa tactcatact cttccttttt caatattatt gaagcattta 6300
tcagggttat tgtctcatga gcggatacat atttgaatgt atttagaaaa ataaacaaat 6360
aggggttccg cgcacatttc cccgaaaagt gccacctggg tccttttcat cacgtgctat 6420
aaaaataatt ataatttaaa ttttttaata taaatatata aattaaaaat agaaagtaaa 6480
aaaagaaatt aaagaaaaaa tagtttttgt tttccgaaga tgtaaaagac tctaggggga 6540
tcgccaacaa atactacctt ttatcttgct cttcctgctc tcaggtatta atgccgaatt 6600
gtttcatctt gtctgtgtag aagaccacac acgaaaatcc tgtgatttta cattttactt 6660
atcgttaatc gaatgtatat ctatttaatc tgcttttctt gtctaataaa tatatatgta 6720
aagtacgctt tttgttgaaa ttttttaaac ctttgtttat ttttttttct tcattccgta 6780
actcttctac cttctttatt tactttctaa aatccaaata caaaacataa aaataaataa 6840
acacagagta aattcccaaa ttattccatc attaaaagat acgaggcgcg tgtaagttac 6900
aggcaagcga tccgtccta 6919
<210> 96
<211> 89
<212> PRT
<213> 酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）
<400> 96
Met Arg Phe Pro Ser Ile Phe Thr Ala Val Leu Phe Ala Ala Ser Ser
1 5 10 15
Ala Leu Ala Ala Pro Val Asn Thr Thr Thr Glu Asp Glu Thr Ala Gln
20 25 30
Ile Pro Ala Glu Ala Val Ile Gly Tyr Ser Asp Leu Glu Gly Asp Phe
35 40 45
Asp Val Ala Val Leu Pro Phe Ser Asn Ser Thr Asn Asn Gly Leu Leu
50 55 60
Phe Ile Asn Thr Thr Ile Ala Ser Ile Ala Ala Lys Glu Glu Gly Val
65 70 75 80
Ser Leu Glu Lys Arg Glu Ala Glu Ala
85
<210> 97
<211> 61
<212> PRT
<213> 酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）
<400> 97
Met Arg Phe Pro Ser Ile Phe Thr Ala Val Leu Phe Ala Ala Ser Ser
1 5 10 15
Ala Leu Ala Ala Pro Val Asn Thr Thr Thr Glu Asp Glu Leu Glu Gly
20 25 30
Asp Phe Asp Val Ala Val Leu Pro Phe Ser Ala Ser Ile Ala Ala Lys
35 40 45
Glu Glu Gly Val Ser Leu Glu Lys Arg Glu Ala Glu Ala
50 55 60
<210> 98
<211> 57
<212> PRT
<213> 酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）
<400> 98
Met Arg Phe Pro Ser Ile Phe Thr Ala Val Leu Phe Ala Ala Ser Ser
1 5 10 15
Ala Leu Ala Ala Pro Val Asn Thr Thr Thr Glu Asp Glu Leu Glu Gly
20 25 30
Asp Phe Asp Val Ala Val Leu Pro Phe Ser Ala Ser Ile Ala Ala Lys
35 40 45
Glu Glu Gly Val Ser Leu Glu Lys Arg
50 55
<210> 99
<211> 19
<212> PRT
<213> 酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）
<400> 99
Met Arg Phe Pro Ser Ile Phe Thr Ala Val Leu Phe Ala Ala Ser Ser
1 5 10 15
Ala Leu Ala
<210> 100
<211> 20
<212> PRT
<213> 黑曲霉（Aspergillus niger）
<400> 100
Met Val Ala Trp Trp Ser Leu Phe Leu Tyr Gly Leu Gln Val Ala Ala
1 5 10 15
Pro Ala Leu Ala
20
<210> 101
<211> 18
<212> PRT
<213> 泡盛曲霉（Aspergillus awamori）
<400> 101
Met Ser Phe Arg Ser Leu Leu Ala Leu Ser Gly Leu Val Cys Ser Gly
1 5 10 15
Leu Ala
<210> 102
<211> 16
<212> PRT
<213> 克鲁维酵母（Kluyveromyces marxianus）
<400> 102
Met Lys Leu Ala Tyr Ser Leu Leu Leu Pro Leu Ala Gly Val Ser Ala
1 5 10 15
<210> 103
<211> 19
<212> PRT
<213> 酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）
<400> 103
Met Leu Leu Gln Ala Phe Leu Phe Leu Leu Ala Gly Phe Ala Ala Lys
1 5 10 15
Ile Ser Ala
<210> 104
<211> 26
<212> PRT
<213> 酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）
<400> 104
Met Thr Lys Pro Thr Gln Val Leu Val Arg Ser Val Ser Ile Leu Phe
1 5 10 15
Phe Ile Thr Leu Leu His Leu Val Val Ala
20 25
<210> 105
<211> 26
<212> PRT
<213> 原鸡（Gallus gallus）
<400> 105
Met Leu Gly Lys Asn Asp Pro Met Cys Leu Val Leu Val Leu Leu Gly
1 5 10 15
Leu Thr Ala Leu Leu Gly Ile Cys Gln Gly
20 25
<210> 106
<211> 18
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 106
Met Lys Trp Val Thr Phe Ile Ser Leu Leu Phe Leu Phe Ser Ser Ala
1 5 10 15
Tyr Ser
<210> 107
<211> 566
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 从质粒表达的ABAB结合蛋白质（ABAB binding protein expressed fromplasmid）
<400> 107
Met Arg Phe Pro Ser Ile Phe Thr Ala Val Leu Phe Ala Ala Ser Ser
1 5 10 15
Ala Leu Ala Met Gln Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val
20 25 30
Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr
35 40 45
Leu Asp Tyr Ser Ser Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu
50 55 60
Arg Glu Gly Val Ser Cys Ile Ser Ser Ser Gly Asp Ser Thr Lys Tyr
65 70 75 80
Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Thr Ser Arg Asp Asn Ala Lys
85 90 95
Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Asp Asp Thr Ala
100 105 110
Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Phe Arg Ala Thr Met Cys Gly Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ser Pro Tyr Gly Lys Asp Asp Trp Gly Lys Gly Thr Leu Val Thr
130 135 140
Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
145 150 155 160
Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro
165 170 175
Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp
180 185 190
Tyr Tyr Gly Ile Gly Trp Phe Arg Gln Pro Pro Gly Lys Glu Arg Glu
195 200 205
Ala Val Ser Tyr Ile Ser Ala Ser Ala Arg Thr Ile Leu Tyr Ala Asp
210 215 220
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ala
225 230 235 240
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Arg Glu Asp Thr Ala Val Tyr
245 250 255
Tyr Cys Ala Arg Arg Arg Phe Ser Ala Ser Ser Val Asn Arg Trp Leu
260 265 270
Ala Asp Asp Tyr Asp Val Trp Gly Arg Gly Thr Gln Val Ala Val Ser
275 280 285
Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
290 295 300
Ser Gln Leu Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
305 310 315 320
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp
325 330 335
Tyr Val Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp
340 345 350
Ile Ala Thr Ile Asn Thr Asp Gly Ser Thr Met Arg Asp Asp Ser Thr
355 360 365
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
370 375 380
Leu Gln Met Thr Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
385 390 395 400
Ala Arg Gly Arg Val Ile Ser Ala Ser Ala Ile Arg Gly Ala Val Arg
405 410 415
Gly Pro Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
420 425 430
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser
435 440 445
Gly Gly Gly Leu Val Gln Thr Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala
450 455 460
Ser Ser Gly Ser Ile Ala Gly Phe Glu Thr Val Thr Trp Ser Arg Gln
465 470 475 480
Ala Pro Gly Lys Ser Leu Gln Trp Val Ala Ser Met Thr Lys Thr Asn
485 490 495
Asn Glu Ile Tyr Ser Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Ile Ile Ser Arg
500 505 510
Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro
515 520 525
Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys Lys Gly Pro Glu Leu Arg Gly Gln
530 535 540
Gly Ile Gln Val Thr Val Ser Ser Val Asp Met Glu Gln Lys Leu Ile
545 550 555 560
Ser Glu Glu Asp Leu Glu
565
<210> 108
<211> 1701
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 从质粒表达的编码ABAB结合蛋白质的多核苷酸序列（Polynucleotidesequence encoding ABAB binding protein expressed from plasmid）
<400> 108
atgagatttc cttcaatttt tactgctgtt ttattcgcag catcctccgc attagctatg 60
caagtacaat tggttgaaac cggtggtggt ttagttcaac caggtggtag tttgagatta 120
tcttgtgctg catcaggttt tacattggat tattcttcaa taggttggtt cagacaagct 180
cctggtaaag aaagagaagg tgtttcttgc atatccagtt ctggtgactc aactaaatat 240
gctgactccg ttaagggtag attcactact tcaagagata acgctaaaaa tacagtctac 300
ttgcaaatga actcattaaa gccagatgac acagcagtct attactgtgc cgcttttaga 360
gccaccatgt gcggtgtatt cccattgtct ccttacggta aagatgactg gggtaaaggt 420
actttagtta ctgtctcatc cggtggtggt ggttccggtg gtggtggtag tggtggtggt 480
ggttctcaag ttcaattagt agaatccggt ggtggtttag tccaacctgg tggtagttta 540
agattatcct gcgaagcaag tggttttaca ttagattatt acggtatcgg ttggtttaga 600
caaccacctg gtaaagaaag agaagctgtc tcttatattt ccgctagtgc aagaactata 660
ttgtacgcag attctgtaaa gggtagattc acaatttcaa gagacaatgc caagaacgct 720
gtttatttgc aaatgaactc tttgaagaga gaagacaccg cagtttatta ctgtgccaga 780
agaagatttt ctgcttcttc agtcaacaga tggttagcag acgattatga tgtttggggt 840
agaggtacac aagtcgccgt aagttctggt ggtggttccg gtggtggtag tggtggtggt 900
tctggtggtg gttcacaatt gcaattagta gaaactggtg gtggtttggt tcaaccaggt 960
ggttccttga gattaagttg tgctgcatct ggttttactt tctctgatta cgttatgaca 1020
tgggtcagac aagctccagg taaaggtcct gaatggatcg ctacaattaa taccgacggt 1080
tccacaatga gagatgacag taccaagggt agattcacta tttcaagaga taacgctaag 1140
aacacattgt acttacaaat gacctctttg aaaccagaag acaccgcatt atattactgt 1200
gccagaggta gagtcatatc cgccagtgct atcagaggtg cagtaagagg tcctggtact 1260
caagttacag tctcttcagg tggcggcggt agtggcggcg gcggttctgg cggtggtggt 1320
tcacaagtcc aattggtaga atctggtggt ggtttagttc aaactggtgg ttcattgaga 1380
ttatcctgcg cttccagtgg ttccattgca ggtttcgaaa ctgttacatg gtcaagacaa 1440
gctccaggta aatctttgca atgggtcgcc tcaatgacca agactaacaa cgaaatctat 1500
tctgattcag ttaagggtag attcattatt tcaagagata atgctaaaaa caccgtttat 1560
ttgcaaatga actcattgaa gccagaagat actggtgttt acttctgcaa gggtcctgaa 1620
ttaagaggtc aaggtattca agtaacagtt tcttcagtcg acatggaaca gaagttgatt 1680
tccgaagaag acctcgagta a 1701
<210> 109
<211> 557
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 从染色体整合表达的ABAB结合蛋白质序列（ABAB binding protein expressedfrom chromosomal integration）
<400> 109
Met Arg Phe Pro Ser Ile Phe Thr Ala Val Leu Phe Ala Ala Ser Ser
1 5 10 15
Ala Leu Ala Met Gln Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val
20 25 30
Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr
35 40 45
Leu Asp Tyr Ser Ser Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu
50 55 60
Arg Glu Gly Val Ser Cys Ile Ser Ser Ser Gly Asp Ser Thr Lys Tyr
65 70 75 80
Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Thr Ser Arg Asp Asn Ala Lys
85 90 95
Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Asp Asp Thr Ala
100 105 110
Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Phe Arg Ala Thr Met Cys Gly Val Phe Pro
115 120 125
Leu Ser Pro Tyr Gly Lys Asp Asp Trp Gly Lys Gly Thr Leu Val Thr
130 135 140
Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
145 150 155 160
Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro
165 170 175
Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp
180 185 190
Tyr Tyr Gly Ile Gly Trp Phe Arg Gln Pro Pro Gly Lys Glu Arg Glu
195 200 205
Ala Val Ser Tyr Ile Ser Ala Ser Ala Arg Thr Ile Leu Tyr Ala Asp
210 215 220
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ala
225 230 235 240
Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Arg Glu Asp Thr Ala Val Tyr
245 250 255
Tyr Cys Ala Arg Arg Arg Phe Ser Ala Ser Ser Val Asn Arg Trp Leu
260 265 270
Ala Asp Asp Tyr Asp Val Trp Gly Arg Gly Thr Gln Val Ala Val Ser
275 280 285
Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
290 295 300
Ser Gln Leu Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
305 310 315 320
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp
325 330 335
Tyr Val Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp
340 345 350
Ile Ala Thr Ile Asn Thr Asp Gly Ser Thr Met Arg Asp Asp Ser Thr
355 360 365
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
370 375 380
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
385 390 395 400
Ala Arg Gly Arg Val Ile Ser Ala Ser Ala Ile Arg Gly Ala Val Arg
405 410 415
Gly Pro Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
420 425 430
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser
435 440 445
Gly Gly Gly Leu Val Gln Thr Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala
450 455 460
Ser Ser Gly Ser Ile Ala Gly Phe Glu Thr Val Thr Trp Ser Arg Gln
465 470 475 480
Ala Pro Gly Lys Ser Leu Gln Trp Val Ala Ser Met Thr Lys Thr Asn
485 490 495
Asn Glu Ile Tyr Ser Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Ile Ile Ser Arg
500 505 510
Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro
515 520 525
Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys Lys Gly Pro Glu Leu Arg Gly Gln
530 535 540
Gly Ile Gln Val Thr Val Ser Ser Val Asp Ala Ala Ser
545 550 555
<210> 110
<211> 1674
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 从染色体整合表达的编码ABAB结合蛋白质的多核苷酸序列（Polynucleotidesequence encoding ABAB binding protein expressed from chromosomalintegration）
<400> 110
atgagatttc cttcaatttt tactgctgtt ttattcgcag catcctccgc attagctatg 60
caagtacaat tggttgaaac cggtggtggt ttagttcaac caggtggtag tttgagatta 120
tcttgtgctg catcaggttt tacattggat tattcttcaa taggttggtt cagacaagct 180
cctggtaaag aaagagaagg tgtttcttgc atatccagtt ctggtgactc aactaaatat 240
gctgactccg ttaagggtag attcactact tcaagagata acgctaaaaa tacagtctac 300
ttgcaaatga actcattaaa gccagatgac acagcagtct attactgtgc cgcttttaga 360
gccaccatgt gcggtgtatt cccattgtct ccttacggta aagatgactg gggtaaaggt 420
actttagtta ctgtctcatc cggtggtggt ggttccggtg gtggtggtag tggtggtggt 480
ggttctcaag ttcaattagt agaatccggt ggtggtttag tccaacctgg tggtagttta 540
agattatcct gcgaagcaag tggttttaca ttagattatt acggtatcgg ttggtttaga 600
caaccacctg gtaaagaaag agaagctgtc tcttatattt ccgctagtgc aagaactata 660
ttgtacgcag attctgtaaa gggtagattc acaatttcaa gagacaatgc caagaacgct 720
gtttatttgc aaatgaactc tttgaagaga gaagacaccg cagtttatta ctgtgccaga 780
agaagatttt ctgcttcttc agtcaacaga tggttagcag acgattatga tgtttggggt 840
agaggtacac aagtcgccgt aagttctggt ggtggttccg gtggtggtag tggtggtggt 900
tctggtggtg gttcacagct gcagctggtg gagaccgggg gaggcttagt tcagcctggg 960
gggtccctga gactctcctg tgcagcctct ggattcacct tcagtgacta cgtgatgacc 1020
tgggtccgcc aagctccagg gaaggggcct gagtggatcg caactattaa tactgatggg 1080
agcacaatgc gcgacgactc cacaaagggc cggttcacca tctccagaga caacgccaag 1140
aacactctgt atctgcaaat gaacagtctg aaacccgagg acactgctct gtattactgt 1200
gcaagaggcc gggtgatctc tgcttccgct atcagaggcg cagtcagagg ccctggaacc 1260
caggtcaccg tctcgagcgg tggcggcggt agtggcggcg gcggttctgg cggtggtggt 1320
tcacaagtcc aattggtaga atctggtggt ggtttagttc aaactggtgg ttcattgaga 1380
ttatcctgcg cttccagtgg ttccattgca ggtttcgaaa ctgttacatg gtcaagacaa 1440
gctccaggta aatctttgca atgggtcgcc tcaatgacca agactaacaa cgaaatctat 1500
tctgattcag ttaagggtag attcattatt tcaagagata atgctaaaaa caccgtttat 1560
ttgcaaatga actcattgaa gccagaagat actggtgttt acttctgcaa gggtcctgaa 1620
ttaagaggtc aaggtattca agtaacagtt tcttcagtcg acgcggctag ctaa 1674
<210> 111
<211> 549
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> ABA结合剂（ABA binding agent）
<400> 111
Gln Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
1 5 10 15
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Ser Ser
20 25 30
Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val Ser
35 40 45
Cys Ile Ser Ser Ser Gly Asp Ser Thr Lys Tyr Ala Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Thr Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Ala Phe Arg Ala Thr Met Cys Gly Val Phe Pro Leu Ser Pro Tyr Gly
100 105 110
Lys Asp Asp Trp Gly Lys Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Glu Pro
115 120 125
Lys Thr Pro Lys Pro Gln Pro Thr Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
130 135 140
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly
145 150 155 160
Gly Gly Leu Val Gln Thr Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ser
165 170 175
Ser Gly Ser Ile Ala Gly Phe Glu Thr Val Thr Trp Ser Arg Gln Ala
180 185 190
Pro Gly Lys Ser Leu Gln Trp Val Ala Ser Met Thr Lys Thr Asn Asn
195 200 205
Glu Ile Tyr Ser Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp
210 215 220
Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu
225 230 235 240
Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys Lys Gly Pro Glu Leu Arg Gly Gln Gly
245 250 255
Ile Gln Val Thr Val Ser Ser Glu Pro Lys Thr Pro Lys Pro Gln Thr
260 265 270
Ser Ala Ile Ala Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
275 280 285
Gly Gly Ser Leu Gln Ala Met Ala Ala Ala Ser Gln Val Gln Leu Val
290 295 300
Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Thr Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser
305 310 315 320
Cys Ala Ser Ser Gly Ser Ile Ala Gly Phe Glu Thr Val Thr Trp Ser
325 330 335
Arg Gln Ala Pro Gly Lys Ser Leu Gln Trp Val Ala Ser Met Thr Lys
340 345 350
Thr Asn Asn Glu Ile Tyr Ser Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Ile Ile
355 360 365
Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu
370 375 380
Lys Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys Lys Gly Pro Glu Leu Arg
385 390 395 400
Gly Gln Gly Ile Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
405 410 415
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Trp Ala Ala Gln Leu Gln Leu
420 425 430
Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu
435 440 445
Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Val Met Thr Trp
450 455 460
Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Ile Ala Thr Ile Asn
465 470 475 480
Thr Asp Gly Ser Thr Met Arg Asp Asp Ser Thr Lys Gly Arg Phe Thr
485 490 495
Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Thr Ser
500 505 510
Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly Arg Val
515 520 525
Ile Ser Ala Ser Ala Ile Arg Gly Ala Val Arg Gly Pro Gly Thr Gln
530 535 540
Val Thr Val Ser Ser
545
<210> 112
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> D7标签（D7 tag）
<400> 112
Ala Pro Thr Lys Ala Lys Arg Arg Val Val Gln Arg Glu Lys Thr
1 5 10 15
<210> 113
<211> 553
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> His-hABAB-D7结合剂（His-hABAB-D7 binding agent）
<400> 113
His His His His His His Gln Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly
1 5 10 15
Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly
20 25 30
Phe Thr Leu Asp Tyr Ser Ser Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly
35 40 45
Lys Glu Arg Glu Gly Val Ser Cys Ile Ser Ser Ser Gly Asp Ser Thr
50 55 60
Lys Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Thr Ser Arg Asp Asn
65 70 75 80
Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Asp Asp
85 90 95
Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Phe Arg Ala Thr Met Cys Gly Val
100 105 110
Phe Pro Leu Ser Pro Tyr Gly Lys Asp Asp Trp Gly Lys Gly Thr Leu
115 120 125
Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
130 135 140
Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val
145 150 155 160
Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr
165 170 175
Leu Asp Tyr Tyr Gly Ile Gly Trp Phe Arg Gln Pro Pro Gly Lys Glu
180 185 190
Arg Glu Ala Val Ser Tyr Ile Ser Ala Ser Ala Arg Thr Ile Leu Tyr
195 200 205
Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys
210 215 220
Asn Ala Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Arg Glu Asp Thr Ala
225 230 235 240
Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg Arg Phe Ser Ala Ser Ser Val Asn Arg
245 250 255
Trp Leu Ala Asp Asp Tyr Asp Val Trp Gly Arg Gly Thr Gln Val Ala
260 265 270
Val Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly
275 280 285
Gly Gly Ser Gln Leu Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln
290 295 300
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
305 310 315 320
Ser Asp Tyr Val Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro
325 330 335
Glu Trp Ile Ala Thr Ile Asn Thr Asp Gly Ser Thr Met Arg Asp Asp
340 345 350
Ser Thr Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr
355 360 365
Leu Tyr Leu Gln Met Thr Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr
370 375 380
Tyr Cys Ala Arg Gly Arg Val Ile Ser Ala Ser Ala Ile Arg Gly Ala
385 390 395 400
Val Arg Gly Pro Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
405 410 415
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val
420 425 430
Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Thr Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser
435 440 445
Cys Ala Ser Ser Gly Ser Ile Ala Gly Phe Glu Thr Val Thr Trp Ser
450 455 460
Arg Gln Ala Pro Gly Lys Ser Leu Gln Trp Val Ala Ser Met Thr Lys
465 470 475 480
Thr Asn Asn Glu Ile Tyr Ser Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Ile Ile
485 490 495
Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu
500 505 510
Lys Pro Glu Asp Thr Gly Val Tyr Phe Cys Lys Gly Pro Glu Leu Arg
515 520 525
Gly Gln Gly Ile Gln Val Thr Val Ser Ser Ala Pro Thr Lys Ala Lys
530 535 540
Arg Arg Val Val Gln Arg Glu Lys Thr
545 550
<210> 114
<211> 1665
<212> DNA
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 编码His-hABAB-D7结合剂的多核苷酸序列（Polynucleotide sequenceencoding His-hABAB-D7 binding agent）
<400> 114
catcatcatc atcatcatca ggtacagctg gtggagacgg ggggagggct ggtacaacca 60
ggcgggtcac tgaggctttc ctgtgccgca tctgggttca cactggatta ttcgtccata 120
gggtggtttc ggcaggctcc tggcaaagag cgtgaggggg tctcatgtat tagtagtagt 180
ggtgatagca caaagtacgc cgattccgta aagggccggt ttacaacctc cagggataat 240
gctaagaaca ccgtatatct ccagatgaac tctctgaagc ccgacgatac ggccgtatat 300
tactgtgcgg ctttcagggc gactatgtgc ggcgtgttcc ctctgagccc ttacggcaag 360
gacgactggg gcaaggggac cctggtgacc gtatcctcag gcggtggagg gtctggtggg 420
ggaggctcag ggggtggagg cagccaggtg caactggttg aatctggggg aggcttggta 480
caacctgggg gatccctgag actctcttgc gaggcctccg gattcacctt ggactactat 540
ggcatcggct ggttccgcca gcccccaggg aaggagcggg aggccgtttc atacattagt 600
gccagtgccc ggaccatact gtacgcagac tctgtgaagg gacgctttac catctctagg 660
gacaatgcca aaaatgctgt gtacctgcaa atgaacagcc tcaagcggga ggataccgca 720
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tatttttcta acaaagcatc ttagattact ttttttctcc tttgtgcgct ctataatgca 5640
gtctcttgat aactttttgc actgtaggtc cgttaaggtt agaagaaggc tactttggtg 5700
tctattttct cttccataaa aaaagcctga ctccacttcc cgcgtttact gattactagc 5760
gaagctgcgg gtgcattttt tcaagataaa ggcatccccg attatattct ataccgatgt 5820
ggattgcgca tactttgtga acagaaagtg atagcgttga tgattcttca ttggtcagaa 5880
aattatgaac ggtttcttct attttgtctc tatatactac gtataggaaa tgtttacatt 5940
ttcgtattgt tttcgattca ctctatgaat agttcttact acaatttttt tgtctaaaga 6000
gtaatactag agataaacat aaaaaatgta gaggtcgagt ttagatgcaa gttcaaggag 6060
cgaaaggtgg atgggtaggt tatataggga tatagcacag agatatatag caaagagata 6120
cttttgagca atgtttgtgg aagcggtatt cgcaatattt tagtagctcg ttacagtccg 6180
gtgcgttttt ggttttttga aagtgcgtct tcagagcgct tttggttttc aaaagcgctc 6240
tgaagttcct atactttcta gagaatagga acttcggaat aggaacttca aagcgtttcc 6300
gaaaacgagc gcttccgaaa atgcaacgcg agctgcgcac atacagctca ctgttcacgt 6360
cgcacctata tctgcgtgtt gcctgtatat atatatacat gagaagaacg gcatagtgcg 6420
tgtttatgct taaatgcgta cttatatgcg tctatttatg taggatgaaa ggtagtctag 6480
tacctcctgt gatattatcc cattccatgc ggggtatcgt atgcttcctt cagcactacc 6540
ctttagctgt tctatatgct gccactcctc aattggatta gtctcatcct tcaatgctat 6600
catttccttt gatattggat catggtagac aacccttaat ataacttcgt ataatgtatg 6660
ctatacgaag ttattaggtc tagagatctg tttagcttgc ctcgtccccg ccgggtcacc 6720
cggccagcga catggaggcc cagaataccc tccttgacag tcttgacgtg cgcagctcag 6780
gggcatgatg tgactgtcgc ccgtacattt agcccataca tccccatgta taatcatttg 6840
catccataca ttttgatggc cgcacggcgc gaagcaaaaa ttacggctcc tcgctgcaga 6900
cctgcgagca gggaaacgct cccctcacag acgcgttgaa ttgtccccac gccgcgcccc 6960
tgtagagaaa tataaaaggt taggatttgc cactgaggtt cttctttcat atacttcctt 7020
ttaaaatctt gctaggatac agttctcaca tcacatccga acataaacaa ccatgggtaa 7080
ggaaaagact cacgtttcga ggccgcgatt aaattccaac atggatgctg atttatatgg 7140
gtataaatgg gctcgcgata atgtcgggca atcaggtgcg acaatctatc gattgtatgg 7200
gaagcccgat gcgccagagt tgtttctgaa acatggcaaa ggtagcgttg ccaatgatgt 7260
tacagatgag atggtcagac taaactggct gacggaattt atgcctcttc cgaccatcaa 7320
gcattttatc cgtactcctg atgatgcatg gttactcacc actgcgatcc ccggcaaaac 7380
agcattccag gtattagaag aatatcctga ttcaggtgaa aatattgttg atgcgctggc 7440
agtgttcctg cgccggttgc attcgattcc tgtttgtaat tgtcctttta acagcgatcg 7500
cgtatttcgt ctcgctcagg cgcaatcacg aatgaataac ggtttggttg atgcgagtga 7560
ttttgatgac gagcgtaatg gctggcctgt tgaacaagtc tggaaagaaa tgcataagct 7620
tttgccattc tcaccggatt cagtcgtcac tcatggtgat ttctcacttg ataaccttat 7680
ttttgacgag gggaaattaa taggttgtat tgatgttgga cgagtcggaa tcgcagaccg 7740
ataccaggat cttgccatcc tatggaactg cctcggtgag ttttctcctt cattacagaa 7800
acggcttttt caaaaatatg gtattgataa tcctgatatg aataaattgc agtttcattt 7860
gatgctcgat gagtttttct aatcagtact gacaataaaa agattcttgt tttcaagaac 7920
ttgtcatttg tatagttttt ttatattgta gttgttctat tttaatcaaa tgttagcgtg 7980
atttatattt tttttcgcct cgacatcatc tgcccagatg cgaagttaag tgcgcagaaa 8040
gtaatatcat gcgtcaatcg tatgtgaatg ctggtcgcta tactgctgtc gattcgatac 8100
taacgccgcc atccagtgtc gaaaacgagc tctcgagaac ccttaatata acttcgtata 8160
atgtatgcta tacgaagtta ttaggtgata tcagatccac ta 8202
<210> 117
<211> 538
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> AT-yABAB hAA6 T83N 结合剂（AT-yABAB hAA6 T83N binding agent）
<400> 117
Met Gln Val Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
1 5 10 15
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr
20 25 30
Ser Ser Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly
35 40 45
Val Ser Cys Ile Ser Ser Ser Gly Asp Ser Thr Lys Tyr Ala Asp Ser
50 55 60
Val Lys Gly Arg Phe Thr Thr Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Val
65 70 75 80
Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Ala Phe Arg Ala Thr Met Cys Gly Val Phe Pro Leu Ser Pro
100 105 110
Tyr Gly Lys Asp Asp Trp Gly Lys Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln
130 135 140
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
145 150 155 160
Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr Gly
165 170 175
Ile Gly Trp Phe Arg Gln Pro Pro Gly Lys Glu Arg Glu Ala Val Ser
180 185 190
Tyr Ile Ser Ala Ser Ala Arg Thr Ile Leu Tyr Ala Asp Ser Val Lys
195 200 205
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ala Val Tyr Leu
210 215 220
Gln Met Asn Ser Leu Lys Arg Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
225 230 235 240
Arg Arg Arg Phe Ser Ala Ser Ser Val Asn Arg Trp Leu Ala Asp Asp
245 250 255
Tyr Asp Val Trp Gly Arg Gly Thr Gln Val Ala Val Ser Ser Gly Gly
260 265 270
Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Gln Leu
275 280 285
Gln Leu Val Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu
290 295 300
Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Val Met
305 310 315 320
Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Pro Glu Trp Ile Ala Thr
325 330 335
Ile Asn Thr Asp Gly Ser Thr Met Arg Asp Asp Ser Thr Lys Gly Arg
340 345 350
Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met
355 360 365
Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala Arg Gly
370 375 380
Arg Val Ile Ser Ala Ser Ala Ile Arg Gly Ala Val Arg Gly Pro Gly
385 390 395 400
Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
405 410 415
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly
420 425 430
Leu Val Gln Thr Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ser Ser Gly
435 440 445
Ser Ile Ala Gly Phe Glu Thr Val Thr Trp Ser Arg Gln Ala Pro Gly
450 455 460
Lys Ser Leu Gln Trp Val Ala Ser Met Thr Lys Thr Asn Asn Glu Ile
465 470 475 480
Tyr Ser Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala
485 490 495
Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr
500 505 510
Gly Val Tyr Phe Cys Lys Gly Pro Glu Leu Arg Gly Gln Gly Ile Gln
515 520 525
Val Thr Val Ser Ser Val Asp Ala Ala Ser
530 535

Claims (67)

1.一种酵母属酵母的工程菌株，其可产生四特异性四聚体结合剂，其中所述结合剂包括连接的第一、第二、第三和第四VHH肽单体，并且其中所述VHH肽单体独立地对艰难梭菌毒素A(TcdA)或毒素B(TcdB)的表位具有结合特异性。
2.根据权利要求1所述的酵母的工程菌株，其中所述第一、第二、第三和第四VHH肽单体各自具有针对不同表位的结合特异性。
3.根据权利要求1所述的酵母的工程菌株，其中两个VHH肽单体对TcdA的表位具有结合特异性，并且两个VHH肽单体对TcdB的表位具有结合特异性。
4.根据权利要求1所述的酵母的工程菌株，其中所述VHH肽单体独立地对TcdA或TcdB的葡糖基转移酶结构域、半胱氨酸蛋白酶结构域、易位结构域或受体结合结构域中的表位具有结合特异性。
5.根据权利要求1所述的酵母的工程菌株，其中所述结合剂是ABAB，其中所述第一和第三单体对TcdA的表位具有结合特异性，并且所述第一和第三单体分别是VHH肽单体AH3(SEQID NO：7)和AA6(SEQ ID NO：5)，以及
所述第二和第四单体对TcdB表位具有结合特异性，并且所述第二和第四单体分别是VHH肽单体5D(SEQ ID NO：1)和E3(SEQ ID NO：3)。
6.根据权利要求5所述的酵母的工程菌株，其中所述ABAB结合剂包括SEQ ID NO：19所示的氨基酸序列或与其具有至少95％序列同一性的序列变体，并且其中所述序列变体保留TcdA和/或TcdB结合特异性，或所述序列变体保留毒素中和活性或保留两者。
7.根据权利要求5所述的酵母的工程菌株，其中所述ABAB结合剂还包括选自AT分泌信号(MRFPSIFTAVLFAASSALA(SEQ ID NO：99))和IVS分泌信号(MLLQAFLFLLAGFAAKISA(SEQ IDNO：103))的N端分泌信号。
8.根据权利要求5所述的酵母的工程菌株，其中所述ABAB结合剂由酵母内的质粒表达，其中所述ABAB结合剂包括SEQ ID NO：107中所示的氨基酸序列或与其具有至少95％序列同一性的序列变体，并且其中所述序列变体保留TcdA和/或TcdB结合特异性，或序列变体保留毒素中和活性或保留两者。
9.根据权利要求8所述的酵母的工程菌株，其中所述质粒是pCEV-URA3-TEF-AT-yABAB-cMyc(SEQ ID NO：88)。
10.根据权利要求5所述的酵母的工程菌株，其中ABAB结合剂编码序列整合到酵母的染色体中，其中所述ABAB结合剂包含SEQ ID NO：109所示的氨基酸序列或与其具有至少95％序列同一性的序列变体，并且其中所述序列变体保留TcdA和/或TcdB结合特异性，或序列变体保留毒素中和活性，或保留两者。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的酵母的工程菌株，其中所述酵母属酵母是酿酒酵母或布拉酵母。
12.一种药物制剂，其包含权利要求1-11中任一项所述的酵母属酵母的工程菌株和药学上可接受的载体或稀释剂。
13.一种制备权利要求1-9中任一项所述的酵母的工程菌株的方法，包括(a)用编码所述结合剂的表达载体转化酵母属酵母菌株，和(b)筛选(a)的酵母以产生所述结合剂。
14.一种制备权利要求10所述的酵母的工程菌株的方法，包括(a)将编码所述结合剂的多核苷酸序列染色体整合到酵母属酵母菌株的基因组中，和(b)筛选(a)的酵母以产生所述结合剂。
15.根据权利要求13或14所述的方法，其中所述酵母属酵母是酿酒酵母或布拉酵母。
16.根据权利要求13或14所述的方法，其中使用免疫测定进行所述筛选。
17.根据权利要求13所述的方法，其中所述表达载体是质粒pCEV-URA3-TEF-AT-yABAB-cMyc(SEQ ID NO：88)。
18.根据权利要求14所述的方法，其中通过以下方法进行染色体整合：
a)使用引物从质粒pCEV-G4-Km-TEF-AT-yABAB hAA6T83N-tagless(SEQ ID NO：90)扩增编码ABAB结合剂的多核苷酸序列以产生整合盒，所述引物含有(i)与选择的酵母染色体整合位点同源的核酸序列和(ii)与所述质粒的ABAB结合剂编码序列的5'和3'区域同源的核酸序列，
(b)在促进所述整合盒自发整合到双链断裂位点的条件下，将(a)中产生的所述整合盒用pCRI-Sb-δ1(SEQ ID NO：91)或pCRI-Sb-δ2(SEQ ID NO：92)转化酵母以诱导相应酵母染色体δ位点内的双链断裂，
(c)筛选(b)中的转化酵母以产生ABAB结合剂。
19.根据权利要求18所述的方法，其中使用免疫测定进行所述筛选。
20.一种治疗或预防受试者中由艰难梭菌诱发的疾病症状的方法，包括向患有艰难梭菌感染或发展艰难梭菌感染的风险的受试者施用治疗有效量的根据权利要求1-10中任一项所述的一种或多种酵母的工程菌株。
21.一种在艰难梭菌感染的受试者中中和艰难梭菌毒素TcdA和/或TcdB的方法，包括向患有艰难梭菌感染的受试者施用治疗有效量的根据权利要求1-10中任一项所述的一种或多种酵母的工程菌株。
22.一种在受试者中治疗或预防艰难梭菌感染的方法，包括向患有艰难梭菌感染或发展艰难梭菌感染的风险的受试者施用治疗有效量的根据权利要求1-10中任一项所述的一种或多种酵母的工程菌株。
23.一种在患有艰难梭菌感染的受试者中维持正常肠功能的方法，包括向患有艰难梭菌感染或发展艰难梭菌感染的风险的受试者施用治疗有效量的根据权利要求1-10中任一项所述的一种或多种酵母的工程菌株。
24.根据权利要求20-23中任一项所述的方法，其中所述酵母的工程菌株处于包括所述酵母的工程菌株和药学上可接受的载体或稀释剂的药物制剂中。
25.根据权利要求21所述的方法，其中所述中和是部分或完全中和。
26.根据权利要求22所述的方法，还包括向所述受试者施用治疗有效量的抗生素。
27.根据权利要求20-23中任一项所述的方法，其中所述酵母的工程菌株的治疗有效量在所述每个受试者体重的10ug/kg和100mg/kg之间。
28.根据权利要求20-23中任一项所述的方法，其中所述酵母属酵母是酿酒酵母或布拉酵母。
29.根据权利要求20-28中任一项所述的方法，其中所述酵母的工程菌株经口、鼻或直肠给予所述受试者。
30.根据权利要求20所述的方法，其中由艰难梭菌诱发的所述疾病症状是腹泻。
31.一种酵母属酵母的工程菌株，其产生包括至少一个VHH肽单体的VHH肽结合剂，其中每个VHH肽单体独立地对艰难梭菌毒素A(TcdA)或毒素B(TcdB)的独特表位具有结合特异性。
32.根据权利要求31所述的酵母属酵母的工程菌株，其中所述VHH肽结合剂包括两个连接的VHH肽单体。
33.根据权利要求31所述的酵母属酵母的工程菌株，其中所述VHH肽结合剂包括三个连接的VHH肽单体。
34.根据权利要求31所述的酵母属酵母的工程菌株，其中所述VHH肽结合剂包括四个连接的VHH肽单体。
35.根据权利要求34所述的酵母属酵母的工程菌株，其中两个所述VHH肽单体对TcdA的表位具有结合特异性，并且两个所述VHH肽单体对TcdB的表位具有结合特异性。
36.根据权利要求31-35中任一项所述的酵母属酵母的工程菌株，其中所述VHH肽单体选自5D(SEQ ID NO：1)、E3(SEQ ID NO：3)、AA6(SEQ ID NO：5)和AH3(SEQ ID NO：7)VHH肽单体组成的组或与其具有至少95％序列同一性的序列变体，并且其中所述序列变体保留TcdA和/或TcdB结合特异性，或所述序列变体保留毒素中和活性或保留两者。
37.根据权利要求32-35中任一项所述的酵母属酵母的工程菌株，其中所述VHH肽单体使用独立选自接头-1(SEQ ID NO：9)、接头-2(SEQ ID NO：11)和接头-3(SEQ ID NO：13)的接头连接。
38.根据权利要求37所述的酵母属酵母的工程菌株，其中所述序列变体的变体氨基酸位于所述VHH肽单体的构架区中。
39.根据权利要求31-38中任一项所述的酵母属酵母的工程菌株，其中所述酵母属酵母是酿酒酵母或布拉酵母。
40.一种治疗或预防受试者中由艰难梭菌诱发的疾病症状的方法，包括向患有艰难梭菌感染或发展艰难梭菌感染的风险的受试者施用治疗有效量的根据权利要求31-39中任一项所述的一种或多种酵母的工程菌株。
41.一种在艰难梭菌感染的受试者中中和艰难梭菌毒素TcdA和/或TcdB的方法，包括向患有艰难梭菌感染的受试者施用治疗有效量的根据权利要求31-39中任一项所述的一种或多种酵母的工程菌株。
42.一种在受试者中治疗或预防艰难梭菌感染的方法，包括向患有艰难梭菌感染或发展艰难梭菌感染的风险的受试者施用治疗有效量的根据权利要求31-39中任一项所述的一种或多种酵母的工程菌株。
43.一种在患有艰难梭菌感染的受试者中维持正常肠功能的方法，包括向患有艰难梭菌感染或发展艰难梭菌感染的风险的受试者施用治疗有效量的根据权利要求31-39中任一项所述的一种或多种酵母的工程菌株。
44.根据权利要求40-43中任一项所述的方法，其中所述酵母的工程菌株处于包括所述酵母的工程菌株和药学上可接受的载体或稀释剂的药物制剂中。
45.根据权利要求41所述的方法，其中所述中和是部分或完全中和。
46.根据权利要求42所述的方法，还包括向所述受试者施用治疗有效量的抗生素。
47.根据权利要求40-43中任一项所述的方法，其中所述酵母的工程菌株的治疗有效量在所述每个受试者体重的10ug/kg和100mg/kg之间。
48.根据权利要求40-43中任一项所述的方法，其中所述酵母属酵母是酿酒酵母或布拉酵母。
49.根据权利要求40-48中任一项所述的方法，其中所述酵母的工程菌株经口、鼻或直肠给予所述受试者。
50.根据权利要求40所述的方法，其中由艰难梭菌诱发的所述疾病症状是腹泻。
51.一种酵母属酵母的工程菌株，其产生对艰难梭菌毒素A(TcdA)或毒素B(TcdB)或两者的独特表位具有结合特异性的治疗性蛋白质。
52.根据权利要求51所述的酵母属酵母的工程菌株，其中所述酵母属酵母是酿酒酵母或布拉酵母。
53.根据权利要求51或52所述的酵母属酵母的工程菌株，其中所述治疗性蛋白质是抗体。
54.根据权利要求51或52所述的酵母属酵母的工程菌株，其中通过(a)用编码所述治疗性蛋白质的表达载体转化酵母属酵母菌株，和(b)筛选(a)的酵母以产生所述治疗性蛋白质来工程化所述酵母属酵母菌株。
55.根据权利要求51或52所述的酵母属酵母的工程菌株，其中通过(a)将编码所述治疗性蛋白质的多核苷酸序列染色体整合到所述酵母属酵母菌株基因组中，和(b)筛选(a)的酵母以产生所述治疗性蛋白质来工程化所述酵母属酵母菌菌株。
56.根据权利要求54或55所述的方法，其中使用免疫测定进行所述筛选。
57.一种治疗或预防受试者中由艰难梭菌诱发的疾病症状的方法，包括向患有艰难梭菌感染或发展艰难梭菌感染的风险的受试者施用治疗有效量的根据权利要求51所述的酵母的工程菌株。
58.一种在艰难梭菌感染的受试者中中和艰难梭菌毒素TcdA和/或TcdB的方法，包括向患有艰难梭菌感染的受试者施用治疗有效量的根据权利要求51所述的酵母的工程菌株。
59.一种在受试者中治疗或预防艰难梭菌感染的方法，包括向患有艰难梭菌感染或发展艰难梭菌感染的风险的受试者施用治疗有效量的根据权利要求51所述的酵母的工程菌株。
60.一种在患有艰难梭菌感染的受试者中维持正常肠功能的方法，包括向患有艰难梭菌感染或发展艰难梭菌感染的风险的受试者施用治疗有效量的根据权利要求51所述的酵母的工程菌株。
61.根据权利要求57-60中任一项所述的方法，其中所述酵母的工程菌株处于包括所述酵母的工程菌株和药学上可接受的载体或稀释剂的药物制剂中。
62.根据权利要求58所述的方法，其中所述中和是部分或完全中和。
63.根据权利要求59所述的方法，还包括向所述受试者施用治疗有效量的抗生素。
64.根据权利要求57-60中任一项所述的方法，其中所述酵母的工程菌株的治疗有效量在所述每个受试者体重的10ug/kg和100mg/kg之间。
65.根据权利要求57-60中任一项所述的方法，其中所述酵母属酵母是酿酒酵母或布拉酵母。
66.根据权利要求57-60中任一项所述的方法，其中所述酵母的工程菌株经口、鼻或直肠给予所述受试者。
67.根据权利要求57所述的方法，其中由艰难梭菌诱发的所述疾病症状是腹泻。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113651891A (zh) * 2021-08-02 2021-11-16 苏州天梯生物医药有限公司 双特性抗体在制备治疗先天性α-肌营养不良症药物中的应用
CN114341165A (zh) * 2019-07-03 2022-04-12 鲁门生物科学股份有限公司 钝顶节旋藻非胃肠外治疗递送平台

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP6640232B2 (ja) 2015-02-06 2020-02-05 ユニバーシティ オブ メリーランド，ボルチモア クロストリジウム・ディフィシル感染症の治療のための、クロストリジウム・ディフィシルのトキシンａ及びトキシンｂに対する四重特異性の八量体型結合剤及び抗体
US11129906B1 (en) 2016-12-07 2021-09-28 David Gordon Bermudes Chimeric protein toxins for expression by therapeutic bacteria
WO2019082138A1 (en) * 2017-10-27 2019-05-02 Lorven Biologics Private Limited PROCESS FOR THE PREPARATION OF LIRAGLUTIDE USING RECOMBINANT SACCHAROMYCES CEREVISIAE
US20200337336A1 (en) * 2018-01-18 2020-10-29 Pando Nutrition Inc. Recombinant yeast as animal feed
JP2022502081A (ja) * 2018-09-20 2022-01-11 ワシントン・ユニバーシティWashington University 遺伝子操作された微生物ならびにそれを作製および使用する方法
US20220235120A1 (en) * 2019-06-03 2022-07-28 University Of Maryland, Baltimore Humanized tetra-specific octavalent antibody against clostridium difficile toxin a and b
CN112680370A (zh) * 2021-03-16 2021-04-20 广东海天创新技术有限公司 一株高核酸酿酒酵母及其应用
EP4351731A2 (en) * 2021-06-11 2024-04-17 Fzata, Inc. Genetically-modified saccharomyces yeast strains as preventative and therapeutic agents

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20130058962A1 (en) * 2007-02-20 2013-03-07 Tufts University Methods, compositions and kits for treating a subject using a recombinant heteromultimeric neutralizing binding protein
US20140294826A1 (en) * 2007-02-20 2014-10-02 Tufts University Methods and compositions with a recombinant neutralizing binding protein for treating toxin exposure
WO2016127104A2 (en) * 2015-02-06 2016-08-11 University Of Maryland, Baltimore Tetra-specific, octameric binding agents and antibodies against clostridium difficile toxin a and toxin b for treatment of c. difficile infection

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5420242A (en) * 1986-10-22 1995-05-30 Kaare M. Gautvik Production of human parathyroid hormone from microorganisms
AUPO591797A0 (en) 1997-03-27 1997-04-24 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation High avidity polyvalent and polyspecific reagents
US20100272698A1 (en) 2009-02-23 2010-10-28 Lubomira Stateva Yeasts
MX2011014040A (es) * 2009-06-19 2012-06-01 Medimmune Llc Variantes de la proteasa.
WO2015100409A2 (en) * 2013-12-26 2015-07-02 Tufts University Methods, compositions and kits for treating a subject using a recombinant neutralizing binding protein

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20130058962A1 (en) * 2007-02-20 2013-03-07 Tufts University Methods, compositions and kits for treating a subject using a recombinant heteromultimeric neutralizing binding protein
US20140294826A1 (en) * 2007-02-20 2014-10-02 Tufts University Methods and compositions with a recombinant neutralizing binding protein for treating toxin exposure
WO2016127104A2 (en) * 2015-02-06 2016-08-11 University Of Maryland, Baltimore Tetra-specific, octameric binding agents and antibodies against clostridium difficile toxin a and toxin b for treatment of c. difficile infection

Non-Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DIANE J SCHMIDT等: "A Tetraspecific VHH-Based Neutralizing Antibody Modifies Disease Outcome in Three Animal Models of Clostridium difficile Infection", 《CLIN VACCINE IMMUNOL》 *
LIU JL等: "Single domain antibody-alkaline phosphatase fusion proteins for antigen detection - Analysis of affinity and thermal stability of single domain antibody", 《JOURNAL OF IMMUNOLOGICAL METHODS》 *
PALMA ML等: "Probiotic Saccharomyces cerevisiae strains as biotherapeutic tools: is there room for improvement?", 《APPLIED MICROBIOLOGY AND BIOTECHNOLOGY》 *
SPIESS C等: "Alternative molecular formats and therapeutic applications for bispecific antibodies", 《MOLECULAR IMMUNOLOGY》 *
VONHEIJNE G等: "SPECIES-SPECIFIC VARIATION IN SIGNAL PEPTIDE DESIGN - IMPLICATIONS FOR PROTEIN SECRETION IN FOREIGN HOSTS", 《FEBS LETTERS》 *
YANG XQ等: "The protective effect of recombinant Lactococcus lactis oral vaccine on a Clostridium difficile-infected animal model", 《BMC GASTROENTEROLOGY》 *
YANG ZY等: "A Novel Multivalent, Single-Domain Antibody Targeting TcdA and TcdB Prevents Fulminant Clostridium difficile Infection in Mice", 《JOURNAL OF INFECTIOUS DISEASES》 *
冯汉平: "多特异性单结构域抗体治疗艰难梭状芽孢杆菌感染", 《抗体研发与人类健康——2013第五届国际抗体大会论文集》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114341165A (zh) * 2019-07-03 2022-04-12 鲁门生物科学股份有限公司 钝顶节旋藻非胃肠外治疗递送平台
CN113651891A (zh) * 2021-08-02 2021-11-16 苏州天梯生物医药有限公司 双特性抗体在制备治疗先天性α-肌营养不良症药物中的应用
CN113651891B (zh) * 2021-08-02 2023-08-04 苏州天梯生物医药有限公司 双特性抗体在制备治疗先天性α-肌营养不良症药物中的应用

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