CN108473571B - 结合人Fc受体的融合蛋白 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及结合人Fc‑受体的融合蛋白。融合蛋白最初作为单体产生，并且能够在感兴趣的靶位点组装成多聚体。本发明还涉及包含融合蛋白的治疗组合物，以及其在治疗疾病中的广泛应用。

Description

结合人Fc受体的融合蛋白
本发明涉及结合人Fc-受体的融合蛋白。融合蛋白最初作为单体产生，并且能够在感兴趣的靶位点组装成多聚体。本发明还涉及包含融合蛋白的治疗组合物，以及其在治疗疾病中的广泛应用。
背景
单克隆抗体(mAb)代表增长最快的医疗领域之一。它们现在已经成功地用于许多疾病的治疗，范围包括癌症到自身免疫。由于人口老龄化，这些疾病正在迅速增加，因此需要新的更有效的治疗手段。为了在基于单克隆抗体的治疗中保持这种增长，并提高其有效性，我们需要更好地了解单克隆抗体的作用机制，并开发新的技术和形式，其可进一步提高其天然治疗能力。
几乎所有的mAb都依赖于它们的Fc区来发挥与免疫系统的关键元件(最值得注意的是补体和免疫效应细胞)相互作用的功能。这种相互作用的关键是单克隆抗体Fc区和免疫受体分子(补体(C1)的第一组分和各种Fcγ受体(FcγR))之间的结构关系。但是，这些关系只被部分理解。
最近发现补体可以通过在细胞表面组装的IgG六聚体活化。观察到IgG抗体的Fc区段之间的特异性非共价相互作用导致抗原在细胞上结合后形成有序的抗体六聚体。六聚体招募和激活C1，触发补体级联。(Diebolder C.A.等人，Science 343,1260-1263，(2014)。
抗体疗法的进展主要集中在使mAb更有效。在效应子功能增强的情况下，这通常可导致具有更大副作用和剂量限制性毒性的耐受性较差的药物。因此，临床上仍然非常需要具有更好的安全性的改进的抗体疗法，其高效且强力，并且具有较少的不良副作用和低毒性。
因此，在本发明中，我们提供了与人Fc-受体结合的改进的融合蛋白。融合蛋白最初以单体形式产生，并且能够在感兴趣的靶位点组装成多聚体。融合蛋白可以用于设计一类新的抗体治疗剂，其作为相对惰性的单体施用，并且只有当它们到达感兴趣的靶位点的期望位置时才组装成高效多聚体。因此，融合蛋白可以提供具有更高安全性的改进的治疗组合物，其将增强的功效和效力与更少的不良副作用和低毒性相结合。
发明描述
除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的技术人员通常理解的相同的含义。本文提及的所有出版物和专利都通过引用并入本文。
将理解，可以组合本文描述的任何实施方案。
在本说明书中，除非另外指明，否则使用EU编号系统来指代抗体结构域中的残基。该系统最初由Edelman等人于1969年设计，并在Kabat等人，1987中有详细描述。
Edelman等人,1969；“The covalent structure of an entireγGimmunoglobulin molecule,”PNAS Biochemistry Vol.63pp78-85.
Kabat等人,1987；in Sequences of Proteins of Immunological Interest,USDepartment of Health and Human Services,NIH,USA.
在针对特定抗体同种型给出位置编号和/或氨基酸残基的情况下，如本领域技术人员已知的那样，其旨在适用于任何其它抗体同种型的对应位置和/或氨基酸残基。当提到来源于IgM或IgA的附属物(tailpiece)中的氨基酸残基时，根据本领域的常规实践，给出的位置编号是天然存在的IgM或IgA中残基的位置编号。
本发明提供了单体融合蛋白，其包含具有来源于IgG的两个重链Fc区的抗体Fc结构域；
其中一个或每个重链Fc区在其C-末端与抗体附属物融合；
其中附属物半胱氨酸残基被修饰以防止二硫键形成。
在一个实施方案中，附属物半胱氨酸残基被缺失、取代或被巯基封端剂封闭。
在一个实施方案中，本发明的融合蛋白进一步包含抗原结合区。抗原结合区可以包含任何合适的抗原结合结构域。在一个实例中，抗原结合区可以来自抗体并且可以例如包含VH和/或VL抗原结合结构域。在一个实施方案中，抗原结合区选自Fab，scFv，单结构域抗体(dAb)和DARPin。在一个实例中，单结构域抗体可以是VH，VL或VHH结构域。在一个实施方案中，抗原结合区与重链Fc区的N端融合。抗原结合区可以直接融合到重链Fc区的N端。或者其可以通过插入的氨基酸序列间接融合。例如，可以在融合伴侣和重链Fc区之间提供短肽接头或铰链序列。
在一个实施方案中，本发明的融合蛋白进一步包含融合伴侣。通常，术语“融合伴侣”是指抗原，病原体相关分子模式(PAMP)，药物，配体，受体，细胞因子或趋化因子。在一个实例中，“融合伴侣”不包括抗体或来源于抗体的可变结构域。在一个实施方案中，融合伴侣融合至重链Fc区的N端。融合伴侣可以直接融合到重链Fc区的N-末端。或者其可以通过插入的氨基酸序列间接融合。例如，可以在融合伴侣和重链Fc区之间提供短肽接头或铰链序列。
本发明的单体的抗体Fc结构域组分可以来源于任何合适的物种。在一个实施方案中，抗体Fc结构域来源于人Fc结构域。
抗体Fc结构域可以来源于任何合适类别的抗体，包括IgA(包括亚类IgA1和IgA2)，IgD，IgE，IgG(包括亚类IgG1，IgG2，IgG3和IgG4)和IgM。通常，抗体Fc结构域来源于IgG。在一个实施方案中，抗体Fc结构域来源于IgG1。在一个实施方案中，抗体Fc结构域来源于IgG2。在一个实施方案中，抗体Fc结构域来源于IgG3。在一个实施方案中，抗体Fc结构域来源于IgG4。
抗体Fc结构域包含两条单独的多肽链，各自称为重链Fc区。两个重链Fc区二聚化以产生抗体Fc结构域。虽然一起形成抗体Fc结构域的两个重链Fc区可以彼此不同，但应理解，这些通常彼此相同。
通常，每个重链Fc区包含两个或三个重链恒定结构域或由其组成。
在天然抗体中，IgA、IgD和IgG的重链Fc区由两个重链恒定结构域(CH2和CH3)组成，而IgE和IgM的Fc区由三个重链恒定结构域(CH2，CH3和CH4)组成。这些二聚化以产生抗体Fc结构域。
在本发明中，重链Fc区可以包含来自一种或多种不同类别(例如一种，两种或三种不同的类别)抗体的重链恒定结构域。
在一个实施方案中，重链Fc区包含来源于IgG1的CH2和CH3结构域。
在一个实施方案中，重链Fc区包含来源于IgG2的CH2和CH3结构域。
在一个实施方案中，重链Fc区包含来源于IgG3的CH2和CH3结构域。
在一个实施方案中，重链Fc区包含来源于IgG4的CH2和CH3结构域。
在我们先前的申请PCT/EP2015/054687中，我们公开了CH3结构域在包含抗体Fc结构域和附属物序列的融合蛋白的聚合中起重要作用。发现CH3结构域355位的氨基酸具有特别强的作用。
因此在一个实施方案中，重链Fc区包含来源于IgG1的CH3结构域。
在一个实施方案中，重链Fc区包含来源于IgG4的CH2结构域和来源于IgG1的CH3结构域。
在一个实施方案中，重链Fc区在355位包含精氨酸残基。
在一个实施方案中，重链Fc区包含来自IgM的CH4结构域。IgM CH4结构域通常位于CH3结构域和附属物之间。
在一个实施方案中，重链Fc区包含来源于IgG的CH2和CH3结构域和来源于IgM的CH4结构域。
将理解，用于产生本发明的重链Fc区的重链恒定结构域可以包括上述天然存在的恒定结构域的变体。与野生型恒定结构域相比，这种变体可以包含一个或多个氨基酸变异。在一个实例中，本发明的重链Fc区包含至少一个在序列上与野生型恒定结构域不同的恒定结构域。将理解，变体恒定结构域可以比野生型恒定结构域更长或更短。优选地，变体恒定结构域与野生型恒定结构域至少50％同一或相似。如本文所用，术语“同一性”表示在比对序列中的任何特定位置，氨基酸残基在序列之间是相同的。如本文所用，术语“相似性”表示在比对序列中的任何特定位置，氨基酸残基在序列之间是相似的类型。例如，可用亮氨酸取代异亮氨酸或缬氨酸。通常可彼此取代的其它氨基酸包括但不限于：
-苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸(具有芳香族侧链的氨基酸)；
-赖氨酸、精氨酸和组氨酸(具有碱性侧链的氨基酸)；
-天冬氨酸和谷氨酸(具有酸性侧链的氨基酸)；
-天冬酰胺和谷氨酰胺(具有酰胺侧链的氨基酸)；和
-半胱氨酸和甲硫氨酸(具有含硫侧链的氨基酸)。
可容易地计算同一性和相似性的程度(Computational Molecular Biology,Lesk,A.M.，编辑，Oxford University Press,New York,1988；Biocomputing.Informaticsand Genome Projects,Smith,D.W.，编辑，Academic Press,New York,1993；ComputerAnalysis of Sequence Data,Part 1,Griffin,A.M.和Griffin,H.G.，编辑，HumanaPress,New Jersey,1994；Sequence Analysis in Molecular Biology,von Heinje,G.,Academic Press,1987；和Sequence Analysis Primer,Gribskov,M.和Devereux,J.，编辑，M Stockton Press,New York,1991)。在一个实例中，变体恒定结构域与野生型恒定结构域具有至少60％同一性或相似性。在另一个实例中，变体恒定结构域具有至少70％同一性或相似性。在另一个实例中，变体恒定结构域具有至少80％同一性或相似性。在另一个实例中，变体恒定结构域具有至少90％同一性或相似性。在另一个实例中，变体恒定结构域具有至少95％同一性或相似性。
在本发明的融合蛋白中，一个或每个重链Fc区在其C-末端与抗体附属物融合，其中附属物半胱氨酸残基被修饰以防止二硫键形成。
本发明的抗体附属物可以来自任何合适的物种。抗体附属物是进化保守的，并且发现于大多数物种，包括原始物种，如硬骨鱼。在一个实施方案中，抗体附属物来源于人抗体。
在人中，IgM已整合J链时其以五聚体形式存在，或者当其不存在J链时，其以六聚体形式存在。IgA以单体和二聚体的形式存在。IgM和IgA的重链具有至C末端恒定结构域的18个氨基酸延伸(称为附属物(tailpiece))。该附属物天然地包括与多聚体的相邻重链形成二硫键的半胱氨酸残基，并且据信在多聚化中具有重要作用。所述附属物还含有糖基化位点。
在我们较早的申请PCT/EP2015/054687中，我们公开了包含来源于IgG的抗体Fc结构域和附属物的重组融合蛋白，其主要合成为六聚体。
本发明人意外地发现，附属物半胱氨酸残基的修饰导致具有非常不寻常的多聚化性质的融合蛋白。如图1所示，本发明的融合蛋白主要作为单体合成，并且能够在高浓度下组装成多聚体。融合蛋白可用于设计一类新的抗体治疗剂，其作为相对惰性的单体施用，并且只有当它们到达感兴趣的靶位点的期望位置时才组装成高度有效的多聚体。因此，融合蛋白可以提供具有更高安全性的改进的治疗组合物，其将增强的功效和效力与更少的不良副作用和低毒性相结合。
在一个实例中，本发明的单体经由Fc结构域和/或(当存在时)抗原结合区和/或融合伴侣被引导至感兴趣的靶位点。例如，本发明的单体可以包含抗原结合区，其可以结合细胞如肿瘤细胞或免疫细胞表面上表达的抗原，以使得单体至高度有效的多聚体的组装可在肿瘤细胞或免疫细胞表面上发生。合适的抗原的实例包括HER2/neu或CD20。
在本发明的融合蛋白中，附属物半胱氨酸残基被修饰以防止形成二硫键。半胱氨酸残基可以使用任何防止二硫键形成的合适方法进行修饰。
在一个实施方案中，附属物半胱氨酸残基是突变的。在一个实施方案中，附属物半胱氨酸残基被删除。在一个实施方案中，附属物半胱氨酸残基被另一个氨基酸残基取代。
在一个实施方案中，抗体附属物来源于人IgM或IgA，其中通常在IgM的575位或IgA的495位发现的附属物半胱氨酸残基已被缺失或被另一个氨基酸残基取代。
在一个实施方案中，通常在IgM的575位发现的附属物半胱氨酸残基被丝氨酸、苏氨酸或丙氨酸残基取代(C575S，C575T或C575A)。
在一个实施方案中，通常在IgA的495位发现的附属物半胱氨酸残基被丝氨酸、苏氨酸或丙氨酸残基取代(C495S，C495T或C495A)。
在一个实施方案中，附属物半胱氨酸残基用巯基封端剂封闭。巯基封端剂是与还原的半胱氨酸残基中的巯基反应从而防止其形成二硫键的化合物。合适的巯基封端剂的实例包括N-乙基马来酰亚胺，碘乙酸或碘乙酰胺。
在一个实施方案中，用于封闭附属物半胱氨酸残基的巯基封端剂与药物缀合。封端反应因此有效地在药物与靶蛋白中的半胱氨酸残基之间形成桥接，从而使药物与附属物缀合。
在一个实施方案中，附属物包含如表1中所示的来自人IgM或IgA的18个氨基酸的附属物序列的全部或部分，其中通常在IgM的575位或IgA的495位发现的半胱氨酸残基被缺失、取代或用巯基封端剂封闭。
附属物可直接融合至重链Fc区的C端。或者，其可以通过插入的氨基酸序列间接融合。例如，可以在附属物和重链Fc区之间提供短接头序列。
本发明的附属物可包括上述附属物序列的变体或片段。IgM或IgA附属物的变体通常具有与表1中显示的18个氨基酸位置中的8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个或17个位置中的所述序列同一的氨基酸序列。片段通常包含8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个或17个氨基酸。附属物可以是杂合IgM/IgA附属物。还设想了变体的片段。
表1 附属物序列
<u>附属物</u> <u>序列</u>
IgM PTLYNVSLVMSDTAGTCY SEQ ID NO:1
IgA PTHVNVSVVMAEVDGTCY SEQ ID NO:2
本发明的每一个重链Fc区可任选地在其N末端具有天然铰链区或经修饰的铰链区。
天然铰链区是通常发现于天然存在的抗体中Fab与Fc结构域之间的铰链区。经修饰的铰链区是在长度和/或组成上与天然铰链区相异的任何铰链。此类铰链可以包括来自其它物种的铰链区，诸如人、小鼠、大鼠、兔、鲨鱼、猪、仓鼠、骆驼、美洲驼(llama)或山羊的铰链区。其它经修饰的绞链区可包含来源于与所述重链Fc区的抗体种类或亚类不同的种类或亚类的抗体的铰链区。或者，所述经修饰的铰链区可包含天然铰链的部分或重复单元(其中所述重复中的每一个单元来源于天然铰链区)。在其它替代方案中，可通过将一个或多个半胱氨酸或其它残基转换成中性残基诸如丝氨酸或丙氨酸，或通过将适当地放置的残基转换成半胱氨酸残基来改变天然铰链区。通过此类方法，可增加或减少该铰链区中的半胱氨酸残基的数目。其它经修饰的铰链区可以是完全合成的，并且可被设计来具有所需的性质，诸如长度、半胱氨酸组成和柔性。
许多经修饰的铰链区早已在例如US5677425、WO9915549、WO2005003170、WO2005003169、WO2005003170、WO9825971和WO2005003171中进行了描述，并且这些通过引用并入本文。
合适的铰链序列的实例示于表2中。
在一个实施方案中，重链Fc区在其N末端具有完整铰链区。
在一个实施方案中，重链Fc区和铰链区来源于IgG4，并且铰链区包含突变序列CPPC(SEQ ID NO：11)。相较于含有序列CPPC的IgG1，人IgG4的核心铰链区天然地含有序列CPSC(SEQ ID NO：12)。存在于IgG4序列中的丝氨酸残基导致该区域中柔性增加，因此一定比例的分子在同一蛋白质链内形成二硫键(链内二硫化键)，而非桥连IgG分子中的另一重链以形成链间二硫化键。(Angal S.等，Mol Immunol,第30卷(1),p105-108,1993)。将丝氨酸残基改变成脯氨酸以产生与IgG1相同的核心序列允许完全形成IgG4铰链区中的链间二硫化键，从而减少在纯化的产物中的异质性。该改变的同种型被称为IgG4P。
表2.铰链序列
Figure BDA0001539711240000091
Figure BDA0001539711240000101
在一个实施方案中，本发明的单体融合蛋白包含图2中提供的氨基酸序列，任选地具有可选的铰链或附属物序列。
因此，在一个实例中，本发明提供了包含两条相同多肽链的单体融合蛋白，每条多肽链包含SEQ ID NO 26至37中任一个所给出的序列或由其组成。
在其中铰链可以与SEQ ID NO 26至37所给出的序列不同的一个实例中，本发明提供了包含两条相同多肽链的单体融合蛋白，每条多肽链包含SEQ ID NO 26至29中任一个的氨基酸6至222所给出的序列或SEQ ID NO 30或31的氨基酸6至333所给出的序列或SEQ IDNO 32至35中任一个的氨基酸6至221所给出的序列或SEQ ID NO 36或37的氨基酸6至332所给出的序列或由其组成。
在一个实施方案中，本发明的单体融合蛋白包含图3中提供的氨基酸序列。因此，在一个实例中，本发明提供了单体融合蛋白，其包含SEQ ID NO 38至69中任一个所给出的氨基酸序列或由其组成。
本发明的单体融合蛋白能够浓度依赖性组装成多聚体。多聚体可以包含2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个或更多个单体单元。这种多聚体也可以替代性地被称为二聚体，三聚体，四聚体，五聚体，六聚体，七聚体，八聚体，九聚体，十聚体，十一聚体，十二聚体等。在一个实例中，单体融合蛋白组装成六聚体。
因此，在一个实施方案中，本发明提供了包含本发明的单体融合蛋白和多聚体的混合物，所述多聚体包含两个或更多个单体单元。
在一个实施方案中，混合物包含本发明的单体融合蛋白和六聚体。
在一个实施方案中，混合物包含大于55％的单体，例如大于65％，大于75％，大于85％，大于90％或大于95％的单体。
在一个实施方案中，混合物富含单体形式的本发明的融合蛋白。在一个实例中，术语“富含”是指大于80％的本发明的融合蛋白以单体形式存在于混合物中，例如大于90％或大于95％。将理解，样品中单体的比例可以使用任何合适的方法如分析型尺寸排阻色谱来测定，如下文所述。
在一个实施方案中，使用稳定蛋白质的单体形式的组分来生产或配制本发明的单体融合蛋白。该组分可以提高混合物中单体对多聚体的比例，从而使蛋白质以单体形式存在的比例比其他情况下更高。合适组分的实例包括药物赋形剂，稀释剂或载体，其使得本发明的单体融合蛋白在施用之前能够以高浓度配制。
本发明的单体融合蛋白可以包含一个或多个改变蛋白质的功能特性(例如结合Fc-受体如白细胞受体，补体或FcRn)的突变。在我们先前的申请PCT/EP2015/054687中详细描述了改变蛋白质的功能特性的突变的例子。将理解，这些突变中的任何一种可以以任何合适的方式组合以实现所需的功能特性，和/或与其他突变组合以改变蛋白质的功能特性。
本发明还提供了编码本发明多肽链的分离的DNA序列或其组分部分。DNA序列可以包含例如通过化学处理产生的合成DNA，cDNA，基因组DNA或其任何组合。
编码本发明多肽链的DNA序列可以通过本领域技术人员熟知的方法获得。例如，编码部分或全部多肽链的DNA序列可根据需要从所测定的DNA序列或基于相应的氨基酸序列合成。
在一个实例中，本发明的单体融合蛋白由图3中提供的DNA序列编码。因此，在一个实例中，本发明提供了SEQ ID No 38至69中任一个给出的DNA序列。
分子生物学的标准技术可用于制备编码本发明多肽链的DNA序列。所需的DNA序列可以使用寡核苷酸合成技术完全或部分合成。可酌情使用定点诱变和聚合酶链式反应(PCR)技术。
本发明还涉及包含一个或多个本发明DNA序列的克隆或表达载体。因此，提供了包含一个或多个编码本发明多肽链的DNA序列或其组成部分的克隆或表达载体。
籍以构建载体的一般方法、转染方法和培养方法对于本领域技术人员来说是众所周知的。在这方面，参考“Current Protocols in Molecular Biology”,1999,F.M.Ausubel(编辑),Wiley Interscience,New York和由Cold Spring Harbor Publishing制作的Maniatis Manual。
还提供了包含含有编码本发明的单体融合蛋白的一个或多个DNA序列的一个或多个克隆载体或表达载体的宿主细胞。任何合适的宿主细胞/载体系统可用于表达编码本发明的单体融合蛋白的DNA序列。可使用细菌例如大肠杆菌(E.coli)和其它微生物系统诸如酿酒酵母(Saccharomyces)或毕赤酵母(Pichia)，或还可使用真核生物(例如哺乳动物)宿主细胞表达系统。合适的哺乳动物宿主细胞包括CHO细胞。用于本发明的中国仓鼠卵巢(CHO细胞)的合适类型可包括CHO和CHO-K1细胞，包括dhfr-CHO细胞，诸如CHO-DG44细胞和CHO-DXB11细胞(可将所述细胞与DHFR选择标记一起使用)，或CHOK1-SV细胞(可将所述细胞与谷氨酰胺合成酶选择标记一起使用)。其它合适的宿主细胞包括NSO细胞。
本发明还提供了用于产生根据本发明的单体融合蛋白的方法，所述方法包括在适合用于表达单体融合蛋白的条件下培养含有本发明的载体的宿主细胞，以及分离和任选地纯化单体融合蛋白。
本发明的单体融合蛋白以高水平从宿主细胞表达。因此，单体融合蛋白的性质有利于商业化加工。
本发明的单体融合蛋白使用任何合适的方法来产生。在一个实施方案中，可在使聚集降至最低的条件下产生本发明的单体融合蛋白。在一个实例中，可通过向培养基、培养上清液或纯化介质中添加防腐剂来使聚集降至最低。合适的防腐剂的实例包括乙二胺四乙酸(EDTA)，乙二醇四乙酸(EGTA)，或低于pH6.0的酸化。
在一个实施方案中，提供了用于纯化本发明的单体融合蛋白的方法，所述方法包括以下步骤：以非结合模式进行阴离子交换色谱，以便杂质保留在柱子上并且单体融合蛋白被洗脱。
在一个实施方案中，纯化使用在FcRn、FcγR或C反应蛋白柱上的亲和捕获。
在一个实施方案中，纯化使用蛋白A。
用于所述方法的合适的离子交换树脂包括Q.FF树脂(由GE-Healthcare提供)。可以例如在约8的pH下进行所述步骤。
所述方法还可包括例如在约4至5(诸如4.5)的pH下进行的应用阳离子交换色谱的初始捕获步骤。所述阳离子交换色谱可以例如应用树脂诸如CaptoS树脂或SP sepharoseFF(由GE-Healthcare提供)。随后可使用离子盐溶液诸如氯化钠(例如以200mM的浓度)从树脂洗脱单体融合蛋白。
适当时，色谱步骤可包括一个或多个洗涤步骤。
纯化方法还可包括一个或多个过滤步骤，诸如渗滤步骤。
可根据分子尺寸，例如通过尺寸排阻色谱纯化本发明的单体融合蛋白。
因此，在一个实施方案中，提供了以基本上纯的形式(特别地不含或基本上不含内毒素和/或宿主细胞蛋白或DNA)存在的根据本发明的纯化的单体融合蛋白。
如本文中使用的纯的形式旨在指至少90％的纯度，诸如91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％w/w或更纯。
基本上不含内毒素通常旨在指1EU/mg蛋白产物或更少诸如0.5或0.1EU/mg产物的内毒素含量。
基本上不含宿主细胞蛋白或DNA通常旨在指400μg/mg蛋白产物或更少，诸如100μg/mg产物或更少，特别地20μg/mg产物的宿主细胞蛋白和/或DNA含量。
由于本发明的单体融合蛋白在病理性病况的治疗和/或预防中是有用的，因此本发明还提供了包含与药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体的一种或多种组合的本发明的单体融合蛋白的药物或诊断组合物。
本发明还提供了用于制备药物或诊断组合物的方法，所述方法包括添加本发明的单体融合蛋白并将其与药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体的一种或多种混合在一起。
在一个实施方案中，药物组合物包含稳定蛋白质的单体形式或增加混合物中单体对多聚体的比例的组分。
单体融合蛋白可以是药物或诊断组合物中的唯一活性成分，或可伴有其它活性成分(包括抗体成分或非抗体成分诸如其它药物分子)。
药物组合物适当地包含治疗有效量的本发明的单体融合蛋白。如本文中所用，术语“治疗有效量”是指治疗、改善或预防被靶向的疾病或病况，或表现出可检测的治疗或预防效果所需的治疗剂的量。对于任何药，最初可在细胞培养测定中或在动物模型中(通常在啮齿类动物、兔、狗、猪或灵长类动物中)评估治疗有效量。还可使用动物模型来测定适当的施用浓度范围和途径。随后使用这样的信息来决定用于在人中施用的有用剂量和途径。
用于人受试者的精确的治疗有效量将取决于疾病状态的严重度、受试者的一般健康、受试者的年龄、体重和性别、饮食、施用时间和频率、药物组合、反应敏感性和对疗法的耐受性/响应。该量可通过常规实验来测定并且在临床医生的判断内。一般地，治疗有效量会是0.01mg/kg至500mg/kg，例如0.1mg/kg至200mg/kg，诸如100mg/kg。可方便地以含有每剂量预定量的本发明的单体融合蛋白的单位剂量形式提供药物组合物。
可单独地向患者施用组合物，或可将其与其它药剂、药物或激素组合(例如，同时地、相继地或分开地)施用。
施用本发明的单体融合蛋白的剂量取决于待治疗的病况的性质、现有疾病的程度，以及取决于单体融合蛋白是被预防性使用还是用于治疗现有病况。
剂量的频率将取决于单体融合蛋白的半寿期和其作用的持续时间。如果单体融合蛋白具有短的半寿期(例如2至10小时)，则可能必需提供每日一个或多个剂量。或者，如果单体融合蛋白长的半寿期(例如2至15天)和/或长效药效学效应，则可只需提供每日一次、每周一次或甚至每1或2个月一次的剂量。
在一个实施方案中，每两周即每月两次递送剂量。
如本文中使用的半寿期旨在指单体融合蛋白在循环中，例如在血清或血浆中的持续时间。
如本文中使用的药效学是指单体融合蛋白的生物作用的特征谱和具体地持续时间。
药学上可接受的载体本身不应当诱导对接受组合物的个体有害的抗体产生并且应当是无毒的。合适的载体可以是大的缓慢代谢的大分子诸如蛋白质、多肽、脂质体、多糖、聚乳酸、聚乙醇酸、聚合氨基酸、氨基酸共聚物和无活性病毒颗粒。
可使用药学上可接受的盐，例如无机酸盐诸如盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐和硫酸盐，或有机酸盐诸如乙酸盐、丙酸盐、丙二酸盐和苯甲酸盐。
治疗组合物中的药学上可接受的载体可额外地含有液体，诸如水、盐水、甘油和乙醇。此外，辅助性物质，诸如润湿剂或乳化剂或pH缓冲物质，可以存在于此类组合物中。
药学上可接受的载体的详细讨论可以从Remington's Pharmaceutical Sciences(Mack Publishing Company，N.J.1991)中获得。
治疗性混悬液或溶液制剂还可以含有一种或多种赋形剂。赋形剂在本领域中是众所周知的，并且包括缓冲剂(例如，柠檬酸盐缓冲剂、磷酸盐缓冲剂、乙酸盐缓冲剂和碳酸氢盐缓冲剂)、氨基酸、尿素、醇、抗坏血酸、磷脂、蛋白质(例如，血清白蛋白)、EDTA、氯化钠、脂质体、甘露醇、山梨糖醇和甘油。可将溶液或悬浮液包封在脂质体或可生物降解的微球中。
通常将使用无菌生产方法以基本上无菌的形式提供制剂。这可包括生产和过滤灭菌用于制剂的经缓冲的溶剂/溶液，蛋白质在无菌的经缓冲的溶剂溶液中的无菌悬浮，以及通过本领域普通技术人员熟悉的方法将制剂分配至无菌容器中。
用于施用的合适形式包括适于肠胃外(例如通过注射或输注,例如通过快速团注或连续输注)施用的形式。当该产品用于注射或输注时，其可采用油性或含水媒介物中的悬浮液、溶液或乳液的形式，并且其可含有配制剂，诸如悬浮剂、防腐剂、稳定剂和/或分散剂。单体融合蛋白可以以纳米颗粒的形式存在。或者，抗体分子可以干燥形式存在，用于在使用前利用适当的无菌液体重构。
一旦配制，就可向受试者直接施用本发明的组合物。待治疗的受试者可以是动物。然而，在一个或多个实施方案中，组合物适用于向人受试者施用。
本发明的药物组合物可以通过许多途径施用，包括、但不限于口服、静脉内、肌内、动脉内、髓内、鞘内、心室内、透皮、经皮(例如，参见WO98/20734)、皮下、腹膜内、鼻内、肠内、局部、舌下、阴道内或经直肠途径。通常，可将药物组合物制备为可注射剂，制备为液体溶液或悬浮液。也可制备适合用于液体介质中的溶液或悬浮液的固体形式(在注射之前)。
组合物的直接递送通常通过皮下、腹膜内、静脉内或肌内注射来实现，或其被递送至组织的间隙空间。还可将组合物施用至病灶中。剂量治疗可以是单次剂量方案或多次剂量方案。
将理解，组合物中的活性成分将是蛋白质分子。这样，其在胃肠道中会易于降解。因此，如果将通过使用胃肠道的途径施用组合物，则组合物将需要含有保护蛋白质免受降解但在其已被从胃肠道吸收后释放蛋白质的药剂。
在一个实施方案中，可将制剂提供为用于局部施用(包括吸入)的制剂。
在一个实施方案中，我们提供了用于治疗的本发明的单体融合蛋白。在一个实施方案中，我们提供了本发明的单体融合蛋白用于制造药物的用途。
在一个实施方案中，我们提供了用于治疗癌症的本发明的单体融合蛋白。
在一个实施方案中，我们提供了本发明的单体融合蛋白在制备用于治疗癌症的药物中的用途。
可以使用本发明的单体融合蛋白治疗的癌症的实例包括结直肠癌，肝癌，前列腺癌，胰腺癌，乳腺癌，卵巢癌，甲状腺癌，肾癌，膀胱癌，头颈癌或肺癌。在一个实施方案中，癌症是皮肤癌，如黑素瘤。在一个实施方案中，癌症是白血病。在一个实施方案中，癌症是成胶质细胞瘤，成神经管细胞瘤或神经母细胞瘤。在一个实施方案中，癌症是神经内分泌癌症。在一个实施方案中，癌症是何杰金氏或非何杰金氏淋巴瘤。
在一个实施方案中，我们提供了用于治疗免疫疾病的本发明的单体融合蛋白。
在一个实施方案中，我们提供了本发明的单体融合蛋白在制备用于治疗免疫疾病的药物中的用途。
可以使用本发明的单体融合蛋白治疗的免疫疾病的例子包括自身免疫疾病，例如急性播散性脑脊髓炎(ADEM)、急性坏死性出血性白质脑炎、艾迪生病、丙种球蛋白血症、斑秃、淀粉样变性、ANCA相关性血管炎、强直性脊柱炎、抗GBM/抗TBM肾炎、抗磷脂综合征(APS)、自身免疫性血管性水肿、自身免疫性再生障碍性性贫血、自身免疫性自主神经功能异常、自身免疫性肝炎、自身免疫性高脂血症、自身免疫性免疫缺陷、自身免疫性内耳病(AIED)、自身免疫性心肌炎、自身免疫性胰腺炎、自身免疫性视网膜病、自身免疫性血小板减少性紫癜(ATP)、自身免疫性甲状腺疾病、自身免疫性荨麻疹、轴突&纳尔神经病变、巴洛病、白塞病、大疱性类天疱疮、心肌病、Castleman病、乳糜泻、美洲锥虫病、慢性炎症性脱髓鞘性多发性神经病(CIDP)、慢性复发性多灶性骨髓炎(CRMO)、变应性肉芽肿性血管炎(Churg-Strauss syndrome)、瘢痕性类天疱疮/良性黏膜类天疱疮、克罗恩病、Cogans综合征、冷凝集素病、先天性心脏传导阻滞、柯萨奇病毒性心肌炎、CREST病、原发性混合型冷球蛋白血症、脱髓鞘神经病变、疱疹样皮炎、皮肌炎、德维克病(视神经脊髓炎)、扩张型心肌病、盘状红斑狼疮、心肌梗死后综合征、子宫内膜异位症、嗜酸性血管中心纤维化、嗜酸性筋膜炎、结节性红斑、实验性变应性脑脊髓炎、伊文思综合征、纤维化肺泡炎、巨细胞性动脉炎(颞动脉炎)、肾小球肾炎、肺出血肾炎综合征、多血管炎肉芽肿肉芽肿病(GPA)(见Wegener's)、格雷夫斯病、Guillain-Barre综合征、桥本氏脑炎、桥本氏甲状腺炎、溶血性贫血、Henoch-Schonlein紫癜、妊娠疱疹、低丙球蛋白血症、特发性血补体过少小管间质性肾炎、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、IgA肾病、IgG4相关疾病、IgG4相关性硬化性疾病、免疫调节脂蛋白、炎症性主动脉瘤、炎性假瘤、包涵体肌炎、胰岛素依赖型糖尿病(I型)、间质性膀胱炎、幼年型关节炎、幼年型糖尿病、川崎综合征、Kuttner’s瘤、Lambert-Eaton综合征、白细胞碎裂性血管炎、扁平苔藓、硬化性苔癣、木样结膜炎、线状IgA病(LAD)、红斑狼疮(SLE)、莱姆病、慢性纵隔纤维化病、梅尼埃病、显微镜下多血管炎(Microscopic polyangiitis)、米库利兹综合征、混合型结缔组织病(MCTD)、蚕蚀性角膜溃疡(Mooren’s ulcer)、Mucha-Habermann病、多灶性纤维硬化、多发性硬化症、重症肌无力、肌炎、发作性睡病、视神经脊髓炎(Devic's)、中性粒细胞减少症、眼瘢痕性类天疱疮、视神经炎、Ormond’s病(腹膜后纤维化)、复发性风湿病、PANDAS(与链球菌相关的小儿自身免疫性神经精神障碍)、副肿瘤性小脑变性、副蛋白血症多神经病(Paraproteinemic polyneuropathies)、阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)、Parry Romberg综合征、Parsonnage-Turner综合征、睫状体扁平部炎(外周葡萄膜炎)、寻常型天疱疮、主动脉周围炎、动脉周围炎、周围神经病变、静脉周脑脊髓炎、恶性贫血、POEMS综合征、结节性多动脉炎、I型、II型&III型自身免疫性多腺综合征、风湿性多肌痛、多肌炎、心肌梗塞后综合征、心包切开术后综合征、孕激素性皮炎、原发性胆汁性肝硬化、原发性硬化性胆管炎、银屑病、银屑病性关节炎、特发性肺纤维化、坏疽性脓皮病、单纯红细胞再生障碍、雷诺现象、反射性交感神经营养不良、Reiter’s综合征、复发性多软骨病、下肢不宁综合征、腹膜后纤维化(Ormond’s病)、风湿热、类风湿关节炎、慢性纤维性甲状腺炎、结节病、施密特综合征、巩膜炎、硬皮病、舍格伦综合征、精子与睾丸自身免疫、僵硬人综合征、亚急性细菌性心内膜炎(SBE)、Susac’s综合征、交感性眼炎、大动脉炎、颞动脉炎/巨细胞动脉炎、血栓性血小板减少性紫癜(TTP)、托洛萨-亨特综合征、横贯性脊髓炎、溃疡性结肠炎、未分化结缔组织病(UCTD)、葡萄膜炎、血管炎、水疱性皮肤病、白癜风、Waldenstrom巨球蛋白血症、暖特发性溶血性贫血和韦格纳肉芽肿(现称为具有多血管炎肉芽肿(GPA)。
在一个实施方案中，自身免疫性疾病选自免疫性血小板减少症(ITP)，慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病(CIDP)，川崎病和格林-巴利综合征(GBS)。
在一个实施方案中，本发明的单体融合蛋白用于治疗或预防癫痫或惊厥。
在一个实施方案中，根据本公开的单体融合蛋白和片段用于治疗或预防多发性硬化。
根据本公开内容的单体融合蛋白可以用于治疗或预防。
本发明的单体融合蛋白也可以用于诊断，例如用于涉及Fc受体的疾病状态如B细胞相关淋巴瘤的体内诊断和成像。
附图说明
图1
1(a)其中附属物半胱氨酸残基已经缺失或被另一个氨基酸残基取代的融合蛋白主要表达为单体并且能够浓度依赖性地组装成六聚体。
1(b)缺乏修饰的附属物的对照蛋白质即使在测试的最高浓度下也不能组装成六聚体。
1(c)包含具有完整半胱氨酸残基的未修饰附属物的对照蛋白主要以六聚体形式表达。
图2
单体融合蛋白的多肽链的示例性氨基酸序列。在每个序列中，附属物序列都加下划线，并且任何突变都用粗体和下划线标出。铰链是粗体的。在含有来自IgM的CH4结构域的构建体中，该区域以斜体显示。
图3
本发明的抗体融合蛋白的示例性氨基酸和DNA序列。附属物序列加下划线。
图4
证明包含本发明的修饰的附属物的全长抗体融合蛋白显示浓度依赖性多聚化成高分子量种类(HMWS)的色谱图。
4(a)利妥昔单抗IgG1FL IgM tp C575S
4(b)曲妥珠单抗IgG1FL IgM tp C575S
图5
通过本发明的融合蛋白的细胞的补体杀伤。该图显示CD20阳性拉吉(Raji)细胞和CD20阳性Ramos细胞的补体杀伤。结果表明，当用本发明的附属物修饰时，抗CD20抗体利妥昔单抗显示增强的CDC。
实施例
实施例1：分子生物学
使用标准分子生物学方法(包括PCR、限制性连接克隆、点突变(Quikchange)和Sanger测序)组装DNA序列。将表达构建体克隆到适于在CHO细胞中瞬时和稳定表达的表达质粒(pNAFL，pNAFH)中。合适的表达载体的其他例子包括pCDNA3(Invitrogen)。
图2中提供了显示单体融合蛋白的多肽链的示例性氨基酸序列的图。在每个序列中，附属物序列用下划线表示，并且任何突变用粗体和下划线表示。铰链是粗体的。在含有来自IgM的CH4结构域的构建体中，该区域以斜体显示。
实施例2：表达
使用lipofectamine或电穿孔转染的HEK293或CHO细胞的“瞬时”表达进行小规模表达。将培养物在CD-CHO(Lonza)或ProCHO5(Life Technologies)培养基中以50-2000ml的规模在摇瓶或摇动袋中生长5-10天。通过离心除去细胞，并将培养物上清液保存在4℃直至纯化。除去细胞后，将防腐剂加入到一些培养物中。
实施例3：纯化和分析
在检查/调节pH到≥6.5后，通过使用pH3.4缓冲液的分级洗脱进行蛋白质A色谱，从培养上清液中纯化蛋白质。立即使用1M Tris pH8.5将洗脱液中和至～pH7.0。
使用压力搅拌池将样品浓缩在0.1M柠檬酸钠缓冲液pH7.5中，并使用10kDa截留膜浓缩至>100mg/ml。然后在如下所述的多聚体形式的SE-HPLC分析之前，将样品在PBS中稀释至如表3中所示的一系列不同的最终浓度。使用鲎变形细胞裂解物(LAL)测定测试内毒素。用于测定的样品<1EU/mg。
多聚体形式的SE-HPLC分析
TSK-G3000
使用尺寸排阻HPLC分析蛋白质，所使用的柱是在系统Agilent 1100 Series上的15ml TSKgel-G3000SW(Tosoh)。流动相为0.2M磷酸钠，pH7.0，流速1ml/min，注入蛋白50μg。使用280nm波长的UV吸光度检测器检测信号。
uPLC
使用尺寸排阻HPLC分析蛋白质，所使用的柱是在系统Agilent 1100 Series上的2.5ml BEH 200(Waters)。流动相为0.2M磷酸钠，pH7.0，流速0.4ml/分钟，注入2.5μg和5μg蛋白质。使用荧光检测器检测信号，激发：350nm，发射：390nm。
Superdex 200 SEC-MALS
使用尺寸排阻HPLC分析蛋白质，所使用的柱是在系统Agilent 1100 Series上的24ml Superdex 200 10/300(GE)。流动相为10mM HEPES，100mM NaCl pH7.5，流速0.5ml/分钟，注入100μg蛋白质。使用280nm波长的UV吸光度检测器和另外的折射率检测器(ViscotekVE3580)和MALS检测器(Viscotech SEC-MALS 20，Malvern)检测信号，
结果
结果表明，本发明的融合蛋白主要作为单体合成，并且能够在高浓度下组装成多聚体，如图1所示。
铰链-Fc-附属物-C575S：
其中附属物半胱氨酸残基已经缺失或被另一个氨基酸残基取代的融合蛋白主要表达为单体并且能够浓度依赖性地组装成六聚体。图1(a)。
对照蛋白：铰链-Fc(无附属物)：
缺乏修饰的附属物的对照蛋白质即使在测试的最高浓度下也不能组装成六聚体。图1(b)。
对照蛋白：铰链-Fc-附属物(C575)：
包含具有完整半胱氨酸残基的未修饰附属物的对照蛋白主要以六聚体形式表达。图1(c)。
实施例5：补体依赖性细胞毒性(CDC)
如下表3所示制备全长抗体构建体。利妥昔单抗和曲妥珠单抗是众所周知的分别识别CD20和HER2/neu的抗体。CA1151识别艰难梭菌外毒素，并被包括在本研究中作为阴性对照抗体进行比较。图3中提供了抗体构建体的氨基酸和DNA序列。
表3
抗体构建体
利妥昔单抗IgG1 IgM 附属物C575
利妥昔单抗IgG1 IgM 附属物C575S
利妥昔单抗IgG1 野生型
CA1151 IgG1 IgM 附属物C575
CA1151 IgG1 IgM 附属物C575S
CA1151 IgG1 野生型
曲妥珠单抗IgG1 IgM 附属物C575
曲妥珠单抗IgG1 IgM 附属物C575S
曲妥珠单抗IgG1 野生型
浓缩和分析HPLC
使用Amicon Ultra-15 Centrifugal Filter Units通过离心浓缩蛋白质。样品在4000RPM下离心直至达到所需浓度。使用尺寸排阻HPLC分析蛋白质，所使用的柱是在系统Agilent 1100Series上的15ml TSKgel-G3000SW(Tosoh)。流动相为0.2M磷酸钠，pH7.0，流速1ml/min，注入50μg蛋白。使用280nm波长的UV吸光度检测器检测信号。
结果证明，包含本发明的修饰的附属物的全长抗体融合蛋白显示浓度依赖性多聚化成高分子量种类(HMWS)。图4。
CDC测定
使用补体依赖性细胞毒性测定来检查修饰的抗体的生物学活性。将靶细胞(50×105)在平底96孔板中以抗体浓度系列孵育，终体积为100μl，并使其在室温下调理15分钟。将调理的靶细胞与终浓度为30％的正常人血清(加入42μl)一起孵育，并在37℃培养箱中孵育30分钟。细胞裂解测量为通过BD FACSCalibur流式细胞仪测定的PI+细胞的一部分。图使用GraphPad Prism软件绘制。
包含抗-CD20抗体利妥昔单抗的融合蛋白的结果显示在图5中。该图显示CD20阳性拉吉细胞和CD20阳性Ramos细胞的补体杀伤。结果表明利妥昔单抗当用本发明的附属物修饰时表现出增强的CDC。
序列表
<110> UCB Biopharma SPRL
<120> 结合人Fc受体的融合蛋白
<130> PF0015-WO-PCT
<140> PCT/EP2016/065914
<141> 2016-07-06
<160> 69
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 1
Pro Thr Leu Tyr Asn Val Ser Leu Val Met Ser Asp Thr Ala Gly Thr
1 5 10 15
Cys Tyr
<210> 2
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
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<212> PRT
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<400> 4
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<211> 58
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 5
Glu Ser Pro Lys Ala Gln Ala Ser Ser Val Pro Thr Ala Gln Pro Gln
1 5 10 15
Ala Glu Gly Ser Leu Ala Lys Ala Thr Thr Ala Pro Ala Thr Thr Arg
20 25 30
Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys Glu Lys Glu
35 40 45
Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro
50 55
<210> 6
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 6
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10 15
<210> 7
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 7
Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10
<210> 8
<211> 62
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 8
Glu Leu Lys Thr Pro Leu Gly Asp Thr Thr His Thr Cys Pro Arg Cys
1 5 10 15
Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro
20 25 30
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro Glu
35 40 45
Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro
50 55 60
<210> 9
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 9
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro
1 5 10
<210> 10
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 10
Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro
1 5 10
<210> 11
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 11
Cys Pro Pro Cys
1
<210> 12
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 12
Cys Pro Ser Cys
1
<210> 13
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 13
Cys Pro Arg Cys
1
<210> 14
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 14
Ser Pro Pro Cys
1
<210> 15
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 15
Cys Pro Pro Ser
1
<210> 16
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 16
Ser Pro Pro Ser
1
<210> 17
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 17
Asp Lys Thr His Thr Cys Ala Ala
1 5
<210> 18
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 18
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<210> 19
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 19
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Thr Cys Pro Pro Cys
1 5 10 15
Pro Ala
<210> 20
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 20
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Thr Cys Pro Pro Cys
1 5 10 15
Pro Ala Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
20 25
<210> 21
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 21
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Gly Lys Pro Thr Leu
1 5 10 15
Tyr Asn Ser Leu Val Met Ser Asp Thr Ala Gly Thr Cys Tyr
20 25 30
<210> 22
<211> 31
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 22
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Gly Lys Pro Thr His
1 5 10 15
Val Asn Val Ser Val Val Met Ala Glu Val Asp Gly Thr Cys Tyr
20 25 30
<210> 23
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 23
Asp Lys Thr His Thr Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
<210> 24
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 24
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp
1 5 10 15
Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro Ala
20 25
<210> 25
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 25
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Ser Cys Pro Ala
1 5 10
<210> 26
<211> 240
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (239)..(239)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400> 26
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
1 5 10 15
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
20 25 30
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
35 40 45
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
50 55 60
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
65 70 75 80
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
85 90 95
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
100 105 110
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
115 120 125
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
130 135 140
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
145 150 155 160
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
165 170 175
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
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Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
195 200 205
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Pro Thr
210 215 220
Leu Tyr Asn Val Ser Leu Val Met Ser Asp Thr Ala Gly Thr Xaa Tyr
225 230 235 240
<210> 27
<211> 240
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (239)..(239)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400> 27
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
1 5 10 15
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
20 25 30
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val
35 40 45
Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
50 55 60
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
65 70 75 80
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
85 90 95
Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser
100 105 110
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
115 120 125
Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
130 135 140
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
145 150 155 160
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
165 170 175
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
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Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
195 200 205
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Pro Thr
210 215 220
Leu Tyr Asn Val Ser Leu Val Met Ser Asp Thr Ala Gly Thr Xaa Tyr
225 230 235 240
<210> 28
<211> 240
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (239)..(239)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400> 28
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
1 5 10 15
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
20 25 30
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
35 40 45
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
50 55 60
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
65 70 75 80
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
85 90 95
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
100 105 110
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
115 120 125
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
130 135 140
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
145 150 155 160
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
165 170 175
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
180 185 190
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
195 200 205
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Pro Thr
210 215 220
His Val Asn Val Ser Val Val Met Ala Glu Val Asp Gly Thr Xaa Tyr
225 230 235 240
<210> 29
<211> 240
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (239)..(239)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400> 29
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
1 5 10 15
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
20 25 30
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val
35 40 45
Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
50 55 60
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
65 70 75 80
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
85 90 95
Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser
100 105 110
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
115 120 125
Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
130 135 140
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
145 150 155 160
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
165 170 175
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
180 185 190
Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
195 200 205
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Pro Thr
210 215 220
His Val Asn Val Ser Val Val Met Ala Glu Val Asp Gly Thr Xaa Tyr
225 230 235 240
<210> 30
<211> 351
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (350)..(350)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400> 30
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
1 5 10 15
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
20 25 30
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
35 40 45
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
50 55 60
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
65 70 75 80
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
85 90 95
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
100 105 110
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
115 120 125
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
130 135 140
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
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Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
165 170 175
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
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Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
195 200 205
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Val Ala
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Leu His Arg Pro Asp Val Tyr Leu Leu Pro Pro Ala Arg Glu Gln Leu
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Asn Leu Arg Glu Ser Ala Thr Ile Thr Cys Leu Val Thr Gly Phe Ser
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<210> 31
<211> 351
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (350)..(350)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<400> 31
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
1 5 10 15
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
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Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val
35 40 45
Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
50 55 60
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
65 70 75 80
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
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Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser
100 105 110
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
115 120 125
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Asn Leu Arg Glu Ser Ala Thr Ile Thr Cys Leu Val Thr Gly Phe Ser
245 250 255
Pro Ala Asp Val Phe Val Gln Trp Met Gln Arg Gly Gln Pro Leu Ser
260 265 270
Pro Glu Lys Tyr Val Thr Ser Ala Pro Met Pro Glu Pro Gln Ala Pro
275 280 285
Gly Arg Tyr Phe Ala His Ser Ile Leu Thr Val Ser Glu Glu Glu Trp
290 295 300
Asn Thr Gly Glu Thr Tyr Thr Cys Val Ala His Glu Ala Leu Pro Asn
305 310 315 320
Arg Val Thr Glu Arg Thr Val Asp Lys Ser Thr Gly Lys Pro Thr Leu
325 330 335
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340 345 350
<210> 32
<211> 239
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 32
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
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Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
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Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
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Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
115 120 125
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
130 135 140
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
145 150 155 160
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
165 170 175
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
180 185 190
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
195 200 205
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Pro Thr
210 215 220
Leu Tyr Asn Val Ser Leu Val Met Ser Asp Thr Ala Gly Thr Tyr
225 230 235
<210> 33
<211> 239
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 33
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
1 5 10 15
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
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Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val
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Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
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Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
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210 215 220
Leu Tyr Asn Val Ser Leu Val Met Ser Asp Thr Ala Gly Thr Tyr
225 230 235
<210> 34
<211> 239
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 34
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
1 5 10 15
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
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Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
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Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
115 120 125
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
130 135 140
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
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Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
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195 200 205
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Pro Thr
210 215 220
His Val Asn Val Ser Val Val Met Ala Glu Val Asp Gly Thr Tyr
225 230 235
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<211> 239
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 35
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
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85 90 95
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195 200 205
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210 215 220
His Val Asn Val Ser Val Val Met Ala Glu Val Asp Gly Thr Tyr
225 230 235
<210> 36
<211> 350
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 36
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
1 5 10 15
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
20 25 30
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
35 40 45
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
50 55 60
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
65 70 75 80
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
85 90 95
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
100 105 110
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
115 120 125
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
130 135 140
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
145 150 155 160
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
165 170 175
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
180 185 190
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
195 200 205
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Val Ala
210 215 220
Leu His Arg Pro Asp Val Tyr Leu Leu Pro Pro Ala Arg Glu Gln Leu
225 230 235 240
Asn Leu Arg Glu Ser Ala Thr Ile Thr Cys Leu Val Thr Gly Phe Ser
245 250 255
Pro Ala Asp Val Phe Val Gln Trp Met Gln Arg Gly Gln Pro Leu Ser
260 265 270
Pro Glu Lys Tyr Val Thr Ser Ala Pro Met Pro Glu Pro Gln Ala Pro
275 280 285
Gly Arg Tyr Phe Ala His Ser Ile Leu Thr Val Ser Glu Glu Glu Trp
290 295 300
Asn Thr Gly Glu Thr Tyr Thr Cys Val Ala His Glu Ala Leu Pro Asn
305 310 315 320
Arg Val Thr Glu Arg Thr Val Asp Lys Ser Thr Gly Lys Pro Thr Leu
325 330 335
Tyr Asn Val Ser Leu Val Met Ser Asp Thr Ala Gly Thr Tyr
340 345 350
<210> 37
<211> 350
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 37
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
1 5 10 15
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
20 25 30
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val
35 40 45
Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
50 55 60
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
65 70 75 80
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
85 90 95
Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser
100 105 110
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
115 120 125
Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
130 135 140
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
145 150 155 160
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
165 170 175
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
180 185 190
Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
195 200 205
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys Val Ala
210 215 220
Leu His Arg Pro Asp Val Tyr Leu Leu Pro Pro Ala Arg Glu Gln Leu
225 230 235 240
Asn Leu Arg Glu Ser Ala Thr Ile Thr Cys Leu Val Thr Gly Phe Ser
245 250 255
Pro Ala Asp Val Phe Val Gln Trp Met Gln Arg Gly Gln Pro Leu Ser
260 265 270
Pro Glu Lys Tyr Val Thr Ser Ala Pro Met Pro Glu Pro Gln Ala Pro
275 280 285
Gly Arg Tyr Phe Ala His Ser Ile Leu Thr Val Ser Glu Glu Glu Trp
290 295 300
Asn Thr Gly Glu Thr Tyr Thr Cys Val Ala His Glu Ala Leu Pro Asn
305 310 315 320
Arg Val Thr Glu Arg Thr Val Asp Lys Ser Thr Gly Lys Pro Thr Leu
325 330 335
Tyr Asn Val Ser Leu Val Met Ser Asp Thr Ala Gly Thr Tyr
340 345 350
<210> 38
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 38
atgggttgga gcttgattct cctgttcctt gtggcggtgg caacgcgggt gctgagc 57
<210> 39
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 39
Met Gly Trp Ser Leu Ile Leu Leu Phe Leu Val Ala Val Ala Thr Arg
1 5 10 15
Val Leu Ser
<210> 40
<211> 66
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 40
atggatttcc aagtgcagat catctcgttc ctcctcatct ccgcctccgt catcatgtct 60
aggggc 66
<210> 41
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 41
Met Asp Phe Gln Val Gln Ile Ile Ser Phe Leu Leu Ile Ser Ala Ser
1 5 10 15
Val Leu Met Ser Arg Gly
20
<210> 42
<211> 1359
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 42
caagtgcagc tgcagcagcc aggagccgaa ctcgtgaagc ccggtgcttc agtgaagatg 60
tcctgcaaag cctccgggta cactttcacc tcgtacaaca tgcactgggt caagcagacc 120
cccggtagag gactggagtg gatcggcgcc atctaccctg ggaacggaga cacctcctac 180
aaccaaaagt tcaagggaaa ggccacactg accgctgaca agtcgtcctc gaccgcgtac 240
atgcagctgt cctctctgac ttccgaggac agcgctgtgt actactgtgc ccggtccact 300
tactacggcg gagattggta ctttaacgtc tggggagccg gcaccaccgt gctcgtgact 360
gtctcgagtg cttctacaaa gggcccatcg gtcttccccc tggcaccctc ctccaagagc 420
acctctgggg gcacagcggc cctgggctgc ctggtcaagg actacttccc cgaacctgtg 480
acggtgtcgt ggaactcagg cgccctgacc agcggcgtgc acaccttccc ggctgtccta 540
cagtcctcag gactctactc cctcagcagc gtggtgaccg tgccctccag cagcttgggc 600
acccagacct acatctgcaa cgtgaatcac aagcccagca acaccaaggt cgataagaaa 660
gttgagccca aatcttgtga caaaactcac acatgcccac cgtgcccagc acctgaactc 720
ctggggggac cgtcagtctt cctcttcccc ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc 780
cggacccctg aggtcacatg cgtggtggtg gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag 840
ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag 900
cagtacaaca gcacgtaccg tgtggtcagc gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg 960
aatggcaagg agtacaagtg caaggtctcc aacaaagccc tcccagcccc catcgagaaa 1020
accatctcca aagccaaagg gcagccccga gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc 1080
cgggatgagc tgaccaagaa ccaggtcagc ctgacctgcc tggtcaaagg cttctatccc 1140
agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaat gggcagccgg agaacaacta caagaccacg 1200
cctcccgtgc tggactccga cggctccttc ttcctctaca gcaagctcac cgtggacaag 1260
agcaggtggc agcaggggaa cgtcttctca tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac 1320
cactacacgc agaagagcct ctccctgtct ccgggtaaa 1359
<210> 43
<211> 639
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 43
cagattgtgc tgtcgcaatc ccctgcgatc ctgtcggcct cacccggaga aaaggtcacg 60
atgacttgcc gcgcttcctc ctccgtgtca tacattcact ggtttcagca gaagccggga 120
agcagcccaa agccttggat ctatgccacc tccaacctgg catccggtgt ccccgtgcgg 180
ttcagcggta gcgggtccgg aaccagctac tccttgacca tttcgagagt ggaagccgag 240
gacgcggcca cctactactg tcagcagtgg actagcaacc cgccgacctt cggagggggc 300
actaagctgg agatcaaacg tacggtagcg gccccatctg tcttcatctt cccgccatct 360
gatgagcagt tgaaatctgg aactgcctct gttgtgtgcc tgctgaataa cttctatccc 420
agagaggcca aagtacagtg gaaggtggat aacgccctcc aatcgggtaa ctcccaggag 480
agtgtcacag agcaggacag caaggacagc acctacagcc tcagcagcac cctgacgctg 540
agcaaagcag actacgagaa acacaaagtc tacgcctgcg aagtcaccca tcagggcctg 600
agctcgcccg tcacaaagag cttcaacagg ggagagtgt 639
<210> 44
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 44
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Asn Met His Trp Val Lys Gln Thr Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Thr Tyr Tyr Gly Gly Asp Trp Tyr Phe Asn Val Trp Gly
100 105 110
Ala Gly Thr Thr Val Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 45
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 45
Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Ile
20 25 30
His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr
35 40 45
Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Thr Ser Asn Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
100 105 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 46
<211> 1413
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 46
caagtgcagc tgcagcagcc aggagccgaa ctcgtgaagc ccggtgcttc agtgaagatg 60
tcctgcaaag cctccgggta cactttcacc tcgtacaaca tgcactgggt caagcagacc 120
cccggtagag gactggagtg gatcggcgcc atctaccctg ggaacggaga cacctcctac 180
aaccaaaagt tcaagggaaa ggccacactg accgctgaca agtcgtcctc gaccgcgtac 240
atgcagctgt cctctctgac ttccgaggac agcgctgtgt actactgtgc ccggtccact 300
tactacggcg gagattggta ctttaacgtc tggggagccg gcaccaccgt gctcgtgact 360
gtctcgagtg cttctacaaa gggcccatcg gtcttccccc tggcaccctc ctccaagagc 420
acctctgggg gcacagcggc cctgggctgc ctggtcaagg actacttccc cgaacctgtg 480
acggtgtcgt ggaactcagg cgccctgacc agcggcgtgc acaccttccc ggctgtccta 540
cagtcctcag gactctactc cctcagcagc gtggtgaccg tgccctccag cagcttgggc 600
acccagacct acatctgcaa cgtgaatcac aagcccagca acaccaaggt cgataagaaa 660
gttgagccca aatcttgtga caaaactcac acatgcccac cgtgcccagc acctgaactc 720
ctggggggac cgtcagtctt cctcttcccc ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc 780
cggacccctg aggtcacatg cgtggtggtg gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag 840
ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag 900
cagtacaaca gcacgtaccg tgtggtcagc gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg 960
aatggcaagg agtacaagtg caaggtctcc aacaaagccc tcccagcccc catcgagaaa 1020
accatctcca aagccaaagg gcagccccga gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc 1080
cgggatgagc tgaccaagaa ccaggtcagc ctgacctgcc tggtcaaagg cttctatccc 1140
agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaat gggcagccgg agaacaacta caagaccacg 1200
cctcccgtgc tggactccga cggctccttc ttcctctaca gcaagctcac cgtggacaag 1260
agcaggtggc agcaggggaa cgtcttctca tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac 1320
cactacacgc agaagagcct ctccctgtct ccgggtaaac cgaccctgta taacgtgagc 1380
ctggtgatga gcgataccgc gggcacctgc tat 1413
<210> 47
<211> 639
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 47
cagattgtgc tgtcgcaatc ccctgcgatc ctgtcggcct cacccggaga aaaggtcacg 60
atgacttgcc gcgcttcctc ctccgtgtca tacattcact ggtttcagca gaagccggga 120
agcagcccaa agccttggat ctatgccacc tccaacctgg catccggtgt ccccgtgcgg 180
ttcagcggta gcgggtccgg aaccagctac tccttgacca tttcgagagt ggaagccgag 240
gacgcggcca cctactactg tcagcagtgg actagcaacc cgccgacctt cggagggggc 300
actaagctgg agatcaaacg tacggtagcg gccccatctg tcttcatctt cccgccatct 360
gatgagcagt tgaaatctgg aactgcctct gttgtgtgcc tgctgaataa cttctatccc 420
agagaggcca aagtacagtg gaaggtggat aacgccctcc aatcgggtaa ctcccaggag 480
agtgtcacag agcaggacag caaggacagc acctacagcc tcagcagcac cctgacgctg 540
agcaaagcag actacgagaa acacaaagtc tacgcctgcg aagtcaccca tcagggcctg 600
agctcgcccg tcacaaagag cttcaacagg ggagagtgt 639
<210> 48
<211> 471
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 48
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Asn Met His Trp Val Lys Gln Thr Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Thr Tyr Tyr Gly Gly Asp Trp Tyr Phe Asn Val Trp Gly
100 105 110
Ala Gly Thr Thr Val Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly Lys Pro Thr Leu Tyr Asn Val Ser Leu Val Met Ser
450 455 460
Asp Thr Ala Gly Thr Cys Tyr
465 470
<210> 49
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 49
Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Ile
20 25 30
His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr
35 40 45
Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Thr Ser Asn Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
100 105 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 50
<211> 1413
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 50
caagtgcagc tgcagcagcc aggagccgaa ctcgtgaagc ccggtgcttc agtgaagatg 60
tcctgcaaag cctccgggta cactttcacc tcgtacaaca tgcactgggt caagcagacc 120
cccggtagag gactggagtg gatcggcgcc atctaccctg ggaacggaga cacctcctac 180
aaccaaaagt tcaagggaaa ggccacactg accgctgaca agtcgtcctc gaccgcgtac 240
atgcagctgt cctctctgac ttccgaggac agcgctgtgt actactgtgc ccggtccact 300
tactacggcg gagattggta ctttaacgtc tggggagccg gcaccaccgt gctcgtgact 360
gtctcgagtg cttctacaaa gggcccatcg gtcttccccc tggcaccctc ctccaagagc 420
acctctgggg gcacagcggc cctgggctgc ctggtcaagg actacttccc cgaacctgtg 480
acggtgtcgt ggaactcagg cgccctgacc agcggcgtgc acaccttccc ggctgtccta 540
cagtcctcag gactctactc cctcagcagc gtggtgaccg tgccctccag cagcttgggc 600
acccagacct acatctgcaa cgtgaatcac aagcccagca acaccaaggt cgataagaaa 660
gttgagccca aatcttgtga caaaactcac acatgcccac cgtgcccagc acctgaactc 720
ctggggggac cgtcagtctt cctcttcccc ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc 780
cggacccctg aggtcacatg cgtggtggtg gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag 840
ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag 900
cagtacaaca gcacgtaccg tgtggtcagc gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg 960
aatggcaagg agtacaagtg caaggtctcc aacaaagccc tcccagcccc catcgagaaa 1020
accatctcca aagccaaagg gcagccccga gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc 1080
cgggatgagc tgaccaagaa ccaggtcagc ctgacctgcc tggtcaaagg cttctatccc 1140
agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaat gggcagccgg agaacaacta caagaccacg 1200
cctcccgtgc tggactccga cggctccttc ttcctctaca gcaagctcac cgtggacaag 1260
agcaggtggc agcaggggaa cgtcttctca tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac 1320
cactacacgc agaagagcct ctccctgtct ccgggtaaac cgaccctgta taacgtgagc 1380
ctggtgatga gcgataccgc gggcaccagc tat 1413
<210> 51
<211> 639
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 51
cagattgtgc tgtcgcaatc ccctgcgatc ctgtcggcct cacccggaga aaaggtcacg 60
atgacttgcc gcgcttcctc ctccgtgtca tacattcact ggtttcagca gaagccggga 120
agcagcccaa agccttggat ctatgccacc tccaacctgg catccggtgt ccccgtgcgg 180
ttcagcggta gcgggtccgg aaccagctac tccttgacca tttcgagagt ggaagccgag 240
gacgcggcca cctactactg tcagcagtgg actagcaacc cgccgacctt cggagggggc 300
actaagctgg agatcaaacg tacggtagcg gccccatctg tcttcatctt cccgccatct 360
gatgagcagt tgaaatctgg aactgcctct gttgtgtgcc tgctgaataa cttctatccc 420
agagaggcca aagtacagtg gaaggtggat aacgccctcc aatcgggtaa ctcccaggag 480
agtgtcacag agcaggacag caaggacagc acctacagcc tcagcagcac cctgacgctg 540
agcaaagcag actacgagaa acacaaagtc tacgcctgcg aagtcaccca tcagggcctg 600
agctcgcccg tcacaaagag cttcaacagg ggagagtgt 639
<210> 52
<211> 471
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 52
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Asn Met His Trp Val Lys Gln Thr Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Thr Tyr Tyr Gly Gly Asp Trp Tyr Phe Asn Val Trp Gly
100 105 110
Ala Gly Thr Thr Val Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly Lys Pro Thr Leu Tyr Asn Val Ser Leu Val Met Ser
450 455 460
Asp Thr Ala Gly Thr Ser Tyr
465 470
<210> 53
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 53
Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Ile
20 25 30
His Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr
35 40 45
Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Val Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Thr Ser Asn Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
100 105 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 54
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 54
atggagtgga gctgggtctt tctgttcttc ctctccgtga ccactggggt tcatagc 57
<210> 55
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 55
Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Phe Leu Ser Val Thr Thr Gly
1 5 10 15
Val His Ser
<210> 56
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 56
atgatgtcct ctgctcagtt ccttggtctc ctgttgctct gttttcaagg taccagatgt 60
<210> 57
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 57
Met Met Ser Ser Ala Gln Phe Leu Gly Leu Leu Leu Leu Cys Phe Gln
1 5 10 15
Thr Arg Cys
<210> 58
<211> 1350
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 58
gaagtgcagc tggtggaatc aggtggggga ttggttcaac ctggaggaag tctccgtctg 60
tcttgtgcag cctctgggtt caacatcaag gatacctaca tacactgggt gagacaggca 120
ccaggtaaag gattggagtg ggtggcaagg atctacccta ccaatggcta cacccgatat 180
gccgacagtg tgaaaggcag gttcacgatt tccgctgaca caagcaagaa cacagcctac 240
ctgcagatga actcactgcg agcagaggat acggctgtct attactgctc tagatgggga 300
ggggacggtt tctacgctat ggactattgg ggacagggca ctcttgtgac agtctcgagt 360
gcttctacaa agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 420
ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaacctgt gacggtgtcg 480
tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 540
ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 600
tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tcgataagaa agttgagccc 660
aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 720
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 780
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 840
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 900
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 960
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 1020
aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggatgag 1080
ctgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 1140
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 1200
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 1260
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 1320
cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa 1350
<210> 59
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 59
gatatccaga tgactcagag tccaagtagt ctcagtgcca gtgtaggtga tagggtaact 60
atcacttgtc gtgccagtca ggatgttaat actgctgtag cctggtatca gcagaaacca 120
ggtaaagccc caaaactact catctattcg gcctccttcc tctactctgg agtaccatct 180
agattcagtg gtagcagaag tggtactgat ttcactctga ctatcagtag tctccagcca 240
gaagatttcg ccacttacta ctgccagcaa cattatacta ctcctcccac gttcggtcag 300
ggtactaaag tagaaatcaa acgtacggta gcggccccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 60
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 60
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 61
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 61
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 62
<211> 1404
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 62
gaagtgcagc tggtggaatc aggtggggga ttggttcaac ctggaggaag tctccgtctg 60
tcttgtgcag cctctgggtt caacatcaag gatacctaca tacactgggt gagacaggca 120
ccaggtaaag gattggagtg ggtggcaagg atctacccta ccaatggcta cacccgatat 180
gccgacagtg tgaaaggcag gttcacgatt tccgctgaca caagcaagaa cacagcctac 240
ctgcagatga actcactgcg agcagaggat acggctgtct attactgctc tagatgggga 300
ggggacggtt tctacgctat ggactattgg ggacagggca ctcttgtgac agtctcgagt 360
gcttctacaa agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 420
ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaacctgt gacggtgtcg 480
tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 540
ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 600
tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tcgataagaa agttgagccc 660
aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 720
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 780
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 840
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 900
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 960
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 1020
aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggatgag 1080
ctgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 1140
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 1200
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 1260
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 1320
cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa ccgaccctgt ataacgtgag cctggtgatg 1380
agcgataccg cgggcacctg ctat 1404
<210> 63
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 63
gatatccaga tgactcagag tccaagtagt ctcagtgcca gtgtaggtga tagggtaact 60
atcacttgtc gtgccagtca ggatgttaat actgctgtag cctggtatca gcagaaacca 120
ggtaaagccc caaaactact catctattcg gcctccttcc tctactctgg agtaccatct 180
agattcagtg gtagcagaag tggtactgat ttcactctga ctatcagtag tctccagcca 240
gaagatttcg ccacttacta ctgccagcaa cattatacta ctcctcccac gttcggtcag 300
ggtactaaag tagaaatcaa acgtacggta gcggccccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 64
<211> 468
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 64
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys Pro Thr Leu Tyr Asn Val Ser Leu Val Met Ser Asp Thr Ala
450 455 460
Gly Thr Cys Tyr
465
<210> 65
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 65
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 66
<211> 1404
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 66
gaagtgcagc tggtggaatc aggtggggga ttggttcaac ctggaggaag tctccgtctg 60
tcttgtgcag cctctgggtt caacatcaag gatacctaca tacactgggt gagacaggca 120
ccaggtaaag gattggagtg ggtggcaagg atctacccta ccaatggcta cacccgatat 180
gccgacagtg tgaaaggcag gttcacgatt tccgctgaca caagcaagaa cacagcctac 240
ctgcagatga actcactgcg agcagaggat acggctgtct attactgctc tagatgggga 300
ggggacggtt tctacgctat ggactattgg ggacagggca ctcttgtgac agtctcgagt 360
gcttctacaa agggcccatc ggtcttcccc ctggcaccct cctccaagag cacctctggg 420
ggcacagcgg ccctgggctg cctggtcaag gactacttcc ccgaacctgt gacggtgtcg 480
tggaactcag gcgccctgac cagcggcgtg cacaccttcc cggctgtcct acagtcctca 540
ggactctact ccctcagcag cgtggtgacc gtgccctcca gcagcttggg cacccagacc 600
tacatctgca acgtgaatca caagcccagc aacaccaagg tcgataagaa agttgagccc 660
aaatcttgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag cacctgaact cctgggggga 720
ccgtcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct 780
gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ctgaggtcaa gttcaactgg 840
tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagtacaac 900
agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaatggcaag 960
gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc 1020
aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggatgag 1080
ctgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctatcc cagcgacatc 1140
gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 1200
ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg 1260
cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg 1320
cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa ccgaccctgt ataacgtgag cctggtgatg 1380
agcgataccg cgggcaccag ctat 1404
<210> 67
<211> 642
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 67
gatatccaga tgactcagag tccaagtagt ctcagtgcca gtgtaggtga tagggtaact 60
atcacttgtc gtgccagtca ggatgttaat actgctgtag cctggtatca gcagaaacca 120
ggtaaagccc caaaactact catctattcg gcctccttcc tctactctgg agtaccatct 180
agattcagtg gtagcagaag tggtactgat ttcactctga ctatcagtag tctccagcca 240
gaagatttcg ccacttacta ctgccagcaa cattatacta ctcctcccac gttcggtcag 300
ggtactaaag tagaaatcaa acgtacggta gcggccccat ctgtcttcat cttcccgcca 360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat 420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag 480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg 540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc 600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt 642
<210> 68
<211> 468
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 68
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys Pro Thr Leu Tyr Asn Val Ser Leu Val Met Ser Asp Thr Ala
450 455 460
Gly Thr Ser Tyr
465
<210> 69
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重组序列
<400> 69
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210

Claims (18)

1.药物组合物，其包含与药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体组合的单体融合蛋白，其中所述单体融合蛋白包含含有来自人IgG1或IgG4的两个重链Fc区的抗体Fc结构域；
其中一个或每个重链Fc区在其C-末端与来自人IgM的抗体附属物融合；
其中附属物半胱氨酸残基被修饰以防止二硫键形成；和
其中所述单体融合蛋白还包含抗原结合区。
2.权利要求1的药物组合物，其中所述半胱氨酸残基被缺失、取代或被巯基封端剂封闭。
3.权利要求1至2中任一项的药物组合物，其中所述抗原结合区是VH或VL抗原结合区。
4.权利要求1至2中任一项的药物组合物，其中所述抗原结合区选自Fab、scFv、dAb、VHH和DARPin。
5.权利要求1至2中任一项的药物组合物，其中所述抗原结合区与CD20或HER2/neu结合。
6.权利要求1至2中任一项的药物组合物，其中每个重链Fc区在其N端具有铰链区。
7.权利要求6的药物组合物，其中所述铰链区包含突变的序列CPPC。
8.权利要求1至2中任一项的药物组合物，其包含改变其Fc-受体结合特征的一个或多个突变。
9.权利要求1的药物组合物，其中每个重链Fc区包含SEQ ID NO26或27中任一个的氨基酸6至222所给出的序列或SEQ ID NO 30或31的氨基酸6至333所给出的序列或SEQ ID NO32或33中任一个的氨基酸6至221所给出的序列或SEQ ID NO 36或37的氨基酸6至332所给出的序列或由其组成。
10.权利要求9的药物组合物，其中每个重链Fc区还包含具有SEQ ID NO 3至25中任一个所给出的序列的铰链区。
11.权利要求1的药物组合物，其中所述单体融合蛋白包含两条相同的多肽链，每条多肽链由SEQ ID NO 26至37中任一个所给出的序列组成。
12.权利要求5的药物组合物，其中所述单体融合蛋白包含SEQ ID NO 52和53或由其组成。
13.权利要求5的药物组合物，其中所述单体融合蛋白包含SEQ ID NO 68和69或由其组成。
14.权利要求1至2中任一项的药物组合物，其中所述单体融合蛋白是纯化的单体。
15.权利要求14的药物组合物，其包含稳定所述蛋白质的单体形式的组分。
16.权利要求15的药物组合物，其另外包含其它活性成分。
17.权利要求1至4中任一项的药物组合物在制备用于治疗癌症的药物中的用途。
18.权利要求1至4中任一项的药物组合物在制备用于治疗免疫疾病的药物中的用途。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2939198A1 (en) 2014-03-05 2015-09-11 Ucb Biopharma Sprl Multimeric fc proteins
GB201607979D0 (en) 2016-05-06 2016-06-22 Liverpool School Tropical Medicine Monomeric proteins and uses thereof
AU2017279538A1 (en) 2016-06-07 2019-01-03 Gliknik Inc. Cysteine-optimized stradomers
CA3029744A1 (en) 2016-07-22 2018-01-25 Gliknik Inc. Fusion proteins of human protein fragments to create orderly multimerized immunoglobulin fc compositions with enhanced fc receptor binding
BR112019009495A2 (pt) 2016-12-09 2019-08-06 Gliknik Inc métodos de tratamento de distúrbios inflamatórios com compostos de fc multivalentes
WO2019115745A1 (en) * 2017-12-14 2019-06-20 CSL Behring Lengnau AG RECOMBINANT igG Fc MULTIMERS FOR THE TREATMENT OF NEUROMYELITIS OPTICA
WO2019175605A1 (en) * 2018-03-16 2019-09-19 Liverpool School Of Tropical Medicine Chimeric fc receptor binding proteins and uses thereof
CN115724985A (zh) * 2021-08-27 2023-03-03 三生国健药业（上海）股份有限公司 一种cdc平台抗体

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011073692A1 (en) * 2009-12-18 2011-06-23 The University Of Nottingham Proteins, nucleic acid molecules and compositions

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20020147326A1 (en) * 1996-06-14 2002-10-10 Smithkline Beecham Corporation Hexameric fusion proteins and uses therefor
US6475749B1 (en) * 1999-08-11 2002-11-05 The Regents Of The University Of California Rh hybrid antibody
DE10001372A1 (de) * 2000-01-14 2001-08-02 Deutsches Krebsforsch Anti-CD3-Einzelketten-Antikörper mit humanem Cmu3- und Cmu4- Domänen
AU2012392760C1 (en) * 2012-10-17 2021-08-12 CSL Behring Lengnau AG Immunomodulatory proteins
CA2939198A1 (en) * 2014-03-05 2015-09-11 Ucb Biopharma Sprl Multimeric fc proteins
JP6851199B2 (ja) * 2014-03-05 2021-03-31 ユーシービー バイオファルマ エスアールエル 多量体Ｆｃタンパク質
JP2018510339A (ja) * 2015-03-05 2018-04-12 ユーシービー バイオファルマ エスピーアールエル 重合体Ｆｃタンパク質及びその機能的特徴を改変するためのスクリーニング方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011073692A1 (en) * 2009-12-18 2011-06-23 The University Of Nottingham Proteins, nucleic acid molecules and compositions

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Addition of a μ-Tailpiece to IgG Results in Polymeric Antibodies with Enhanced Effector Functions Including Complement-Mediated Cytolysis by lgG4;Richard I. F.等;《The Journal of Immunology》;19951231;第154卷(第5期);摘要，第2228页右栏图1 *
Developmental Regulation of IgM Secretion: The Role of the Carboxy-Terminal Cysteine;Roberto Sitia等;《Cell》;19900309;第60卷;摘要，第783-784页，第787页右栏第1段 *
Effect of a tail piece cysteine deletion on biochemical and functional properties of an epidermal growth factor receptor-directed IgA2m(1) antibody;Christina Brunke等;《mAbs》;20131231;第5卷(第6期);摘要 *
Roberto Sitia等.Developmental Regulation of IgM Secretion: The Role of the Carboxy-Terminal Cysteine.《Cell》.1990,第60卷第781-790页. *

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