CN108379170A - 一种美白皮肤的护肤品组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种美白皮肤的护肤品组合物。其含有增稠组份、氢氧化钾水溶液；以及含有龙胆草提取物的美白组份。其中A相由去离子水、甘油、卡波姆、小核菌胶、丙二醇、透明质酸、己二醇、对羟基苯酮组成；B相由氢氧化钾、去离子水组成；C相由甘草酸二钾、龙胆草提取物、传明酸、PEG‑12、α‑熊果苷组成。本发明组合物能够通过抑制抑制酪氨酸酶的活性而达到抑制黑色素合成，进而发挥美白的作用。

Description

一种美白皮肤的护肤品组合物
技术领域
本发明涉及化妆品领域，具体而言，本发明涉及美白皮肤的护肤品组合物及其制备方法，以及利用龙胆草提取物作为美白成分的用途。
背景技术
植物龙胆(GentianascabraBge.)在中国大陆、俄罗斯、日本、朝鲜等均有分布，生长于海拔400米至1,700米的地区。中国有龙胆属240多种，多产于西南高山地区，北京周边、祁连山区只有少数几种。耐寒，喜光，耐半阴，喜深喜、肥沃及排水良好的砂质土壤。株高30-60cm，茎直立，上部不分枝。单叶对生，无柄，基部叶小，中上部叶卵形至披针形，叶基圆而联合报于茎节上。花单生茎顶，广漏斗形，深蓝色，花期8-9月。
多年生草本，高30-60厘米。根茎平卧或直立，短缩或长达5厘米，具多数粗壮、略肉质的须根。花枝单生，直立，黄绿色或紫红色，中空，近圆形，具条棱，棱上具乳突，稀光滑。枝下部叶膜质，淡紫红色，鳞片形，长4-6毫米，先端分离，中部以下连合成筒状抱茎；中、上部叶近革质，无柄，卵形或卵状披针形至线状披针形，长2-7厘米，宽2-3厘米，有时宽仅约0.4厘米，愈向茎上部叶愈小，先端急尖，基部心形或圆形，边缘微外卷，粗糙，上面密生极细乳突，下面光滑，叶脉3-5条，在上面不明显，在下面突起，粗糙。花多数，簇生枝顶和叶腋；无花梗；每朵花下具2个苞片，苞片披针形或线状披针形，与花萼近等长，长2-2.5厘米；花萼筒倒锥状筒形或宽筒形，长10-12毫米，裂片常外反或开展，不整齐，线形或线状披针形，长8-10毫米，先端急尖，边缘粗糙，中脉在背面突起，弯缺截形；花冠蓝紫色，有时喉部具多数黄绿色斑点，筒状钟形，长4-5厘米，裂片卵形或卵圆形，长7-9毫米，先端有尾尖，全缘，褶偏斜，狭三角形，长3-4毫米，先端急尖或2浅裂；雄蕊着生冠筒中部，整齐，花丝钻形，长9-12毫米，花药狭矩圆形，长3.5-4.5毫米；子房狭椭圆形或披针形，长1.2-1.4厘米，两端渐狭或基部钝，柄粗，长0.9-1.1厘米，花柱短连柱头长3-4毫米，柱头2裂，裂片矩圆形。蒴果内藏，宽椭圆形，长2-2.5厘米，两端钝，柄长至1.5厘米；种子褐色，有光泽，线形或纺锤形，长1.8-2.5毫米，表面具增粗的网纹，两端具宽翅。花果期5-11月。
酪氨酸酶是一种含铜酶，来源于胚胎神经峭细胞，是黑色素代谢和儿茶酚胺的关键酶，并且是白癜风自身免疫的重要抗原。酪氨酸酶其实是一种铜结合蛋白，所含的离子铜特异性能与人酪氨酸酶结合，一个位点的铜结合可以促进另一个位点的铜结合，组氨酸在铜B位点协调其结合。
酪氨酸酶(TYR)是一种75kD含铜酶，来源于胚胎神经鞘细胞，是黑色素代谢和儿茶酚胺的关键酶。Spritz等人证实TYR是一种铜结合蛋白，有铜A和铜B位点。离子铜特异性能与人TYR结合，一个位点的铜结合可以促进另一个位点的铜结合。组氨酸在铜B位点协调其结合。TYR的多肽链的适当折叠对铜结合及其催化活性是关键性的，TYR突变可中断铜结合使其催化活性丧失。眼、皮肤白化病是由于TYR基因突变所致，该病TYR阳性患者色素性皮肤损害发生率高。超氧化物负离子(O2-)能穿透黑素细胞(MC)入胞内，TYR通过利用O2-保护MC，免受O2-细胞毒作用。在黑素瘤患者黑素瘤细胞(MMC)和MC中抗氧化系统失衡，内源性反应性氧生成，细胞内不能抵御内源性超氧化物的攻击。白癜风患者血清中TYR抗体的生成，提示白癜风的发病与自身免疫有关。
皮肤白不白，主要取决于黑色素细胞合成黑色素的能力。在人的表皮基底层细胞间，分布着黑色素细胞，它含有的酪氨酸酶可以将酪氨酸氧化成多糖，中间再经过一系列的代谢过程，最后便可生成黑色素。黑色素生成越多，皮肤就越黝黑；反之，则皮肤就越白皙。酪氨酸酶具有独特的双重催化功能，是生物体内黑色素合成的关键酶，与人的衰老有密切关系。其异常过量表达可导致人体的色素沉着性疾病。酪氨酸酶抑制剂可以治疗目前常见的色素沉着性皮肤病如雀斑、黄褐斑、老年斑。市场上流行的美白化妆品中的熊果苷、维生素C衍生物、曲酸及其衍生物、绿茶提取物、甘草提取物等中药提取物等均为酪氨酸酶抑制剂，主要是通过抑制酪氨酸酶的活性而达到抑制黑色素合成，进而发挥美白的作用。
发明内容
本发明的目的在于提供了一种美白皮肤的护肤品组合物；
本发明的另一发明目的是提供了上述护肤品组合物的制备方法；
本发明的另一发明目的是提供了一种可用于化妆品领域的龙胆草提取物。所述提取物可用于制备化妆品；
本发明的另一发明目的是提供了含有本发明龙胆草提取物的化妆品组合物。
本发明的目的是通过下述方法实现的。
龙胆草属于阻断性美白物质，其可有效抑制酪氨酸酶的活性成分，破坏黑色素形成的环境。但是直接使用龙胆草的缺点是显而易见的，如使用不方便，效果不稳定，质量无法控制等。申请人在对龙胆草进行提取处理之后，对提取的11种天然产物进行酪氨酸活性实验，发现本发明所述的式I化合物对抑制酪氨酸酶的活性，破坏黑色素具有显著作用。
为实现上述目的，本发明采用了下述技术方案：
一种美白皮肤的护肤品组合物，其由下列组份组成：
A：增稠组份；
B：氢氧化钾水溶液；
C：美白组份；
其中，A相由以下重量份的组分组成：去离子水95～103、甘油3-4、卡波姆0.08-0.1、小核菌胶0.1-0.15、丙二醇2-3、透明质酸0.05-0.08、己二醇0.4-0.5、对羟基苯酮0.4-0.5；
B相由以下重量份的组分组成：氢氧化钾0.025-0.03、去离子水1-2；
C相由以下重量份的组分组成：甘草酸二钾0.03-0.06、龙胆草提取物0.5-0.8、传明酸0.05-0.1、PEG-12 0.5-1、α-熊果苷0.1-0.2。
优选地，所述龙胆草提取物以下述式I化合物所示：
优选地，所述组份的重量份如下所示：去离子水103、甘油、3.5、卡波姆0.1、小核菌胶0.15、丙二醇2.5、透明质酸0.06、己二醇0.4、对羟基苯酮0.4；氢氧化钾0.027、去离子水2；甘草酸二钾0.05、龙胆草提取物0.6、传明酸0.08、PEG-12 0.8、α-熊果苷0.15。
所述的美白皮肤的护肤品组合物，通过下述方法制备所得：
1)将A相加入洁净乳化锅，搅拌下加热至80℃-85℃，保温20～30分钟至料体充分溶胀；均质4-6分钟至完全溶解，然后开始降温；
2)温度降至60～70℃，加入分散均匀的B相，搅拌均匀，继续降温；
3)温度降至35～45℃，依次加入C相，搅拌至完全均匀；
4)取样检测，过400-800目滤布，出料。
一种化合物，其以下述式I化合物所示：
所述的式I化合物，其以下述提取方法得到：
(1)由龙胆草的鲜品或干品用水分3次煎煮，与水的重量比为1∶3～1∶5，每次5-8小时，合并煎煮液，过滤浓缩至75℃时的相对密度为1.2～1.4时，得到黄褐色浓缩物；
(2)将步骤(1)的浓缩物用硅胶柱层析，以体积比1∶1～3∶1的乙酸乙酯+石油醚混合溶剂梯度洗脱，TLC检测，收集含式I化合物馏分，减压浓缩，冷却结晶，得到针状晶体。
本发明还提供了式I化合物的制备方法，其包括下述步骤：
(1)由龙胆草的鲜品或干品用水分3次煎煮，与水的重量比为1∶3～1∶5，每次5-8小时，合并煎煮液，过滤浓缩至75℃时的相对密度为1.2～1.4时，得到黄褐色浓缩物；
(2)将步骤(1)的浓缩物用硅胶柱层析，以体积比1∶1～3∶1的乙酸乙酯+石油醚混合溶剂梯度洗脱，TLC检测，收集含式I化合物馏分，减压浓缩，冷却结晶，得到针状晶体。
本发明所述的美白皮肤的护肤品组合物，所述组合物的剂型为霜膏、多相乳状液、凝胶或喷雾剂。
本发明所述的式I化合物可用于制备化妆品。
实施例
下面通过实施例对本发明作进一步说明。应该理解的是，本发明实施例所述方法仅仅是用于说明本发明，而不是对本发明的限制，在本发明的构思前提下对本发明制备方法的简单改进都属于本发明要求保护的范围。实施例中用到的所有原料和溶剂均购自Sigma-Aldrich公司。
龙胆草提取物的制备：
(1)龙胆草的干品2000克用水分3次煎煮，与水的重量比为1∶5，每次5小时，合并煎煮液，过滤浓缩至75℃时的相对密度为1.3时，得到黄褐色浓缩物；
(2)将步骤(1)的浓缩物用硅胶柱层析，以体积比1∶1～3∶1的乙酸乙酯+石油醚混合溶剂梯度洗脱，TLC检测，收集含式I化合物馏分，减压浓缩，冷却结晶，得到针状晶体3.3克，HPLC检测纯度99.0％。
Anal.Calcd for C21H26O3
熔点：151～153℃
1HNMR(300MHz，DMSO)，δ：6.48(s，H，1H)；6.41(m，H，1H)；6.23(d，H，1H)；5.91～5.97(m，H，3H)；5.66(d，H，1H)；5.47(m，H，1H)；5.05(s，OH，1H)；4.77(s，OH，1H)；4.18(d，CH2，2H)；3.12(d，CH2，2H)；2.56(d，CH2，2H)；2.37(m，CH2，2H)；2.34(m，CH，1H)；2.06(m，CH2，2H)；1.02(m，CH，1H)；0.15～0.40(m，CH2，4H).
护肤品组合物的制备：
取A相增稠组分、B相氢氧化钾水溶液、C相美白组分；
其中A相中去离子水103克、甘油3.5克、卡波姆0.1克、小核菌胶0.15克、丙二醇2.5克、透明质酸0.06克、己二醇0.4克、对羟基苯酮0.4克；
B相中氢氧化钾0.027克、去离子水2克；
C相中甘草酸二钾0.05克、龙胆草提取物0.6克、传明酸0.08克、PEG-12 0.8克、α-熊果苷0.15克。
将A相加入洁净乳化锅，搅拌下加热至约85℃，保温20分钟至料体充分溶胀；均质6分钟至完全溶解，然后开始降温；温度降至约70℃，加入分散均匀的B相，搅拌均匀，继续降温；温度降至约42℃，依次加入C相，搅拌至完全均匀；取样检测，合格后，过滤布(400-800目)过滤出料。其外观为无色透明液体；粘度：800～1600mpa.s(25℃，2#，12r/min)；耐寒稳定性考察(48℃X24h)：合格；耐寒稳定性考察(-15℃X24h)：合格。
皮肤刺激性实验：
选取18～50岁之间的男女各20位，每人在其手臂内侧、耳后根处涂抹0.5g本产品，范围均为2cmX2cm，每天两次，观察记录24h、72h后的皮肤反应。结果表明：涂本发明产品24h、72h后皮肤未见发红、发疹、水疙等局部刺激反应，说明本发明美白化妆品是安全，无不良反应的。
酪氨酸酶的活性实验：
在酪氨酸酶反应生成黑色素的过程中，酪氨酸酶的催化作用主要发生在酪氨酸转化为多巴以及多巴转化为多巴醌这两个反应中。多巴醌是一有色物质，在475nm处有特征吸收，故可以用分光光度计进行测定。酪氨酸酶的酶活力测定是以L-酪氨酸为底物，L-酪氨酸溶液、酪氨酸酶溶液及式I化合物溶液均以磷酸缓冲液(pH6.8)配制。测定时，用吸管准确吸取A，B，C，D四组反应液，每组设3个平行试管，充分混匀后，在37℃水浴温育30min迅速转移比色皿中于475nm处测吸光值。以下列公式计算酪氨酸酶的抑制百分率：
酪氨酸酶的抑制百分率(％)＝[(A-B)-(C-D)]/(A-B)×100％
式中：A表示A组反应液在475nm下的吸光度值；
B表示B组反应液在475nm下的吸光度值；
C表示C组反应液在475nm下的吸光度值；
D表示D组反应液在475nm下的吸光度值；
在3mL pH6.8磷酸缓冲液的测活体系中，先加入1mL含不同浓度的抑制剂于比色杯中，再加入1mL预先在30℃恒温水浴中保温的底物溶液，然后加入1mL酪氨酸酶水溶液，立刻混匀，在30℃恒温条件下、波长475nm处测定光密度值随时间的增长直线，酪氨酸酶活力单位(U/min)规定：以每分钟反应液在475nm波长的光密度值增加0.001为一个酶活力单位。
将式I化合物分别配成浓度为0.5、1、2、3、4mg/mL的溶液，按上表反应体系测定其对酪氨酸酶的抑制率。式I化合物对酪氨酸酶的抑制率随着浓度的增大而增强，当式I化合物浓度为0.5、1、2、3、4mg/mL时，抑制率分别达到21.1％、29％、51.8％、66.3％、76.8％。
本发明组合物疗效验证：
按本发明护肤品组合物进行制备，对产品进行疗效统计：志愿者500例，男170例，女330例，年龄最小者18岁，最大者50岁，平均年龄31.12岁。每例受试者使用本发明所述美白化妆品，每日早中清洗皮肤将0.5g本发组合物明均匀涂于脸部，连续使用一个月(一个疗程)。
效果判定标准：
优：自觉舒适、皮肤黑色素明显减少；
良：自觉一般、黑色素不再增多中等；
差：无明显变化。
结果：500例中，效果判定优者460例，占92％；效果判定良者40例，占8％；总共有效率为10％。全部受试者无1例休闲不良反应。

Claims (9)

1.一种美白皮肤的护肤品组合物，其特征在于由下列组份组成：
A：增稠组份；
B：氢氧化钾水溶液；
C：美白组份；
其中，其中A相由以下重量份的组分组成：去离子水95～103、甘油3-4、卡波姆0.08-0.1、小核菌胶0.1-0.15、丙二醇2-3、透明质酸0.05-0.08、己二醇0.4-0.5、对羟基苯酮0.4-0.5；
B相由以下重量份的组分组成：氢氧化钾0.025-0.03、去离子水1-2；
C相由以下重量份的组分组成：甘草酸二钾0.03-0.06、龙胆草提取物0.5-0.8、传明酸0.05-0.1、PEG-120.5-1、α-熊果苷0.1-0.2。
2.根据权利要求1所述的美白皮肤的护肤品组合物，其特征在于：所述龙胆草提取物以下述式I化合物所示：
3.根据权利要求1所述的美白皮肤的护肤品组合物，其特征在于所述组份的重量份如下所示：去离子水103、甘油、3.5、卡波姆0.1、小核菌胶0.15、丙二醇2.5、透明质酸0.06、己二醇0.4、对羟基苯酮0.4；氢氧化钾0.027、去离子水2；甘草酸二钾0.05、龙胆草提取物0.6、传明酸0.08、PEG-120.8、α-熊果苷0.15。
4.权利要求1-3任一所述的美白皮肤的护肤品组合物，其特征在于通过下述方法制备所得：
1)将A相加入洁净乳化锅，搅拌下加热至80℃-85℃，保温20～30分钟至料体充分溶胀；均质4-6分钟至完全溶解，然后开始降温；
2)温度降至60～70℃，加入分散均匀的B相，搅拌均匀，继续降温；
3)温度降至35～45℃，依次加入C相，搅拌至完全均匀；
4)取样检测，过400-800目滤布，出料。
5.一种化合物，其特征在于以下述式I化合物所示：
6.根据权利要求5所述的式I化合物，其特征在于以下述提取方法得到：
(1)由龙胆草的鲜品或干品用水分3次煎煮，与水的重量比为1∶3～1∶5，每次5-8小时，合并煎煮液，过滤浓缩至75℃时的相对密度为1.2～1.4时，得到黄褐色浓缩物；
(2)将步骤(1)的浓缩物用硅胶柱层析，以体积比1∶1～3∶1的乙酸乙酯+石油醚混合溶剂梯度洗脱，TLC检测，收集含式I化合物馏分，减压浓缩，冷却结晶，得到针状晶体。
7.权利要求5所述的式I化合物的制备方法，其特征在于包括下述步骤：
(1)由龙胆草的鲜品或干品用水分3次煎煮，与水的重量比为1∶3～1∶5，每次5-8小时，合并煎煮液，过滤浓缩至75℃时的相对密度为1.2～1.4时，得到黄褐色浓缩物；
(2)将步骤(1)的浓缩物用硅胶柱层析，以体积比1∶1～3∶1的乙酸乙酯+石油醚混合溶剂梯度洗脱，TLC检测，收集含式I化合物馏分，减压浓缩，冷却结晶，得到针状晶体。
8.根据权利要求1-3任一所述的美白皮肤的护肤品组合物，其特征在于所述组合物的剂型为霜膏、多相乳状液、凝胶或喷雾剂。
9.权利要求5所述的式I化合物在制备化妆品方面的用途。
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