CN108459104A - 一种检测鱼类胆汁中个人护理品的方法 - Google Patents

一种检测鱼类胆汁中个人护理品的方法 Download PDF

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柳王荣
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South China Normal University
South China Institute of Environmental Science of Ministry of Ecology and Environment
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GUANGDONG PROVINCIAL INSTITUTE OF BIOLOGICAL PRODUCTS AND MATERIA MEDICA
South China Normal University
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Abstract

本发明涉及一种检测鱼类胆汁中个人护理品的方法，主要包括以下步骤：样品添加内标和水解、样品提取和净化、分析检测。本发明基于多同位素内标分析方法，采用最佳蛋白和磷脂去除管和d‑SPE管对胆汁样品进行提取净化，通过UPLC‑MS/MS仪器和GC‑MS仪器测定净化试样中的个人护理品(PCPs)的浓度，避免了样品保存时间短、检出限较高、复杂基质干扰严重等问题，建立了一套简便快捷且准确度和灵敏度较高的检测方法。另外，该方法通过在提取净化前的胆汁样品中加入或不加入水解酶，实现了胆汁中PCPs的总浓度和自由态浓度的对比测定，有助于揭示PCPs在鱼类胆汁中的存在形态。

Description

一种检测鱼类胆汁中个人护理品的方法
技术领域
本发明涉及个人护理品检测方法领域，特别是涉及一种检测鱼类胆汁中个人护理品的方法。
背景技术
个人护理品(Personal Care Products，PCPs)是人们日常生活中不可或缺的日用化学品，其中包含很多活性成分，例如用于抗真菌、消毒、防污、防腐等的杀生剂类，用作化妆品固着剂和定香剂等的合成麝香类，用作化妆品紫外吸收剂的苯并三唑类。这类日用化学品使用后，其中的PCPs类活性成分通过污水处理厂直接或间接排入水环境。而污水处理厂对PCPs的去除效率有限，因此，PCPs在国内外河流环境中频繁检出，个别化合物甚至高达μg/L数量级。河流环境中较高浓度的PCPs对于栖息于其中的水生生物会产生一系列生态毒理效应，例如会在各种鱼类体内产生生物富集作用。
对鱼类而言，肝脏代谢作用后经胆囊排泄胆汁是一种去除环境外源性污染物的重要途径。因此，鱼胆汁中外源性污染物的含量能够作为生物体吸收外源性污染物后内暴露的重要指标，尤其是亲水性污染物，这类污染物易于以胆汁形式排泄。因此，有必要建立一种检测鱼类胆汁中PCPs的方法，用于检测野外鱼体胆汁中PCPs的含量，从而指示环境中生活污水的污染。
目前，针对PCPs的环境监测，已有相关研究采用超声提取、固相萃取(SolidPhaseExtraction，SPE)和高效液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)法分析测定水体和土壤样品中的PCPs，以及基于QuEChERS(快速Quick、简单Easy、廉价Cheap、高效Effective、耐用Rugged、安全Safe)方法结合超高效液相色谱串联质谱法(UPLC-MS/MS)和气相色谱串联质谱(GC-MS)测定鱼肉样品中的PCPs。但目前为止，还没有野外鱼胆汁中PCPs检测方法的报道。因此，亟需建立一种鱼类胆汁样品中PCPs浓度的检测方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种检测鱼类胆汁中个人护理品的方法。
为实现上述目的，本发明的技术方案如下：
一种检测鱼类胆汁中个人护理品的方法，包括以下步骤：(1)样品添加内标和水解，(2)样品提取和净化，(3)分析检测；所述的胆汁是单一鱼类胆汁；
所述步骤(1)中，实验组1：在胆汁样品中加入水解酶β-glucuronidase和aryl-sulfatase；实验组2：在胆汁样品中不加入水解酶β-glucuronidase和/或aryl-sulfatase；
所述步骤(2)中，先用蛋白和磷脂去除管和乙腈对样品进行混合沉淀，再采用d-SPE管进行分散型固相萃取，所述d-SPE管内含900mg无水硫酸镁、150mg乙二胺基-N-丙基填料和150mg C18；在所述蛋白和磷脂去除管和d-SPE管中，加入的有机试剂为含1％v/v乙酸的乙腈；
所述步骤(3)中，将步骤(2)的净化产品分为两份：一份采用UPLC-MS/MS仪器检测；一份采用GC-MS仪器检测；
用所述UPLC-MS/MS仪器的ESI+模式测定的个人护理品，包括避蚊胺、艾卡瑞丁、多菌灵、噻苯咪唑、氟康唑、酮康唑、甘宝素、克霉唑、咪康唑、伊曲康唑、苯并三唑、5-甲基苯并三唑、5-氯苯并三唑、5,6-双甲基苯并三唑；
用所述UPLC-MS/MS仪器的ESI-模式测定的个人护理品，包括尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯、尼泊金丁酯、三氯卡班和三氯生；
用所述GC-MS仪器测定的个人护理品，包括吐纳麝香、佳乐麝香、二甲苯麝香和麝香酮。
优选的，所述步骤(1)中添加的内标是抑霉唑-D5、噻苯咪唑-D6、氟康唑-D4、酮康唑-D8、克霉唑-D5、咪康唑-D5、尼泊金甲酯-D4、尼泊金丙酯-D4、三氯卡班-D7和13C12-三氯生、吐纳麝香-D3和二甲苯麝香-D15，所述步骤(1)中，用pH＝5.0的0.2M乙酸缓冲液配置成内标溶液。
优选的，所述步骤(1)实验组1所述水解酶均采用pH＝5.0的0.2M乙酸缓冲液进行稀释，所述水解酶的单位均是10000unit/mL。
优选的，用所述UPLC-MS/MS仪器检测，溶剂是50％v/v甲醇-水溶液；UPLC检测条件为：进样体积5μL，色谱柱反相C18柱，柱温40℃；用所述GC-MS仪器检测，溶剂是二氯甲烷。
优选的，所述ESI+模式下流动相为含5mM乙酸铵和0.05％v/v甲酸的超纯水缓冲液和甲醇，流速为0.3mL/min；干燥气流速为4L/min，干燥气温度为250℃，鞘气流速为12L/min，鞘气温度为300℃，雾化器压力为45psi，毛细管电压为4500V和喷嘴电压为500V。
优选的，所述ESI-模式下流动相组成为超纯水和甲醇，流速为0.35mL/min；干燥气流速为6L/min，干燥气温度为280℃，鞘气流速为11L/min，鞘气温度为350℃，雾化器压力为50psi，毛细管电压为3500V和喷嘴电压为2000V。
优选的，对所述UPLC-MS/MS仪器测定个人护理品制备标准溶液，用甲醇或超纯水对标准溶液和内标溶液进行稀释，定容成1M的50％v/v甲醇-水溶液，使得个人护理品的浓度均依次为0.1μg/L、0.25μg/L、0.5μg/L、1μg/L、2.5μg/L、5μg/L、25μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L，内标浓度均为50μg/L。
优选的，所述的GC-MS仪器的检测条件为：以不分流模式进样，进样体积2.0μL；色谱柱DB-5MS UI，氦气作为载气，流速1.0mL/min；色谱柱升温程序为0min时80℃，以15℃/min升至170℃，以1℃/min升至185℃，再以20℃/min升至300℃，维持5min；进样口、传输线、离子源EI和质谱分析器的温度分别为280℃、300℃、230℃和150℃。
优选的，对所述GC-MS仪器测定个人护理品制备标准溶液，用二氯甲烷对标准溶液和内标溶液进行稀释，定容至1mL，使得个人护理品的浓度均依次为1μg/L、5μg/L、10μg/L、20μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L，内标浓度均为50μg/L。
本发明的机理
(1)引入12种同位素内标，建立多同位素内标的分析方法，做到多数PCPs都有对应的同位素标记物作为内标，对于无法购买到对应同位素标记物的PCPs，选择结构、性质相近物质的同位素标记物作为内标。
(2)引入蛋白和磷脂去除管(3mL)和d-SPE管(900mg无水硫酸镁、150mg PSA和150mg C18)，简化前处理程序，提高提取净化效果，尽可能降低基质效应的干扰。
(3)在样品提取净化前中加入水解酶辅助释放胆汁中共轭态的PCPs，有助于更为准确地测定胆汁中PCPs的总浓度，包括自由态和共轭态。
基于以上三项关键技术方案，旨在建立高效快捷且准确度更高、检测限更低、稳定性更强的多同位素内标分析方法。
本发明的优点和有益效果
(1)鱼类胆汁不同于常规的河水等水样，胆汁中的基质如果没有净化直接使用仪器测定，基质效应非常大，对目标物质离子化造成严重影响；鱼类胆汁成分复杂，含有磷脂、蛋白质、胆色素、胆固醇等生物基质；常规的水样前处理方法不能有效去除胆汁样品中的生物基质，需要采用专门的去除手段进行前处理，建立有效的去除手段是一个很大的挑战；本发明有效的解决了样品基质去除的难题，去除的样品颜色清澈，基质干扰小。
(2)采用多同位素内标分析方法，可以有效补偿因胆汁样品前处理损耗而导致的PCPs浓度变化，延长了样品的保存时间；可以有效降低检测仪器和基质效应对测定结果的影响，提高了样品检测的准确度，降低了方法的检测限，尤其对于低浓度样品。
(3)在胆汁样品提取净化过程中，采用蛋白和磷脂去除管和d-SPE管(内含900mg无水硫酸镁+150mg PSA+150mg C18)，可以明显简化前处理程序，提高净化效果，尽可能降低样品的基质效应，提高了样品检测的准确度，降低了方法的检测限尤其对于低浓度样品。
(4)待侧胆汁样品等分为两份，一份加入水解酶水解，辅助释放胆汁中共轭态的PCPs，用于测定胆汁中PCPs的总浓度(包括自由态和共轭态的PCPs)；另一份不水解，用于测定胆汁中自由态PCPs的浓度，对比测定结果有助于揭示PCPs在鱼类胆汁中的存在形态。
(5)经过同样前处理步骤(水解或不水解)得到的同一份净化试样，采用UPLC-MS/MS仪器对鱼类胆汁中20种PCPs，采用GC-MS仪器对鱼类胆汁中4种PCPs(包括自由态和共轭态的PCPs)进行测定，定量精准，灵敏度高，可同时测定多种PCPs。
附图说明
图1为本发明的检测方法流程图。
图2为UPLC-MS/MS仪器ESI+模式下对100μg/L的14种PCPs及内标混合标准溶液的总离子流图。
图3为UPLC-MS/MS仪器ESI+模式下对100μg/L的14种PCPs的提取离子流图。
图4为UPLC-MS/MS仪器ESI-模式下对100μg/L的6种PCPs及内标混合标准溶液的总离子流图。
图5为UPLC-MS/MS仪器ESI-模式下对100μg/L的6种PCPs的提取离子流图。
图6为GC-MS仪器对100μg/L的4种PCPs及内标混合标准溶液的总离子流图。
图7为GC-MS仪器对100μg/L的4种PCPs的提取离子流图。
图8为实施例5的UPLC-MS/MS仪器和GC-MS仪器测定的化合物的提取离子流图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。
实施例1
本发明实施例提供一种鲤鱼胆汁样品中PCPs的检测方法，包括以下步骤：
(1)样品添加内标和水解
准确移取50μL混匀后的鲤鱼胆汁样品两份，分别用于胆汁中PCPs总浓度(自由态+共轭态)和自由态浓度的测定。用于PCPs总浓度测定的样品需要进行水解，于50μL胆汁样品中加入500μg/L的12种混合内标(抑霉唑-D5、噻苯咪唑-D6、氟康唑-D4、酮康唑-D8、克霉唑-D5、咪康唑-D5、尼泊金甲酯-D4、尼泊金丙酯-D4、三氯卡班-D7和13C12-三氯生、吐纳麝香-D3、二甲苯麝香-D15)溶液40μL(溶于pH＝5.0的0.2M乙酸缓冲液)，再加入10μL 10000unit/mL的水解酶溶液(采用pH＝5.0的0.2M乙酸缓冲液稀释)，然后置于37℃恒温培养箱中水解4h，待净化；另一份无需水解的50μL胆汁样品同样加入500μg/L的12种混合内标溶液40μL和pH＝5.0的0.2M乙酸缓冲液10μL，待净化。
(2)样品提取净化
将步骤(1)中两份待净化液分别转入盛有500μL乙腈(含1％乙酸，体积比)的Captiva NDLipid蛋白和磷脂去除管，涡旋30s，置于SPE装置上，抽真空，在25～50kPa真空条件下，提取溶液缓慢滴落(蛋白和磷脂干扰物被截留)，收集于d-SPE管中。于CaptivaNDLipid管中再次加入200μL乙腈(含1％乙酸，体积比)冲洗管壁上残留的胆汁，洗涤液并入对应的d-SPE管。于d-SPE管中再加入5.2mL乙腈(含1％乙酸，体积比)，手动摇晃1min。于转速为2364g条件下离心10min。取3mL上清液于玻璃管中，置于柔和的氮气流下浓缩至近干(室温)。然后加入200μL甲醇再溶解，混匀，采用0.22μm的尼龙针筒过滤器过滤后，作为待仪器检测的净化试样。
(3)分析检测
将步骤(2)所得待测试样均分为两份，将其中的甲醇以氮吹再溶解的形式分别替换为甲醇/水溶液(50/50，体积比)和二氯甲烷，分别采用UPLC-MS/MS仪器和GC-MS仪器分析检测其中杀生剂类+苯并三唑类和合成麝香类PCPs的浓度。
所采用的UPLC-MS/MS仪器为Agilent 1200系列的超高效液相色谱串联Agilent6460A的三重四级杆质谱(电喷雾电离源ESI，多反应监测模式MRM)，ESI包含ESI+和ESI-两种模式。
UPLC检测条件为：进样体积5μL；色谱柱Agilent Zorbax SB-C18(100mm×3.0mm，1.8μm)；柱温40℃。ESI+模式下流动相组成为超纯水缓冲液(含5mM乙酸铵和0.05％甲酸(体积比))(A)和甲醇(B)，梯度洗脱程度如下：0min 50％B，5min 80％B，6.5min 90％B，11.5min 90％B，Post time 5min，流动相的流速为0.3mL/min；ESI-模式下流动相组成为超纯水(A)和甲醇(B)，梯度洗脱程度如下：0min 50％B，3min 56％B，4min 90％B，8.5min90％B，Post time 5min，流动相的流速为0.35mL/min。
三重四级杆质谱检测条件为：ESI+模式下干燥气流速为4L/min，干燥气温度为250℃，鞘气流速为12L/min，鞘气温度为300℃，雾化器压力为45psi，毛细管电压为4500V和喷嘴电压为500V；ESI-负模式下干燥气流速为6L/min，干燥气温度为280℃，鞘气流速为11L/min，鞘气温度为350℃，雾化器压力为50psi，毛细管电压为3500V和喷嘴电压为2000V。
通过UPLC-MS/MS检测的PCPs(杀生剂类+苯并三唑类)及其MRM质谱参数如表1所示。
所采用的GC-MS仪器为Agilent 6890N的气相色谱串联Agilent 5975B的质谱(电子轰击离子源EI，选择离子监测模式SIM)。
GC-MS检测条件为：以不分流模式进样，进样体积2.0μL；色谱柱Agilent DB-5MSUI(30m×0.25mm,0.25μm)，氦气作为载气，流速1.0mL/min。色谱柱升温程序为0min时80℃，以15℃/min升至170℃，以1℃/min升至185℃，再以20℃/min升至300℃，维持5min。进样口、传输线、离子源EI和质谱分析器的温度分别为280℃、300℃、230℃和150℃。
通过GC-MS检测的PCPs(合成麝香类)及其MRM质谱参数如表2所示。
表2通过GC-MS检测的PCPs(合成麝香类)及其MRM质谱参数
a IS(Internal Standard)：内标。
(4)绘制标准曲线，以内标法进行定量
准确称取(或量取)10mg(或体积)的各种PCPs标准品及内标标准品，用100mL甲醇进行溶解(或稀释)，配制成浓度为100mg/L的单标及单内标储备液。根据UPLC-MS/MS仪器和GC-MS仪器测定的目标PCPs清单，移取100μL的各单标(或单内标)储备液，混合均匀后分别用甲醇和二氯甲烷定容至10mL，使各PCPs含量为1mg/L，得到分别用于UPLC-MS/MS和GC-MS测定的混合标准溶液(或混合内标溶液)。移取适量体积用于UPLC-MS/MS测定的混合标准溶液和混合内标溶液，采用甲醇或超纯水进行稀释，最终定容成1mL甲醇/水溶液(50/50，体积比)，使得其中各目标PCPs浓度依次为0.1、0.25、0.5、1、2.5、5、25、50、100、200μg/L，各内标浓度均为50μg/L的标准溶液；移取适量体积用于GC-MS测定的混合标准溶液和混合内标溶液，采用二氯甲烷进行稀释，最终定容至1mL，使得其中各目标PCPs浓度依次为1、5、10、20、50、100、200μg/L，各内标浓度均为50μg/L的标准溶液。按照步骤(3)中UPLC-MS/MS和GC-MS的检测条件分别对上述标准溶液进行测定。以各PCPs和对应内标的浓度之比为横坐标，各PCPs和对应内标的峰面积之比为纵坐标进行回归，得到各PCPs的标准曲线，用于计算待侧样品中各目标PCPs的浓度。
实施例2
本发明实施例提供一种鲤鱼胆汁样品中PCPs的加标回收检测实验，包括以下步骤：
(1)样品采集和加标
从水产市场上购买鲤鱼，采集新鲜胆汁，进行添加回收实验。准确移取50μL混匀后的胆汁样品于3mL棕色小瓶中，加入一定浓度的24种PCPs混合标准溶液20μL，使得其中各PCPs的浓度分别为10、20、100、200μg/L，每个浓度设置6份，其中3份用于胆汁中PCPs总浓度(自由态+共轭态)的测定，另外3份用PCPs自由态浓度的测定。同时另取6份50μL混匀后的胆汁样品，不添加24种PCPs的混合标准溶液但补充20μL甲醇作为对照，同理，其中3份用于胆汁中PCPs总浓度的测定，另外3份用PCPs自由态浓度的测定。
(2)样品添加内标和水解
用于PCPs总浓度测定的样品需要进行水解，于步骤(1)的胆汁样品中加入500μg/L的12种混合内标溶液20μL(溶于pH＝5.0的0.2M乙酸缓冲液)，再加入10μL10000unit/mL的水解酶溶液(采用pH＝5.0的0.2M乙酸缓冲液稀释)，然后置于37℃恒温培养箱中水解4h，待净化；另一份无需水解的50μL胆汁样品同样加入1000μg/L的12种混合内标溶液20μL和pH＝5.0的0.2M乙酸缓冲液10μL，待净化。
(3)样品提取净化
将步骤(2)中两份待净化液分别转入盛有500μL乙腈(含1％乙酸，体积比)的Captiva NDLipid蛋白和磷脂去除管，涡旋30s，置于SPE装置上，抽真空，在25～50kPa真空条件下，提取溶液缓慢滴落(蛋白和磷脂干扰物被截留)，收集于d-SPE管中。于CaptivaNDLipid管中再次加入200μL乙腈(含1％乙酸，体积比)冲洗管壁上残留的胆汁，洗涤液并入对应的d-SPE管。于d-SPE管中再加入5.2mL乙腈(含1％乙酸，体积比)，手动摇晃1min。于转速为2364g条件下离心10min。取3mL上清液于玻璃管中，置于柔和的氮气流下浓缩至近干(室温)。然后加入200μL甲醇再溶解，混匀，采用0.22μm的尼龙针筒过滤器过滤后，作为待仪器检测的净化试样。
(4)分析检测
将步骤(3)所得待测试样均分为两份，将其中的甲醇以氮吹再溶解的形式分别替换为甲醇/水溶液(50/50，体积比)和二氯甲烷，分别采用UPLC-MS/MS仪器和GC-MS仪器分析检测其中杀生剂类+苯并三唑类和合成麝香类PCPs的浓度。
图2为本实施例中UPLC-MS/MS仪器ESI+模式下对100μg/L 14种PCPs混合标准溶液的总离子流图，图3为ESI-模式下对100μg/L 6种PCPs混合标准溶液的总离子流图；图4为GC-MS仪器对100μg/L 4种PCPs混合标准溶液的总离子流图。
内标法标准曲线的绘制：根据UPLC-MS/MS仪器和GC-MS仪器测定的目标PCPs清单，移取一定体积用于UPLC-MS/MS测定的混合标准溶液和混合内标溶液，采用甲醇或超纯水进行稀释，最终定容成1mL甲醇/水溶液(50/50，体积比)，使得其中各目标PCPs浓度依次为0.1、0.25、0.5、1、2.5、5、25、50、100、200μg/L，各内标浓度均为50μg/L的标准溶液；移取一定体积用于GC-MS测定的混合标准溶液和混合内标溶液，采用二氯甲烷进行稀释，最终定容至1mL，使得其中各目标PCPs浓度依次为1、5、10、20、50、100、200μg/L，各内标浓度均为50μg/L的标准溶液。分别采用UPLC-MS/MS仪器和GC-MS仪器对上述标准溶液进行测定。以各PCPs和对应内标的浓度之比为横坐标，各PCPs和对应内标的峰面积之比为纵坐标进行回归，得到各PCPs的标准曲线。
将仪器检测得出的待测试样中各PCPs的峰面积带入标准曲线方程中，计算得到待测试样中各PCPs的浓度值。
(5)方法回收率、检出限和定量限计算
方法回收率按如下公式进行计算：
R＝(C2–C1)/C0×100％
R——回收率，％；
C2——仪器测定的加标胆汁样品中PCPs浓度，μg/L；
C1——仪器测定的非加标胆汁样品中PCPs浓度，μg/L；
C0——胆汁样品中加入的PCPs标准溶液浓度，μg/L。
方法检出限和定量限的计算：在10μg/L添加浓度条件下，分别以仪器信噪比的3倍和10倍计算该方法的检出限和定量限(除二甲苯麝香和麝香酮基于20μg/L添加浓度计算)。
本实施例中的方法回收率、检出限、定量限结果及标准曲线的回归系数如表3所示。
由表3可见，在不同添加浓度下，大多数PCPs的回收率均在70％～120％之间。且对于大多数PCPs而言，该方法检出限和定量限均较低，大多均处于0.06～2.00μg/L之间，能够满足分析测试的要求。
实施例3
本发明实施例提供一种鲤鱼胆汁样品中PCPs的加标例和对比例的加标回收对比实验，包括以下步骤：
从水产市场上购买鲤鱼，采集新鲜胆汁，进行添加回收实验。标准例按照实施例2中步骤(1)-(3)类似的方法进行前处理，唯一不同的是：加标浓度仅有100μg/L，取得加标胆汁样品1份；对比例按照施例2中步骤(1)-(3)类似的方法进行前处理，唯一不同的是：将步骤(3)中的“乙腈”为“甲醇”，加标浓度仅有100μg/L，取得加标胆汁样品1份。
将步骤(3)所得待测试样均又分为两份，将其中的甲醇以氮吹再溶解的形式分别替换为甲醇/水溶液(50/50，体积比)和二氯甲烷，分别采用UPLC-MS/MS仪器和GC-MS仪器分析检测其中杀生剂类+苯并三唑类和合成麝香类PCPs的浓度。
标准例和对比例的回收率结果见表4。可以看到，标准例中化合物的加标回收率为80％～133％，加标回收率较好，而对比例中，DEET、ICD、ICZ的加标回收率严重偏高，CBD、CTZ的加标回收率偏低，KCZ、CBZ、PP、BP、TCS的甚至不能取得加标回收。可见，采用步骤(3)中采用“甲醇”是不合适的。
表4鱼类胆汁样品对比例和标准例的各目标PCPs的加标回收率
注:nd＝未检出。
实施例4
本发明实施例提供一种鲤鱼胆汁样品中PCPs的对比例(常规水样处理方法)的加标回收对比实验，包括以下步骤：
(1)从水产市场上购买鲤鱼，采集新鲜胆汁，进行添加回收实验。标准例按照施例2中步骤(1)-(3)类似的方法进行前处理，唯一不同的是：加标浓度仅做100μg/L，最终取得加标胆汁样品1份。
(2)对比例按照以下步骤进行：取50μL鲤鱼胆汁，加入干净的30mL玻璃试管中，加入一定浓度的24种PCPs混合标准溶液20μL，使得其中各PCPs的浓度分别为100μg/L，加入1000μg/L的12种混合内标溶液20μL；再加入12μL4.0mol/L的硫酸溶液和1.5mL甲醇，混合均匀；然后，胆汁样品采用200mg的HLB柱进行固相萃取，采用6mL甲醇洗脱，氮气下吹干并定容至200μL，采用0.22μm的尼龙针筒过滤器过滤后，作为待仪器检测的净化试样，即加标胆汁样品1份。
将步骤(1)、(2)各自所得的标准例和对比例待测试样均又分为两份，将其中的甲醇以氮吹再溶解的形式分别替换为甲醇/水溶液(50/50，体积比)和二氯甲烷，分别采用UPLC-MS/MS仪器和GC-MS仪器分析检测其中杀生剂类+苯并三唑类和合成麝香类PCPs的浓度。
标准例和对比例的回收率结果见表5。可以看到，标准例中化合物的加标回收率为80％～133％，加标回收率较好，而对比例中，化合物都为未检出，这是由于鱼体胆汁中的胆色素等基质干扰在常规水样前处理过程中不能去除，严重干扰UPLC-MS/MS的离子化过程，出现抑制作用。可见，采用常规水样处理方法处理胆汁是不合适的。
表5鲤鱼胆汁样品对比例和标准例的各目标PCPs的加标回收率
注:nd＝未检出。
实施例5
于长江葛洲坝以下的干流四个点位分别选取4、9、11和11个鱼类样品(共35个样品)，其中包含鲤鱼11条、鳊鱼10条、鲫鱼7条、鲢鱼和鲶鱼各2条、草鱼、赤睛鱼和大头鱼各1条。采集每条鱼的胆汁样品，准确移取50μL混匀后的胆汁样品两份，分别用于胆汁中PCPs总浓度(自由态+共轭态)和自由态浓度的测定。按照施例1中步骤(2)-(3)类似的方法进行前处理，唯一不同的是：加入12种混合内标溶液的浓度为500μg/L，体积为40μL。然后，按照实施例1中步骤(4)同样检测方法对其中各目标PCPs的浓度进行测定，测定结果详见表6，野外鱼类胆汁中12种检出的化合物的提取离子流图见图8。
表6本检测方法对长江鱼类胆汁样品中各目标PCPs的浓度测定结果
a统计检出频率时，不包括低于方法检出限的值，但包括高于方法检出限而低于方法定量限的值；
b计算浓度范围、均值和中值时，低于方法检出限的值以“0”进行代替，高于方法检出限而低于方法定量限的值以“1/2×方法定量限”进行代替；
c ND(Not Detected)：未检出，即低于方法检出限。
由表6可见，该方法可以有效测定多种鱼类胆汁中各PCPs的总浓度(自由态+共轭态)和自由态浓度，有助于揭示PCPs在鱼类胆汁中的存在形态。
综上所述，本发明基于多同位素内标分析方法，采用Agilent公司商品化生产的Captiva NDLipid蛋白和磷脂去除管和d-SPE管(内含900mg无水硫酸镁+150mg PSA+150mgC18)对胆汁样品进行提取净化，通过UPLC-MS/MS仪器和GC-MS仪器仪器测定净化试样中的PCPs的浓度，避免了样品保存时间短、检出限较高、复杂基质干扰严重等问题，建立了一套简便快捷且准确度和灵敏度较高的检测方法。另外，该方法通过在提取净化前的胆汁样品中加入或不加入水解酶(β-glucuronidase+aryl-sulfatase)，实现了胆汁中PCPs的总浓度(自由态+共轭态)和自由态浓度的对比测定，有助于揭示PCPs在鱼类胆汁中的存在形态。
本发明的实施方式不限于此，按照本发明的上述内容，利用本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，本发明还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更，均落在本发明权利保护范围之内。

Claims (9)

1.一种检测鱼类胆汁中个人护理品的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)样品添加内标和水解，(2)样品提取和净化，(3)分析检测；所述的胆汁是单一鱼类胆汁；
所述步骤(1)中，实验组1：在胆汁样品中加入水解酶β-glucuronidase和aryl-sulfatase；实验组2：在胆汁样品中不加入水解酶β-glucuronidase和/或aryl-sulfatase；
所述步骤(2)中，先用蛋白和磷脂去除管和乙腈对样品进行混合沉淀，再采用d-SPE管进行分散型固相萃取，所述d-SPE管内含900mg无水硫酸镁、150mg乙二胺基-N-丙基填料和150mg C18；在所述蛋白和磷脂去除管和d-SPE管中，加入的有机试剂为含1％v/v乙酸的乙腈；
所述步骤(3)中，将步骤(2)的净化产品分为两份：一份采用UPLC-MS/MS仪器检测；一份采用GC-MS仪器检测；
用所述UPLC-MS/MS仪器的ESI+模式测定的个人护理品，包括避蚊胺、艾卡瑞丁、多菌灵、噻苯咪唑、氟康唑、酮康唑、甘宝素、克霉唑、咪康唑、伊曲康唑、苯并三唑、5-甲基苯并三唑、5-氯苯并三唑、5,6-双甲基苯并三唑；
用所述UPLC-MS/MS仪器的ESI-模式测定的个人护理品，包括尼泊金甲酯、尼泊金乙酯、尼泊金丙酯、尼泊金丁酯、三氯卡班和三氯生；用所述GC-MS仪器测定的个人护理品，包括吐纳麝香、佳乐麝香、二甲苯麝香和麝香酮。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中添加的内标是抑霉唑-D5、噻苯咪唑-D6、氟康唑-D4、酮康唑-D8、克霉唑-D5、咪康唑-D5、尼泊金甲酯-D4、尼泊金丙酯-D4、三氯卡班-D7和13C12-三氯生、吐纳麝香-D3和二甲苯麝香-D15，所述步骤(1)中，用pH＝5.0的0.2M乙酸缓冲液配置成内标溶液。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)实验组1所述水解酶均采用pH＝5.0的0.2M乙酸缓冲液进行稀释，所述水解酶的单位均是10000unit/mL。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，用所述UPLC-MS/MS仪器检测，溶剂是50％v/v甲醇-水溶液；UPLC检测条件为：进样体积5μL，色谱柱反相C18柱，柱温40℃；用所述GC-MS仪器检测，溶剂是二氯甲烷。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述ESI+模式下流动相为含5mM乙酸铵和0.05％v/v甲酸的超纯水缓冲液和甲醇，流速为0.3mL/min；干燥气流速为4L/min，干燥气温度为250℃，鞘气流速为12L/min，鞘气温度为300℃，雾化器压力为45psi，毛细管电压为4500V和喷嘴电压为500V。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述ESI-模式下流动相组成为超纯水和甲醇，流速为0.35mL/min；干燥气流速为6L/min，干燥气温度为280℃，鞘气流速为11L/min，鞘气温度为350℃，雾化器压力为50psi，毛细管电压为3500V和喷嘴电压为2000V。
7.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，对所述UPLC-MS/MS仪器测定个人护理品制备标准溶液，用甲醇或超纯水对标准溶液和内标溶液进行稀释，定容成1M的50％v/v甲醇-水溶液，使得个人护理品的浓度均依次为0.1μg/L、0.25μg/L、0.5μg/L、1μg/L、2.5μg/L、5μg/L、25μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L，内标浓度均为50μg/L。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的GC-MS仪器的检测条件为：以不分流模式进样，进样体积2.0μL；色谱柱DB-5MSUI，氦气作为载气，流速1.0mL/min；色谱柱升温程序为0min时80℃，以15℃/min升至170℃，以1℃/min升至185℃，再以20℃/min升至300℃，维持5min；进样口、传输线、离子源EI和质谱分析器的温度分别为280℃、300℃、230℃和150℃。
9.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，对所述GC-MS仪器测定个人护理品制备标准溶液，用二氯甲烷对标准溶液和内标溶液进行稀释，定容至1mL，使得个人护理品的浓度均依次为1μg/L、5μg/L、10μg/L、20μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L，内标浓度均为50μg/L。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110007018A (zh) * 2019-03-28 2019-07-12 北京建工环境修复股份有限公司 一种测定土壤中合成麝香浓度的方法
CN110887911A (zh) * 2019-12-14 2020-03-17 浙江树人学院（浙江树人大学） 一种动物源食品中克霉唑残留的气相色谱-串联质谱检测方法
CN111896640A (zh) * 2020-07-07 2020-11-06 义乌市产品(商品)质量监督检验研究院 一种检测玩具材料中氯咪巴唑含量的方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101918098A (zh) * 2007-11-27 2010-12-15 奎斯特诊断投资公司 通过质谱法检测雌二醇的方法
CN103539828A (zh) * 2013-09-27 2014-01-29 安徽华印机电股份有限公司 从去除胆红素的猪胆汁下脚料中提取猪去氧胆酸的方法
CN104535702A (zh) * 2014-12-30 2015-04-22 天津大学 一种同时检测饮用水中多种痕量药物污染物的方法
CN104583229A (zh) * 2012-08-29 2015-04-29 新加坡科技研究局 肽及其应用
WO2016130646A1 (en) * 2015-02-10 2016-08-18 Indiana University Research And Technology Corporation Device and method for analysis of biofluids by ion generation using wetted porous material

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101918098A (zh) * 2007-11-27 2010-12-15 奎斯特诊断投资公司 通过质谱法检测雌二醇的方法
CN104583229A (zh) * 2012-08-29 2015-04-29 新加坡科技研究局 肽及其应用
CN103539828A (zh) * 2013-09-27 2014-01-29 安徽华印机电股份有限公司 从去除胆红素的猪胆汁下脚料中提取猪去氧胆酸的方法
CN104535702A (zh) * 2014-12-30 2015-04-22 天津大学 一种同时检测饮用水中多种痕量药物污染物的方法
WO2016130646A1 (en) * 2015-02-10 2016-08-18 Indiana University Research And Technology Corporation Device and method for analysis of biofluids by ion generation using wetted porous material

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KIM H. HEE 等: "Development and validation of liquid chromatography tandem mass spectrometry method for simultaneous quantification of first line tuberculosis drugs and metabolites in human plasma and its application in clinical study", 《JOURNAL OF PHARMACEUTICAL AND BIOMEDICAL ANALYSIS》 *
LI YAO 等: "Simultaneous determination of 24 personal care products in fish muscle and liver tissues using QuEChERS extraction coupled with ultra pressure liquid chromatography-tandem mass spectrometry and gas chromatography-mass spectrometer analyses", 《ANALYTICAL AND BIOANALYTICAL CHEMISTRY》 *
OLURANTI P. TOGUNDE 等: "Determination of Pharmaceutical Residues in Fish Bile by Solid-Phase Microextraction Couple with Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry (LC/MS/MS)", 《ENVIRONMENTAL SCIENCE & TECHNOLOGY》 *
陈永艳 等: "超高效液相色谱串联质谱测定饮用水中PPCPs残留", 《中国给水排水》 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110007018A (zh) * 2019-03-28 2019-07-12 北京建工环境修复股份有限公司 一种测定土壤中合成麝香浓度的方法
CN110887911A (zh) * 2019-12-14 2020-03-17 浙江树人学院（浙江树人大学） 一种动物源食品中克霉唑残留的气相色谱-串联质谱检测方法
CN110887911B (zh) * 2019-12-14 2022-09-13 浙江树人学院（浙江树人大学） 一种动物源食品中克霉唑残留的气相色谱-串联质谱检测方法
CN111896640A (zh) * 2020-07-07 2020-11-06 义乌市产品(商品)质量监督检验研究院 一种检测玩具材料中氯咪巴唑含量的方法
CN111896640B (zh) * 2020-07-07 2024-04-23 义乌市产品(商品)质量监督检验研究院 一种检测玩具材料中氯咪巴唑含量的方法

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