CN108371103A - 一种采用台闽苣苔的珠芽进行组培快繁的方法 - Google Patents

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应震
王晓乐
李海滨
付双彬
姚丽娟
曾爱平
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    • A01H4/001—Culture apparatus for tissue culture

Abstract

本发明公开了一种采用台闽苣苔的珠芽进行组培快繁的方法，通过芽诱导培养基、芽增殖培养基和生根培养基的培养，得到株高5cm左右，根须5～7根的台闽苣苔苗，不但增加了芽增殖培养基，且所有培养基中增加了AC，芽增殖培养基增加了土豆泥，这样使得繁殖时间缩短到80天，效率高，且培养的台闽苣苔苗遗传稳定性高，种苗一致性高，能快速形成台闽苣苔产业化。

Description

一种采用台闽苣苔的珠芽进行组培快繁的方法
技术领域
本发明涉及台闽苣苔的组培技术，具体涉及一种采用台闽苣苔的珠芽进行组培快繁 的方法。
背景技术
台闽苣苔是一种苦苣苔科台闽苣苔属植物，为单属种植物，在植物系统分类学上占 有重要的位置。该植物主要分布于我国浙江省温州至福建省漳州和台湾地区，琉球群岛也有少量分布。台闽苣苔生活范围较为狭窄，适宜生活在海拔约300～1000m的山谷阴 处或沟边草丛中。台闽苣苔花型美观，花色艳丽，具有较高的观赏价值。同时，台闽苣 苔也是重要的药用植物，具有药用经济价值，清热解毒，凉血止咳等功效。然而随着我 国东南沿海经济发展，人类活动导致大量的山林山地被开垦，这侵占了台闽苣苔的栖息 地，使该植物的数量急剧减少。目前，台闽苣苔已经成为中国苦苣苔科植物濒危稀有种， 亟待对其进行保护。以植物组织培养为基础的快速繁育技术是目前大批量提高植物数量 的有效方法，其操作简便，育种时间短，见效快，目前已得到了广泛的商业化应用。如 台闽苣苔的组织培养和快速繁殖(生理通讯第41卷第4期-497，2005年8月)的论文， 就公开了利用台闽苣苔的幼叶进行组织培养的方法，其利用诱导不定芽分化培养基 (MS+6-BA+NAA+蔗糖+琼脂)进行不定芽发生和扩大培养，用生根培养基(MS+活性 炭+蔗糖+琼脂)让不定芽的苗生根和开叶，虽然用组织培养技术可以较为快速的繁殖台 闽苣苔，但该组培技术存在着培养时间较长(至少需要120天)，幼叶诱导操作难度较 大、效率不高等问题。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种组培快繁的生产周期较短，效率高；又使种苗达到一致性、遗传稳定性高的采用台闽苣苔的珠芽进行组培快繁的方法。
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种采用台闽苣苔的珠芽进行组培快繁的方法，其步骤如下：
a、选取健壮的野生台闽苣苔的珠芽，在清水下冲洗，再在1%NaClO3水溶液中浸泡2～4min，取出珠芽用无菌水充分洗净；在超净工作台上将珠芽用无菌纱布包好放置在75％的酒精中消毒30～60s，再用质量浓度0.1％的HgCl2水溶液浸泡5～8min，然后用无菌水冲洗5次，最后置于无菌滤纸上，待其吸干水分后，得到洁净珠芽；
b、将步骤a的洁净珠芽播撒于芽诱导培养基上进行芽诱导培养，培养设定温度为21℃～25℃，光照强度为1500lx～3000lx，光培养时长为12小时。培养25天可观察到愈伤组织长出大量的丛生芽；所述芽诱导培养基的组成：1/2MS+终浓度0.5～1.5mg／L的6-BA +终浓度0.5～1mg／L的NAA +终浓度1～2g／L的AC +终浓度30g/L的蔗糖+终浓度7.5g/L琼脂，PH值为5.8～6.5；
c、将步骤b的丛生芽切分成1～2芽的小块，接种到芽增殖培养基中进行增殖培养，培养设定温度为22℃～26℃，光照强度为1500lx～3000lx，光培养时长为12小时，培养30天得到长为3～4cm丛生芽；所述芽增殖培养基的组成：1/2MS+终浓度1～3mg／L的6-BA +终浓度0.2～1mg／L的NAA +终浓度1～2g／L的AC +质量终浓度10～15%的土豆泥+终浓度30g/L的蔗糖+终浓度7.5g/L琼脂，PH值为5.8～6.5；
d、将步骤c的长为3～4cm丛生芽单株移植至生根培养基中进行生根培养，培养设定温度为22℃～26℃，光照强度为1500lx～3000lx，光培养时长为12小时，培养25天得到株高4～5.5cm，根须5～7根的台闽苣苔苗；所述生根培养基的组成：1/2MS+终浓度0.05～0.5mg／L的NAA +终浓度2g／L的AC +终浓度30g/L的蔗糖+终浓度7.5g/L的琼脂，pH值为5.8～6.5；
e、上述1/2MS为元素浓度减半的国际通用MS培养基，用流水洗净台闽苣苔苗的根部残留的培养基，在800～1000倍多菌灵溶液中浸泡30min，单株移栽入盆，基质为3份腐殖土、3份草炭土、1份珍珠岩，试管苗栽植不宜太深，保持湿度。
与现有技术相比，本发明的优点在于一种采用台闽苣苔的珠芽进行组培快繁的方法，通过芽诱导培养基、芽增殖培养基和生根培养基的培养，得到株高5cm左右，根须5～7根的台闽苣苔苗，不但增加了芽增殖培养基，且所有培养基中增加了AC，芽增殖培养基增加了土豆泥，这样使得繁殖时间缩短到80天，效率高，且培养的台闽苣苔苗遗传稳定性高，种苗一致性高。能快速形成台闽苣苔产业化，实现台闽苣苔工厂化生产，促进台闽苣苔产业的发展。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步详细描述。
实施例1
一种采用台闽苣苔的珠芽进行组培快繁的方法，其步骤如下：a、选取健壮的野生台闽苣苔的珠芽，在清水下冲洗，再在1%NaClO3水溶液中浸泡2～4min，取出珠芽用无菌水充分洗净；在超净工作台上将珠芽用无菌纱布包好放置在75％的酒精中消毒30～60s，再用质量浓度0.1％的HgCl2水溶液浸泡5～8min，然后用无菌水冲洗5次，最后置于无菌滤纸上，待其吸干水分后，得到洁净珠芽；b、将步骤a的洁净珠芽播撒于芽诱导培养基上进行芽诱导培养，培养设定温度为21℃～25℃，光照强度为1500lx～3000lx，光培养时长为12小时。培养25天愈伤组织长出大量的丛生芽；芽诱导培养基的组成：1/2MS+终浓度1.0mg／L的6-BA +终浓度0.7mg／L的NAA +终浓度1.5g／L的AC +终浓度30g/L的蔗糖+终浓度7.5g/L琼脂，PH值为5.8-6.5；c、将步骤b的丛生芽切分成1～2芽的小块，接种到芽增殖培养基中进行增殖培养，培养设定温度为22℃～26℃，光照强度为1500lx～3000lx，光培养时长为12小时，培养30天得到长为3～4cm丛生芽；芽增殖培养基的组成：1/2MS+终浓度2mg／L的6-BA +终浓度0.6mg／L的NAA +终浓度1.5g／L的AC +质量终浓度12%的土豆泥+终浓度30g/L的蔗糖+终浓度7.5g/L琼脂，PH值为5.8-6.5；d、将步骤c的长为3～4cm丛生芽单株移植至生根培养基中进行生根培养，培养设定温度为22℃～26℃，光照强度为1500lx～3000lx，光培养时长为12小时，培养25天得到株高4～5.5cm，根须5～7根的台闽苣苔苗；生根培养基的组成：1/2MS+终浓度0.2mg／L的NAA +终浓度2g／L的AC +终浓度30g/L的蔗糖+终浓度7.5g/L的琼脂，pH值为5.8～6.5；e、其中1/2MS为元素浓度减半的国际通用MS，用流水洗净台闽苣苔苗的根部残留的培养基，在800～1000倍多菌灵溶液中浸泡30min，单株移栽入盆，基质为3份腐殖土、3份草炭土、1份珍珠岩，试管苗栽植不宜太深，保持湿度，成活率达90%以上。
实施例2
与实施例1基本相同，所不同的只是芽诱导培养基的组成：1/2MS+终浓度0.5mg／L的6-BA +终浓度1mg／L的NAA +终浓度2g／L的AC +终浓度30g/L的蔗糖+终浓度7.5g/L琼脂；1/2MS+终浓度3mg／L的6-BA +终浓度0.2mg／L的NAA +终浓度1g／L的AC +质量终浓度15%的土豆泥+终浓度30g/L的蔗糖+终浓度7.5g/L琼脂，生根培养基的组成：1/2MS+终浓度0.05mg／L的NAA +终浓度2g／L的AC +终浓度30g/L的蔗糖+终浓度7.5g/L的琼脂。
实施例3
与实施例1基本相同，所不同的只是芽诱导培养基的组成：1/2MS+终浓度1.5mg／L 的6-BA +终浓度0.5mg／L的NAA +终浓度1g／L的AC +终浓度30g/L的蔗糖+终浓度7.5g/L琼脂；1/2MS+终浓度1mg／L的6-BA +终浓度1mg／L的NAA +终浓度2g／L的AC +质量终浓度10%的土豆泥+终浓度30g/L的蔗糖+终浓度7.5g/L琼脂，生根培养基的组成：1/2MS+终浓度0.5mg／L的NAA +终浓度2g／L的AC +终浓度30g/L的蔗糖+终浓度7.5g/L的琼脂。

Claims (3)

1.一种采用台闽苣苔的珠芽进行组培快繁的方法，其特征在于步骤如下：
a、选取健壮的野生台闽苣苔的珠芽，在清水下冲洗，再在1%NaClO3水溶液中浸泡2～4min，取出珠芽用无菌水充分洗净；在超净工作台上将珠芽用无菌纱布包好放置在75％的酒精中消毒30～60s，再用质量浓度0.1％的HgCl2水溶液浸泡5～8min，然后用无菌水冲洗5次，最后置于无菌滤纸上，待其吸干水分后，得到洁净珠芽；
b、将步骤a的洁净珠芽播撒于芽诱导培养基上进行芽诱导培养，培养设定温度为21℃～25℃，光照强度为1500lx～3000lx，光培养时长为12小时；培养25天愈伤组织长出大量的丛生芽；所述芽诱导培养基的组成：1/2MS+终浓度0.5～1.5mg／L的6-BA +终浓度0.5～1mg／L的NAA +终浓度1～2g／L的AC +终浓度30g/L的蔗糖+终浓度7.5g/L琼脂，PH值为5.8-6.5；
c、将步骤b的丛生芽切分成1～2芽的小块，接种到芽增殖培养基中进行增殖培养，培养设定温度为22℃～26℃，光照强度为1500lx-3000lx，光培养时长为12小时，培养30天得到长为3～4cm丛生芽 ；所述芽增殖培养基的组成：1/2MS+终浓度1～3mg／L的6-BA +终浓度0.2～1mg／L的NAA +终浓度1～2g／L的AC +质量终浓度10～15%的土豆泥+终浓度30g/L的蔗糖+终浓度7.5g/L琼脂，PH值为5.8-6.5；
d、将步骤c的长为3～4cm丛生芽单株移植至生根培养基中进行生根培养，培养设定温度为22℃～26℃，光照强度为1500lx～3000lx，光培养时长为12小时，培养25天得到株高4～5.5cm，根须5～7根的台闽苣苔苗；所述生根培养基的组成：1/2MS+终浓度0.05～0.5mg／L的NAA +终浓度2g／L的AC +终浓度30g/L的蔗糖+终浓度7.5g/L的琼脂，pH值为5.8～6.5；
e、上述1/2MS为元素浓度减半的国际通用MS，用流水洗净台闽苣苔苗的根部残留的培养基，在800～1000倍多菌灵溶液中浸泡30min，单株移栽入盆，基质为3份腐殖土、3份草炭土、1份珍珠岩，试管苗栽植不宜太深，保持湿度。
2.如权利要求1所述的一种采用台闽苣苔的珠芽进行组培快繁的方法，其特征在于步骤b中，所述芽诱导培养基的组成：1/2MS+终浓度1.0mg／L的6-BA +终浓度0.7mg／L的NAA +终浓度1.5g／L的AC +终浓度30g/L的蔗糖+终浓度7.5g/L琼脂。
3.如权利要求1所述的一种采用台闽苣苔的珠芽进行组培快繁的方法，其特征在于步骤c中，所述芽增殖培养基的组成：1/2MS+终浓度2mg／L的6-BA +终浓度0.6mg／L的NAA +终浓度1.5g／L的AC +质量终浓度12%的土豆泥+终浓度30g/L的蔗糖+终浓度7.5g/L琼脂。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN109892124A (zh) * 2019-04-22 2019-06-18 台州学院 一种利用珠芽培养台闽苣苔植株的方法

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104041412A (zh) * 2014-06-09 2014-09-17 广西壮族自治区药用植物园 一种贵州半蒴苣苔的组织培养快速繁殖方法

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