CN108434006A - 一种防治手足口病的液体洗手液及其制作方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种液体洗手液及其制作方法。本发明制作的液体洗手液对手足口病病毒具有显著的抑制作用，其有效成分TJAB‑1099用量在μM级别即能达到抗病毒功效，而且能够长效抑菌、保护皮肤。

Description

一种防治手足口病的液体洗手液及其制作方法
技术领域
本发明涉及液体洗手液，更具体的，涉及一种可以防治手足口病的液体洗手液，尤其适合儿童使用。
背景技术
人手足口病(Hand-foot-mouth disease,HFMD)是由多种肠道病毒感染引起的急性传染病，在我国以肠道病毒71型(EV 71)最为常见。手足口病分布于全球，且近年来发病率呈上升趋势，可散发或流行发病，发病季节多在夏季，五岁以下儿童发病率最高，年长儿及成人也可被传染。起病时出现发热症状，口腔粘膜出现散在疱疹，手足和臀部出现斑丘疹、疱疹，疱疹周围可有炎性红晕，疱内液体较少。并伴有咳嗽、流涕、食欲不振等症状。少数病例，特别是EV71感染患儿，可出现脑膜炎、脑炎、脑脊髓炎、神经源、性肺水肿、循环障碍等，病情凶险，可致死亡或留有后遗症。
我国是手足口病的高发区域，患者基数较大，严重影响儿童的身体健康。现今市场上有众多消毒抑菌类洗手液，但是并没有专门针对手足口病的洗手类产品，本发明的产品将能弥补这一现状。本发明的主要有效成分TJAB-1099是天津国际生物医药联合研究院院长饶子和团队研发的一类针对手足口病病毒的高效抑制剂，以此药物作为主要成分制成的洗手液能特异性地杀灭病毒，具有效率高、安全性好等特点。
TJAB-1099的结构式如下所示：其中，R为氢、C1-C5烷基等各种取代基；
然而TJAB-1099是一种水难溶性化合物，其水溶性限制了其口服吸收率，使其临床应用和剂型开发均受到了很大限制。
发明内容
本发明提供了一种可以防治手足口病的液体洗手液，洗手液的有效成分为EV71病毒的高效抑制剂TJAB-1099(中国专利CN104744433 A，申请公布日为2015年7月1日)。此产品抑制病毒效果明显，安全性好，特别适合医院及儿童使用。
本发明提供了一种预防手足口病的洗手液，含有以下重量比组分：TJAB-1099：0.00002％～0.00006％，Span 20：0.000001％～0.000005％，水溶性基质：0.5％～3％，表面活性剂APG1200：5％～20％，乙醇：20％～40％，甘油：1％～4％，香精：0.1％～1％，其余为去离子水；其中，TJAB-1099的结构式如下所示：
其中，R为氢、C1-C5烷基。
在上述洗手液中，其中，所述洗手液的制作方法包括：将Span 20加入乙醇中混匀，再加入TJAB-1099，使其完全溶解，制成A溶液；将水溶性基质粉末加入水中，充分溶胀，制成B溶液；取甘油、香精以及A溶液溶于乙醇中，充分混匀，制成C溶液；在B溶液中边搅拌边加入表面活性剂APG-1200，充分混合；然后加入全部C溶液，边加边搅拌，形成均匀的液体洗手液。
在上述洗手液中，其中，所述水溶性基质为纤维素衍生物。
在上述洗手液中，其中，所述水溶性基质为羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素中的一种或多种。
在上述洗手液中，其中，所述洗手液具有多种不同的香型。
在上述洗手液中，其中，所述洗手液的pH在6.5～10之间。
在上述洗手液中，其中，所述洗手液灭活EV71病毒。
本发明的技术优势如下：
中国专利CN104744433 A(申请公布日：2015年7月1日)公布了EV71病毒抑制剂(TJAB-1099)，该化合物能够有效的阻断EV71病毒在人体内的复制，从而特异性的治疗由EV71病毒引起的手足口病。本发明中的有效成分即为TJAB-1099，其在很低量水平即能达到抗病毒效果。
本发明的产品中所用表面活性剂为烷基糖苷类APG-1200，它是新一代温和、绿色、环保型表面活性剂，起泡能力强，泡沫细腻、丰富、稳定，润湿性好，去污力强，对人体皮肤温和，绿色、无毒、无刺激，生物降解迅速彻底。
本发明的产品中特别添加适量甘油，具有显著的保湿效果，能减少由于频繁洗手引起的皮肤干裂感，保持皮肤水分。
本发明的产品特异性针对手足口病，在洗手产品市场上并没有专门用于抗手足口病的相关产品，本发明的洗手液能够极大地为人们的健康特别是儿童人群提供保障。
本发明的产品特别适合儿童使用，也非常适合学校、幼儿园、医院等场所使用。
附图说明
图1示出了本申请的产品、商业洗手液以及阴性对照对病毒的抑制效果。
具体实施方式
以下结合具体的实施案例对本发明进行具体阐述，但本发明的保护范围不仅限于此。
一种可以防治手足口病的液体洗手液，其成分包括：水溶性基质、表面活性剂APG-1200、Span 20、乙醇、甘油、香精、TJAB-1099和去离子水，其特征为含有EV71病毒的高效抑制剂TJAB-1099。
其中，水溶性基质可以选择纤维素衍生物，如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素中的一种或多种，其可以在水中溶胀，具有增稠、调理等作用。
本发明所述的可以预防手足口病的液体洗手液，含有以下重量比组分：TJAB-1099：0.00002％～0.00006％，Span 20：0.000001％～0.000005％，水溶性基质：0.5％～3％，表面活性剂APG1200：5％～20％，乙醇：20％～40％，甘油：1％～4％，香精：0.1％～1％，其余为去离子水。
本发明所述液体洗手液的制作方法如下：
将Span 20加入乙醇中混匀，再加入TJAB-1099，使其完全溶解，制成A溶液；
将水溶性基质粉末加入水中，充分溶胀，制成B溶液；
取甘油、香精以及A溶液溶于乙醇中，混匀，制成C溶液；
在B溶液中边搅拌边加入表面活性剂APG-1200，充分混合；然后加入全部C溶液，边加边搅拌，形成均匀的液体洗手液。
本发明所述洗手液有较好的外观，不同味道的香型，特别是比较符合儿童的感官要求。
本发明所述洗手液pH在6.5～10之间，符合相关洗手液的标准，中性至微碱性能够更好地抑菌、抗病毒。
本发明所述液体洗手液进行抑制手足口病致病病毒的有效性检测，发现此产品能够有效地灭活EV71病毒。
实施例1：一种防治手足口病的液体洗手液
制备方法：
取100μg Span 20加入100ml乙醇中混匀，再加入4.25mg TJAB-1099(例如，此处使用的TJAB-1099中的R为H)，搅拌使其完全溶解制成A溶液；取1g羧甲基纤维素钠在70ml水中充分溶胀制成B溶液；取3ml甘油、1ml香精和1ml A溶液溶于20ml乙醇中，搅拌混匀制成溶液C；然后在溶液B中边搅拌边加入5ml表面活性剂APG-1200，充分混合；最后加入全部C溶液，边加边搅拌，形成外观均匀的液体洗手液。
由本实施例液体洗手液的制备方法可知本实施例1的液体洗手液的组成如下：
TJAB-1099：0.00004％，Span20：0.000001％，水溶性基质羧甲基纤维素钠：1％，表面活性剂APG1200：5％，乙醇：20％，甘油：3％，香精：1％，其余为去离子水。
使用类似的方法，制备了实施例2和3的液体洗手液。
实施例2的洗手液的组成如下：
TJAB-1099：0.00002％，Span20：0.000003％，甲基纤维素：0.5％，表面活性剂APG1200：13％，乙醇：30％，甘油：1％，丙二醇：1％，香精：0.5％，其余为去离子水。
实施例3的洗手液的组成如下：
TJAB-1099：0.00006％，Span20：0.000005％，羟乙基纤维素：1％，羟丙基甲基纤维素：2％，表面活性剂APG1200：20％，乙醇：40％，甘油：4％，丙二醇：3％，香精：0.1％，其余为去离子水。
下面以实施例1为例说明洗手液抑制手足口病致病病毒的有效性检测方法及结果：
洗手液抑制手足口病致病病毒的有效性检测方法及结果：
1.RD细胞的培养
将在液氮中冻存的RD细胞(从中国医学科学院细胞库购买得到)37℃水浴锅中解冻后，加入到盛有20ml培养基的培养瓶中，培养基成分为DMEM(Dulbecco's modifiedeagle medium)+10％胎牛血清(Fetal Bovine Serum,FBS)+1％青霉素和链霉素(Penicillin-Streptomycin,PS)，37℃，5％CO2培养。
2.EV71病毒的扩增
待细胞生长至满度为90％时，加入EV71病毒(EV71病毒的种属、获取方法、实验方法和保存方法同公开日为2015年7月1日的专利CN104744433A一致)200μL，37℃，5％CO2培养。24h后细胞发生病变，待细胞完全病变后收集上清，4000rpm离心10min，将上清分装后冻存于-80℃。
3.EV71病毒滴度测定
用终点稀释法(endpoint dilution assays，EPDAs)测定病毒滴度，RD细胞按3×105个/ml接种于96孔板中，37℃，5％CO2培养24h后，将第二列6个孔的培养基吸走，加入110μL冻存的病毒，从第二列取11μl病毒加入到第三列，混匀后从第三列取11μl再加到第三列，依次稀释至第十列，第十一列为细胞对照，72h后利用奥林巴斯显微镜观察致细胞病变效应(cytopathic effect，CPE)并记录。，如果孔内细胞病变25％则记为+，病变50％记为++，病变75％记为+++，病变100％记为++++。利用软件Reed&Muench Calculator计算病毒的半数组织培养感染剂量(Tissue culture infective dose,TCID50)。
4.终点稀释法病毒感染滴度的计算
以半数细胞感染剂量(TCID50)表示。TCID50的对数值计算公式如下。TCID50对数值＝病变率高于50％组稀释度的对数值+距离比例(“病变率高于50％组”是指病变率超过50％的最低组，下简称“高于50％组”；“病变率低于50％组”是指病变率低于50％的最高组，下简称“低于50％组”)。
具体计算方法如下：
1)计算细胞病变率。先计数培养板上不同稀释度样本细胞病变发生与未发生的孔数，然后分别计算“细胞无病变(-)”和“细胞病变(+)”的累积总计值。计算“细胞无病变(-)”累积值时，由稀释度低样本组向稀释度高样本组累积；“细胞病变(+)”累积值则相反，由稀释度高样本组向稀释度低样本组累积。各稀释度样本组“细胞病变(+)”累积总计值，除以该稀释度样本组“细胞无病变(-)”与“细胞病变(+)”累积总计值之和即为其病变比，由之可得病变率(％)。
2)计算距离比例，距离比例可按下式计算：
5.实施例1制备的洗手液灭活EV71病毒的实验方法
①1％琼脂糖凝胶的制备
称取1.2g琼脂糖M，溶于120mL 1*TAE缓冲液中，121℃高温灭菌20min，在生物安全柜中向两个六孔板的每个孔中加入2mL的琼脂糖凝胶，冷却至常温凝固。
②分组
分为本发明产品组、商业洗手液组(美国进口普瑞来)、阴性对照组
③洗手液对EV71病毒灭活实验步骤
A.在每孔中加入100μL洗手液(实验组或对照组)或者灭菌ddH2O，用一次性涂布棒涂抹均匀，在生物安全柜中风干2h；
B.加入病毒滴度为3×109TCID50/mL的病毒50μL，涂抹均匀；
C.2h后，每孔中加入500μL细胞培养液洗脱病毒，800rpm离心3min，取上清，用终点稀释法测病毒滴度。
⑤终点稀释法测定病毒滴度
方法同上。
6.实验结果
第四天，观察结果，如图1，结果显示，实施例1制备的洗手液能有效地(有效灭活的标准是细胞病变效应CPE为90％以上)灭活EV71病毒。
洗手液pH值测定方法及结果：
在室温下，用新煮沸并冷却的蒸馏水1:10(W/V)的试样溶液，混匀并用pH计对实施例1进行测定，测定其pH为6.86。
同理地，使用类似的方法，确认实施例2和实施例3制备的洗手液也能有效地灭活EV71病毒。为了简便，在此不再详细描述。此外，测得实施例2和实施例3制备的洗手液的pH分别为6.98和7.54。
本发明的洗手液克服了化合物TJAB-1099的水难溶性这一难题，使化合物TJAB-1099直接作用于手部病毒，达到对手足口病的防治效果。本发明制作的免洗泡沫洗手液对手足口病病毒具有显著的抑制作用，其有效成分TJAB-1099用量在μM级别即能达到抗病毒功效，而且能够长效抑菌、保护皮肤。免洗泡沫型洗手液使用方便，特别适合户外活动及旅行中使用。

Claims (7)

1.一种预防手足口病的洗手液，含有以下重量比组分：TJAB-1099：0.00002％～0.00006％，Span 20：0.000001％～0.000005％，水溶性基质：0.5％～3％，表面活性剂APG1200：5％～20％，乙醇：20％～40％，甘油：1％～4％，香精：0.1％～1％，其余为去离子水；
其中，TJAB-1099的结构式如下所示：
其中，R为氢、C1-C5烷基。
2.根据权利要求1所述的洗手液，其中，所述洗手液的制作方法包括：
将Span 20加入乙醇中混匀，再加入TJAB-1099，使其完全溶解，制成A溶液；
将水溶性基质粉末加入水中，充分溶胀，制成B溶液；
取甘油、香精以及A溶液溶于乙醇中，充分混匀，制成C溶液；
在B溶液中边搅拌边加入表面活性剂APG-1200，充分混合；然后加入全部C溶液，边加边搅拌，形成均匀的液体洗手液。
3.根据权利要求1所述的洗手液，其中，所述水溶性基质为纤维素衍生物。
4.根据权利要求3所述的洗手液，其中，所述水溶性基质为羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素中的一种或多种。
5.根据权利要求1所述的洗手液，其中，所述洗手液具有多种不同的香型。
6.根据权利要求1所述的洗手液，其中，所述洗手液的pH在6.5～10之间。
7.根据权利要求1所述的洗手液，其中，所述洗手液灭活EV71病毒。
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