CN108383907A - 针对降钙素原的纳米抗体及其应用 - Google Patents

针对降钙素原的纳米抗体及其应用 Download PDF

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郑德森
李良红
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Abstract

本发明涉及生物医学和临床诊断技术领域，本发明公开了一种针对降钙素原的新纳米抗体、其编码序列以及其在诊断中的应用。本发明利用降钙素原免疫骆驼，获得高质量的纳米抗体基因库，然后将PCT包被在酶联板上，展示该蛋白质正确的空间结构，并以此PCT作为抗原筛选骆驼重链抗体噬菌体展示基因库，从而获得了针对PCT的纳米抗体基因，再将此基因转化至大肠杆菌中，建立能在大肠杆菌中高效表达的纳米抗体株。本发明最终确定了PCT中两个可与纳米抗体结合的不同抗原表位，具有良好的特异性和稳定性，进一步通过对所获得的纳米抗体进行包被和标记，建立了一种PCT的检测方法，为PCT临床诊断试剂盒的研发奠定了坚实的基础。

Description

针对降钙素原的纳米抗体及其应用
技术领域
本发明涉及生物医学和临床诊断技术领域，尤其涉及一种针对降钙素原的纳米抗体、其编码序列以及其在诊断中的应用。
背景技术
降钙素原(procalcitonin，简写为PCT)是一种人体血液中的蛋白质，当严重细菌、真菌、寄生虫感染以及脓毒症和多脏器功能衰竭时它在血浆中的水平升高，而自身免疫、过敏和病毒感染时PCT不会升高，同时，局部有限的细菌感染、轻微的感染和慢性炎症不会导致其升高。PCT反映了全身炎症反应的活跃程度，影响PCT水平的因素包括被感染器官的大小和类型、细菌的种类、炎症的程度和免疫反应的状况。
PCT的检测对于指导临床治疗和评价治疗效果具有重要的意义。传统的检测方法主要采用双抗体夹心法的酶联免疫技术或者化学发光技术，例如，发明专利“一种降钙素原的化学发光定量检测试剂盒及其制备方法和检测方法”(CN201410143487.9)公开了一种包括降钙素原系列标准品、偶联有链霉亲和素的磁微粒悬浮液、羟基琥珀酰亚胺生物素酯标记的抗降钙素原单克隆抗体溶液和含碱性磷酸酶标记的抗降钙素原单克隆抗体溶液的降钙素原化学发光定量检测试剂盒；发明专利“一种检测降钙素原的试剂盒及降钙素原的检测方法”(CN201110201457.5)公开了一种包括发光底物、磁微粒偶联抗体、降钙素原单克隆抗体和辣根过氧化物酶标记链霉亲和素的降钙素原检测试剂盒；发明专利申请“一株降钙素原单克隆抗体杂交瘤细胞株CS12-1及其应用”(CN201710570260.6)公开了一株降钙素原单克隆抗体的杂交瘤细胞株CS12-1，该杂交瘤细胞株能够分泌PCT单克隆抗体，经酶标后可用于建立了检测降钙素原的双抗体夹心酶联免疫检测方法。然而，上述方法皆需要分别包被和标记一对针对PCT的单克隆抗体，而单克隆抗体在高温和强酸强碱条件下会分解，需要在零度以下保存，否则会在数周内失去活性，稳定性差，另外传统的单克隆抗体还有溶解度低及制备困难等方面的问题，同时，传统单克隆抗体的大分子特性等也严重制约了其广泛应用。
纳米抗体是目前最小的抗体分子，是由比利时科学家N.Bendahman于1993年在Nature杂志上首先报道，在骆驼血液中的抗体，有一半没有轻链，并且这些“重链抗体”能像正常抗体一样与抗原等靶标紧密结合。与现有单克隆抗体相比，纳米抗体主要有如下优点：1)分子量小，仅有普通抗体的十分之一，可以自由进入到普通抗体所不能到达的区域，如实体瘤内部及穿越血脑屏障，另外小体积使得纳米抗体可以进入抗原的三维折叠构象内部，去特异性识别普通抗体不能识别的位点；2)高稳定性，能耐高温且具有高度的构像稳定性，在37℃孵育1周后纳米抗体仍具有80％的结合活性，它具有可逆的去折叠能力，将其长期存放在37℃的环境后仍能重新获得抗原结合能力，这一优点使得纳米抗体易于储存、运输，而不像普通抗体那样必须始终冷冻保存，另外在蛋白酶和极度pH值环境中纳米抗体仍然具有高度稳定性，可以开发口服类药物；3)易于基因工程操作，可用于构建多种双特异性和双功能抗体：双特异性抗体能结合一个靶抗原的相邻两个位点，从而获得对抗原的高亲合力；双功能抗体是通过偶联的方法将纳米抗体与毒性载体，如放射性核素、细胞毒性药物等融合在一起，从而将这些毒性物质特异性的递送到癌细胞，而不象化疗那样损伤正常细胞；4)对人的免疫原性弱，易于完全人源化，不引起病人体内排异反应，符合抗体药物的发展方向。纳米抗体的上述诸多优点使得其明显优于传统抗体，基于骆驼重链抗体的VHH单域抗体的特殊结构，兼具了传统抗体与小分子药物的优势，目前，纳米抗体已经发展成为有广泛生物应用价值的通用分子，其应用范围涉及到基础研究、新药开发、疾病的诊断和治疗等多个领域。
然而，目前尚未见到将纳米抗体技术用于降钙素原检测的相关报道，也没有适用于临床诊断的针对降钙素原的纳米抗体及其检测试剂盒产品问世。
发明内容
为了填补现有技术中缺乏与降钙素原相关的纳米抗体的技术空白，本发明提供了一种针对降钙素原的特异性纳米抗体，并公开了其编码序列，同时揭示了该纳米抗体在降钙素原检测和相关疾病的诊断及治疗方面的应用前景。
本发明的第一方面，提供了一种针对降钙素原的纳米抗体，所述纳米抗体具有如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列的VHH链。
进一步地，上述针对降钙素原的纳米抗体偶联有辣根过氧化物酶。
同时，本发明还涉及上述针对降钙素原的纳米抗体在制备降钙素原检测试剂中的用途。
以及，上述针对降钙素原的纳米抗体在制备降钙素原检测试剂盒中的用途。
本发明的第二方面，提供了一种针对降钙素原的纳米抗体的VHH链，包括框架区FR和互补决定区CDR。所述框架区FR由框架区FR1、框架区FR2、框架区FR3和框架区FR4组成；所述互补决定区CDR由互补决定区CDR1、互补决定区CDR2和互补决定区CDR3组成；
所述框架区FR1-FR4和互补决定区CDR1-CDR3的氨基酸序列以下：
第一组：FR1为SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列，FR2为SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列，FR3为SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列，FR4为SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列，CDR1为SEQ ID NO.7所示的氨基酸序列，CDR2为SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列，CDR3为SEQ IDNO.9所示的氨基酸序列；或者
第二组：FR1为SEQ ID NO.10所示的氨基酸序列，FR2为SEQ ID NO.11所示的氨基酸序列，FR3为SEQ ID NO.12所示的氨基酸序列，FR4为SEQ ID NO.13所示的氨基酸序列，CDR1为SEQ ID NO.14所示的氨基酸序列，CDR2为SEQ ID NO.15所示的氨基酸序列，CDR3为SEQ ID NO.16所示的氨基酸序列。
进一步地，上述针对降钙素原的纳米抗体的VHH链的氨基酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示。
本发明的第三方面，提供了一种与降钙素原纳米抗体相关的DNA分子，所述DNA分子编码上述针对降钙素原的纳米抗体的VHH链。
进一步地，上述DNA分子具有SEQ ID NO.17或SEQ ID NO.18所示的核苷酸序列。
本发明的第四方面，提供了一种与降钙素原纳米抗体相关的表达载体，所述表达载体包含SEQ ID NO.17或SEQ ID NO.18所示的核苷酸序列。
综上，本发明利用降钙素原免疫骆驼，获得高质量的纳米抗体基因库，然后将PCT包被在酶联板上，展示该蛋白质正确的空间结构，并以此PCT作为抗原筛选骆驼重链抗体噬菌体展示基因库，从而获得了针对PCT的纳米抗体基因，再将此基因转化至大肠杆菌中，建立能在大肠杆菌中高效表达的纳米抗体株。本发明最终确定了PCT中两个可与纳米抗体结合的不同抗原表位，具有良好的特异性和稳定性，进一步通过对所获得的纳米抗体进行包被和标记，建立了一种PCT的检测方法，为PCT临床诊断试剂盒的研发奠定了坚实的基础。
本发明针对降钙素原的纳米抗体具有分子量小、可穿透血脑屏障、表达效率高、特异性强、亲和力高、免疫原性弱等优点，同时有效克服了传统单克隆抗体开发周期长、稳定性差、保存条件苛刻等缺陷，具有很好的开发应用前景。
附图说明
图1为PCT纳米抗体在大肠杆菌中表达纯化的蛋白质电泳结果图(图示：1-蛋白质分子量标准，2-纯化的纳米抗体)；
图2为双抗原夹心法(化学发光法)检测PCT抗原的检测结果图。
具体实施方式
以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。
在进一步描述本发明具体实施方式之前，应理解，本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围。
除非另外定义，本发明中使用的所有技术和科学术语与本技术领域技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外，根据本技术领域的技术人员对现有技术的掌握及本发明的记载，还可以使用与本发明实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本发明。
实施例：针对降钙素原的纳米抗体的制备
(一)PCT纳米抗体文库的构建：
(1)将2mg/mL的PCT抗原与等体积的弗氏佐剂混合，免疫一只双峰骆驼，两周一次，共免疫3次，刺激骆驼的B淋巴细胞分泌PCT特异性纳米抗体；
(2)抽取100mL骆驼外周血，并提取淋巴细胞的总RNA；
(3)合成cDNA并利用套式PCR扩增VHH基因片段；
(4)利用限制性内切酶Pst I及Not I酶切10μg VHH基因片段和20μg噬菌体展示载体pComb3；
(5)将以上酶切的产物进行连接，并转化至感受态细胞TG1中，构建PCT的纳米抗体文库，测定库容大小为1.0×109。
(二)筛选针对PCT的纳米抗体：
(1)将20μg PCT抗原溶解至100mM的NaHCO3(PH9.6)中，然后加入到酶联板中，每孔100μL，4℃放置包被过夜；
(2)用0.05％PBS+Tween-20洗1遍，加入0.1％的酪蛋白溶液，每孔300μL，室温封闭2小时；
(3)加入噬菌体库，每孔100μL，室温作用1小时；
(4)用0.05％PBS+Tween-20洗5遍，洗掉非特异性的噬菌体；
(5)用100mM的TEA(Triethylamine)将与PCT特异性结合的噬菌体解离下来，感染处于对数生长期的大肠杆菌TG1细胞，37℃培养1小时，纯化噬菌体并用于下一轮的筛选，相同筛选过程重复3-4轮，并逐步得到富集；
(6)从上述富集后的细胞培养皿中挑选96个单个菌落，并接种于含有100μg/mL氨苄青霉素的TB培养基中，生长至对数期后，加IPTG至终浓度为1mM，28℃培养过夜；
(7)利用渗滤法提取粗抗体，加入到包被有PCT抗原的酶联板中，室温反应1小时；
(8)用0.05％PBS+Tween-20洗5遍，加入鼠抗HA抗体，室温反应1小时；
(9)用0.05％PBS+Tween-20洗5遍，加入辣根过氧化物酶标记的山羊抗鼠抗体，室温反应1小时；
(10)用0.05％PBS+Tween-20洗5遍，加入TMB底物液显色15分钟，在酶标仪上450nm波长读取吸光值；
(11)当样品孔的吸光值大于对照孔的吸光值3倍以上时判定为阳性克隆孔；
(12)将阳性克隆孔的菌接种于含100μg/mL氨苄青霉素的LB培养基中，培养过夜后，提取质粒并测序；
(13)经过测序对比，最终获得两株不同的纳米抗体，编码此抗体的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.17和SEQ ID NO.18所示。
(三)PCT纳米抗体在大肠杆菌中的表达纯化：
(1)将上述两种克隆株的质粒转化到大肠杆菌WK6菌株中，并将其涂布在含有氨苄青霉素和葡萄糖的平板上，37℃培养过夜；
(2)挑选单菌落接种在5mL含有氨苄青霉素的LB液体培养基中，37℃振荡培养过夜；
(3)接种1mL培养过夜的菌种至300mL TB液体培养基中，37℃振荡培养使菌液OD值达到0.6-0.9时，加入IPTG，28℃振荡培养过夜；
(4)离心收集菌体，利用渗滤法获得粗抗体液；
(5)经镍离子亲和柱层析纯化，电泳结果显示纯度可达90％以上(电泳结果见附图1)。
(四)纳米抗体的辣根过氧化物酶标记：
(1)称取5mg辣根过氧化物酶，加入1mL双蒸水，加入0.5mL新鲜配制浓度为100mg/mL的高碘酸钠溶液；
(2)室温放置30分钟；
(3)加入25μL乙二醇，室温放置30分钟；
(4)加入上述纯化的纳米抗体1mg，并调PH至9.0，4℃放置过夜；
(5)加入20μL浓度为5mg/mL的硼氢化钠，混匀后4℃放置2小时；
(6)用50mM Na2CO3-NaHCO3透析4小时以上，换液3次以上，每次大于500ml；
(7)移入50mM PBS缓冲液进行透析；
(8)酶联免疫法检测酶标记抗体的活性。
(五)双抗原夹心法(化学发光法)检测PCT抗原：
(1)取上述纯化的纳米抗体0.1mg，加入到50mL 100mM的NaHCO3(PH9.6)中，然后加入到酶联板中，每孔100μL，4℃放置包被过夜；
(2)用0.05％PBS+Tween-20洗1遍，加入0.1％的酪蛋白溶液，每孔300μL，室温封闭2小时；
(3)去掉酪蛋白溶液，加入50μL不同浓度的PCT抗原0pg/mL、3.2pg/mL、16pg/mL、80pg/mL、400pg/mL、2000pg/mL，然后加入上述辣根过氧化物酶标记的纳米抗体50μL(浓度为1:1000稀释)，室温反应1小时；
(4)用0.05％PBS+Tween-20洗5遍，加入发光底物液，室温反应10分钟，在化学发光读数仪读取发光值(检测结果见附图2)。
以上对本发明优选的具体实施方式和实施例作了详细说明，但是本发明并不限于上述实施方式和实施例，在本领域技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明构思的前提下作出各种变化。
SEQUENCE LISTING
<110> 北京科卫临床诊断试剂有限公司
<120> 针对降钙素原的纳米抗体及其应用
<130> 2018
<160> 18
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 194
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 1
Glu Val Leu Gly Ser Glu Val Gly Pro Gly Gly Leu Ser Arg Cys Ala
1 5 10 15
Leu Ala Thr Ser Val Trp Gln Arg Ala Val Gly Pro Lys Arg Leu Glu
20 25 30
Gly Val Ser Thr Ile Ser Asp Leu Lys Gly Lys Phe Asn Ile Asp Arg
35 40 45
Asn Gly Lys Glu Thr Ile Tyr Leu Glu Leu Asp Thr Leu Arg Ser Gln
50 55 60
Asp Ser Ala Met Trp Thr Cys Gly Trp Gln Thr Glu Val Ser Val Ser
65 70 75 80
Thr Gly Leu Thr Phe Asn Ser Trp Ala Gly Ser Leu Asn Lys Ser Gly
85 90 95
Arg Thr Pro Gln Val Glu Leu Glu Gln Thr Gly Pro Gly Thr Val Glu
100 105 110
Ser Val Gly Ser Ile Asp Leu Ser Ala Thr Gly Ser Gly Val Asp Phe
115 120 125
Asn Asp Trp Gly Met Ala Trp Phe Arg Glu Gly Pro Ala Tyr Glu Arg
130 135 140
Gln Gly Val Gly Gln Gly Arg Phe Ser Ile Thr Phe Asn Asp Ala Lys
145 150 155 160
Asp Ser Leu Phe Ile Glu Met Asp Thr Leu Lys Pro Gln Asp Ser Gly
165 170 175
Met Tyr Arg Asp Val Ser His Trp Ala Glu Gly Ser Gln Ile Ser Val
180 185 190
Thr Ser
<210> 2
<211> 195
<212> PRT
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<400> 2
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Glu Val Ser Val Cys Ile Ser Asp Leu Lys Gly Lys Phe Asn Ile Asp
35 40 45
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Gln Asp Ser Gly Met Trp Thr Cys Arg Trp Gln Thr Glu Val Thr Val
65 70 75 80
Ser Thr Gly Pro Thr Phe Asp Ser Trp Ala Met Ser Leu Pro Lys Ser
85 90 95
Gly Glu Thr Pro Gln Val Glu Leu Glu Ala Thr Gly Pro Gly Thr Val
100 105 110
Glu Pro Val Gly Ser Ile Asp Leu Ser Ala Thr Gly Ser Ala Ala Asp
115 120 125
Phe Asn Arg Trp Gly Met Ala Trp Phe Arg Glu Gly Gly Ala Tyr Glu
130 135 140
Arg Gln Gly Val Gly Gln Gly Arg Phe Pro Ile Thr Phe Glu Asp Ala
145 150 155 160
Lys Thr Ser Leu Phe Ile Glu Met Asp Thr Leu Lys Leu Glu Asp Ser
165 170 175
Gly Met Tyr Arg Asp Val Ser His Asn Ala Glu Gly Ser Gln Ile Ser
180 185 190
Pro Thr Ser
195
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<212> PRT
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<400> 4
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<213> 人工序列
<400> 5
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Ile Tyr Leu Glu Leu Asp Thr Leu Arg Ser Gln Asp Ser Ala Met Trp
20 25 30
Thr Cys
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<400> 6
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<211> 8
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<400> 8
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<212> PRT
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<400> 9
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1 5 10 15
Ser Ile Asp Leu Ser Ala Thr Gly Ser Gly Val Asp Phe Asn Asp Trp
20 25 30
Gly Met Ala Trp Phe Arg Glu Gly Pro Ala Tyr Glu Arg Gln Gly Val
35 40 45
Gly Gln Gly Arg Phe Ser Ile Thr Phe Asn Asp Ala Lys Asp Ser Leu
50 55 60
Phe Ile Glu Met Asp Thr Leu Lys Pro Gln Asp Ser Gly Met Tyr Arg
65 70 75 80
Asp Val Ser His Trp Ala Glu Gly Ser Gln Ile Ser Val Thr Ser
85 90 95
<210> 10
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 10
Gln Val Gly Ser Val Glu His Gly Ser Cys Gly Leu Arg Thr Val Ser
1 5 10 15
Ala Cys Ser Glu Val Gly
20
<210> 11
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 11
Trp Tyr Gln Ala Glu Pro Ala Arg Lys Leu Glu Val Ser Val Cys Ile
1 5 10 15
<210> 12
<211> 34
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 12
Ser Asp Leu Lys Gly Lys Phe Asn Ile Asp Arg Asn Gly Lys Glu Thr
1 5 10 15
Ile Tyr Leu Glu Leu Asp Thr Leu Arg Thr Gln Asp Ser Gly Met Trp
20 25 30
Thr Cys
<210> 13
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 13
Arg Trp Gln Thr Glu Val Thr Val Ser Thr
1 5 10
<210> 14
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 14
Gly Pro Thr Phe Asp Ser Trp Ala Met Ser
1 5 10
<210> 15
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 15
Leu Pro Lys Ser Gly Glu Thr Pro
1 5
<210> 16
<211> 95
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 16
Gln Val Glu Leu Glu Ala Thr Gly Pro Gly Thr Val Glu Pro Val Gly
1 5 10 15
Ser Ile Asp Leu Ser Ala Thr Gly Ser Ala Ala Asp Phe Asn Arg Trp
20 25 30
Gly Met Ala Trp Phe Arg Glu Gly Gly Ala Tyr Glu Arg Gln Gly Val
35 40 45
Gly Gln Gly Arg Phe Pro Ile Thr Phe Glu Asp Ala Lys Thr Ser Leu
50 55 60
Phe Ile Glu Met Asp Thr Leu Lys Leu Glu Asp Ser Gly Met Tyr Arg
65 70 75 80
Asp Val Ser His Asn Ala Glu Gly Ser Gln Ile Ser Pro Thr Ser
85 90 95
<210> 17
<211> 585
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 17
gaagtactcg gttcagaggt gggtcctgga ggcctatctc gatgtgcact tgcaacttcc 60
gtgtggcaac gtgcagtagg tcctaaaaga ctagaaggtg tatctaccat ttctgattta 120
aaaggcaagt tcaacatctc ggataggaat ggtaaggaga ctatctatct agagctcgat 180
acattgcgaa gtcaagatag cgctatgtgg acatgtggct ggcaaactga agtgagtgta 240
tcaactggcc tcaccttcaa ttcatgggcc ggatcactta ataagagtgg gagaacacca 300
caggttgaac tagaacagac cggaccgggt acagttgagt ctgtgggttc catcgatctc 360
tccgccaccg gctcgggtgt agactttaat gactacggaa tggcatggtt cagagaaggt 420
ccggcatatg aaagacaggg cgtgggacag ggtcggttct ccatcacctt caacgatgcc 480
aaggactccc tcttcctgga aatggacacc ttgaagccgc aggattccgg catgtaccgg 540
gacgtatcgc actgggccga aggctcccag atcagcgtaa cctcc 585
<210> 18
<211> 588
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 18
caagtaggtt cagtggagca cggttcttgt ggcctacgaa ccgtgtccgc ttgttccgag 60
gtgggatggt atcaagcaga acctgccaga aaactagaag tatctgtctg tatttctgat 120
ttaaaaggca agttcaacat ctcggatagg aatggtaagg agactatcta tctagagctc 180
gatacattgc gaactcaaga tagcggtatg tggacatgta ggtggcaaac tgaagtgact 240
gtatcaactg gccccacctt cgattcatgg gccatgtcac ttgataagag tggggagaca 300
ccacaggttg aactagaagc gaccggaccg ggtacagttg agcctgtggg ttccatcgat 360
ctctccgcca ccggctcggc tgctgacttt aatcgctacg gaatggcatg gttcagagaa 420
ggtccggcat atgaaagaca gggcgtggga cagggtcggt tccccatcac cttcgaggat 480
gccaagacat ccctcttcct ggaaatggac accttgaagc tcgaggattc cggcatgtac 540
cgggacgtat cgcacaatgc cgaaggctcc cagatcagcc caacctcc 588

Claims (9)

1.一种针对降钙素原的纳米抗体，其特征在于：所述纳米抗体具有如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列的VHH链。
2.如权利要求1所述的针对降钙素原的纳米抗体，其特征在于所述纳米抗体偶联有辣根过氧化物酶。
3.如权利要求1或2所述的针对降钙素原的纳米抗体在制备降钙素原检测试剂中的用途。
4.如权利要求1或2所述的针对降钙素原的纳米抗体在制备降钙素原检测试剂盒中的用途。
5.一种针对降钙素原的纳米抗体的VHH链，包括框架区FR和互补决定区CDR，其特征在于：所述框架区FR由框架区FR1、框架区FR2、框架区FR3和框架区FR4组成；所述互补决定区CDR由互补决定区CDR1、互补决定区CDR2和互补决定区CDR3组成；
所述框架区FR1-FR4和互补决定区CDR1-CDR3的氨基酸序列以下：
第一组：FR1为SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列，FR2为SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列，FR3为SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列，FR4为SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列，CDR1为SEQID NO.7所示的氨基酸序列，CDR2为SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列，CDR3为SEQ ID NO.9所示的氨基酸序列；或者
第二组：FR1为SEQ ID NO.10所示的氨基酸序列，FR2为SEQ ID NO.11所示的氨基酸序列，FR3为SEQ ID NO.12所示的氨基酸序列，FR4为SEQ ID NO.13所示的氨基酸序列，CDR1为SEQ ID NO.14所示的氨基酸序列，CDR2为SEQ ID NO.15所示的氨基酸序列，CDR3为SEQ IDNO.16所示的氨基酸序列。
6.如权利要求5所述的针对降钙素原的纳米抗体的VHH链，所述VHH链的氨基酸序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示。
7.一种DNA分子，其特征在于：所述DNA分子编码权利要求5或权利要求6所述的针对降钙素原的纳米抗体的VHH链。
8.如权利要求7所述的DNA分子，其特征在于：所述DNA分子具有SEQ ID NO.17或SEQ IDNO.18所示的核苷酸序列。
9.一种表达载体，其特征在于：所述表达载体包含SEQ ID NO.17或SEQ ID NO.18所示的核苷酸序列。
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