CN108459167A - 一种用于人体尿液中β-HCG、PDG定量检测的试剂盒及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种用于人体尿液中β‑HCG、PDG定量检测的试剂盒，所述试剂盒包括海绵垫和与所述海绵垫连接的β‑HCG试纸条及PDG试纸条，所述β‑HCG试纸条或所述PDG试纸条分别包括依次连接排列的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水纸。本发明的试剂盒以尿液为检测样本，可以一步同时检测尿液中β‑HCG、PDG，灵敏度高，检测效率高，操作便捷，安全无创伤，适于现场检测。本发明还包括一种用于人体尿液中β‑HCG、PDG定量检测的试剂盒的制备方法。

Description

一种用于人体尿液中β-HCG、PDG定量检测的试剂盒及其制备 方法
技术领域
本发明涉及免疫诊断领域，特别是，涉及一种用于人体尿液中β-HCG、PDG定量检测的试剂盒及其制备方法。
背景技术
HCG(人绒毛膜促性腺激素)是由胎盘合体滋养细胞分泌的一种糖蛋白激素，它是由α和β二聚体的糖蛋白组成。其中α-亚单位为垂体前叶激素所共有，β-亚单位是HCG所特异的。因此为避免交叉反应，目前均采用抗β-HCG单克隆抗体进行特异的HCG检查。HCG的检查对早期妊娠诊断有重要意义，对与妊娠相关疾病、滋养细胞肿瘤等疾病的诊断、鉴别和病程观察等有重要价值。另外，β-HCG还能够当做孕妇妊娠期间的监护观察指标，评估胎儿发育。目前临床定量检测β-HCG的产品主要以血液为检测样本，其方法主要有酶联免疫吸附法，化学发光法，荧光免疫层析法和免疫胶体金法。其中胶体金法因其方法简单，判断时间快速，操作方便较为通用。研究显示，同一个人在同一时刻的尿与血清的β-HCG检测，虽然是二种截然不同的样本，但其β-HCG定量结果之间有很好的一致性，相关系数γ＝0.83，血清中β-HCG浓度在大部分情况下比尿液中β-HCG浓度略高，但是尿液样本比血清采集容易，简单方便、无创伤。因此尿液样本的β-HCG定量检测有其特定的优势。
孕酮检查主要用于了解黄体的功能，卵巢有无排卵，是否受孕以及受孕胚胎是否健康等。临床常用于先兆性流产、习惯性流产等闭经或闭经原因的反应性诊断等。最新研究发现尿液中孕酮的主要代谢物PDG(孕二醇3-葡萄糖醛酸苷)与血液中孕酮的水平成正相关。孕酮的代谢物PDG可以监测生殖状况，协助辨别可孕期和不孕期。目前国内外用于孕酮的检测产品主要采用血液为检测样本，方法包括酶联免疫分析法、放射免疫分析法、化学发光免疫分析法、时间分辨免疫荧光法等。这些传统定量免疫检测产品(放免法、酶联法)都需要将标记的抗原或抗体(探针)和游离(探针)的抗原或抗体进行分离，才能通过昂贵的仪器设备读取结果，并且需要专业人员操作，所需时间长、操作步骤多、系统误差大。对于备孕期以及需要体外受精怀孕的女性通常需要在排卵期每天检查孕酮水平，经常性的采血带来一定痛苦和不安全，尿液测试取样相对方便、简单、无创伤。
现有的检测诊断技术中大部分是针对β-HCG或PDG单一检测，而未见到两者的联合检测产品，检测步骤繁琐。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种人体尿液中β-HCG、PDG定量检测的试剂盒及其制备方法。
为解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下：
一种用于人体尿液中β-HCG、PDG定量检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括海绵垫和与所述海绵垫连接的β-HCG试纸条及PDG试纸条，所述β-HCG试纸条或所述PDG试纸条分别包括依次连接排列的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水纸。
进一步地，所述β-HCG试纸条的金标垫由玻璃纤维浸泡β-HCG抗体金标结合物和兔IgG金标结合物干燥后制成，所述PDG试纸条的金标垫由玻璃纤维浸泡PDG单抗金标结合物和兔IgG金标结合物干燥后制成。
进一步地，所述β-HCG试纸条的硝酸纤维素膜靠近所述金标垫的一端设置有由预包被的β-HCG抗体形成的检测区，所述β-HCG试纸条的硝酸纤维素膜靠近所述吸水纸的一端设置有由预包被的羊抗兔IgG抗体形成的质控区。
进一步地，所述PDG试纸条的硝酸纤维素膜靠近金标垫的一端设置有由预包被的PDG-BSA半抗原形成的检测区，所述PDG试纸条的硝酸纤维素膜靠近所述吸水纸的一端设置有由预包被的羊抗兔IgG抗体形成的质控区。
进一步地，所述主壳体包括上盖和与上盖相互卡合的下盖，所述上盖上开设有第一视窗和第二视窗。
进一步地，所述上盖的外表面上还凹设有显示区，所述第一视窗和第二视窗并排开设于所述显示区内。
一种用于人体尿液中β-HCG、PDG定量检测的试剂盒的制备方法，其包括以下步骤：
(1)制备胶体金：加热超纯水至沸腾，向沸水中加入10％氯金酸溶液，快速加入10％柠檬酸三钠溶液，搅拌混匀，保持溶液沸腾，直到液体呈酒红色即停止加热，冷却至室温后补足失水；
(2)制备β-HCG抗体标记溶液：取一定体积的胶体金溶液，加入一定量的K2CO3调节PH，缓慢加入β-HCG抗体，继续搅拌30分钟后，加入10％BSA溶液封闭，离心，弃去上清液，沉淀用缓冲液悬浮，保存备用；
(3)制备PDG单抗标记溶液：取一定体积的胶体金溶液，加入一定量的K2CO3调节PH，缓慢加入PDG单抗，继续搅拌，加入10％BSA溶液封闭，离心，弃去上清液，沉淀用缓冲液悬浮，保存备用；
(4)制备兔IgG标记溶液：取一定体积的胶体金溶液，加入K2CO3调节PH，缓慢加入兔IgG，继续搅拌，加入10％BSA溶液封闭，离心，弃去上清液，沉淀用缓冲液悬浮，保存备用；
(5)将玻璃纤维胶分别浸泡在β-HCG抗体标记溶液、兔IgG标记溶液和PDG单抗标记溶液、兔IgG标记溶液中，干燥后作为金标垫备用；
(6)β-HCG抗体包被：在硝酸纤维素膜上分别包被β-HCG抗体形成检测区，包被羊抗兔IgG形成控制区，干燥后备用；
(7)PDG-BSA半抗原包被：在硝酸纤维素膜上分别包被PDG-BSA半抗原形成检测区，包被羊抗兔IgG抗体，干燥后备用。
进一步地，还包括样品垫处理步骤，样品垫分别用样品垫处理液浸泡处理，干燥后备用。
进一步地，还包括以下步骤，将吸水纸、硝酸纤维素膜、金标垫、样品垫依次粘贴于PVC板上，2mm重叠，压紧后3.9mm裁条，β-HCG试纸条和PDG试纸条分别装于下盖22上，装上海绵垫40、上盖21及端盖30。
进一步地，所述制备方法包括以下步骤，
(1)制备胶体金：加热1L超纯水至沸腾，向沸水中加入1ml 10％氯金酸溶液，快速加入1.5ml 10％柠檬酸三钠溶液，搅拌混匀，保持溶液沸腾，直到液体呈酒红色即停止加热，冷却至室温后补足失水；
(2)制备β-HCG抗体标记溶液：取一定体积的胶体金溶液，加入0.1mol/L K2CO3调节PH，缓慢加入β-HCG抗体，β-HCG抗体的浓度控制为10ug/ml左右，继续搅拌30分钟后，加入10％BSA溶液封闭15分钟，12000～15000r/min离心30分钟，弃去上清液，沉淀用缓冲液悬浮，4℃保存备用；
(3)制备PDG单抗标记溶液：取一定体积的胶体金溶液，0.1mol/L K2CO3调节PH，缓慢加入PDG单抗，PDG单抗的浓度为3.5ug/ml左右，继续搅拌30分钟后，加入10％BSA溶液封闭15分钟，12000～15000r/min离心30分钟，弃去上清液，沉淀用缓冲液悬浮，4℃保存备用；
(4)制备兔IgG标记溶液：取一定体积的胶体金溶液，0.1mol/L K2CO3调节PH，缓慢加入兔IgG，使其终浓度为4ug/ml，继续搅拌30分钟后，加入10％BSA溶液封闭15分钟，12000～15000r/min离心30分钟，弃去上清液，沉淀用缓冲液悬浮，4℃保存备用；
(5)将玻璃纤维胶分别浸泡在β-HCG抗体标记溶液、兔IgG标记溶液和PDG单抗标记溶液、兔IgG标记溶液中，干燥后作为金标垫备用；
(6)β-HCG抗体包被：在硝酸纤维素膜上分别包被β-HCG抗体形成检测区，包被羊抗兔IgG形成控制区，干燥后备用；
(7)PDG-BSA半抗原包被：在硝酸纤维素膜上分别包被PDG-BSA半抗原形成检测区，包被羊抗兔IgG抗体，干燥后备用；
(8)样品垫处理：样品垫分别用样品垫处理液浸泡处理，干燥后备用；
(9)将吸水纸、硝酸纤维素膜、金标垫、样品垫依次粘贴于PVC板上，2mm重叠，压紧后3.9mm裁条，β-HCG和PDG检测试纸条分别装于下盖22上，装上海绵垫40、上盖21及端盖30。
相比现有技术，本发明的有益效果在于：
本发明的人体尿液中β-HCG、PDG定量检测的试剂盒能够同时实现β-HCG和PDG联合检测，高效、准确，可以减少重复工作，提高临床诊断效率；安全无创伤，尿液测试取样相对方便、简单、无创伤，操作简单。
附图说明
图1为本发明的人体尿液中β-HCG、PDG定量检测的试剂盒的主视图；
图2为图1所示试剂盒的部分分解图；
图3为图2所示试剂盒的局部分解图；
图4为图2所示试剂盒的下盖的结构示意图；
图5为本发明的β-HCG检测曲线图；
图6为本发明的PDG检测检测曲线图。
图中零部件名称及编号分别为：
试剂盒100 主壳体20 端盖30
海绵垫40 β-HCG试纸条50 PDG试纸条60
上盖21 下盖22 第一视窗211
第二视窗212 显示区210 上卡合部215
凸条217 卡合孔2152 凸台218
配合孔2182 安装部221 卡合凸起222
下卡合部225 开口31 样品垫51、61
金标垫52、62 硝酸纤维素膜53、63 吸水纸54、64
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明的人体尿液中β-HCG、PDG定量检测的试剂盒及其制备方法作进一步详细说明。
如同时参阅图1至图4，本发明的人体尿液中β-HCG、PDG定量检测的试剂盒100包括主壳体20、盖设于主壳体20一端的端盖30、收容于主壳体20内部的海绵垫40、β-HCG试纸条50及PDG试纸条60。
请主壳体20包括上盖21和与上盖21相互卡合的下盖22。上盖21上开设有第一视窗211和第二视窗212。本实施方式中，上盖21的外表面上还凹设有显示区210，第一视窗211和第二视窗212并排开设于显示区210内，可以理解地，显示区210还可以在印刷文字或图案，方便使用者观察测试结果。上盖21的一端设置有上卡合部215，上盖21的内表面设置有三个凸条217，三个凸条217分布于第一视窗211和第二视窗212的两侧。卡合部215上开设有卡合孔2152，卡合部215和上盖21的内表面上分别凸设有多个凸台218，每一个凸台218的端面开设有一个配合孔2182。
下卡合部225和下盖22的内表面上设置有用于安装β-HCG试纸条50及PDG试纸条60安装部221及能够与配合孔2182相卡合的卡合凸起222。下盖22的一端对应上卡合部215设置有下卡合部225。
端盖30大致呈一端具有开口31的筒状，端盖30的内壁上对应卡合孔2152凸设置有卡持部(图未示)。
β-HCG试纸条50包括样品垫51、金标垫52、硝酸纤维素膜53和吸水纸54。硝酸纤维素膜53靠近金标垫52的一端设置有由预包被的β-HCG抗体形成的检测区(T线)，硝酸纤维素膜53靠近吸水纸54的一端设置有由预包被的羊抗兔IgG抗体形成的质控区(C线)。
PDG试纸条60包括样品垫61、金标垫62、硝酸纤维素膜63和吸水纸64。硝酸纤维素膜63靠近金标垫62的一端设置有由预包被的PDG-BSA半抗原形成的检测区(T线)，硝酸纤维素膜63靠近吸水纸64的一端设置有由预包被的羊抗兔IgG抗体形成的质控区(C线)。
金标垫52由玻璃纤维浸泡β-HCG抗体金标结合物和兔IgG金标结合物干燥后制成，金标垫62由玻璃纤维浸泡PDG单抗金标结合物和兔IgG金标结合物干燥后制成。
人体尿液中β-HCG、PDG定量检测的试剂盒100检测β-HCG检测原理为，利用胶体金免疫层析技术，采用双抗体夹心法检测β-HCG，样本经海绵垫40吸取后经样品垫51到达金标垫52，当待测样本中含有的β-HCG浓度等于或高于最低检测限时，样本中的β-HCG先和金标垫52上标记的β-HCG抗体形成反应复合物，在层析作用下反应复合物沿着硝酸纤维膜53向前移动，与检测区预包被的β-HCG抗体结合，最终在T线形成一条肉眼可见的红色反应线；相反，当待测样本中不含β-HCG或者β-HCG浓度低于最低检测限时，则在T线无肉眼可见红色反应线形成。β-HCG浓度越高，T线显色越深。因质控区(C线)包被羊抗兔IgG抗体，无论样本中是否存在β-HCG，金标垫52上的兔IgG均会与质控区包被的羊抗兔IgG抗体形成红色反应线。
同时，本发明的人体尿液中β-HCG、PDG定量检测的试剂盒100可以同时检测前述样本中PDG的含量，PDG的检测采用竞争法，样本经海绵垫40吸取后经样品垫61到达金标垫62，检测线(T线)包被的重组抗原(PDG-BSA)和待检样品中的PDG竞争结合金标上的PDG抗体，若待测样品中不含PDG时，金标PDG抗体与检测区(T线)预包被的重组抗原(PDG-BSA)结合，在T线形成肉眼可见的红色反应线；若待测样品中含有PDG，PDG和金标PDG抗体结合，在层析作用下沿着硝酸纤维膜63向前移动，抑制金标PDG抗体与检测区(T线)重组抗原(PDG-BSA)的结合，最终在T线形成的红色反应线变弱。样本中PDG浓度越高，T线颜色越浅。T线颜色的深浅与样本中PDG含量存在负相关。质控区(C线)包被羊抗兔IgG抗体，无论样本中是否存在PDG，金标垫上的兔IgG均会与C线预包被的羊抗兔IgG抗体反应形成红色反应线。
本说明书还包括上述人体尿液中β-HCG、PDG定量检测的试剂盒100的制备方法，包括：
(1)制备胶体金：加热超纯水至沸腾，向沸水中加入10％氯金酸溶液，快速加入10％柠檬酸三钠溶液，搅拌混匀，保持溶液沸腾，直到液体呈酒红色即停止加热，冷却至室温后补足失水；
(2)制备β-HCG抗体标记溶液：取一定体积的胶体金溶液，加入一定量的K2CO3调节PH，缓慢加入β-HCG抗体，继续搅拌30分钟后，加入10％BSA溶液封闭，离心，弃去上清液，沉淀用缓冲液悬浮，保存备用；
(3)制备PDG单抗标记溶液：取一定体积的胶体金溶液，加入一定量的K2CO3调节PH，缓慢加入PDG单抗，继续搅拌，加入10％BSA溶液封闭，离心，弃去上清液，沉淀用缓冲液悬浮，保存备用；
(4)制备兔IgG标记溶液：取一定体积的胶体金溶液，加入K2CO3调节PH，缓慢加入兔IgG，继续搅拌，加入10％BSA溶液封闭，离心，弃去上清液，沉淀用缓冲液悬浮，保存备用；
(5)将玻璃纤维分别浸泡在β-HCG抗体标记溶液、兔IgG标记溶液和PDG单抗标记溶液、兔IgG标记溶液中，干燥后作为金标垫备用；
(6)β-HCG抗体包被：在硝酸纤维素膜上分别包被β-HCG抗体形成检测区，包被羊抗兔IgG形成质控区，干燥后备用；
(7)PDG-BSA半抗原包被：在硝酸纤维素膜上分别包被PDG-BSA半抗原形成检测区，包被羊抗兔IgG抗体，干燥后备用；
(8)样品垫处理：样品垫分别用样品垫处理液浸泡处理，干燥后备用。
(9)将吸水纸、金标垫、硝酸纤维素膜依次粘贴于PVC板上，约2mm重叠，压紧后3.9mm裁条，β-HCG和PDG检测试纸条分别装于下盖22上，装上海绵垫40、上盖21及端盖30。
实施例1
(1)制备胶体金：加热1L超纯水至沸腾，向沸水中加入1ml 10％氯金酸溶液，快速加入1.5ml 10％柠檬酸三钠溶液，搅拌混匀，保持溶液沸腾，直到液体呈酒红色即停止加热，冷却至室温后补足失水；
(2)制备β-HCG抗体标记溶液：取一定体积的胶体金溶液，加入0.1mol/L K2CO3调节PH，缓慢加入β-HCG抗体，β-HCG抗体的浓度控制为10ug/ml左右，继续搅拌30分钟后，加入10％BSA溶液封闭15分钟，12000～15000r/min离心30分钟，弃去上清液，沉淀用缓冲液悬浮，4℃保存备用；
(3)制备PDG单抗标记溶液：取一定体积的胶体金溶液，0.1mol/L K2CO3调节PH，缓慢加入PDG单抗，PDG单抗的浓度为3.5ug/ml左右，继续搅拌30分钟后，加入10％BSA溶液封闭15分钟，12000～15000r/min离心30分钟，弃去上清液，沉淀用缓冲液悬浮，4℃保存备用；
(4)制备兔IgG标记溶液：取一定体积的胶体金溶液，0.1mol/L K2CO3调节PH，缓慢加入兔IgG，使其终浓度为4ug/ml左右，继续搅拌30分钟后，加入10％BSA溶液封闭15分钟，12000～15000r/min离心30分钟，弃去上清液，沉淀用缓冲液悬浮，4℃保存备用；
(5)将玻璃纤维胶分别浸泡在β-HCG抗体标记溶液、兔IgG标记溶液和PDG单抗标记溶液、兔IgG标记溶液中，干燥后作为金标垫备用；
(6)β-HCG抗体包被：在硝酸纤维素膜上分别包被β-HCG抗体形成检测区，包被羊抗兔IgG形成质控区，干燥后备用；
(7)PDG-BSA半抗原包被：在硝酸纤维素膜上分别包被PDG-BSA半抗原形成检测区，包被羊抗兔IgG抗体，干燥后备用；
(8)样品垫处理：样品垫分别用样品垫处理液浸泡处理，干燥后备用。
(9)将吸水纸、硝酸纤维素膜、金标垫、样品垫依次粘贴于PVC板上，约2mm重叠，压紧后3.9mm裁条，β-HCG和PDG检测试纸条分别装于下盖22上，装上海绵垫40、上盖21及端盖30。
使用方法及步骤
(1)检测人将海绵垫插入尿杯中10-15秒，至肉眼可见尿液样本爬上两侧检测区，即可取出。
(2)将试剂盒100平放，通过第一视窗211和第二视窗212观察，等待红色条带出现。
(3)10分钟内通过胶体金免疫分析仪读取结果，10分钟后的检测结果判读无效。胶体金免疫分析仪内置的分析系统和定标程序对β-hCG和PDG进行定标。每个标准浓度(mIU/ml)测双份然后取其平均值存贮电脑中，以后在对病人标本检测时，每次将病人标本的测定值通过标准曲线计算得到。并用质控品定期对仪器进行校准。
β-HCG检测
标准曲线制作：
标准品用阴性尿液稀释至12.5、25、500、1000、5000、10000、15000mIU/ml，β-HCG试剂条检测，胶体金免疫分析仪读取T值，检测结果见下表。
浓度mIU T值
12.5 67.5
25 118
500 928
1000 1325
5000 1908
10000 2197
15000 2407
以标准品浓度(mIU/ml)为横坐标，T均值为纵坐标做对数曲线如图5，对病人标本检测时，每次将病人标本的测定值通过标准曲线计算得到。
PDG检测
标准曲线制作：标准品用阴性尿液稀释至0、100、500、1250、2500、3500、5000ng/ml
PDG试剂条检测，胶体金免疫分析仪读取T值；定义0ng/ml浓度的T值为B0值，处理数据得到B0与其他各个浓度T值的比值(B0/B)，检测结果见下表。
浓度(ng/ml) T值 B0/B
0 827 1
100 560 1.476786
500 394 2.098985
1250 367 2.253406
2500 215 3.846512
3500 192 4.307292
5000 117 7.068376
以B0/B为纵坐标，标准品浓度(ng/ml)为横坐标做线性回归图如图6，对病人标本检测时，每次将病人标本的测定值通过标准曲线计算得到。
本发明的人体尿液中β-HCG、PDG定量检测的试剂盒100可以通过一步法同时检测人体尿液中是否存在β-HCG、PDG，以及测定β-HCG、PDG的含量，检测高效、便捷，且取样不会给人体造成创伤。
对本领域的技术人员来说，可根据以上描述的技术方案以及构思，做出其它各种相应的改变以及形变，而所有的这些改变以及形变都应该属于本发明权利要求的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种用于人体尿液中β-HCG、PDG定量检测的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括海绵垫和与所述海绵垫连接的β-HCG试纸条及PDG试纸条，所述β-HCG试纸条或所述PDG试纸条分别包括依次连接排列的样品垫、金标垫、硝酸纤维素膜和吸水纸。
2.如权利要求1所述的用于人体尿液中β-HCG、PDG定量检测的试剂盒，其特征在于，所述β-HCG试纸条的金标垫由玻璃纤维浸泡β-HCG抗体金标结合物和兔IgG金标结合物干燥后制成，所述PDG试纸条的金标垫由玻璃纤维浸泡PDG单抗金标结合物和兔IgG金标结合物干燥后制成。
3.如权利要求1所述的用于人体尿液中β-HCG、PDG定量检测的试剂盒，其特征在于，所述β-HCG试纸条的硝酸纤维素膜靠近所述金标垫的一端设置有由预包被的β-HCG抗体形成的检测区，所述β-HCG试纸条的硝酸纤维素膜靠近所述吸水纸的一端设置有由预包被的羊抗兔IgG抗体形成的质控区。
4.如权利要求1所述的用于人体尿液中β-HCG、PDG定量检测的试剂盒，其特征在于，所述PDG试纸条的硝酸纤维素膜靠近金标垫的一端设置有由预包被的PDG-BSA半抗原形成的检测区，所述PDG试纸条的硝酸纤维素膜靠近所述吸水纸的一端设置有由预包被的羊抗兔IgG抗体形成的质控区。
5.如权利要求1所述的用于人体尿液中β-HCG、PDG定量检测的试剂盒，其特征在于，所述主壳体包括上盖和与上盖相互卡合的下盖，所述上盖上开设有第一视窗和第二视窗。
6.如权利要求5所述的用于人体尿液中β-HCG、PDG定量检测的试剂盒，其特征在于，所述上盖的外表面上还凹设有显示区，所述第一视窗和第二视窗并排开设于所述显示区内。
7.一种用于人体尿液中β-HCG、PDG定量检测的试剂盒的制备方法，其包括以下步骤：
(1)制备胶体金：加热超纯水至沸腾，向沸水中加入10％氯金酸溶液，快速加入10％柠檬酸三钠溶液，搅拌混匀，保持溶液沸腾，直到液体呈酒红色即停止加热，冷却至室温后补足失水；
(2)制备β-HCG抗体标记溶液：取一定体积的胶体金溶液，加入一定量的K2CO3调节PH，缓慢加入β-HCG抗体，继续搅拌30分钟后，加入10％BSA溶液封闭，离心，弃去上清液，沉淀用缓冲液悬浮，保存备用；
(3)制备PDG单抗标记溶液：取一定体积的胶体金溶液，加入一定量的K2CO3调节PH，缓慢加入PDG单抗，继续搅拌，加入10％BSA溶液封闭，离心，弃去上清液，沉淀用缓冲液悬浮，保存备用；
(4)制备兔IgG标记溶液：取一定体积的胶体金溶液，加入K2CO3调节PH，缓慢加入兔IgG，继续搅拌，加入10％BSA溶液封闭，离心，弃去上清液，沉淀用缓冲液悬浮，保存备用；
(5)将玻璃纤维胶分别浸泡在β-HCG抗体标记溶液、兔IgG标记溶液和PDG单抗标记溶液、兔IgG标记溶液中，干燥后作为金标垫备用；
(6)β-HCG抗体包被：在硝酸纤维素膜上分别包被β-HCG抗体形成检测区，包被羊抗兔IgG形成控制区，干燥后备用；
(7)PDG-BSA半抗原包被：在硝酸纤维素膜上分别包被PDG-BSA半抗原形成检测区，包被羊抗兔IgG抗体，干燥后备用。
8.如权利要求7所述的用于人体尿液中β-HCG、PDG定量检测的试剂盒的制备方法，其特征在于：还包括样品垫处理步骤，样品垫分别用样品垫处理液浸泡处理，干燥后备用。
9.如权利要求7所述的用于人体尿液中β-HCG、PDG定量检测的试剂盒的制备方法，其特征在于：还包括以下步骤，将吸水纸、硝酸纤维素膜、金标垫、样品垫依次粘贴于PVC板上，2mm重叠，压紧后3.9mm裁条，β-HCG试纸条和PDG试纸条分别装于下盖22上，装上海绵垫40、上盖21及端盖30。
10.如权利要求7所述的用于人体尿液中β-HCG、PDG定量检测的试剂盒的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括以下步骤，
(1)制备胶体金：加热1L超纯水至沸腾，向沸水中加入1ml 10％氯金酸溶液，快速加入1.5ml 10％柠檬酸三钠溶液，搅拌混匀，保持溶液沸腾，直到液体呈酒红色即停止加热，冷却至室温后补足失水；
(2)制备β-HCG抗体标记溶液：取一定体积的胶体金溶液，加入0.1mol/L K2CO3调节PH，缓慢加入β-HCG抗体，β-HCG抗体的浓度控制为10ug/ml左右，继续搅拌30分钟后，加入10％BSA溶液封闭15分钟，12000～15000r/min离心30分钟，弃去上清液，沉淀用缓冲液悬浮，4℃保存备用；
(3)制备PDG单抗标记溶液：取一定体积的胶体金溶液，0.1mol/L K2CO3调节PH，缓慢加入PDG单抗，PDG单抗的浓度为3.5ug/ml左右，继续搅拌30分钟后，加入10％BSA溶液封闭15分钟，12000～15000r/min离心30分钟，弃去上清液，沉淀用缓冲液悬浮，4℃保存备用；
(4)制备兔IgG标记溶液：取一定体积的胶体金溶液，0.1mol/L K2CO3调节PH，缓慢加入兔IgG，使其终浓度为4ug/ml，继续搅拌30分钟后，加入10％BSA溶液封闭15分钟，12000～15000r/min离心30分钟，弃去上清液，沉淀用缓冲液悬浮，4℃保存备用；
(5)将玻璃纤维胶分别浸泡在β-HCG抗体标记溶液、兔IgG标记溶液和PDG单抗标记溶液、兔IgG标记溶液中，干燥后作为金标垫备用；
(6)β-HCG抗体包被：在硝酸纤维素膜上分别包被β-HCG抗体形成检测区，包被羊抗兔IgG形成控制区，干燥后备用；
(7)PDG-BSA半抗原包被：在硝酸纤维素膜上分别包被PDG-BSA半抗原形成检测区，包被羊抗兔IgG抗体形成控制区，干燥后备用；
(8)样品垫处理：样品垫分别用样品垫处理液浸泡处理，干燥后备用；
(9)将吸水纸、硝酸纤维素膜、金标垫、样品垫依次粘贴于PVC板上，2mm重叠，压紧后3.9mm裁条，β-HCG和PDG检测试纸条分别装于下盖22上，装上海绵垫40、上盖21及端盖30。
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