CN108445119B - 一种适用于联合测定植物内源激素的色谱检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于植物内源激素的测定技术领域，公开了一种适用于联合测定植物内源激素的色谱检测方法，包括：A、B泵流动相的配置比例；A、B泵流速控制；柱温箱温度控制；检测器检测波长。本发明对仪器要求不高，高效液相色谱仪可以实现；实现了对GA3(赤霉素)、IAA(生长素)、ABA(脱落酸)三种植物激素的联合测定，使得样品前处理操作更简单，回收率更高，分离效果好，而且等速洗脱，重现性好；最重要的是省工省时省药剂。

Description

一种适用于联合测定植物内源激素的色谱检测方法
技术领域
本发明属于植物内源激素的测定技术领域，尤其涉及一种适用于联合测定植物内源激素的色谱检测方法。
背景技术
目前，业内常用的现有技术是这样的：
高效液相色谱(HPLC)具有高效、高灵敏度的特点，成为植物内源激素较理想的分析方法。当前最常用的提取方法是用80％的冰甲醇来提取，浸提过夜，收集滤液，旋转蒸干，用少量水溶解残液，冻融过夜，溶化后，离心取上清液，调节pH，加乙酸乙酯萃取，取有机相，然后再旋转蒸发，最后用流动相溶解，上样测定。
综上所述，现有技术存在的问题是：
现有的技术不但操作复杂，耗时长，而且一次只能检测一种目标物，无法完成同时对3大类内源激素的检测，并且回收率相当低(约为80％)。因此，科研人员一直追求建立一种简单而又高精度的检测公艺，以使植物内源激素的提取步骤简化、高效，更方便的应用高效液相检测方法。
植物内源激素检测方法，可以分成样品前处理提取纯化和HPLC检测分析两部分。纯化效果的好坏直接决定了检测的精确度。因此，在实际操作中，专业人员更多的精力是用于对材料样品前处理提取和纯化效果的优化，而忽视了对液相色谱条件的选择。因为，色谱条件才是决定样品提取方法和纯化方向的前提基础，是影响乃至决定检测分析效果的关键因素。利用色谱条件的调整来消除杂志干扰，可以使提取纯化操作更具有目的性，减少不必要的盲目的纯化步骤，实现真正意义的简化、高效。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种适用于联合测定植物内源激素的色谱检测方法。本发明通过多次试验，摸索出一种实现多种内源激素联合测定的液相色谱条件，避免了三种植物内源激素出现的峰位重迭、过度密挤、双峰、拖尾等问题，且分离度高，准确性、重复性好。
本发明是这样实现的，根据色谱柱分离原理，利用GA3(赤霉素)、IAA(生长素)、ABA(脱落酸)三种植物激素物质成分极性强弱的不同，来筛选流动相及合理配比，获得使三种植物激素同步分离的理想流动相极性，从而有的放矢，只针对干扰性强的物质进行分离纯化，精简提取工艺，而且实现了不同激素的联合测定。
所述适用于联合测定植物内源激素的色谱检测方法包括：
步骤一，A、B泵流动相的配置比例，A泵流动相按照体积比：0.01mol/L pH＝3.5的磷酸钠缓冲液：甲醇＝7：3；B泵流动相：纯乙腈；
步骤二，A、B泵流速控制，A泵流速0.8；B泵流速0.2；总流速为1.0ml/min，等速洗脱；
步骤三，柱温箱温度控制；
步骤四，检测器检测波长。
进一步，所述磷酸钠缓冲液配置完成后经0.22μm滤膜过滤，使用前完整A泵流动相的配置，常温(28℃)保质期为3天。
进一步，所述柱温箱温度为40℃。
进一步，所述检测器波长为210nm。
本发明的另一目的在于提供一种使用所述适用于联合测定植物内源激素的色谱检测方法的植物内源激素。
综上所述，本发明的优点及积极效果为：
本发明实现了对GA3(赤霉素)、IAA(生长素)、ABA(脱落酸)三种不同植物激素的同步检测；精简了样品前处理流程；减少了化学试剂用量；最主要的是简化了提取纯化步骤(由5-7天的工作量，减少为1-2天)；提高了收率高(由80％提高到90％以上)和检测精准度(目标峰独立、分离效果好)。
附图说明
图1是本发明实施例提供的适用于联合测定植物内源激素的色谱检测方法流程图。
图2是本发明实施例提供的试验结果示意图；
图中：(a)柠檬叶三种激素色谱检测图；(b)蝴蝶兰叶片三种激素色谱检测图；(c)叶底红叶片三种激素色谱检测图；(d)三种激素标样图；三种激素是GA3(赤霉素)、IAA(生长素)、ABA(脱落酸)。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
本发明提供的液相色谱条件，选择性好、检测灵敏度和回收率高，且能实现对多种激素的联合测定，并且对样品前处理要求不高、化学试剂用量少，及有效控制了成本，又使操作简单、易实现。
下面结合附图对本发明的应用原理作详细的描述。
如图1所示，本发明实施例提供的适用于联合测定植物内源激素的色谱检测方法包括以下步骤：
S101：A、B泵流动相的配置比例，A泵流动相：0.01mol/L PH＝3.5的PBS(磷酸钠缓冲液)：甲醇＝7：3(体积比)；B泵流动相：纯乙腈；PBS配置完成后经0.22μm滤膜过滤，使用前完整A泵流动相的配置，保质期为3天。
S102：A、B泵流速控制，A泵流速0.8；B泵流速0.2；总流速为1.0ml/min，等速洗脱；
S103：柱温箱温度为40℃；
S104：检测器波长为210nm。
下面结合试验对本发明的应用效果作详细的描述。
1试验材料：
本实验中所用材料均取自于福建省热带作物科学研究所。柠檬：为“四季香水柠檬“4年生树龄的新生功能叶片；叶底红：为野牡丹科锦香草属，苗龄20个月；蝴蝶兰：为“v31”，苗龄16个月的顶部嫩叶。
2HPLC检测条件：
2.1仪器设备：高效液相色谱仪(岛津CTO-15C)，色谱柱Phenomenex Luna C18(250×4.6mm，5μm)，标样IAA、GA3、ABA均为Fluka HPLC专用试剂，所用色谱纯甲醇和乙腈为德国墨克公司生产，C18小柱为waters公司生产。
2.2色谱条件：色谱柱为Phenomenex Luna C18(250×4.6mm，5μm)；柱温40℃；进样量10μL；流速1mL/min。
A泵流速0.8；B泵流速0.2；总流速为1.0ml/min，等速洗脱。
流动相(体积比)：甲醇：乙腈：磷酸缓冲液(pH3.5)＝70:15:15
3提取方式及检测效果
3.1内源激素赤霉素、生长素和脱落酸三类激素的提取。柠檬叶0.2g、蝴蝶兰1.0g、叶底红0.2g，经液氮研磨后加入80％的甲醇与50mg/mL 2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚的混合提取液15ml，-20℃提取过夜浸提，4℃15000g、离心10min，取上清，残渣清洗2次重复离心后，合并上清液。减压冻干，流动相溶解后过固相萃取小柱纯化，过0.22μm滤膜后进样检测。
3.2检测效果
3.3检测效果的参数分析
采用标样法测定激素提取回收率。取GA3、IAA、ABA浓度为100μg/mL的混合标样，按照提取优化后的操作步骤操作。激素回收率计算用下式表示：
样品回收率(％)＝(添加标样的峰面积－未加标样的峰面积)/相应激素标样的峰面积。
表1内源激素HPLC分析的若干参数
Figure BDA0001598237900000051
按提取工艺提取激素表样重复5次，测得回收率、保留时间、变异系数等指标具体如图2所示。此测定方法保留时间较稳定，最小波动时间在0.3min，最大波动时间在0.6min，越是出峰晚的保留时间的波动时间越大。激素回收率较高，IAA的最低为91.56％，IAA对光敏感，容易分解，尤其在高温、光照等条件的共同作用下。综上所述，数据回收率高、误差小，峰形尖锐、保留时间变化幅度小，符合定量分析要求，对同步高效分离柠檬内源激素赤霉素、生长素和脱落酸的方法是可行的。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (2)

1.一种适用于联合测定植物内源激素的色谱检测方法，其特征在于，所述适用于联合测定植物内源激素的色谱检测方法包括：
步骤一，A、B泵流动相的配置比例，A泵流动相按照体积比：0.01mol/L pH＝3.5的磷酸钠缓冲液：甲醇＝7：3；B泵流动相：纯乙腈；
步骤二，A、B泵流速控制，A泵流速0.8；B泵流速0.2；总流速为1.0ml/min，等速洗脱；
步骤三，控制柱温箱温度；
步骤四，设置检测器检测波长；
所述柱温箱温度为40℃；
所述检测波长为210nm。
2.如权利要求1所述的适用于联合测定植物内源激素的色谱检测方法，其特征在于，所述磷酸钠缓冲液配置完成后经0.22μm滤膜过滤，28℃保质期为3天。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20020055171A1 (en) * 1998-05-27 2002-05-09 Virenda Kumar Tuli Preparation of biologically active 3-methyleneoxindole and definition of its application in stimulation of plant growth and tissue repair
CN101738441A (zh) * 2010-01-22 2010-06-16 大连民族学院 一种测定植物内源激素的方法
CN103822983B (zh) * 2014-03-03 2015-05-20 中国科学院武汉植物园 一种高效分离和测定草坪草内源激素的方法
CN104764827B (zh) * 2015-04-13 2016-10-26 南京信息工程大学 一种番茄植株顶芽内源激素含量的测定方法
CN104897843B (zh) * 2015-06-24 2017-01-11 南京信息工程大学 一种茶树嫩芽内源激素含量的测定方法
CN106442747B (zh) * 2016-06-20 2019-02-22 浙江公正检验中心有限公司 一种采用气相色谱质谱法同时测定果蔬中氯吡脲、2，4-d、多效唑残留量的方法
CN107024552B (zh) * 2017-03-28 2020-03-06 北京林业大学 一种测定玉兰亚属植物中植物激素的方法

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