CN108485979A - 一种青贮饲料专用细菌冻干保护剂 - Google Patents

一种青贮饲料专用细菌冻干保护剂 Download PDF

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CN108485979A CN201810280306.5A CN201810280306A CN108485979A CN 108485979 A CN108485979 A CN 108485979A CN 201810280306 A CN201810280306 A CN 201810280306A CN 108485979 A CN108485979 A CN 108485979A
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张淼
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Abstract

本发明公开了一种青贮饲料专用细菌冻干保护剂，属于微生物助剂技术领域。本发明研制的青贮饲料专用细菌冻干保护剂是由多巴胺、苯甲酸抗坏血酸酯、磷脂、活化壳聚糖、尿素、芒硝和钙盐组成，在配置过程中，先将芒硝和钙盐混合后，于烘箱中干燥至恒重，得干燥混合盐，再向混料机中通入氮气，于氮气保护状态下，向混料机中依次加入多巴胺、苯甲酸抗坏血酸酯、磷脂、活化壳聚糖、尿素和干燥混合盐，搅拌混合均匀，出料，封装，即得青贮饲料专用细菌冻干保护剂。本发明所得青贮饲料专用细菌冻干保护剂具有优异的保护效果。

Description

一种青贮饲料专用细菌冻干保护剂
技术领域
本发明公开了一种青贮饲料专用细菌冻干保护剂，属于微生物助剂技术领域。
背景技术
青贮饲料的质量直接影响反刍动物的生产性能，而青贮饲料所用乳酸菌对其质量起决定性作用，目前在青贮饲料用直投式乳酸菌发酵剂的研究与应用方面十分薄弱。乳酸菌直投式发酵剂的制备通常采用真空冷冻干燥技术，它具有活菌数高、菌体细胞活力强、不易被污染和易于运输保藏等优点。在冻干过程中部分菌体细胞会受损甚至死亡，其死亡率将达90%以上，使菌体细胞的发酵活力下降，冻干保护剂可有效减少菌体所受伤害。
目前的冻干保护剂主要有脱脂乳、海藻糖、三聚磷酸钾和抗坏血酸作为保护剂，主要原因包括如下几点。脱脂乳不管单独使用还是与其他冻干保护剂混合使用均具有良好的保护作用，它在冻干过程中能使溶液呈过冷状态，抑制细胞内蛋白质的变性失活，维持细胞内稳态以降低细胞死亡率，另外，它含有大量的蛋白质，能够减少细胞暴露于氧气和介质中的表面积，给细胞提供了保护性的外衣，减少细胞壁损伤。海藻糖在冻干过程中能扩散至胞内并填充在胞内酶和其他蛋白质等活性大分子周围，当细胞失水时，海藻糖的羟基可与胞内的生物活性大分子的极性基团形成氢键，代替极性基团周围失去的水分子，从而维持胞内蛋白质分子的稳定性。抗坏血酸的羟基能够与乳酸菌菌体细胞壁中磷脂分子的磷酸基团之间形成氢键，从而抑制细胞膜因失水而受损。三聚磷酸钾能够在胞内液中结合水分子，发生水合作用，使胞内液的粘性增加，从而在冻干过程中弱化了水的结晶过程，降低了体系中水转化成冰的比例，使其直接进入升华阶段。针对目前传统的冻干保护剂存在的保护效果不佳的问题，还需对其进行研究。
发明内容
本发明主要解决的技术问题是：针对传统冻干保护剂保护效果不佳的问题，提供了一种青贮饲料专用细菌冻干保护剂。
为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：
一种青贮饲料专用细菌冻干保护剂，是由以下重量份数的原料组成：
多巴胺 30～40份
苯甲酸抗坏血酸酯 10～15份
磷脂 8～10份
活化壳聚糖 8～10份
尿素 2～4份
芒硝 3～5份
钙盐 0.1～0.2份
所述青贮饲料专用细菌冻干保护剂的配置过程为：
（1）按原料组成称量各组分；
（2）将芒硝和钙盐混合后，于烘箱中干燥至恒重，得干燥混合盐；
（3）向混料机中通入氮气，于氮气保护状态下，向混料机中依次加入多巴胺、苯甲酸抗坏血酸酯、磷脂、活化壳聚糖、尿素和干燥混合盐，搅拌混合均匀，出料，封装，即得青贮饲料专用细菌冻干保护剂。
所述苯甲酸抗坏血酸酯制备过程为：将苯甲酰氯和L-抗坏血酸按质量比为0.6：1～0.8：1混合后，于氮气保护状态下加热搅拌反应，再经真空干燥，得苯甲酸抗坏血酸酯。
所述磷脂为大豆磷脂、蛋黄磷脂或牛奶磷脂中的任意一种。
所述活化壳聚糖活化过程为：将壳聚糖和水按质量比为1：50～1：60混合溶胀后，加热搅拌溶解，待冷却后，加入壳聚糖酶，恒温搅拌酶解3～5h后，灭酶，浓缩和干燥，得活化壳聚糖。
所述钙盐为二水石膏或半水石膏中的任意一种。
本发明的有益效果是：
（1）本发明通过添加多巴胺，在使用过程中，多巴胺可在尿素提供的弱碱性环境下，与水中溶解氧发生反应，从而在细菌表面形成保护层，减少细菌细胞和空气以及其它介质的接触几率，减少细菌在加工和储存过程中的损伤，提高存活率；另外，本发明还添加了微溶性的钙盐，在使用过程中，部分钙盐电离使体系中产生钙离子，钙离子的存在可改变细菌细胞膜的通透性，从而有利于活化后的壳聚糖分子以及部分多巴胺等成分渗透进入细菌细胞内部，并填充于细菌胞内酶和其他活性大分子及细胞器周围，在冻干过程中，当细胞失水时，壳聚糖及多巴胺分子结构中的氨基、羟基等极性基团可与胞内酶和大分子中极性基团形成氢键，代替极性基团周围失去的水分子，从而维持细菌细胞内活性大分子、酶及细胞器的稳定，从而使细菌存活率得到有效提高；
（2）本发明通过添加芒硝和钙盐等无机物，两者在冻干过程中，在低温环境下可将体系中少量游离水吸收后，转变为结晶水，避免过量游离水结冰而引起细菌失活，在后期结晶水同样可以挥发，不会对产品的干燥造成不良影响，同时，芒硝和钙盐的采用，在饲料中被动物食用后，可改善动物的消化系统的消化功能，有利于动物的生长发育，另外，本申请还添加有苯甲酸抗坏血酸酯，苯甲酸抗坏血酸酯分子结构中具有芳香结构，在使用过程中，通过分子中的π键，更容易在微生物细胞壁表面吸附，且由于分子中羟基的作用，可与微生物中大分子极性基团形成氢键，对细胞中活性大分子起到保护作用，再者，抗坏血酸经改性后，抗坏血酸的还原性得以保留，避免氧气对细菌的伤害，同时，改性后，其分子结构既有亲水性又有亲油性，亲水基团和细菌中极性基团形成氢键，而亲油基团暴露于表面，从而降低了细菌冻干后的吸湿性，有利于细菌冻干后的长期保存；
（3）本发明中，多巴胺、苯甲酸抗坏血酸酯、磷脂、壳聚糖、尿素、芒硝以及钙盐等个原料皆可作为饲料中的有益添加剂，被动物食用后，可有效调节动物生理机能，有利于动物的生长发育。
具体实施方式
按质量比为0.6：1～0.8：1将苯甲酰氯和L-抗坏血酸混合倒入三口烧瓶中，并将三口烧瓶移入数显测速恒温磁力搅拌器，以60～80mL/min速率向三口烧瓶中通入氮气，于氮气保护状态下，于温度为40～48℃，转速为300～500r/min条件下，恒温搅拌反应3～5h，出料，再经真空干燥至恒重，得苯甲酸抗坏血酸酯；将壳聚糖和水按质量比为1：50～1：60混合倒入烧杯中，用玻璃棒搅拌混合10～15min后，于室温条件下静置溶胀8～12h，待溶胀结束后，于温度为90～95℃，转速为600～800r/min条件下，加热搅拌溶解45～60min，再经自然冷却至室温后，向烧杯中加入壳聚糖质量3～5%的壳聚糖酶，随后于温度为30～35℃，转速为200～400r/min条件下，恒温搅拌酶解3～5h后，升温至85～90℃，保温灭酶10～15min，待灭酶结束，将烧杯中物料转入旋转蒸发仪，于压力为500～550kPa，温度为75～85℃条件下，旋蒸浓缩30～45min，得浓缩液，再将所得浓缩液移入烘箱中，于温度为105～110℃条件下干燥至恒重，得干燥料，并将所得干燥料用研钵研磨成粉，得活化壳聚糖；按重量份数计，依次取30～40份多巴胺，10～15份苯甲酸抗坏血酸酯，8～10份磷脂，8～10份活化壳聚糖，2～4份尿素，3～5份芒硝，0.1～0.2份钙盐，先将芒硝和钙盐混合后置于烘箱中，于温度为105～120℃条件下，干燥至恒重，得干燥混合盐；随后以600～800mL/min速率向混料机中通入干燥的氮气，于氮气保护状态下，向混料机中依次加入多巴胺，苯甲酸抗坏血酸酯、磷脂、活化壳聚糖、尿素和干燥混合盐，以300～500r/min转速搅拌混合4～5h后，出料，封装，即得青贮饲料专用细菌冻干保护剂。所述磷脂为大豆磷脂、蛋黄磷脂或牛奶磷脂中的任意一种。所述钙盐为二水石膏或半水石膏中的任意一种。
实例1
按质量比为0.8：1将苯甲酰氯和L-抗坏血酸混合倒入三口烧瓶中，并将三口烧瓶移入数显测速恒温磁力搅拌器，以80mL/min速率向三口烧瓶中通入氮气，于氮气保护状态下，于温度为48℃，转速为500r/min条件下，恒温搅拌反应5h，出料，再经真空干燥至恒重，得苯甲酸抗坏血酸酯；将壳聚糖和水按质量比为1：60混合倒入烧杯中，用玻璃棒搅拌混合15min后，于室温条件下静置溶胀12h，待溶胀结束后，于温度为95℃，转速为800r/min条件下，加热搅拌溶解60min，再经自然冷却至室温后，向烧杯中加入壳聚糖质量5%的壳聚糖酶，随后于温度为35℃，转速为400r/min条件下，恒温搅拌酶解5h后，升温至90℃，保温灭酶15min，待灭酶结束，将烧杯中物料转入旋转蒸发仪，于压力为550kPa，温度为85℃条件下，旋蒸浓缩45min，得浓缩液，再将所得浓缩液移入烘箱中，于温度为110℃条件下干燥至恒重，得干燥料，并将所得干燥料用研钵研磨成粉，得活化壳聚糖；按重量份数计，依次取40份多巴胺，15份苯甲酸抗坏血酸酯，10份磷脂，10份活化壳聚糖，4份尿素，5份芒硝，0.2份钙盐，先将芒硝和钙盐混合后置于烘箱中，于温度为120℃条件下，干燥至恒重，得干燥混合盐；随后以800mL/min速率向混料机中通入干燥的氮气，于氮气保护状态下，向混料机中依次加入多巴胺，苯甲酸抗坏血酸酯、磷脂、活化壳聚糖、尿素和干燥混合盐，以500r/min转速搅拌混合5h后，出料，封装，即得青贮饲料专用细菌冻干保护剂。所述磷脂为大豆磷脂。所述钙盐为二水石膏。
实例2
按质量比为0.8：1将苯甲酰氯和L-抗坏血酸混合倒入三口烧瓶中，并将三口烧瓶移入数显测速恒温磁力搅拌器，以80mL/min速率向三口烧瓶中通入氮气，于氮气保护状态下，于温度为48℃，转速为500r/min条件下，恒温搅拌反应5h，出料，再经真空干燥至恒重，得苯甲酸抗坏血酸酯；将壳聚糖和水按质量比为1：60混合倒入烧杯中，用玻璃棒搅拌混合15min后，于室温条件下静置溶胀12h，待溶胀结束后，于温度为95℃，转速为800r/min条件下，加热搅拌溶解60min，再经自然冷却至室温后，向烧杯中加入壳聚糖质量5%的壳聚糖酶，随后于温度为35℃，转速为400r/min条件下，恒温搅拌酶解5h后，升温至90℃，保温灭酶15min，待灭酶结束，将烧杯中物料转入旋转蒸发仪，于压力为550kPa，温度为85℃条件下，旋蒸浓缩45min，得浓缩液，再将所得浓缩液移入烘箱中，于温度为110℃条件下干燥至恒重，得干燥料，并将所得干燥料用研钵研磨成粉，得活化壳聚糖；按重量份数计，依次取15份苯甲酸抗坏血酸酯，10份磷脂，10份活化壳聚糖，4份尿素，5份芒硝，0.2份钙盐，先将芒硝和钙盐混合后置于烘箱中，于温度为120℃条件下，干燥至恒重，得干燥混合盐；随后以800mL/min速率向混料机中通入干燥的氮气，于氮气保护状态下，向混料机中依次加入苯甲酸抗坏血酸酯、磷脂、活化壳聚糖、尿素和干燥混合盐，以500r/min转速搅拌混合5h后，出料，封装，即得青贮饲料专用细菌冻干保护剂。所述磷脂为大豆磷脂。所述钙盐为二水石膏。
实例3
将壳聚糖和水按质量比为1：60混合倒入烧杯中，用玻璃棒搅拌混合15min后，于室温条件下静置溶胀12h，待溶胀结束后，于温度为95℃，转速为800r/min条件下，加热搅拌溶解60min，再经自然冷却至室温后，向烧杯中加入壳聚糖质量5%的壳聚糖酶，随后于温度为35℃，转速为400r/min条件下，恒温搅拌酶解5h后，升温至90℃，保温灭酶15min，待灭酶结束，将烧杯中物料转入旋转蒸发仪，于压力为550kPa，温度为85℃条件下，旋蒸浓缩45min，得浓缩液，再将所得浓缩液移入烘箱中，于温度为110℃条件下干燥至恒重，得干燥料，并将所得干燥料用研钵研磨成粉，得活化壳聚糖；按重量份数计，依次取40份多巴胺，10份磷脂，10份活化壳聚糖，4份尿素，5份芒硝，0.2份钙盐，先将芒硝和钙盐混合后置于烘箱中，于温度为120℃条件下，干燥至恒重，得干燥混合盐；随后以800mL/min速率向混料机中通入干燥的氮气，于氮气保护状态下，向混料机中依次加入多巴胺，磷脂、活化壳聚糖、尿素和干燥混合盐，以500r/min转速搅拌混合5h后，出料，封装，即得青贮饲料专用细菌冻干保护剂。所述磷脂为大豆磷脂。所述钙盐为二水石膏。
实例4
按质量比为0.8：1将苯甲酰氯和L-抗坏血酸混合倒入三口烧瓶中，并将三口烧瓶移入数显测速恒温磁力搅拌器，以80mL/min速率向三口烧瓶中通入氮气，于氮气保护状态下，于温度为48℃，转速为500r/min条件下，恒温搅拌反应5h，出料，再经真空干燥至恒重，得苯甲酸抗坏血酸酯；将壳聚糖和水按质量比为1：60混合倒入烧杯中，用玻璃棒搅拌混合15min后，于室温条件下静置溶胀12h，待溶胀结束后，于温度为95℃，转速为800r/min条件下，加热搅拌溶解60min，再经自然冷却至室温后，向烧杯中加入壳聚糖质量5%的壳聚糖酶，随后于温度为35℃，转速为400r/min条件下，恒温搅拌酶解5h后，升温至90℃，保温灭酶15min，待灭酶结束，将烧杯中物料转入旋转蒸发仪，于压力为550kPa，温度为85℃条件下，旋蒸浓缩45min，得浓缩液，再将所得浓缩液移入烘箱中，于温度为110℃条件下干燥至恒重，得干燥料，并将所得干燥料用研钵研磨成粉，得活化壳聚糖；按重量份数计，依次取40份多巴胺，15份苯甲酸抗坏血酸酯，10份活化壳聚糖，4份尿素，5份芒硝，0.2份钙盐，先将芒硝和钙盐混合后置于烘箱中，于温度为120℃条件下，干燥至恒重，得干燥混合盐；随后以800mL/min速率向混料机中通入干燥的氮气，于氮气保护状态下，向混料机中依次加入多巴胺，苯甲酸抗坏血酸酯、活化壳聚糖、尿素和干燥混合盐，以500r/min转速搅拌混合5h后，出料，封装，即得青贮饲料专用细菌冻干保护剂。所述钙盐为二水石膏。
实例5
按质量比为0.8：1将苯甲酰氯和L-抗坏血酸混合倒入三口烧瓶中，并将三口烧瓶移入数显测速恒温磁力搅拌器，以80mL/min速率向三口烧瓶中通入氮气，于氮气保护状态下，于温度为48℃，转速为500r/min条件下，恒温搅拌反应5h，出料，再经真空干燥至恒重，得苯甲酸抗坏血酸酯；按重量份数计，依次取40份多巴胺，15份苯甲酸抗坏血酸酯，10份磷脂，10份壳聚糖，4份尿素，5份芒硝，0.2份钙盐，先将芒硝和钙盐混合后置于烘箱中，于温度为120℃条件下，干燥至恒重，得干燥混合盐；随后以800mL/min速率向混料机中通入干燥的氮气，于氮气保护状态下，向混料机中依次加入多巴胺，苯甲酸抗坏血酸酯、磷脂、尿素和干燥混合盐，以500r/min转速搅拌混合5h后，出料，封装，即得青贮饲料专用细菌冻干保护剂。所述磷脂为大豆磷脂。所述钙盐为二水石膏。
实例6
按质量比为0.8：1将苯甲酰氯和L-抗坏血酸混合倒入三口烧瓶中，并将三口烧瓶移入数显测速恒温磁力搅拌器，以80mL/min速率向三口烧瓶中通入氮气，于氮气保护状态下，于温度为48℃，转速为500r/min条件下，恒温搅拌反应5h，出料，再经真空干燥至恒重，得苯甲酸抗坏血酸酯；按重量份数计，依次取40份多巴胺，15份苯甲酸抗坏血酸酯，10份磷脂，4份尿素，5份芒硝，0.2份钙盐，先将芒硝和钙盐混合后置于烘箱中，于温度为120℃条件下，干燥至恒重，得干燥混合盐；随后以800mL/min速率向混料机中通入干燥的氮气，于氮气保护状态下，向混料机中依次加入多巴胺，苯甲酸抗坏血酸酯、磷脂、尿素和干燥混合盐，以500r/min转速搅拌混合5h后，出料，封装，即得青贮饲料专用细菌冻干保护剂。所述磷脂为大豆磷脂。所述钙盐为二水石膏。
实例7
按质量比为0.8：1将苯甲酰氯和L-抗坏血酸混合倒入三口烧瓶中，并将三口烧瓶移入数显测速恒温磁力搅拌器，以80mL/min速率向三口烧瓶中通入氮气，于氮气保护状态下，于温度为48℃，转速为500r/min条件下，恒温搅拌反应5h，出料，再经真空干燥至恒重，得苯甲酸抗坏血酸酯；将壳聚糖和水按质量比为1：60混合倒入烧杯中，用玻璃棒搅拌混合15min后，于室温条件下静置溶胀12h，待溶胀结束后，于温度为95℃，转速为800r/min条件下，加热搅拌溶解60min，再经自然冷却至室温后，向烧杯中加入壳聚糖质量5%的壳聚糖酶，随后于温度为35℃，转速为400r/min条件下，恒温搅拌酶解5h后，升温至90℃，保温灭酶15min，待灭酶结束，将烧杯中物料转入旋转蒸发仪，于压力为550kPa，温度为85℃条件下，旋蒸浓缩45min，得浓缩液，再将所得浓缩液移入烘箱中，于温度为110℃条件下干燥至恒重，得干燥料，并将所得干燥料用研钵研磨成粉，得活化壳聚糖；按重量份数计，依次取40份多巴胺，15份苯甲酸抗坏血酸酯，10份磷脂，10份活化壳聚糖，5份芒硝，0.2份钙盐，先将芒硝和钙盐混合后置于烘箱中，于温度为120℃条件下，干燥至恒重，得干燥混合盐；随后以800mL/min速率向混料机中通入干燥的氮气，于氮气保护状态下，向混料机中依次加入多巴胺，苯甲酸抗坏血酸酯、磷脂、活化壳聚糖和干燥混合盐，以500r/min转速搅拌混合5h后，出料，封装，即得青贮饲料专用细菌冻干保护剂。所述磷脂为大豆磷脂。所述钙盐为二水石膏。
实例8
按质量比为0.8：1将苯甲酰氯和L-抗坏血酸混合倒入三口烧瓶中，并将三口烧瓶移入数显测速恒温磁力搅拌器，以80mL/min速率向三口烧瓶中通入氮气，于氮气保护状态下，于温度为48℃，转速为500r/min条件下，恒温搅拌反应5h，出料，再经真空干燥至恒重，得苯甲酸抗坏血酸酯；将壳聚糖和水按质量比为1：60混合倒入烧杯中，用玻璃棒搅拌混合15min后，于室温条件下静置溶胀12h，待溶胀结束后，于温度为95℃，转速为800r/min条件下，加热搅拌溶解60min，再经自然冷却至室温后，向烧杯中加入壳聚糖质量5%的壳聚糖酶，随后于温度为35℃，转速为400r/min条件下，恒温搅拌酶解5h后，升温至90℃，保温灭酶15min，待灭酶结束，将烧杯中物料转入旋转蒸发仪，于压力为550kPa，温度为85℃条件下，旋蒸浓缩45min，得浓缩液，再将所得浓缩液移入烘箱中，于温度为110℃条件下干燥至恒重，得干燥料，并将所得干燥料用研钵研磨成粉，得活化壳聚糖；按重量份数计，依次取40份多巴胺，15份苯甲酸抗坏血酸酯，10份磷脂，10份活化壳聚糖，4份尿素，0.2份钙盐，先将钙盐置于烘箱中，于温度为120℃条件下，干燥至恒重，得干燥混合盐；随后以800mL/min速率向混料机中通入干燥的氮气，于氮气保护状态下，向混料机中依次加入多巴胺，苯甲酸抗坏血酸酯、磷脂、活化壳聚糖、尿素和干燥混合盐，以500r/min转速搅拌混合5h后，出料，封装，即得青贮饲料专用细菌冻干保护剂。所述磷脂为大豆磷脂。所述钙盐为二水石膏。
实例9
按质量比为0.8：1将苯甲酰氯和L-抗坏血酸混合倒入三口烧瓶中，并将三口烧瓶移入数显测速恒温磁力搅拌器，以80mL/min速率向三口烧瓶中通入氮气，于氮气保护状态下，于温度为48℃，转速为500r/min条件下，恒温搅拌反应5h，出料，再经真空干燥至恒重，得苯甲酸抗坏血酸酯；将壳聚糖和水按质量比为1：60混合倒入烧杯中，用玻璃棒搅拌混合15min后，于室温条件下静置溶胀12h，待溶胀结束后，于温度为95℃，转速为800r/min条件下，加热搅拌溶解60min，再经自然冷却至室温后，向烧杯中加入壳聚糖质量5%的壳聚糖酶，随后于温度为35℃，转速为400r/min条件下，恒温搅拌酶解5h后，升温至90℃，保温灭酶15min，待灭酶结束，将烧杯中物料转入旋转蒸发仪，于压力为550kPa，温度为85℃条件下，旋蒸浓缩45min，得浓缩液，再将所得浓缩液移入烘箱中，于温度为110℃条件下干燥至恒重，得干燥料，并将所得干燥料用研钵研磨成粉，得活化壳聚糖；按重量份数计，依次取40份多巴胺，15份苯甲酸抗坏血酸酯，10份磷脂，10份活化壳聚糖，4份尿素，5份芒硝，先将芒硝置于烘箱中，于温度为120℃条件下，干燥至恒重，得干燥混合盐；随后以800mL/min速率向混料机中通入干燥的氮气，于氮气保护状态下，向混料机中依次加入多巴胺，苯甲酸抗坏血酸酯、磷脂、活化壳聚糖、尿素和干燥混合盐，以500r/min转速搅拌混合5h后，出料，封装，即得青贮饲料专用细菌冻干保护剂。所述磷脂为大豆磷脂。
对比例：上海某生物科技有限公司生产的冻干保护剂。
将实例1至9所得冻干保护剂和对比例产品进行性能检测，具体检测方法如下：
菌体的活化与培养：将实验室保存的植物乳杆菌Lp1接入到MRS液体培养基中，在37℃下培养，每24h传代一次，均按照体积分数为1.5%的接种量接种，活化两次。随后将活化后的菌液以体积分数为3%的接种量接种到100mL的MRS液体培养基中，在37℃下培养至稳定期初期（14h）后收集菌体。
浓缩发酵剂的制备和真空冷冻干燥：将植物乳杆菌Lp1的发酵液在4℃下，以6000g，离心20min，在无菌操作台中弃掉上清液，用灭菌生理盐水洗涤菌泥2次，随后用1/10原发酵液体积的灭菌生理盐水充分悬浮混合菌体，接着4℃离心收集菌体，弃去上清液，然后加入等体积的不同浓度的冻干保护剂后充分震荡，混匀菌悬液。将菌悬液样品放置在-80℃预冻12h后，放入真空冷冻干燥机中进行冻干，利用冻干后菌体细胞的存活率来比较上述冻干保护剂的效果。
菌体细胞存活率计算：采用梯度稀释平板活菌计数法，分别对冻干前的菌悬液样品和冻干后的样品进行活菌计数，其中冻干后的菌粉计数时，先向冻干菌粉中加入与冻干前等体积的灭菌生理盐水进行复水，随后将平板在37℃下培养48h后计活菌数，测定菌体细胞冻干存活率。
菌体细胞存活率=1mL冻干后样品中的活菌数/1mL冻干前样品中的活菌数×100%。
具体检测结果如表1所示：
表1：性能检测表
检测内容 实例1 实例2 实例3 实例4 实例5 实例6 实例7 实例8 实例9 对比例
细胞存活率/% 93.64 85.17 83.57 82.54 81.46 80.82 83.23 84.74 82.18 72.45
由表1检测结果可知，本发明所得青贮饲料专用细菌冻干保护剂具有优异的保护效果。

Claims (5)

1.一种青贮饲料专用细菌冻干保护剂，其特征在于，是由以下重量份数的原料组成：
多巴胺 30～40份
苯甲酸抗坏血酸酯 10～15份
磷脂 8～10份
活化壳聚糖 8～10份
尿素 2～4份
芒硝 3～5份
钙盐 0.1～0.2份
所述青贮饲料专用细菌冻干保护剂的配置过程为：
（1）按原料组成称量各组分；
（2）将芒硝和钙盐混合后，于烘箱中干燥至恒重，得干燥混合盐；
（3）向混料机中通入氮气，于氮气保护状态下，向混料机中依次加入多巴胺、苯甲酸抗坏血酸酯、磷脂、活化壳聚糖、尿素和干燥混合盐，搅拌混合均匀，出料，封装，即得青贮饲料专用细菌冻干保护剂。
2.根据权利要求1所述的一种青贮饲料专用细菌冻干保护剂，其特征在于：所述苯甲酸抗坏血酸酯制备过程为：将苯甲酰氯和L-抗坏血酸按质量比为0.6：1～0.8：1混合后，于氮气保护状态下加热搅拌反应，再经真空干燥，得苯甲酸抗坏血酸酯。
3.根据权利要求1所述的一种青贮饲料专用细菌冻干保护剂，其特征在于：所述磷脂为大豆磷脂、蛋黄磷脂或牛奶磷脂中的任意一种。
4.根据权利要求1所述的一种青贮饲料专用细菌冻干保护剂，其特征在于：所述活化壳聚糖活化过程为：将壳聚糖和水按质量比为1：50～1：60混合溶胀后，加热搅拌溶解，待冷却后，加入壳聚糖酶，恒温搅拌酶解3～5h后，灭酶，浓缩和干燥，得活化壳聚糖。
5.根据权利要求1所述的一种青贮饲料专用细菌冻干保护剂，其特征在于：所述钙盐为二水石膏或半水石膏中的任意一种。
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