CN108348605B - 用pdgf-cc抑制剂和抗雌激素治疗er阴性乳癌 - Google Patents

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Abstract

本申请公开，通过用抗PDGF‑CC抗体治疗，ER阴性乳癌能够被转化为ER阳性乳癌，比如转化为管腔型表型乳癌。ER阳性乳癌包括管腔型乳癌可用抗雌激素治疗进行治疗。在此基础上，本申请公开，如果和使用抗PDGF‑CC抗体的治疗进行组合治疗，则ER阴性乳癌出乎意料地可用抗雌激素治疗进行治疗。例如，所述治疗可以是辅助治疗，例如治疗的目的在于降低手术去除原发性肿瘤之后乳癌复发的风险。

Description

用PDGF-CC抑制剂和抗雌激素治疗ER阴性乳癌
技术领域
本发明涉及癌症治疗领域，尤其涉及ER阴性乳癌的治疗领域。
背景技术
2012年，仅乳癌的全球发病率就达到170万新增病例。乳癌可分为5个临床相关亚型：正常型、管腔A、管腔B、HER2和基底型乳癌。
乳癌的分子亚型影响复发率和中位复发时间。在所有乳癌患者中，携带基底型肿瘤的女性复发率最高(34％相对于所有其它亚型的20％)，中位复发时间最短(2.6年相对于所有其它亚型的5年)。因此，携带基底型乳癌的女性的预后在所有亚型中是最差的，并且目前提供的唯一治疗选择是高剂量化疗；治疗方案伴随着严重的副作用。与高剂量化疗相比，伴有轻微副作用的内分泌疗法对基底型肿瘤无效。
被诊断患有特征在于不存在雌激素受体(ER阴性乳癌)表达的乳癌的妇女，不用抗激素药进行治疗，因为这种疗法已被证明对ER阴性乳癌无效。例如，在2011年Lancet(doi：10.1093/annonc/mds194)中发表的早期乳癌试验者协作组(EBCTCG)进行的meta分析得出结论：在ER阴性疾病中，他莫昔芬对乳癌复发或死亡具有微小的影响或几乎没有影响。同样的，其它一些研究表明辅助治疗与抗雌激素在治疗三阴性乳癌中无效(参见例如Foulkes等人(doi：10.1056/NEJMra1001389)；Joensuu等人(doi：10.1093/annonc/mds194)；Baselga等人(doi：10.1200/JCO.2012.46.2408)；Clifford等人(doi：10.1634/theoncologist.2011-S1-01)；Liedtke等人，(doi：10.1200/JCO.2007.14.4147))。
发明内容
因此，对改善ER阴性乳癌的治疗存在极大的需求。
有趣的是，本发明公开了通过用抗PDGF-CC抗体进行治疗可将ER阴性乳癌转化为ER阳性乳癌，例如转化为管腔型表型的乳癌。ER阳性乳癌包括管腔型乳癌，可用抗雌激素治疗。在此基础上本发明公开，如果治疗与抗PDGF-CC抗体联合治疗，令人惊讶的是ER阴性乳癌可以用抗雌激素治疗进行治疗。所述治疗可以是例如为辅助治疗，例如旨在通过手术去除原发性肿瘤后降低乳癌复发风险的治疗。
因此，本发明提供了用于在有需求的个体中治疗ER阴性乳癌的多组件药盒，其包含抗PDGF-CC抗体和抗雌激素。
本发明还提供了用于在有需求的个体中治疗ER阴性乳癌的多组件药盒，其包含PDGF-R的抑制剂和抗雌激素。
本发明还提供了在有需求的个体中治疗ER阴性乳癌的方法，所述方法包括同时或以任何顺序依次向所述个体施用抗PDGF-CC抗体和抗雌激素，从而治疗ER阴性乳癌。
本发明还提供了在有需要的个体中治疗ER阴性乳癌的方法，所述方法包括同时或以任何顺序依次向所述个体施用PDGF-R的抑制剂和抗雌激素，从而治疗ER阴性乳癌。
本发明还提供了使ER阴性乳癌对抗雌激素治疗敏感的方法，所述方法包括向患有ER阴性乳腺的个体施用抗PDGF-CC，从而使所述ER阴性乳癌对抗雌激素治疗敏感。
本发明还提供了使ER阴性乳癌对抗雌激素治疗敏感的方法，所述方法包括向患有ER阴性乳腺的个体施用PDGF-R的抑制剂，从而使所述ER阴性乳癌对抗雌激素治疗敏感。
本发明还提供了将ER阴性乳癌转化为ER阳性乳癌的方法，所述方法包括向患有ER阴性乳腺的个体施用抗PDGF-CC，从而将所述ER阴性乳癌转换为ER阳性乳癌。
本发明还提供了在患有ER阴性乳癌的个体中降低ER阴性乳癌复发风险的方法，其中所述个体中的所述乳癌已通过手术治疗，所述方法包括：
a.通过向患有ER阴性乳癌的个体施用抗PDGF-CC抗体使ER阴性乳癌对抗雌激素治疗敏感；
b.向所述个体施用抗雌激素。
本发明还提供了在患有ER阴性乳癌个体中降低ER阴性乳癌复发风险的方法，其中所述个体中的所述乳癌已通过手术治疗，所述方法包括：
a.通过向患有ER阴性乳癌的个体施用PDGF-R的抑制剂使ER阴性乳癌对抗雌激素治疗敏感；
b.向所述个体施用抗雌激素，
从而降低所述ER阴性乳癌复发的风险。
本发明还提供了多组件药盒，其包含抗PDGF-CC抗体和抗雌激素，其用于上述方法中。
附图说明
图1。显示PDGF-CC的表达。图A和B显示在正常乳房组织中的表达。图C至F显示在乳肿瘤中的表达。图G显示与临床病理参数相关的表达。图H显示与PDGF-C阴性患者相比，具有中等至高表达PDGF-C的患者的月存活。图I显示PDGFR的表达。
图2。图A显示MMTV-PyMT小鼠肿瘤中PDGF-CC、PDGFRα和PDGFRβ的表达。图B显示MMTV-PyMT小鼠乳房肿瘤的体积。图C-D显示肿瘤潜伏期和存活率。图E-F显示肿瘤分期和坏死。图G显示肺转移。图H显示移植后肿瘤体积。图I显示注射后肿瘤体积。
图3。图A显示肿瘤切片的Masson三色染色。图B显示MMTV-PyMT；Pdgfclacz/lacz小鼠严重出血。图C显示HIF-1α的免疫染色。图D显示通过定量PCR分析确定的VEGF-A的表达。图E-F显示SCID小鼠中的肿瘤体积和血管密度，所述小鼠携带原位植入的MDA-MB-231肿瘤并用A3B6抗体或对照抗体进行治疗。
图4。图A和B显示Foxa1的表达；lacZ/lacZ相当于PDGFC-/-。图C显示根据癌症基因组图谱项目中收集的乳肿瘤的转录谱，Foxa1的表达与非基底型分子亚型高度相关。图D显示Foxa1的表达作为管腔亚型肿瘤的特异性特征。图E显示一组(a cohort of)人乳肿瘤标本的Foxa1免疫染色。图F显示乳肿瘤细胞系中PDGF-CC的表达。图G显示Foxa1的表达与PDGF-CC的表达呈负相关。
图5。图A显示FoxA1和ERα在肿瘤蛋白裂解物中的表达。图B显示通过定量PCR确定的斯钙素(STC)-1、肝细胞生长因子(HGF)和胰岛素生长因子结合蛋白3(IGFBP3)的表达。图C至E显示用STC-1、HGF和/或IGFBP3刺激后分别表达管腔型亚型标记物FoxA1、ERα和GATA3。图F显示对他莫昔芬诱导的生长停滞的敏感性。图G显示来自基质成纤维细胞的条件化介质可以替换为三种旁分泌PDGF-CC诱导的因子。图H显示MMTV-PyMT小鼠肿瘤对STC-1、HGF和IGFBP3的免疫染色。
图6。图A显示他莫昔芬治疗的小鼠和未治疗的小鼠中wt肿瘤的肿瘤生长。图B显示用他莫昔芬治疗后Pdgfc缺陷型小鼠肿瘤的肿瘤生长。图C显示用他莫昔芬治疗后完全建立的MDA-MB-231肿瘤的肿瘤生长。图D显示抗PDGF-CC抗体A3B6和他莫昔芬联合治疗后完全建立的MDA-MB-231肿瘤的肿瘤生长。图E显示用单克隆抗PDGF-CC抗体A3B6治疗后ERα的表达。图F显示PDGF-CC阻断信号传导后MDA-MB-231肿瘤中ERα的表达。图G显示乳肿瘤微环境中旁分泌信号传导网络的理论模型。
图7。用抗PDGF-CC抗体、来曲唑、抗PDGF-CC抗体和来曲唑的组合治疗的小鼠以及对照中的肿瘤生长。
图8。用伊马替尼、他莫昔芬、伊马替尼和他莫昔芬的组合治疗的小鼠以及对照中的肿瘤生长。
具体实施方式
定义
如本文所用的术语“抗体”是指能够识别并结合抗原的多肽或蛋白，所述抗原包含至少一个抗原结合位点。所述抗原结合位点优选地包含至少一个CDR。抗体可以是天然存在的抗体、天然存在的抗体的片段或合成抗体。
本文所用的术语“抗原”是指包含至少一个表位的分子。抗原可以例如是多肽、多糖、蛋白、脂蛋白或糖蛋白。
本文所用术语“基底型乳癌”是指三阴性表型的乳癌，即所述癌症不表达可检测水平的雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和人表皮生长因子受体(HER)-2。此外，基底型乳癌通常不表达FoxA1。基底型乳癌与高分级(high grade)、不良预后和患者年纪轻相关。
本文所用的术语“表位”是指能够与抗体特异性结合的决定簇。本发明内，表位可以包含在PDGF-C或PDGF-CC中。表位通常由分子的化学活性表面基团如氨基酸组成，并且通常具有特定的三维结构特征以及特定的电荷特征。表位可以是构象型或非构象型，其中在变性溶剂存在时，与前者而非后者的结合消失。表位可以是连续的或不连续的，其中不连续表位是蛋白抗原上的构象表位，其由蛋白一级序列中的至少两个独立区域形成。
术语“ER阴性乳癌”是指缺乏雌激素受体表达的乳癌。当所述乳癌＝<10％的肿瘤细胞以免疫组织化学可检测的水平表达雌激素受体时，乳癌被认为是ER阴性乳癌。优选地，ER阴性乳癌是指在其中所述乳癌<1％的肿瘤细胞以免疫组织化学可检测的水平表达雌激素受体时的乳癌。
术语“ER阳性乳癌”是指表达雌激素受体的乳癌。当所述乳癌>10％的肿瘤细胞以免疫组织化学可检测的水平表达雌激素受体时，乳癌被认为是ER阳性乳癌。
术语“管腔型乳癌”是指对抗雌激素疗法有响应的乳癌。特别是，“管腔型乳癌”表达雌激素受体(ER)。根据本发明，“管腔型乳癌”可能是真正的管腔型乳癌，例如管腔A型或管腔B型乳癌。
如本文所用术语“天然存在的抗体”是指能够识别并结合抗原并且包含通过二硫键相互连接的两条相同的重链(H)和两条相同的轻链(L)的异四聚体糖蛋白。每条重链包含重链可变区(在此缩写为VH)和重链恒定区(在此缩写为CH)。每条轻链包含轻链可变区(缩写为VL)和轻链恒定区(缩写为CL)。VH和VL区可以进一步细分成称为互补决定区(CDR)的高变区，散布有称为框架区域(FR)的更保守区域。抗体可包含几个相同的异源四聚体。
本文所用的术语“治疗”可以指任何类型的治疗。治疗可能是治疗性治疗，也可能是改善性治疗和/或降低癌症作用的治疗。治疗也可能是延缓癌症进展的治疗，例如治疗可降低癌症的生长、降低转移或以其它方式延缓癌症进展。治疗也可以是降低复发风险的治疗。
治疗方法
本发明提供了在有需求的个体中治疗ER阴性乳癌的方法。本发明的方法包括向患有ER阴性乳癌的个体同时或以任何顺序依次施用抗PDGF-CC抗体和抗雌激素，从而治疗ER阴性乳癌。
本公开还提供了在有需求的个体中治疗ER阴性乳癌的方法，所述方法包括向患有ER阴性乳癌的个体同时或以任何顺序依次施用PDGF-R的抑制剂和抗雌激素，从而治疗ER阴性乳癌。
根据本发明的治疗方法可以结合一种或更多种治疗ER阴性乳癌的常规方法。因此，本发明的方法可以包含使用抗PDGF-CC抗体和抗雌激素的治疗与一种或更多种其它方法的组合。本发明的方法还可以包含使用PDGF-R抑制剂和抗雌激素的治疗与一种或更多种其它方法的组合。例如，所述ER阴性乳癌可以通过选自手术、放射和化疗的方法进行治疗。特别是，用本发明方法治疗的个体可能是患有ER阴性乳癌的个体，其中所述个体已通过手术治疗所述乳癌。因此，待治疗的个体可能是患有ER阴性乳癌的个体，其中原发性肿瘤已通过手术切除。在这种情况下，本发明的治疗常常被认为是辅助疗法，其降低复发风险。具体而言，治疗可以是在治疗开始后5年内用以降低复发风险的治疗。例如，治疗可以是在治疗开始后5年内用以预防复发的治疗。优选地，在手术后的最后1个月，例如在手术后的最后一周，开始用抗PDGF-CC抗体和抗雌激素治疗。治疗可能提前开始，例如甚至在手术之前。类似地，在手术后的最后1个月，例如在手术后的最后一周，开始用PDGF-R的抑制剂和抗雌激素治疗。治疗可能提前开始，例如甚至在手术之前。
在本发明中还包括，待用抗PDGF-CC抗体和抗雌激素治疗个体，或待用PDGF-R的抑制剂和抗雌激素治疗的个体尚未接受手术治疗。这可能是因为特定的乳癌是不能进行手术的乳癌，不适合通过手术进行去除的乳癌或因为个体尚未接受手术。这种治疗可以是例如肿瘤辅助治疗。
抗PDGF-CC抗体可以是能够结合PDGF-CC的任何抗体，例如下文在“抗PDGF-CC抗体”章节中所述的任何抗体。抗雌激素可以是任何具有抗雌激素作用的化合物，例如下文在抗雌激素章节中所述的任何化合物。
本发明还提供了使ER阴性乳癌对抗雌激素治疗敏感的方法。ER阴性乳癌对抗雌激素治疗没有响应(参见例如早期乳癌试验者协作组(EBCTCG)doi：10.1016/S0140-6736(11)60993-8)，但有趣的是，本发明公开了可以通过抗PDGF-CC抗体治疗使ER阴性乳癌对抗雌激素治疗敏感。
因此，本发明提供了使ER阴性乳癌对抗雌激素治疗敏感的方法，所述方法包括向患有ER阴性乳癌的个体施用抗PDGF-CC抗体，从而使所述ER阴性乳癌对抗雌激素治疗敏感。
本公开还提供了使ER阴性乳癌对抗雌激素治疗敏感的方法，所述方法包括向患有ER阴性乳癌的个体施用PDGF-R的抑制剂，从而使所述ER阴性乳癌对抗雌激素治疗敏感。
特别是，本发明可提供在个体中使ER阴性乳癌对抗雌激素治疗敏感的方法，其中所述的个体患有ER阴性乳癌，且其中所述个体中的所述乳癌已通过手术得以治疗，其中在所述个体中进行抗雌激素治疗之后，未观察到复发或复发风险显著降低。
因此可以用抗雌激素治疗对抗雌激素治疗敏感的乳癌。因此方法可以包括向患有ER阴性乳癌的个体施用抗雌激素的步骤，其中所述抗PDGF-CC抗体和所述抗雌激素可以同时或以任何顺序依次施用。
因此，本发明还提供在有需求的个体中治疗ER阴性乳癌的方法，所述方法包括：
a.通过向患有ER阴性乳癌的个体施用抗PDGF-CC抗体使ER阴性乳癌对抗雌激素治疗敏感；
b.向所述个体施用抗雌激素从而治疗所述ER阴性乳癌。
本公开还提供了在有需求的个体中治疗ER阴性乳癌的方法，所述方法包括：
a.通过向患有ER阴性乳癌的个体施用PDGF-R的抑制剂使ER阴性乳癌对抗雌激素治疗敏感；
b.向所述个体施用抗雌激素，
从而治疗所述ER阴性乳癌。
本发明还提供了在个体中治疗ER阴性乳癌的方法，其中所述的个体患有ER阴性乳癌，其中所述个体中的所述乳癌已通过手术治疗，所述方法包括：
a.通过向患有ER阴性乳癌的个体施用抗PDGF-CC抗体使ER阴性乳癌对抗雌激素治疗敏感；
b.向所述个体施用抗雌激素，
从而降低所述ER阴性乳癌复发的风险。
本发明还提供了在个体中治疗ER阴性乳癌的方法，其中所述的个体患有ER阴性乳癌，其中所述个体中的所述乳癌已通过手术治疗，所述方法包括：
a.通过向患有ER阴性乳癌的个体施用PDGF-R的抑制剂使ER阴性乳癌对抗雌激素治疗敏感；
b.向所述个体施用抗雌激素，
从而降低所述ER阴性乳癌复发的风险。
本发明还提供了在有需求的个体中治疗ER阴性乳癌的方法，所述方法包括：
a.通过向患有ER阴性乳癌的个体施用抗PDGF-CC抗体使ER阴性乳癌对抗雌激素治疗敏感；
b.通过手术治疗所述ER阴性乳癌；
c.通过向患有ER阴性乳癌的个体施用抗PDGF-CC抗体，使剩余的ER阴性乳癌对抗雌激素治疗敏感；
d.向所述个体施用抗雌激素，
从而降低所述ER阴性乳癌复发的风险。
本发明还提供了在有需求的个体中治疗ER阴性乳癌的方法，所述方法包括：
a.通过向患有ER阴性乳癌的个体施用PDGF-R的抑制剂使ER阴性乳癌对抗雌激素治疗敏感；
b.通过手术治疗所述ER阴性乳癌；
c.通过向患有ER阴性乳癌的个体施用PDGF-R的抑制剂，使剩余的ER阴性乳癌对抗雌激素治疗敏感；
d.向所述个体施用抗雌激素，
从而降低所述ER阴性乳癌复发的风险。
本发明还提供了将ER阴性乳癌转化为ER阳性乳癌的方法。这种方法包括向患有ER阴性乳癌的个体施用抗PDGF-CC，从而将所述ER阴性乳癌转化为ER阳性乳癌。
本发明还提供了将ER阴性乳癌转化为管腔型乳癌的方法。这种方法包括向患有ER阴性乳癌的个体施用抗PDGF-CC，从而将所述ER阴性乳癌转化为管腔型乳癌。
当所述癌症表达可检测水平的雌激素受体(ER)时，乳癌被认为是管腔型乳癌。优选，所述乳癌的至少1％，例如至少10％的乳癌细胞表达可检测水平的ER。
在一些实施方案中，方法可以包括测试乳癌是否已经转化为管腔乳癌和/或ER阳性乳癌的附加步骤。所述测试可以在施用所述抗PDGF-CC抗体之后进行，并且通常可以包括以下步骤：
a)从所述乳癌获得样本；
b)测试所述样本中雌激素受体(ER)的表达；
c)其中在所述样本中可检测到的ER表达表明所述乳癌已被转化为管腔乳癌或ER阳性乳癌。
所述测试可以是用于确定乳癌是否表达ER的任何测试。在一个实施方案中，测试是免疫组织化学测试，例如这样一种测试，其中步骤b)涉及借助识别ER的抗体给步骤a)中获得的样本染色，然后检测ER表达，例如通过显微镜。如果比初始ER阴性肿瘤更大百分比的细胞表达ER(例如如果超过1％的肿瘤细胞表达ER)，则认为ER得以表达。优选地，如果所述样本的至少10％的肿瘤细胞表达ER，那么乳癌被认为是ER阳性的。
因此，本发明提供了在有需求的个体中治疗ER阴性乳癌的方法，所述方法包括：
a.通过向患有ER阴性乳癌的个体施用抗PDGF-CC抗体，将ER阴性乳癌转化为管腔型乳癌；
b.向所述个体施用抗雌激素，
从而治疗所述ER阴性乳癌。
本发明的方法可以包括施用抗PDGF-CC抗体和抗雌激素的步骤。可以同时或以任何顺序依次施用所述抗PDGF-CC抗体和所述抗雌激素。
可替代地，本发明的方法可包括施用PDGF-R的抑制剂和抗雌激素的步骤。可以同时或以任何顺序依次施用所述PDGF-R的抑制剂和所述抗雌激素。
本发明还提供了多组件药盒，其包含：
a)抗PDGF-CC抗体和抗雌激素，或
b)PDGF-R的抑制剂和抗雌激素
其用于在个体中治疗ER阴性乳癌，其中所述个体患有ER阴性乳癌，并且其中所述个体中的所述乳癌已通过手术治疗，其中所述治疗降低复发风险。
在本发明的一些实施方案中，向所述个体同时施用所述抗PDGF-CC抗体或所述PDGF-R的抑制剂以及所述抗雌激素。
然而，在一些实施方案中，优选的是在施用所述抗雌激素之前，向所述个体施用抗PDGF-CC抗体或PDGF-R的抑制剂。这种施用顺序可以确保ER阴性乳癌在施用所述抗雌激素之前对抗雌激素敏感。
在本发明的一些实施方案中，抗PDGF-CC抗体或PDGF-R的抑制剂施用不止一次，例如可以被施用至少两次，例如至少3次，例如1至20次的范围，例如2至10次的范围。
在一个实施方案中，向患有ER阴性乳癌的个体施用至少两次抗PDGF-CC抗体或PDGF-R的抑制剂，其中一次或更多次施用在手术治疗之前，并且一次或更多次额外的施用在手术治疗后施用。手术后施用可与抗雌激素治疗同时进行。
同样，抗雌激素可以施用不止一次。在延长的时间内多次施用抗雌激素，例如每天一次，每天两次或甚至在更长的时间段内更频繁地施用。抗雌激素也可以更低频次地施用，例如，在每周1至6次的范围内，或者例如每月1至4次的范围内。因此，抗雌激素的施用可以在延长的时间段内非常频繁地进行，例如至少1个月，例如至少6个月，例如至少1年，例如数年。例如抗雌激素治疗可以每天一次持续至少1年，例如1至10年的范围，例如4至6年的范围，例如持续5年。在这样的实施方案中，抗雌激素的首次施用可以与抗-PDGF-CC抗体或PDGF-R抑制剂的至少一次施用同时进行，而后续施用可分开进行。还有可能的是，抗PDGF-CC抗体或PDGF-R抑制剂的每次施用与抗雌激素的施用同时进行，然而此外的抗雌激素分开施用。
在本发明的一个实施方案中，在首次施用抗雌激素之前施用至少一次抗PDGF-CC抗体或PDGF-R的抑制剂。因此，所述抗雌激素的第一剂量可以在首次施用所述抗PDGF-CC抗体或所述PDGF-R抑制剂之后的1小时至几周内施用。
通常，抗雌激素比抗PDGF-CC抗体或PDGF-R的抑制剂施用更长的时间。因此，可以例如在治疗开始时施用抗PDGF-CC抗体或PDGF-R的抑制剂，而抗雌激素通常可以连续施用较长时间。
因此，如上所述，抗PDGF-CC抗体或PDGF-R的抑制剂可以例如以1至5次的范围施用，而抗雌激素通常可以连续施用1至10年的范围，例如在4至6年的范围，例如5年。抗雌激素的最后一次施用优选晚于抗PDGF-CC抗体或PDGF-R的抑制剂的最后一次施用。
施用途径可以根据特定的抗PDGF-CC抗体、PDGF-R的抑制剂和抗雌激素来选择。通常，肠胃外施用抗PDGF-CC抗体或PDGF-R的抑制剂。PDGF-R的抑制剂可以肠胃外施用，例如作为静脉内制剂，并且也可以肠内施用，例如以片剂形式口服施用。以下在“药物制剂”章节中描述了用于肠胃外施用的方法和有用的制剂。抗雌激素可以通过任何有用的途径施用，其可以根据所使用的特定抗雌激素来选择。通常，口服施用抗雌激素。以下在“药物制剂”章节中描述了用于口服施用的方法和有用制剂。
要治疗的个体可以是患有ER阴性乳癌的任何个体。通常情况下，个体是人类，例如男性或女性人类。优选地，个体是女性人类。
在一些实施方案中，本公开的方法包括施用抗PDGF-CC抗体和抗雌激素，其中抗雌激素是雌激素拮抗剂，如下文“抗雌激素”章节所述。
在一些实施方案中，本公开的方法包括施用抗PDGF-CC抗体和抗雌激素，其中抗雌激素是雌激素拮抗剂，其选自他莫昔芬、雷洛昔芬、4-羟基他莫昔芬(4-hydroxytramoxifen)、曲沃昔芬、雷洛昔芬盐酸盐(keoxifene)、阿非昔芬、LY117018、氟维司群和托瑞米芬。
在一些实施方案中，本公开的方法包括施用抗PDGF-CC抗体和雌激素拮抗剂，其中雌激素拮抗剂是他莫昔芬。
在一些实施方案中，本公开的方法包括施用抗PDGF-CC抗体和抗雌激素，其中抗雌激素是芳香酶抑制剂，如在下文“抗雌激素”章节中所述。
在一些实施方案中，本公开的方法包括施用抗PDGF-CC抗体和抗雌激素，其中抗雌激素是选自依西美坦、福美坦、氨鲁米特、伏氯唑、法倔唑、阿那曲唑和来曲唑的芳香酶抑制剂。
在一些实施方案中，本公开的方法包括施用抗PDGF-CC抗体和抗雌激素，其中抗雌激素是来曲唑。
在一些实施方案中，本公开的方法包括施用PDGF-R的抑制剂和抗雌激素，其中抗雌激素是雌激素拮抗剂，如以下“抗雌激素”章节中所述的。
在一些实施方案中，本公开的方法包括施用PDGF-R的抑制剂和抗雌激素，其中抗雌激素是选自以下的雌激素拮抗剂：他莫昔芬、雷洛昔芬、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、雷洛昔芬盐酸盐、阿非昔芬、LY117018、氟维司群和托瑞米芬。
在一些实施方案中，本公开的方法包括施用PDGF-R的抑制剂和抗雌激素，其中抗雌激素是他莫昔芬。
多组件药盒
本发明提供多组件药盒，其包含抗PDGF-CC抗体和抗雌激素。本发明还提供了包含PDGF-R的抑制剂和抗雌激素的多组件药盒。多组件药盒尤其用于在有需求的个体中治疗ER阴性乳癌。因此，可以制备用于本文上述“治疗方法”章节中描述的任何治疗方法的多组件药盒。
可以作为分开的单元提供多组件药盒，即一个或更多个包含抗PDGF-CC抗体的单元，以及一个或更多个包含抗雌激素的单元，其中所述单元分开提供。或者，多组件药盒可以包含一个或更多个包含PDGF-R的抑制剂的单元和一个或更多个包含抗雌激素的单元，其中单元分开提供。
因此，可以制备用于连续施用的多组件药盒，其中多组件药盒的每个部分都是分开提供和施用的。因此，可以制备抗PDGF-CC抗体和抗雌激素用于顺序施用。另外，可以制备PDGF-R的抑制剂和抗雌激素用于顺序施用。本发明中包括，制备用于根据上述“治疗方法”章节中所述的任何方法进行施用的所述多组件药盒。特别是，可以制备多组件药盒用于治疗ER阴性乳癌，其中所述治疗包含步骤：
a.向有需求的个体施用抗PDGF-CC抗体；
b.随后施用抗雌激素。
或者，可以制备用于治疗ER阴性乳癌的多组件药盒，其中所述治疗包含步骤：
a.向有需求的个体施用PDGF-R的抑制剂；
b.随后施用抗雌激素。
通常，制备用于胃肠外施用有限次数的抗PDGF-CC抗体或PDGF-R的抑制剂。例如，如本文上述“治疗方法”章节中所述，可以制备用于胃肠外施用的抗PDGF-CC抗体或PDGF-R的抑制剂。通常还制备PDGF-R的抑制剂用于口服施用，例如以片剂形式。相反，抗雌激素可以通过任何方式制备用于施用。因此，例如抗雌激素可以如本文上述在“治疗方法”章节中所述制备用于频繁口服施用。
在一些实施方案中，本公开的多组件药盒包含抗PDGF-CC抗体和抗雌激素，其中抗雌激素是如下文“抗雌激素”章节所述雌激素拮抗剂。
在一些实施方案中，本公开的多组件药盒包含抗PDGF-CC抗体和抗雌激素，其中抗雌激素是选自他莫昔芬、雷洛昔芬、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、雷洛昔芬盐酸盐、阿非昔芬、LY117018、氟维司群和托瑞米芬的雌激素拮抗剂。
在一些实施方案中，本公开的多组件药盒包含抗PDGF-CC抗体和抗雌激素，其中抗雌激素是他莫昔芬。
在一些实施方案中，本公开的多组件药盒包含抗PDGF-CC抗体和抗雌激素，其中抗雌激素是如下“抗雌激素”章节所述的芳香酶抑制剂。
在一些实施方案中，本公开的多组件药盒包含抗PDGF-CC抗体和抗雌激素，其中抗雌激素是芳香酶抑制剂，其选自依西美坦、福美坦、氨鲁米特、伏氯唑、法倔唑、阿那曲唑和来曲唑。
在一些实施方案中，本公开的多组件药盒包含抗PDGF-CC抗体和抗雌激素，其中抗雌激素是来曲唑。
在一些实施方案中，本公开的多组件药盒包含PDGF-R的抑制剂和抗雌激素，其中抗雌激素是如下文“抗雌激素”章节所述的雌激素拮抗剂。
在一些实施方案中，本公开的多组件药盒包含PDGF-R的抑制剂和抗雌激素，其中抗雌激素是雌激素拮抗剂，其选自他莫昔芬、雷洛昔芬、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、雷洛昔芬盐酸盐、阿非昔芬、LY117018、氟维司群和托瑞米芬的雌激素拮抗剂。
在一些实施方案中，本公开的多组件药盒包含PDGF-R的抑制剂和抗雌激素，其中抗雌激素是他莫昔芬。
抗PDGF-CC抗体
本发明涉及多组件药盒，其包含抗PDGF-CC抗体，以及本发明涉及使用抗PDGF-CC抗体进行治疗的方法。所述抗-PDGF-CC抗体可以是任何能够结合PDGF-CC的抗体，特别是特异性结合PDGF-CC的抗体。在本文下文的“PDGF-CC”章节中详细描述了PDGF-CC。由于PDGF-CC是PDGF-C的二聚体，因此抗PDGF-CC抗体可以特异性结合PDGF-CC和PDGF-C。
本发明还涉及包含PDGF-R的抑制剂的多组件药盒，以及使用PDGF-R抑制剂进行治疗的方法。然而，优选使用抗PDGF-CC抗体作为高度特异性靶向PDGF-CC的抗体，但不靶向PDGF家族的其它成员，因此副作用最小。PDGF-R的抑制剂在阻断PDGF-R信号传导通路方面也是有效的，但它们在所有PDGF-R上非特异性地起作用并可能因此导致不希望的作用。然而，当PDGF-R的抑制剂是抗PDGF-R的抗体时，这种不希望的作用被最小化。
抗PDGF-CC抗体可以与任何PDGF-CC结合。然而，通常优选使用的抗PDGF-CC抗体能够结合要治疗的个体的PDGF-CC。因此，在本发明的实施方案中，如果个体是人，则优选抗PDGF-CC抗体能够结合人PDGF-CC。人PDGF-C序列如本文SEQ ID NO：1所示。
根据本发明的抗PDGF-CC抗体是能够识别和结合PDGF-CC的任何多肽或蛋白。术语“特异性结合”意指，对PDGF-CC的亲和力比对非特异性抗原(例如BSA)的亲和力高至少10倍。典型地，当以基于IC50值的表观亲和力测量时，抗体以对应于约10-7M或更小，例如约10- 8M或更小，例如约10-9M或更小，例如约10-10M或更小KD的亲和力结合。
在一个实施方案中，抗-PDGF-CC抗体特异性结合PDGF-CC和任选地PDGF-C，但不结合任何其它PDGF。
在一个实施方案中，所述抗PDGF-CC抗体是天然存在的抗体或其功能同系物。天然存在的抗体是能够识别和结合抗原的异四聚体糖蛋白，其包含通过二硫键相互连接的两条相同的重链(H)和两条相同的轻链(L)。每条重链包含或优选由重链可变区(本文缩写为VH)和重链恒定区(本文缩写为CH)组成。每条轻链包含或优选由轻链可变区(本文缩写为VL)和轻链恒定区(本文缩写为CL)组成。VH和VL区可以进一步细分成称为互补决定区(CDR)的高变区，其中散布有更保守的区域，称为框架区(FR)。每个VH和VL包含并且优选地由三个CDR和四个FR组成，按照以下顺序从氨基末端到羧基末端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。
根据本发明的天然存在的抗体可以由一个异四聚体组成，或者它们可以包含几个相同的异四聚体。因此，根据本发明的天然存在的抗体可以例如选自IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。这些不同种类的免疫球蛋白的亚基结构和三维构型是众所周知的。在本发明的优选实施方案中，抗体是IgG，例如IgG-1、IgG-2、IgG-3和IgG-4。
根据本发明的天然存在的抗体可以是特定物种的抗体，例如抗体可以是鼠、大鼠、兔、山羊、绵羊、鸡、驴、骆驼或人抗体。然而根据本发明的抗体也可以是来自几种物种的抗体之间的杂交物，例如抗体可以是嵌合抗体，例如人源化抗体。
并不总是期望使用非人抗体用于人类治疗，因此根据本发明的抗PDGF-CC抗体可以是人抗体或人源化抗体，例如天然存在的人抗体。
根据本发明的抗PDGF-CC抗体可以是人免疫球蛋白或人源化免疫球蛋白，例如天然存在的人免疫球蛋白。
本文所用的人抗体是这样的抗体，其获自使用人免疫球蛋白序列的系统。人抗体可以是例如从动物(例如小鼠)分离的抗体，所述动物对于从其制备的人免疫球蛋白基因或杂交瘤而言是转基因的或转染色体的。人抗体也可以从经过转化而表达抗体的宿主细胞中分离，例如从转染瘤中分离。人抗体也可从重组的、组合人抗体文库中分离。
人抗体具有源自人种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区。然而，在某些实施方案中，这样的重组人抗体可以进行体外诱变或体内体细胞诱变，并且因此重组抗体的VH和VL区的氨基酸序列是这样的序列，其虽然衍生自并且与人种系VH和VL序列相关，但是可能不是天然存在于体内人抗体种系库内。
人抗体与野生型人免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列在氨基酸序列方面具有优选至少90％，更优选至少95％，甚至更优选至少96％、97％、98％或99％的同一性。
所述转染色体动物的转基因可含有人免疫球蛋白基因的迷你基因座(miniloci)，其编码未重排的人重链(μ和/或γ)和κ轻链免疫球蛋白序列。此外，动物可能含有一个或更多个使内源重链和轻链基因座失活的突变。这种动物的实例描述于Lonberg，N.等人(1994)Nature 368(6474)：856-859和WO 02/43478。
根据本发明的抗PDGF-CC抗体可以是嵌合抗体，即抗体包含来源于不同物种的区域。嵌合抗体可以例如包含来自一种动物物种的可变区和来自另一种动物物种的恒定区。例如，嵌合抗体可以是具有源自小鼠单克隆抗体的可变区和人恒定区的抗体。这种抗体还可以称为人源化抗体。
因此，根据本发明的抗PDGF-CC抗体也可以是人源化抗体，其部分由从人种系免疫球蛋白序列获得的序列和部分来自其它序列的序列所编码。所述其它序列优选是来自其它物种的种系免疫球蛋白，更优选来自其它哺乳动物物种。具体地说，人源化抗体可以是这种的抗体，其中抗原结合位点源自非人物种的免疫球蛋白，优选来自非人哺乳动物，例如来自小鼠或大鼠，而该分子的一些或全部剩余免疫球蛋白衍生部分源自人免疫球蛋白。来自所述非人物种的抗原结合位点可以例如由完整的VL或VH或两者、或者一个或更多个嫁接到VL或VH或两者中适当的人框架区上的CDR组成。因此，在人源化抗体中，CDR可以来自小鼠或大鼠单克隆抗体，抗体的其它区域是人源的。
根据本发明的抗PDGF-CC抗体可以是单克隆抗体，如天然存在的单克隆抗体，或者它可以是多克隆抗体，如天然存在的多克隆抗体。
抗PDGF-CC抗体可以是含有抗原结合位点的任何蛋白或多肽，例如单一多肽、蛋白或糖蛋白。优选地，抗原结合位点包含至少一个CDR，或更优选可变区。
因此，抗原结合位点可以包含VH和/或VL。在抗体中，VH和VL一起可以含有抗原结合位点，然而，VH或VL中的任一个可以包含抗原结合位点。
抗PDGF-CC抗体可以例如是抗体的抗原结合片段，优选天然存在的抗体、异源特异性抗体、单链抗体或重组抗体的抗原结合片段。
根据本发明的抗PDGF-CC抗体可以包含一个或更多个抗原结合位点。天然存在的异源四聚体抗体包含两个抗原结合位点。
如上所述，与本发明一起使用的抗PDGF-CC抗体能够识别和结合PDGF-CC。因此，通常抗-PDGF-CC抗体特异性结合PDGF-CC上的一个或更多个表位。在本发明的实施方案中，如果抗体是单克隆抗体，那么抗体通常结合PDGF-CC上的一个表位。
所述表位可以位于PDGF-CC的任何有用部分。然而，在本发明的优选实施方案中，抗体是抑制性抗体，即抗体能够抑制PDGF-CC活性。特别优选的是抗体能够抑制PDGF-CC与PDGFRα同二聚体和/或PDGFRα/β异二聚体的结合。抗PDGF-CC抗体也能够抑制PDGFRα同二聚体和/或PDGFRα/β异二聚体的激活。例如，可通过确定PDGFRα同二聚体和/或PDGFRα/β异二聚体的激酶活性，来确定PDGFRα同二聚体和/或PDGFRα/β异二聚体的激活。
在一个实施方案中，优选抗PDGF-CC抗体能够抑制PDGF-CC的蛋白水解过程。
在本发明的一个实施方案中，所述抗-PDGF-CC抗体可以是美国专利申请no.62/357,536描述的任何抗体。因此，抗PDGF-CC可以包括美国申请62/357,536中描述的单克隆抗体(mAb)A3B6、11F5、19C7和12F5、嵌合抗体chA3B6或人源化抗体huA3B6的完整抗体、片段或基本同源的片段。片段可以包括美国申请62/357,536中所述的A3B6、chA3B6、huA3B6、1011F5、12F5和19C7的可变轻链和重链序列或CDR区的一个或一部分。在优选的实施方案中，抗PDGF-CC抗体可以是人源化抗体，特别是在美国申请62/357,536中描述的抗体huA3B6。
在一个实施方案中，抗PDGF-CC抗体可以结合PDGF-CC核心活性结构域内的一个或更多个表位，其在全长序列的残基230-345处提供，全长序列作为SEQ ID NO：1提供。
因此，在本发明的一个实施方案中，优选抗PDGF-CC抗体结合位于PDGF-CC区域中的表位，其包括切割位点。在人PDGF-C中，切割位点位于SEQ ID NO：1的氨基酸231至234。因此，优选抗PDGF-CC抗体能够结合包含选自SEQ ID NO：1的氨基酸231、232、233和234的至少部分氨基酸的表位。具体而言，抗PDGF-CC抗体能够结合包含SEQ ID NO：1氨基酸231、232、233和234中至少一个氨基酸的表位。在其它实施方案中，抗PDGF-CC抗体能够与紧邻切割位点的表位结合，从而抑制PDGF-C的蛋白水解过程。因此，在一个实施方案中，抗PDGF-CC抗体能够结合位于SEQ ID NO：1的氨基酸230至250内的表位。
在本发明的一个实施方案中，抗-PDGF-CC抗体结合WO2005/087812中所述的PDGF-C表位。例如，抗PDGF-CC抗体可以结合包含SEQ ID NO：1的氨基酸231至274的表位。
在本发明的一个实施方案中，抗-PDGF-CC抗体结合WO2007/124308中所述的PDGF-C表位。例如，抗PDGF-CC抗体可以结合位于、包含或由SEQ ID NO：1氨基酸228至238组成的表位。
在本发明的一个实施方案中，抗-PDGF-CC抗体结合WO2013/160359中所述的PDGF-C表位。例如，抗PDGF-CC抗体可以结合位于、包含或由SEQ ID NO：1氨基酸308至322组成的表位。
在本发明的一个实施方案中，抗PDGF-CC抗体可以结合位于、包含或由SEQ ID NO：1氨基酸242至254组成的表位。
在本发明的一个实施方案中，抗PDGF-CC抗体可以结合位于、包含或由SEQ ID NO：1氨基酸288至308组成的表位。
在本发明的一个实施方案中，抗PDGF-CC抗体可以结合位于、包含或由SEQ ID NO：1氨基酸325至345组成的表位。
在本发明的一个实施方案中，抗PDGF-CC抗体可以结合位于、包含或由SEQ ID NO：1氨基酸256至274组成的表位。
在本发明的一个实施方案中，抗PDGF-CC抗体可以结合位于、包含或由SEQ ID NO：1氨基酸256至264组成的表位。
在本发明的一个实施方案中，抗PDGF-CC抗体可以结合位于、包含或由SEQ ID NO：1氨基酸256至260组成的表位。
PDGF-CC
血小板衍生生长因子(PDGF)是对于正常组织生长和维持重要的生长因子。PDGF-C作为潜在二聚体PDGF-CC由细胞分泌。PDGF-CC通过PDGFR-α传导信号，特别是通过PDGFRα同二聚体和/或PDGFRα/β异二聚体。组织型纤溶酶原激活物(tPA)是具有高度限制性底物特异性的分泌型丝氨酸蛋白酶，并且tPA切割并激活潜在二聚体PDGF-CC。
在本发明的优选实施方案中，PDGF-CC是人PDGF-CC。人PDGF-C序列在此以SEQ IDNO：1提供，并且人PDGF-CC是两个SEQ ID NO：1多肽的二聚体。
然而，PDGF-CC也可以是人PDGF-C的功能同源物，例如多肽的二聚体，其各自与SEQID NO：1具有至少70％，如至少80％，例如至少85％，如至少90％，例如至少95％的序列同一性。
因此PDGF-CC也可以是其它哺乳动物的PDGF-CC。
PDGF-R的抑制剂
本公开涉及包含血小板衍生生长因子受体(PDGF-R)抑制剂的多组件药盒以及使用PDGF-R的抑制剂进行治疗的方法。发明人已经发现抑制PDGF受体导致ER阴性乳房肿瘤对内分泌疗法的作用敏感。
PDGF-R是血小板衍生生长因子(PDGF)家族成员的细胞表面酪氨酸激酶受体。存在PDGF-R的两种形式，各自由不同基因编码的α(UniProt登录号P16234；SEQ ID NO：8)和β(UniProt登录号P09619；SEQ ID NO：9)。根据结合哪个生长因子，PDGF-R可以是同源二聚化或异源二聚化。受体的胞外区由5个免疫球蛋白样结构域组成，而细胞内部分为酪氨酸激酶结构域。PDGF与PDGF-Rα或β的酪氨酸激酶结构域结合，并因此引起受体二聚化。不同的PDGF与不同的受体二聚体相互作用。二聚化是激酶激活的先决条件，所述激酶将受体本身及受体底物的一些关键残基磷酸化。受体的磷酸化残基通常靠近细胞外区域中信号传导分子的三个特异性结合位点。信号传导分子可以配有不同的酶活性，或者可以充当适配子分子，在一些但不是所有的情况下，其发现于与具有催化活性的亚基的复合物中。在与激活的受体相互作用后，催化活性上调。PDGF-R信号传导通路的主要下游介质似乎是Ras/促分裂原激活蛋白激酶(MAPK)、PI-3激酶和磷脂酶-γ(PLCγ)通路。另外，依赖于活性氧物质(ROS)的STAT3激活已被确定为管平滑肌细胞中PDGF-R信号传导通路的关键下游介质。
两种受体和四种PDGF中的每一个的表达均在独立的控制下进行，产生PDGF/PDGF-R系统的高度灵活性。不同的细胞类型在PDGF同种型和PDGF-R表达的比例上差别很大
发明人已经发现通过使用PDGF-R的抑制剂获得与通过使用抗PDGF-CC抗体获得的结果相似的结果，但是治疗后的机理不同。
根据本公开内容的PDGF-R的抑制剂或其变体可以是能够与PDGF-R相互作用并阻断其酪氨酸激酶活性的任何化合物。例如，PDGF-R的抑制剂可以结合并特异性占据PDGF-R的酪氨酸激酶位点。
在本公开中，术语“PDGF-R”指PDGF-Rα(PDGF-Rα)和PDGF-Rβ(PDGF--Rβ)及其变体，例如天然存在的PDGF-Rα和PDGF-Rβ同种型。
在一些实施方案中，PDGF-R的抑制剂能够抑制PDGF-Rα和PDGF-Rβ的酪氨酸激酶活性。
在一些实施方案中，PDGF-R的抑制剂能够抑制PDGF-Rα的酪氨酸激酶活性。
在一些实施方案中，PDGF-R的抑制剂能够抑制PDGF-Rβ的酪氨酸激酶活性。
在一些实施方案中，PDGF-R的抑制剂是酪氨酸激酶抑制剂。
已知有几种PDGF-R的抑制剂，例如伊马替尼、尼罗替尼、阿西替尼、舒尼替尼、达西替尼、索拉非尼、SU6668、帕唑帕尼、乐伐替尼、卡博替尼和尼达尼布。
优选，在本公开的一些实施方案中，PDGF-R的抑制剂是伊马替尼。
在本公开的其它实施方案中，PDGF-R的抑制剂是抗PDGF-R的抗体。一些抗体事实上能够与PDGF-R相互作用并阻断或中和它们的活性；特别是它们可以阻断或中和离开PDGF-R的信号传导。
抗PDGF-R抗体可以与任何PDGF-R结合。然而，通常优选使用的抗PDGF-R抗体能够结合待治疗的个体的PDGF-R。因此，在本发明的实施方案中，如果个体是人，则优选抗-PDGF-R抗体能够结合人PDGF-R，例如人PDGF-Rα和/或人PDGF-Rβ。
根据本发明的抗PDGF-R抗体可以是能够识别和结合PDGF-R的任何多肽或蛋白。术语“特异性结合”意指，对PDGF-R、PDGF-Rα和/或PDGF-Rβ比对非特异性抗原(例如BSA)，以至少高10倍的亲和力的结合。典型地，当以基于IC50值的表观亲和力测量时，抗体以对应于约10-7M或更小，例如约10-8M或更小，例如约10-9M或更小，例如约10-10M或更小KD的亲和力结合。根据本发明的天然存在的抗体可以由一个异四聚体组成，或者它们可以包含几个相同的异四聚体。因此，根据本发明的天然存在的抗体可以例如选自IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。这些不同种类的免疫球蛋白的亚基结构和三维构型是众所周知的。
在一个实施方案中，所述抗PDGF-R抗体是在“抗PDGF-CC抗体”章节中所定义的天然存在的抗体、或其功能同源物。
如上文“抗PDGF-CC抗体”章节所述，根据本发明的天然存在的抗体可能是特定物种的抗体。然而，抗体也可以是来自几种物种的抗体之间的杂交物，例如抗体可以是嵌合抗体，例如人源化抗体。
并不总是期望使用非人抗体用于人类疗法，因此根据本发明的抗PDGF-R抗体可以是人抗体或人源化抗体，例如天然存在的人抗体，如上文“抗PDGF-CC抗体”章节所述。
根据本发明的抗PDGF-R抗体可以是人免疫球蛋白或人源化免疫球蛋白，例如天然存在的人免疫球蛋白。
根据本发明的抗PDGF-R抗体可以是单克隆抗体，如天然存在的单克隆抗体，或者其可以是多克隆抗体，如天然存在的多克隆抗体，如上文“抗PDGF-CC抗体”章节所述。
抗PDGF-R抗体可以是含有抗原结合位点的任何蛋白或多肽，如单一多肽，蛋白或糖蛋白。优选地，抗原结合位点包含至少一个CDR，或更优选可变区。
如上所述，与本发明一起使用的抗PDGF-R抗体能够识别和结合PDGF-Rα和/或PDGF-Rβ。因此，通常抗-PDGF-R抗体特异性结合PDGF-Rα和/或PDGF-Rβ上的一个或更多个表位。在本发明的实施方案中，其中抗体是单克隆抗体时，抗体通常结合PDGF-Rα和/或PDGF-Rβ上的一个表位。
还可以使用结合PDGF-Rα和/或PDGF-Rβ上的一个或更多个表位的多克隆抗体。
在一些实施方案中，PDGF-R的抑制剂是靶向PDGF-Rα和PDGF-Rβ两者的抗体。抗体也可以是PDGF-Rα特异性的。或者，抗体可以对PDGF-Rβ具有特异性。
抗雌激素
本发明涉及包含抗雌激素的多组件药盒以及使用抗雌激素的治疗方法。所述抗雌激素可以是能够降低雌激素产生或利用的任何化合物。
通常抗雌激素可以分成两个不同的亚类，即能够降低或抑制雌激素产生的化合物和能够降低和/或抑制雌激素活性的化合物。后一组包括能够预防或降低由雌激素受体介导的信号传导的化合物。
因此，在本发明的一个实施方案中，抗雌激素是芳香酶抑制剂。芳香酶抑制剂通过阻断或降低哺乳动物中雌激素的合成从而降低雌激素水平起作用。芳香酶抑制剂的实例包括但不限于依西美坦、阿那曲唑、来曲唑、氨鲁米特、睾内酯、伏氯唑、福美坦和法倔唑。
在另一个实施方案中，抗雌激素是雌激素拮抗剂。雌激素拮抗剂的实例包括但不限于他莫昔芬、雷洛昔芬、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、雷洛昔芬盐酸盐(keoxifene)、阿非昔芬、LY117018、氟维司群、阿佐昔芬、lasofozone和托瑞米芬。
雌激素拮抗剂是这样一种化合物，其既是拮抗剂，又是雌激素的部分激动剂。这种抗雌激素的实例是他莫昔芬。
雌激素拮抗剂也可能是雌激素的完全拮抗剂。这种抗雌激素的实例是氟维司群。
与本发明一起使用的优选抗雌激素是他莫昔芬。他莫昔芬是与雌激素受体(ER)结合的三苯基亚烷基衍生物。他莫昔芬的治疗机制复杂，但他莫昔芬的主要作用是通过雌激素受体发挥的。除了他莫昔芬之外，它的活性代谢物N-去甲基他莫昔芬和内昔芬(endoxifen)(4-羟基-N-去甲基他莫昔芬)可以用作本发明的抗雌激素。
与本发明一起使用的抗雌激素因此可以是三苯基亚烷基衍生物，例如他莫昔芬或结构类似的化合物，包括克罗米芬，克罗米芬的4-羟基化、N-脱烷基化和4-羟基-N-脱烷基化的类似物，他莫昔芬，吡咯烷基他莫昔芬，托瑞米芬，固定环他莫昔芬，非培米芬(fispemifene)以及具有基本相似结构的所有其它分子。也可以使用前述的顺式和反式异构体。
抗雌激素也可能是选择性雌激素受体调节剂(SERM)。本发明的SERM包括但不限于三苯基亚烷基，其包括：2-[4-(1,2-二苯基丁-1-烯基)苯氧基]-N,N-二甲基-乙胺(他莫昔芬)以及美国专利4,536,516中所述的其它化合物，并入此处作为参考；4'-羟基-2-[4-(1,2-二苯基丁-1-烯基)苯氧基]-N,N-二甲基-乙胺(4'-羟基他莫昔芬)以及美国专利4,623,660中描述的其它化合物，并入此处作为参考，以及脱烷基化变体4'-羟基-2-[4-(1,2-二苯基丁-1-烯基)苯氧基]-N-单甲基-乙胺(N-去甲基-4'-羟基他莫昔芬，也被称为内昔芬；固定环他莫昔芬及其4'-羟基、N-去甲基、N-去乙基、4'-羟基-N-去甲基和4'-羟基-N-去乙基形式；1-[4'-(二甲基氨基乙氧基)苯基]-1-(3'-羟基苯基)-2-苯基丁-1-烯(屈洛昔芬)及美国专利5,047,431中描述的其它化合物，及其4'-羟基、N-去乙基和4'-羟基-N-去乙基形式；2-[对-[4-氯-1,2-二苯基-1-丁烯基]苯氧基]-N,N-二甲基乙胺(托瑞米芬)以及美国专利4,696,949、5,491,173和4,996,225中描述的其它化合物，其各自并入此处作为参考，以及4'-羟基托瑞米芬、N-去甲基托瑞米芬以及N-去甲基-4'-羟基托瑞米芬；1-(2-(4-(1-(4-碘-苯基)-2-苯基-丁-1-烯基)-苯氧基)-乙基)-吡咯烷酮(艾多昔芬)和美国专利4,839,155中描述的其它化合物，并入此处作为参考；以及4-羟基吡咯烷基他莫昔芬；2-(2-{4-[(1Z)-4-氯-1,2-二苯基丁-1-烯-1-基]苯氧基乙氧基)乙-1-醇(非培米芬)以及美国专利7,504,530中描述的其它化合物，其各自并入此处作为参考，以及4'-羟基非培米芬；克罗米芬及其两种异构体；以及美国专利4,696,949和5,491,173和6,576,645中描述的化合物，其各自并入此处作为参考，以及(E)4'-羟基克罗米芬、(E)N-去乙基-克罗米芬和(E)N-去乙基-4'-羟基克罗米芬。
与本发明一起使用的SERMS还包括但不限于苯并噻吩衍生物，例如：[6-羟基-2-(4-羟基苯基)-苯并噻吩-3-基]-[4-[2-(1-哌啶基)乙氧基)苯基]-甲酮(雷洛昔芬)以及在美国专利4,418,068和5,393,763中描述的其它化合物，两者都并入此处作为参考；LY353381；和LY335563及WO 98/45286、WO 98/45287和WO 98/45288中描述的其它化合物；苯并吡喃衍生物，比如：(+)-7-新戊酰氧基-3-(4'-新戊酰氧基苯基)-4-甲基-2-(4“-(2”哌啶基乙氧基)苯基)-2H-苯并吡喃(EM 800/SCH 57050)以及WO 96/26201中描述的其它化合物；(2S)-3-(4-羟基苯基)-4-甲基-2-[4-[2-(1-哌啶基乙氧基)苯基]-2H-色满基(chromen)-7-醇(EM 652)；萘衍生物如：顺式-6-苯基-544-(2-吡咯烷-1-基-乙氧基)-苯基]-5,6,7,8-四氢萘-2-醇(lasofoxifene/CP336,156)以及在美国专利5,552,412中描述的其它化合物；3,4-二氢-2-(对甲氧基苯基)-1-萘基-对-[2-(1-吡咯烷基乙氧基)]苯基酮(曲沃昔芬/LY133314)以及在美国专利4,230,862中描述的其它化合物，并入此处作为参考；以及1-(4-取代的烷氧基)苄基)萘化合物，例如美国专利6,509,356中所述的那些化合物，并入此处作为参考；色满，例如3,4-反式-2,2-二甲基-3-苯基-4-[4-(2-(2-(吡咯烷-1-基-乙氧基)苯基]-7-甲氧基色满(左美洛昔芬)以及WO 97/25034、WO 97/25035、WO 97/25037和WO97/25038中所述的其它化合物；以及1-(2-((4-(-甲氧基-2,2二甲基-3-苯基-色满-4-基)-苯氧基)-乙基)-吡咯烷(sentchroman)以及美国专利3,822,287中描述的其它化合物，并入此处作为参考。
本发明的其它SERM包括但不限于在美国专利6,387,920、6,743,815、6,750,213、6,869,969、6,927,224、7,045,540、7,138,426、7,151,196和7,157,604中描述的化合物，其各自并入此处作为参考。
与本发明一起使用的其它非限制性抗雌激素包括：6α-氯-16α-甲基孕甾-4-烯-3,20-二酮(氯美沙酮)；6-氯-17-羟基孕甾-1,4,6-三烯-3,20-二酮(代马孕酮)；1-[2-[4-[1-(4-甲氧基苯基)-2-硝基-2-苯基乙烯基]苯氧基]乙基]-吡咯烷(硝米芬/CN-55,945-27)；和1-[2-[对-(3,4-二氢-6-甲氧基-2-苯基-1-萘基)苯氧基]乙基]吡咯烷(萘福昔芬)。
与本发明一起使用的其它非限制性抗雌激素包括吲哚，如J.Med.Chem.33：2635-2640(1990)、J.Med.Chem.30：131-136(1987)、CA02889770 2015-04-24、WO2014/070523、PCT/US2013/066141、WO 93/10741、WO 95/17383、WO 93/23374和美国专利6,503,938和6,069,153中描述的那些，两者均并入此处作为参考。
与本发明一起使用的其它非限制性抗雌激素包括2-[3-(1-氰基-1-甲基-乙基)-5-(1H-1,2,4-三唑-1-基甲基)苯基]-2-甲基-丙腈(阿那曲唑)和EP0296749中描述的其它化合物；6-甲基雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮(依西美坦)以及在美国专利4,808,616中描述的其它化合物，并入此处作为参考；4-[(4-氰基苯基)-(1,2,4-三唑-1-基)甲基]苯甲腈(Thenzonitrile)(来曲唑)以及在美国专利5,473,078中描述的其它化合物，并入此处作为参考；1-(4'-二甲基氨基乙氧基)苯基]-1-(3'-羟基苯基)-2-苯基丁-1-烯(屈洛昔芬)以及在美国专利5,047,431中所述的其它化合物，并入此处作为参考；2a，3a-环硫-5a-雄甾烷-1713-01(环硫雄醇)；2a，3a-环硫-5a-雄甾烷-1713-基-1-甲氧基环戊氧基(美雄烷)；4-[(2Z，4Z)-4-(4-羟基苯基己-2,4-二烯-3-基]苯酚(环丁二烯)和在美国专利2,464,203和2,465,505中描述的其它化合物，均并入此处作为参考；在未列出的药物(Unlisted Drugs)28(10)：169(0)(1976)中描述的CI-628；在未列出的药物(Unlisted Drugs)，26(7)：106(1)(1974)中描述的CI-628；13-乙基-17a-乙炔基-1713-hydroxygona-4,9,1,-三烯-3-酮(R2323)；Geynet等人，Gynecol.Invest.3(1)：2-29(1972)中描述的二苯酚hydrochrysene以及红细胞MEA；Merck索引第10版#2149中所述的1-[1-氯-2,2-双(4-甲氧基苯基)乙烯基]-4-甲氧基-苯(氯三噻吩)；Merck索引第10版#3668中所述的144-(2-二乙氨基乙氧基)苯基]-1-苯基-2-(对甲氧基苯基)乙醇(乙氧基三苯酚)以及2-对-氯苯基-14p-(2-二乙基氨基乙氧基)苯基]-1-对-甲苯基乙醇(三苯乙醇)和美国专利2,914,562中描述的其它化合物，并入此处作为参考。本发明的其它抗雌激素包括但不限于：(2e)-3-(4-((1e)-1,2-二苯基丁-1-烯基)苯基)丙烯酸(GW5638)、GW7604和Wilson等人，Endocrinology，138(9)：3901-3911(1997)和WO 95/10513中描述的其它化合物；144-(2-二乙基氨基乙氧基)苯基]-2-(4-甲氧基苯基)-1-苯基-乙醇(MER-25)、N,N-二乙基-244-(5-甲氧基-2-苯基-3H-茚-1-基)苯氧基乙胺盐酸盐(U-11,555A)、1-[2-[4-(6-甲氧基-2-苯基-3,4-二氢萘-1-基)苯氧基]乙基]吡咯烷盐酸盐(U-11，100A)、ICI-46,669、2-[4-[(Z)-1,2-二苯基丁-1-烯基]苯氧基]-N,N-二甲基-乙胺；2-CA0289770 2015-04-24WO2014/070523PCT/US2013/066141羟基丙烷-1,2,3-三羧酸(ICI-46,474)以及Terenius等人，Gynec.Pharmac.Invest.，3：96-107(1972)中描述的其它化合物；2-羟基-6-萘丙酸(亚硒酸)；[4-[(4-乙酰氧基苯基)-亚环己基-甲基]乙酸苯酯(环烯基/ICI-48213)；[6-羟基-2-(4-羟苯基)苯并噻吩-3-基]-[4-[2-(1-哌啶基乙氧基]苯基二甲酮(雷洛昔芬盐酸盐(keoxifene))、4-[(Z)-1-[4-(2-二甲基氨基乙氧基)苯基]-2-(4-丙烷-2-基苯基)丁-1-烯基]苯酚(DP-TAT-59/米泼昔芬)；(1RS，2RS)-4,4'-二乙酰氧基-5,5'-二氟-(1-乙基-2-亚甲基)二-间-亚苯基二乙酸酯(乙酰氟)；6-羟基-2-(对羟基苯基)-苯并(b)噻吩-3-基[2-(1-吡咯烷基)-乙氧基)苯基]酮(LY-117018)和[6-羟基-2-(4-羟基苯基)苯并[b]噻吩-3-基]-[4-(2-(1-哌啶基)-乙氧基)苯基]甲酮(LY-156758)。本发明的其它抗雌激素包括但不限于：非甾体雌激素受体配体，例如美国专利5,681,835、5,877,219、6,207,716、6,340,774和6,599,921中描述的那些，其均并入此处作为参考；类固醇衍生物，例如美国专利4,659,516中所述的那些，并入此处作为参考；7a-11-氨基烷基-雌三烯，如WO 98/07740中所述的那些；11-f3-卤素-7a-取代的雌三烯，如WO99/33855中所述的那些；17α-烷基-173-氧-雌三烯，例如美国专利申请10/305,418中所述的那些，并入此处作为参考；2-苯基-144-(2-氨基乙氧基)-苄基-吲哚，例如美国专利7.132,417中所述的那些，并入此处作为参考；4-氟烷基-2h-苯并吡喃，例如美国专利6,844,336中所述的那些，并入此处作为参考；(4-(2-(2-氮杂-双环[2.2.1]庚-2-基)-乙氧基)-苯基)-(6-羟基-2-(4-羟基-苯基)-苯并[b]壬-3-基)-甲酮以及WO 95/10513和美国专利4,133,814中描述的其它苯并噻吩，并入此处作为参考；2-苯基-1-[4-(2-氨基乙氧基)-苄基]-吲哚，例如美国专利5,998,402中所述的那些，在此引入作为参考；3-[4-(2-苯基-吲哚-1-基甲基)苯基]-丙烯酰胺以及在美国专利5,985,910中描述的其它化合物，并入此处作为参考；2-苯基-1-[4-(氨基-1-基-烷-1-基)-苄基]-1H-吲哚-5-醇和美国专利5,780,497和5,880,137中描述的其它化合物，两者都并入此处作为参考；类固醇，如美国专利6,455,517、6,548,491、6,747,018和7,041,839中所述的那些，各自并入此处作为参考；二-(3'-羟基苯基)-烷烃化合物CA 02889770 2015-04-24WO 2014/070523PCT/US2013/066141，如美国专利4,094,994中所述的那些，并入此处作为参考；苯酚衍生物，例如美国专利4,751,240中所述的那些，并入此处作为参考；2,3-二芳基-2H-1-苯并吡喃类似物，例如Saeed等人，J.Med.Chem.,33:3210-3216(1990)和Sharma等人，J.Med.Chem.33:3216-3229(1990)中描述的那些；以及苯并呋喃和三芳基呋喃类似物，例如Durani等人，J.Med.Chem.32：1700-1707(1989)中描述的那些。
与本发明一起使用的抗雌激素也可以是任何上述抗雌激素的药学上可接受的盐、酯或前体药物。药学上可接受的盐以标准方式制备。如果母体化合物是碱性的，则用过量有机或无机酸在合适的溶剂中处理。如果母体化合物是酸性的，用无机或有机碱在合适的溶剂中处理。
本发明的抗雌激素可以以其碱金属或碱土金属盐的形式以有效量，与药学上可接受的载体或稀释剂同步、同时或一起施用。
用于本发明药物组合物的药学上可接受的酸加成盐的实例包括，例如衍生自无机酸(例如盐酸、氢溴酸、磷酸、偏磷酸、硝酸和硫酸)和有机酸(例如酒石酸、乙酸、柠檬酸、苹果酸、乳酸、富马酸、苯甲酸、乙醇酸、葡糖酸、琥珀酸、对甲苯磺酸和芳基磺酸)的那些。
ER阴性乳癌
抗PDGF-CC抗体、本发明的多组件药盒和方法可用于治疗ER阴性乳癌。
ER阴性乳癌可以是以缺乏雌激素受体(ER)表达为特征的任何乳癌。如本文所用，当所述乳癌<10％的肿瘤细胞以免疫组织化学可检测水平表达雌激素受体时，乳腺被认为是ER阴性乳癌。在本发明的一些实施方案中，ER阴性乳癌是这样的乳癌，其中所述乳癌<1％的肿瘤细胞以免疫组织化学可检测的水平表达雌激素受体。免疫组织化学优选地是这样的测试，其中涉及借助识别ER的抗体对来自乳癌的样本进行染色，然后在所述样本的细胞中检测ER表达，例如通过显微镜。
在本发明的一个实施方案中，如Hammond等人2010所述的美国临床肿瘤学会(American Society of Clinical Oncology)推荐的，ER阴性乳癌为这样的乳癌，其中<1％的肿瘤核对ER表达呈阳性。
根据本发明，可以通过任何有用的手段确定ER表达，优选通过任何有用的免疫组织化学方法。优选地，可以如Hammond等人2010所述的确定ER表达。
在本发明的一个实施方案中，ER阴性乳癌也是孕酮受体阴性(PR阴性)乳癌。因此，待治疗的乳癌可能特别是ER阴性和PR阴性乳癌。所述PR阴性乳癌可以是这样的乳癌，在其中所述乳癌<10％的肿瘤细胞以免疫组织化学可检测的水平表达孕酮受体(PR)。在本发明的一些实施方案中，PR阴性乳癌是这样的乳癌，其中所述乳癌<2％的肿瘤细胞以免疫组织化学可检测的水平表达PR。在本发明的一些实施方案中，PR阴性乳癌是这样的乳癌，其中所述乳癌<1％的肿瘤细胞以免疫组织化学可检测的水平表达PR。可以通过任何有用的手段确定PR表达，优选通过任何有用的免疫组织化学方法。优选地，可以如Hammond等人2010所述进行PR表达的确定。
在一些实施方案中，ER阴性乳癌可以表达人表皮生长因子受体2(HER-2)。
在本发明的另一个实施方案中，ER阴性乳癌是三阴性乳癌，即所述癌症是ER阴性、PR阴性和人表皮生长因子受体(HER)-2阴性。上面解释了术语ER阴性和PR阴性。HER-2阴性乳癌可以是表达不可检测的HER-2的乳癌。可以通过任何有用的方法进行HER-2表达的测试，例如通过免疫组织化学方法或通过FISH。优选地，当根据Wolff等人2013中的推荐确定时，HER-2阴性乳癌是HER-2阴性。
在本发明的一个实施方案中，ER阴性乳癌是基底型乳癌。在一个实施方案中，所述基底型乳癌可以是三阴性乳癌。
基底型乳癌也可以是ER阴性乳癌，其表达一种或更多种高分子量/基底细胞角蛋白，例如选自CK5/6、CK14和CK17。
基底型乳癌也可以是ER阴性和HER-2阴性乳癌，其表达CK5/&和/或表皮生长因子受体。
基底型乳癌也可以是表达CK5/6和/或EGFR的三阴性乳癌。
此外，基底型乳癌通常不表达FoxA1。基底型乳癌与高分级、预后不良和患者年纪轻相关。
特别是，ER阴性乳癌可能是这样的乳癌，它在首次诊断时是ER阴性乳癌。因此，ER阴性乳癌特征在于发病时是ER阴性，而不是治疗后丧失ER表达的乳癌。优选ER阴性乳癌是这样的乳癌，其中原发性肿瘤为ER阴性。
药物制剂
尽管本发明的抗PDGF-CC抗体和抗雌激素有可能作为原料化合物施用，但优选以药物制剂的形式呈现它们。药物制剂可以通过常规技术制备，例如Remington：Science andPractice of Pharmacy 2005，Lippincott，Williams&Wilkins所述。
与本发明一起使用的化合物可以配制用于肠胃外施用，并且可以以任何合适的形式呈现，例如在安瓿、预填充注射器、小体积输注或多剂量容器中的单位剂量形式存在，任选地添加有防腐剂。具体而言，可以预见，抗-PDGF-CC抗体被配制用于胃肠外施用，然而抗雌激素也可以配制用于肠胃外施用。
对于肠胃外施用，制剂可以采取油性或含水载体中的悬液、溶液或乳剂形式，例如在聚乙二醇水溶液中的溶液。或者，活性成分可以是通过无菌固体的无菌分离或通过溶液的冷冻干燥获得的粉末形式，在使用之前用合适的载体(例如无菌无热原水)配制。例如，制剂可以在单位剂量或多剂量密封的容器(例如安瓿、小瓶、预填充注射器、输注袋)中存在，或者可以以冷冻干燥(冻干)条件存储，在即用前仅需要添加无菌液体赋形剂例如水，用于注射。临时注射溶液和悬液可以由无菌粉末、颗粒和片剂得以制备。
油性或非水性载体、稀释剂、溶剂或载体的实例包括丙二醇、聚乙二醇、植物油和可注射的有机酯，并且可以包含配制剂如防腐剂、润湿剂、乳化剂或悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。
用于注射的制剂通常含有溶液中约0.5至约25重量％的活性成分，例如抗PDGF-CC抗体。例如，剂量可以在每kg体重1至100mg抗-PDGF-CC抗体的范围，例如在每kg体重1至20mg抗-PDGF-CC抗体的范围，例如在每kg体重5至15mg抗-PDGF-CC抗体的范围。
本发明的化合物也可以配制成多种口服施用制剂。对于抗雌激素，这可能尤其如此。固体形式的制剂可包括粉剂、片剂、滴剂、胶囊、扁囊剂、锭剂和可分散颗粒。适用于口服施用的其它形式可以包括液体形式制剂，包括乳剂、糖浆剂、酏剂、水溶液、水性悬液、牙膏、凝胶脱毛剂、咀嚼胶或固体形式制剂，其预期在使用前即刻转化成液体形式的制剂，如溶液、悬液和乳剂。
在粉剂中，载体是精细分散的固体，其与精细分散的活性成分混合。在片剂中，活性成分与具有必要粘合能力的载体以合适的比例混合并压制成所需的形状和大小。合适的载体是碳酸镁、硬脂酸镁、滑石、糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡、可可脂等。
根据本发明的滴剂可以包含无菌或非无菌水或油溶液或悬液，并且可以通过将活性成分溶解在合适的水溶液中进行制备，任选地包含杀菌剂和/或杀真菌剂和/或任何其它合适的防腐剂，以及任选包含表面活性剂。用于制备油性溶液的合适溶剂包括甘油、稀释的醇和丙二醇。
乳剂可以在丙二醇水溶液中的溶液中制备，或者可以含有乳化剂如卵磷脂、脱水山梨糖醇单油酸酯或阿拉伯胶。水溶液可通过将活性成分溶于水中并加入合适的着色剂、调味剂、稳定剂和增稠剂来制备。水性悬液可以通过将精细分散的活性成分分散在具有粘性材料(例如天然或合成树胶、树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和其它公知的悬浮剂)的水中来制备。
可以使用，制造商推荐的，根据功效需要使用的任何剂量的抗雌激素。本领域已知抗雌激素的适宜剂量。因此，根据本发明，用于治疗管腔型乳癌的常规剂量可用于治疗基底型乳癌。例如，抗雌激素可以经制备而用于0.01至10mg/kg体重/天(优选0.05至1.0mg/kg)剂量范围的施用，其中当口服施用时，平均体重的人优选每天20至40mg，或者当肠胃外施用时，每天0.003至3.0mg/kg体重(优选0.015至0.3mg/ml)之间的剂量范围，每天1.5mg，特别是每天3.0mg，对于平均体重的人而言优选以两个等分的剂量。
序列表
SEQ ID NO:1 来自智人的PDGF-CC的氨基酸序列
SEQ ID NO:2 MMTV-PyMT引物
SEQ ID NO:3 MMTV-PyMT引物
SEQ ID NO:4 PDGF-C野生型引物
SEQ ID NO:5 PDGF-C野生型引物
SEQ ID NO:6 PDGF-C突变体引物
SEQ ID NO:7 PDGF-C突变体引物
SEQ ID NO:8 PDGF-Rα
SEQ ID NO:9 PDGF-Rβ
SEQ ID NO：1血小板衍生生长因子C前体智人(Homo sapiens)
Figure BDA0001655733530000311
项目
可以进一步通过以下项目限定本发明：
1.一种多组件药盒，其包含抗PDGF-CC抗体和抗雌激素，其用于在有需求的个体中治疗ER阴性乳癌。
2.一种多组件药盒，其包含PDGF-R的抑制剂和抗雌激素，其用于在有需求的个体中治疗ER阴性乳癌。
3.根据项目1所述的多组件药盒，其中所述的抗PDGF-CC抗体和所述抗雌激素制备用于顺序施用。
4.根据项目1和3中任一项所述的多组件药盒，其用于治疗ER阴性乳癌，其中所述治疗包括步骤：
a.向有需求的个体施用抗PDGF-CC抗体；
b.随后施用抗雌激素。
5.根据项目2所述的多组件药盒，其中所述PDGF-R的抑制剂和所述抗雌激素制备用于顺序施用。
6.根据项目2和5中任一项所述的多组件药盒，其用于治疗ER阴性乳癌，其中所述治疗包括步骤：
a.向有需求的个体施用PDGF-R的抑制剂；
b.随后施用抗雌激素。
7.根据前述项目中任一项所述的多组件药盒，其中所述个体患有ER阴性乳癌，并且其中所述个体中的所述乳癌已通过手术治疗，其中所述治疗降低复发的风险。
8.一种治疗有需求个体中ER阴性乳癌的方法，所述方法包括向所述个体同时或以任何顺序依次施用抗PDGF-CC抗体和抗雌激素，从而治疗ER阴性乳癌。
9.一种治疗有需求的个体中ER阴性乳癌的方法，所述方法包括向所述个体同时或以任何顺序依次施用PDGF-R的抑制剂和抗雌激素，从而治疗ER阴性乳癌。
10.一种使ER阴性乳癌对抗雌激素治疗敏感的方法，所述方法包括向患有ER阴性乳腺的个体施用抗PDGF-CC，从而使所述ER阴性乳癌对抗雌激素治疗敏感。
11.一种使ER阴性乳癌对抗雌激素治疗敏感的方法，所述方法包括向患有ER阴性乳腺的个体施用PDGF-R的抑制剂，从而使所述ER阴性乳癌对抗雌激素治疗敏感。
12.一种将ER阴性乳癌转化为ER阳性乳癌的方法，所述方法包括向患有ER阴性乳腺的个体施用抗PDGF-CC，从而将所述ER阴性乳癌转换为ER阳性乳癌。
13.根据项目12所述的方法，其中所述ER阳性乳癌是管腔型乳癌。
14.一种在有需求的个体中治疗ER阴性乳癌的方法，所述方法包括：
a.进行根据项目8至11中任一项所述的方法；
b.向所述个体施用抗雌激素，
从而治疗所述ER阴性乳癌。
15.一种在患有ER阴性乳癌的个体中降低ER阴性乳癌复发风险的方法，其中所述个体中的所述乳癌已通过手术治疗，所述方法包括：
a.通过向患有ER阴性乳癌的个体施用抗PDGF-CC抗体使ER阴性乳癌对抗雌激素治疗敏感；
b.向所述个体施用抗雌激素，
从而降低所述ER阴性乳癌复发的风险。
16.一种在患有ER阴性乳癌个体中降低ER阴性乳癌复发风险的方法，其中所述个体中的所述乳癌已通过手术治疗，所述方法包括：
a.通过向患有ER阴性乳癌的个体施用PDGF-R的抑制剂使ER阴性乳癌对抗雌激素治疗敏感；
b.向所述个体施用抗雌激素，
从而降低所述ER阴性乳癌复发的风险。
17.根据项目4、7和8 14和15中任一项所述的多组件药盒或方法，其中在所述抗雌激素的首次施用之前，向所述个体首次施用抗PDGF-CC抗体。
18.根据项目6和7、9、14和16中任一项所述的多组件药盒或方法，其中在所述抗雌激素的首次施用之前，向所述个体首次施用PDGF-R的抑制剂。
19.根据项目4、7和8 14、15和17中任一项所述的多组件药盒或方法，其中所述抗雌激素的最后一次施用晚于所述抗PDGF-CC抗体的最后一次施用。
20.根据项目6和7、9、14、16和18中任一项所述的多组件药盒或方法，其中所述抗雌激素的最后一次施用晚于所述PDGF-R的抑制剂的最后一次施用。
21.根据项目4、7、8、14、15、17和19中任一项所述的多组件药盒或方法，其中向患有ER阴性乳癌的个体施用至少两次抗PDGF-CC抗体。
22.根据项目4、7、8、14、15、17、19和21中任一项所述的多组件药盒或方法，其中向患有ER阴性乳癌的个体施用至少两次抗PDGF-CC抗体，其中一次或更多次施用在手术治疗之前，并且一次或更多次额外的施用在手术治疗后施用。
23.根据项目6、7、9、14、16、18和20中任一项所述的多组件药盒或方法，其中向患有ER阴性乳癌的个体施用至少两次PDGF-R的抑制剂。
24.根据项目6、7、9、14、16、18、20和23中任一项所述的多组件药盒或方法，其中向患有ER阴性乳癌的个体施用至少两次PDGF-R的抑制剂，其中一次或更多次施用在手术治疗之前，并且一次或更多次额外的施用在手术治疗后施用。
25.根据项目4、7、8、14、15、17、19、21和22中任一项所述的多组件药盒或方法，其中所述抗PDGF-CC抗体施用1至5次的范围，而抗雌激素连续施用1至10年的范围，例如在4至6年的范围，例如5年。
26.根据项目6、7、9、14、16、18、20、23和24中任一项所述的多组件药盒或方法，其中所述PDGF-R的抑制剂施用1至5次的范围，而抗雌激素连续施用1至10年的范围，例如在4至6年的范围，例如5年。
27.根据项目1、3、4、7、8、10、12至15、17、19、21、22和25中任一项所述的多组件药盒或方法，其中所述抗PDGF-CC抗体是特异性结合PDGF-CC的单克隆抗体。
28.根据项目1、3、4、7、8、10、12至15、17、19、21、22、25和27中任一项所述的多组件药盒或方法，其中所述抗PDGF-CC抗体是特异性结合PDGF-CC的人类单克隆抗体。
29.根据项目1、3、4、7、8、10、12至15、17、19、21、22、25、27和28中任一项所述的多组件药盒或方法，其中所述抗PDGF-CC抗体是人源化抗体。
30.根据项目1、3、4、7、8、10、12至15、17、19、21、22、25、27至29中任一项所述的多组件药盒或方法，其中所述抗PDGF-CC抗体是中和性PDGF-CC抗体。
31.根据项目1、3、4、7、8、10、12至15、17、19、21、22、25、27至30中任一项所述的多组件药盒或方法，其中所述抗PDGF-CC抗体能够在结合PDGF-CC之后抑制PDGF-CC的蛋白水解切割。
32.根据项目1、3、4、7、8、10、12至15、17、19、21、22、25、27至31中任一项所述的多组件药盒或方法，其中所述抗PDGF-CC抗体能够结合人PDGF-CC。
33.根据项目1、3、4、7、8、10、12至15、17、19、21、22、25、27至32中任一项所述的多组件药盒或方法，其中所述抗PDGF-CC抗体能够抑制PDGF-CC活性。
34.根据项目1、3、4、7、8、10、12至15、17、19、21、22、25、27至33中任一项所述的多组件药盒或方法，其中所述抗PDGF-CC抗体能够抑制PDGF-CC与PDGFRα同二聚体和/或与PDGFRα/β异二聚体的结合。
35.根据项目1、3、4、7、8、10、12至15、17、19、21、22、25、27至34中任一项所述的多组件药盒或方法，其中所述抗PDGF-CC抗体能够抑制PDGFRα同二聚体和/或PDGFRα/β异二聚体的激活。
36.根据项目1、3、4、7、8、10、12至15、17、19、21、22、25、27至35中任一项所述的多组件药盒或方法，其中所述抗PDGF-CC抗体能够抑制PDGF-CC的蛋白酶解加工。
37.根据项目1、3、4、7、8、10、12至15、17、19、21、22、25、27至36中任一项所述的多组件药盒或方法，其中所述抗PDGF-CC抗体能够结合位于、包含或由以下组成的表位：
a.SEQ ID NO：1的氨基酸230至250；
b.SEQ ID NO：1的氨基酸228至238；
c.SEQ ID NO：1的氨基酸308至322；
d.SEQ ID NO：1的氨基酸242至254；
e.SEQ ID NO：1的氨基酸288至308；
f.SEQ ID NO：1的氨基酸325至345；
g.SEQ ID NO：1的氨基酸256至274；
h.SEQ ID NO：1的氨基酸256至264；和/或
i.SEQ ID NO：1的氨基酸256至260。
38.根据项目1、3、4、7、8、10、12至15、17、19、21、22、25、27至37中任一项所述的多组件药盒或方法，其中所述抗PDGF-CC抗体能够结合位于SEQ ID NO：1氨基酸230至250内的表位。
39.根据项目2、5至7、9、11、14、16、18、20、23、24、26中任一项所述的多组件药盒或方法，其中所述PDGF-R的抑制剂是酪氨酸激酶抑制剂。
40.根据项目39所述的多组件药盒或方法，其中所述PDGF-R的抑制剂能够阻断PDGF-R的酪氨酸激酶活性。
41.根据项目39和40中任一项所述的多组件药盒或方法，其中所述PDGF-R的抑制剂是伊马替尼。
42.根据项目2、5至7、9、11、14、16、18、20、23、24、26中任一项所述的多组件药盒或方法，其中所述PDGF-R的抑制剂是能够结合PDGF-Rα和/或PDGF-Rβ的抗体。
43.根据项目2、5至7、9、11、14、16、18、20、23、24、26、42中任一项所述的多组件药盒或方法，其中所述PDGF-R的抑制剂是能够抑制PDGF-Rα和/或PDGF-Rβ的抗体。
44.根据项目2、5至7、9、11、14、16、18、20、23、24、26、42和43中任一项所述的多组件药盒或方法，其中所述PDGF-R的抑制剂是中和性PDGF-Rα和/或PDGF-Rβ抗体。
45.根据前述项目中任一项所述的多组件药盒或方法，其中所述抗雌激素是雌激素拮抗剂。
46.根据项目45中任一项所述的多组件药盒或方法，其中所述雌激素拮抗剂选自他莫昔芬、雷洛昔芬、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、雷洛昔芬盐酸盐(keoxifene)、阿非昔芬、LY117018、氟维司群和托瑞米芬。
47.根据项目1至46中任一项所述的多组件药盒或方法，其中所述抗雌激素是抑制雌激素产生的化合物。
48.根据项目1至44中任一项所述的多组件药盒或方法，其中所述抗雌激素是芳香酶抑制剂。
49.根据项目48所述的多组件药盒或方法，其中所述抗雌激素选自依西美坦、福美坦、氨鲁米特、伏氯唑、法倔唑、阿那曲唑和来曲唑。
50.根据前述项目中任一项所述的多组件药盒或方法，其中所述个体是人。
51.根据前述项目中任一项所述的多组件药盒或方法，其中所述个体是人，其中所述原发性乳癌肿瘤已通过手术切除。
52.根据前述项目中任一项所述的多组件药盒或方法，其中所述ER阴性乳癌是三阴性乳癌。
53.根据前述项目中任一项所述的多组件药盒或方法，其中所述ER阴性乳癌是基底型乳癌。
54.根据前述项目中任一项所述的多组件药盒或方法，其中所述ER阴性乳癌是其中原发性肿瘤为ER阴性的乳癌。
实施例
进一步通过以下实施例说明本发明，其不应被解释为限制本发明。
实施例1.抗PDGF-CC抗体使肿瘤对雌激素疗法敏感
患者群和乳腺肿瘤亚型的定义
对来自于890位原发性浸润性乳癌患者的组织进行了分析，所述患者在1965年至2004年(中值1999年7月)在USZ外科病理学研究所(Institute of Surgical Pathology)进行诊断。所有患者根据机构审查委员会(Institutional Review Board)批准的方案自愿参加，样本捐献者给出书面知情同意书。瑞士苏黎世大学医院的外科麻醉病理学伦理委员会SPUK批准了这项研究，参考号为StV 12-2005。对于所有这些患者，可以获得市区癌症登记处的追踪数据：未考虑没有追踪信息的患者(Theurillat等，Int J Cancer，2007)。此外，分析了69个正常组织和152个原位病变(DCIS，LN)。根据由IHC检测到的ER、HER2和CK5/6，确定分子癌症亚型。管腔型：ER阳性病例，即HER2阴性；HER2型：Her2阳性病例；基底型：CK5/6阳性、ER阴性且HER2阴性。将所有标记物均为阴性的病例命名为NIL型。
组织微阵列构建
正常和恶性人组织和肿瘤细胞系的代表性品种的福尔马林固定石蜡包埋材料，汇集并装配在单个块上，如所述(Kristiansen等，Br J Cancer2008)。
人肿瘤组织阵列上的免疫组织化学
为了评估各种肿瘤类型中的PDGF-CC表达，根据制造商的说明，我们在市售的肿瘤组织阵列(Chemicon)上使用针对PDGF-CC的兔多克隆抗体615。针对乳肿瘤群，并且为了确认从多克隆抗体615获得的结果，在自动Ventana平台(预处理方案CC1m，UView HRP检测系统)上使用mab抗-PDGF-CC抗体A3B6(2μg/ml)。A3B6抗体的表位是SEQ ID NO：1氨基酸256至274序列内的SEQ ID NO：1氨基酸256至260。特定的免疫反应性被过量的活性PDGF-CC完全阻断。平行处理基底细胞标记物细胞角蛋白CK5/6(克隆混合物D5/16B4，1:25，丹麦Dako)、HER2(克隆10A7，1:50，英国Novocastra)，EGFR(克隆3C6，预稀释，Ventana，美国Tucson)以及Ki-67(克隆Mib-1，1：20，丹麦Dako)。
小鼠组织制备、组织学和免疫染色
治疗完成后，将小鼠用2.5％阿佛丁(12.5mg/kg体重；Sigma-Aldrich)麻醉，通过心脏穿刺收集300μL血液并立即与RNAlater溶液(Life Technologies)混合并储存于-20℃。小鼠用PBS然后用4％多聚甲醛(仅用于移植的FVB/N小鼠)进行心脏灌注。
对于石蜡包埋，将器官在4％多聚甲醛中后固定2小时，然后进行包埋。将石蜡包埋的切片脱石蜡并再水化，接着在压力蒸煮器(ERα)中的高pH缓冲液(pH 6；DAKO)中或在95℃水浴中保持20分钟进行抗原恢复(PR、STC1、IGFBP3和HGF)。过氧化物酶活性在室温下用甲醇中的3％H2O2猝灭10分钟，然后用PBS中的0.1％BSA洗涤。
ERα染色需要在M.O.M.阻断(blocking)(Mouse on Mouse basic kit，Vectorlabs)、CAS-阻断(block)(Life Technologies)和M.O.M.稀释剂中进行后续步骤。抗雌激素受体ERα的一抗(1：200，克隆1D5；DAKO)在M.O.M.稀释剂孵育。
使用CAS-阻断来阻断和孵育抗STC1(1：200；SC-30183，Santa Cruz)、IGFBP3(1：200；SC-9028，Santa Cruz)和HGF(1：200；ab83760，Abcam)的一抗。在潮湿室中于4℃过夜进行初次孵育。
洗涤后，使用DAB作为比色底物(Vector Laboratories)，使用适当的生物素化二抗和ABC过氧化物酶系统(ABC Elite标准试剂盒，Vector Laboratories)。
对于冷冻保存，将原发性肿瘤、肺、肝和脑在4℃过夜保存在30％蔗糖中，然后包埋在最佳切割温度(Optimal Cutting Temperature,OCT)介质(HistoLab)中。将冷冻切片在冰冷的丙酮中固定，然后使用无血清蛋白封闭物(Serum Free Protein Block)(DAKO)在室温下封闭>90分钟。针对PDGFRα(PE-缀合的，1：200；12-1401，eBioscience)和针对PDGFRβ(1：200；3169S，Cell Signaling)的一抗在4℃在潮湿室中孵育过夜。使用适当的Alexa488-荧光色素偶联的二抗(Life Technologies)，使用含有4'，6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)的包埋剂(Vector Laboratories)来最终包埋(mount)切片。
对于RNA分离和制备，将原发性肿瘤、肝、肺和脑在液氮中快速冷冻并储存于-80℃。
小鼠
所有动物实验经动物实验伦理委员会(Stockholm Norra
Figure BDA0001655733530000381
Figure BDA0001655733530000382
申请号N96/11和Lund申请M142/13)批准。先前已经描述了FVB/N-Tg(MMTV-PyVT)634Mul/J转基因小鼠(Guy等Molecular and Cellular Biology 1992)，并购自JacksonLaboratory。通过基因分型验证MMTV-PyMT转基因的存在以及杂合子和纯合子敲除PDGF-C后代的生成。根据常见的组织裂解、核酸提取和纯化方案，从耳或尾活检中制备DNA。在1.5％琼脂糖凝胶上跑胶PCR产物。MMTV-PyMT引物对(5'至3')：
GGAAGCAAGTACTTCACAAGGG[SEQ ID NO：2]和
GGAAAGTCACTAGGAGCAGGG[SEQ ID NO：3]。PDGF-C野生型对：
AGCTGACAT TTGATGAGAGAT[SEQ ID NO：4]和
AGTAGGTGAAATAAGAGGTGAACA[SEQ ID NO：5]。PDGF-C突变体对：
CTCATGTTCTCGTGACTCTGA[SEQ ID NO：6]和TAGCTAGTCGATACCGTCGA[SEQ ID NO：7]。
使用卡尺在12周龄时测量10个不同腺体的肿瘤大小。肿瘤体积计算为长×宽2×π/6。用阿佛丁(Sigma Aldrich，St Louis，MO)麻醉不同年龄的小鼠，然后用Hank's平衡盐溶液(HBSS)随后用4％多聚甲醛(PFA)的心脏灌注进行麻醉。将左侧宫颈和胸部乳腺切除，并在4％PFA中过夜固定，然后包埋于石蜡中。对于冷冻切片，将肿瘤组织置于30％蔗糖，之后在OCT中包埋。
将肿瘤片移植到乳房脂肪垫中
在手术过程中，麻醉3周龄FVB/N(MMTV-PyMT和PDGF-C小鼠的共同背景株)雌性小鼠并保持在异氟烷下。右侧腹部乳腺乳头下4mm切口产生口袋，其中插入2x2mm肿瘤片(保存在冰上，来自MMTV-PyMT或MMTV-PyMT；PDGF-C肿瘤)。用6-O Ethilon聚酰胺丝(Ethicon)进行缝合。在手术过程结束时和接下来的两天，腹腔注射止痛剂和抗炎剂力莫敌(Rimadyl)(5mg/kg体重；Orion Pharma Animal Health)。对于治疗性试验，将他莫昔芬(2mg/mL)稀释在玉米油(载体)中，并且通过每天口服灌胃施用。
将小鼠乳房细胞系MMTV...MMTV/PDGF-C-/-(在我们的实验室中建立)原位注射入FVB/N小鼠的第4腹股沟乳腺。此外，将MMTV-PyMT和MMTV-PDGF-CC-/-肿瘤的小肿瘤片(2mm3)在麻醉下直接原位移植。小鼠在手术后立即经受力莫敌，并在随后的两天进行镇痛。如上所述，每周对肿瘤进行两次测量并且将小鼠安乐死。
异种移植物建立
2×106人MDA-MB-231细胞皮下接种于免疫缺陷型小鼠中。在活的镇静动物中，用卡尺监测和测量肿瘤生长，每周一次。从肿瘤建立当天开始，每周两次通过腹腔注射递送抗PDGF-CC(A3B6)抗体或IgG2a对照(每周300mg/kg)。当肿瘤可触及(最长直径>3mm)时，将小鼠随机分组并使用他莫昔芬(3mg/kg)或载体(玉米油)每天口服灌胃。
统计
使用SPSS V17进行所有统计计算(SPSS，美国Chicago)。使用Spearman秩相关来确定PDGF-CC表达与临床病理学参数的相关性。Kaplan Meier分析(以及对数秩检验)和Cox回归模型用于单变量或多变量分析。使用双尾独立学生t检验来评估小鼠实验的统计学，P≤0.05被认为是显著的。
细胞培养
将鼠MMT-PyMT或MMTV-PyMT；PDGF-C-/-细胞和人MDA-MB-231细胞维持在补充有1％青霉素/链霉素、10％胎牛血清(FBS)和谷氨酸的DMEM Glutamax(Invitrogen)中培养。
体外刺激
3×106MMTV-PyMT；PDGF-C-/-细胞接种于培养介质中。24小时后，将细胞在补充有1％牛血清白蛋白(BSA；Sigma Aldrich)的DMEM Glutamax(Invitrogen)中饥饿24小时。用rmSTC1(400ng/mL；BioVendor)、rmHGF(30ng/mL)、rhIGFBP3(250ng/mL；R&D)或这些因子的组合在饥饿介质中刺激细胞48小时。细胞系CAF2(Kojima等，PNAS，2010)用于产生CAF条件化介质。将单层CAF2细胞在饥饿介质中孵育48小时。将该条件化介质离心(1500×g)以去除细胞并用于下游实验。
定量逆转录PCR
将体外培养的细胞用冰冷的PBS洗涤两次。使用RNAeasy MiniKit(Qiagen)分离RNA。使用iScript cDNA合成试剂盒(Bio Rad)制备cDNA。使用KAPA SYBR FAST qPCR KitMaster Mix(KAPA Biosystems)进行定量实时PCR。相对于管家基因L19，将mRNA表达归一化。对于FOXA1，使用EGFR和ESR1QuantiTect Primer测定(Qiagen)引物。L19引物对(5'至3')：GGTGACCTGGATGAGAAGGA和TTCAGCTTGTGGA TGTGCTC。GATA3引物对(5'至3')：CAATGCCTGCGGACTCTACC和GGTGGTGGTCTCGACAGTTCG。
Western印迹
将体外培养的细胞用冰冷的PBS洗涤两次，并在冰上用50μl裂解缓冲液(20mMTris-HCl pH7.5、150mM NaCl、5mM EDTA、0.5％脱氧胆酸钠、0.5％Triton X)裂解30分钟。以12000×g离心裂解物并弃去沉淀物。通过吸收光谱法测定蛋白浓度。蛋白悬液与5×上样缓冲液混合，在96℃变性2分钟，并通过10％丙烯酰胺凝胶上的SDS-PAGE分离。将蛋白转移至乙醇激活的PDCV膜。用PBST中的5％奶粉(PBS中0.05％吐温-20)将膜封闭1小时，并在封闭缓冲液中于4℃与抗雌激素受体α抗体(ERα1：200；SC-542，Santa Cruz)孵育O/N。洗涤后，在封闭缓冲液中以1:5000施加抗兔HSP，并在室温孵育2小时。洗涤膜，用SuperSignalRWest Pico化学发光底物(Thermo Scientific)显色。用CCD照相机(FluorChem E，CellBiosciences)测量发光信号。
体外4-羟基他莫昔芬治疗
15000个细胞(MMTV-PyMT或MMTV-PyMT；PDGF-C-/-)接种在96孔板中。如前所述，在生长介质中孵育24小时，然后饥饿24小时，用CAF条件化介质或重组因子刺激细胞。
在递增浓度的4-羟基他莫昔芬(0-5μM；Sigma Aldrich)中，在各自的刺激介质中，在接种后第4天和第6天处理细胞。在第7天细胞增殖试剂WST-1(Roche)用于活力测定。
肿瘤等级评估
通过定量每个阶段转化腺体占据的面积，将来自MMTV-PyMT、MMTV-PyMT；PDGF-C+/-和MMTV-PyMT；PDGF-C-/-小鼠的肿瘤组织(n＝5只小鼠/基因型)分为不同程度的进展。进展的范围从正常脂肪组织到特征在于恶化前增生和腺瘤的“癌前期”(保留了一些正常的导管和腺泡乳腺形态)，再到具有间质浸润的更多上皮细胞密集的“早期癌”，最后到浸润性、非常密集的、高分裂指数(high mitotic index)的“晚期癌”。评估肿瘤的乳房脂肪组织的比例、增生组织、腺瘤、早期癌和晚期癌。病理学家描述PDGF-C的特异性坏死，并在样本中盲法评分。
ERα评估
在治疗性试验结束时，对MDA-MB-231人异种移植肿瘤组织进行免疫染色并评估核ERα阳性。感兴趣的区域限于肿瘤质(mass)，不包括周围的脂肪组织。进行单细胞和灶(foci)的定量(n>3个细胞/灶)。
转移定量
在组织固定时，将MMTV-PyMT左肺叶包埋在石蜡中。通过整个肺/肝叶的连续切片来评估转移负荷。在每第25个切片上进行苏木精和伊红染色后，在每只小鼠>15个切片以及每组>5只小鼠中，确定转移灶的数目(直径>8个细胞)。
结果
PDGF-CC是乳癌生存不良的独立预后因子。为了研究PDGF-CC在人乳房中的表达模式，我们对包含890个肿瘤标本以及正常乳房组织的组织微阵列进行免疫染色。PDGF-CC在正常乳腺组织中的表达局限于毛细血管中的肌上皮/基底细胞和内皮细胞，而发现大多数管腔细胞对于PDGF-CC表达是阴性的(图1a-b)。在乳肿瘤中，PDGF-CC由恶性细胞、肿瘤内毛细血管和基质成纤维细胞表达(图1b-e)。值得注意的是，PDGF-CC免疫反应性在直接与恶性上皮相邻的基质中最为显著(图1f)。接下来，PDGF-CC的染色强度对于上皮和基质区在分级方面是独立的，并且与临床病理学参数相关(图1g)。PDGF-CC的基质免疫反应性与患者结果无关。与之形成鲜明对比的是，在单变量Cox回归和Kaplan-Meier分析中，PDGF-CC的中度至高度表达(2+和3+的评分)被认为是生存不良的高度显著预后因子(RR 1.52，95％CI 1.16-1.99，p＝0.003；图1h)。重要的是，根据已确立的临床风险因子(如诊断时的年龄、分期、分级和淋巴结状态等)而调整的多变量分析，表明PDGF-CC的上皮表达是生存不良的独立预后因子(RR 1.48，95％CI 1.04-2.13，p＝0.03)。有趣的是，PDGF家族的两种受体，即PDGFRα和PDGFRβ，都专门由基质成纤维细胞表达，这表明恶性细胞参与和肿瘤微环境间充质细胞的旁分泌交流(图1i)。
PDGF-CC对于实验性乳癌的生长在功能上是重要的。接下来，为了研究乳腺肿瘤发生中PDGF-CC表达的功能性方面，基于广泛研究的和临床相关的MMTV-PyMT小鼠，与Pdgfc缺陷型小鼠(Pdgfclacz/lacz)杂交，我们生成了遗传工程改造的小鼠乳癌模型。对MMTV-PyMT小鼠肿瘤中PDGF-CC、PDGFRα和PDGFRβ表达的观察，显示出对人乳癌中表达模式的忠实性概括，并且确定了恶性细胞和基质成纤维细胞之间的旁分泌通路的存在(图2a)。引人注目的是，Pdgfc的遗传缺陷严重影响了MMTV-PyMT小鼠乳腺肿瘤的生长(图2b)。而对照小鼠呈现平均大小为220±xx mm3的肿瘤，单个或两个拷贝的Pdgfc编码基因缺陷，分别将平均肿瘤大小降低至98±xx mm3和95±xx mm3(图2b)。除降低整体肿瘤负荷外，Pdgfc的遗传缺陷与显著更长的肿瘤潜伏期以及MMTV-PyMT小鼠的存活延长相关(图2c-d)。此外，与来自对照小鼠的肿瘤相比，来自年龄匹配但缺乏PDGFC编码基因的小鼠的肿瘤处于更低的阶段，并且包含大量坏死区域(图2e-f)。因此，在没有PDGF-CC信号传导的情况下14周龄荷瘤小鼠表现出少26.3％的肺转移(图2g)。然而，这很可能是由于疾病的发作延迟，因为与大2周的Pdgfc缺乏小鼠相比，12周龄的wt小鼠群显示出相似的转移负荷(图2g)。
为了确定在Pdgfc缺陷型小鼠中肿瘤发展的延迟并非是由于发育缺陷，我们在年轻wt小鼠乳房脂肪垫中原位移植了来自MMTV-PyMT；Pdgfc+/+和MMTV-PyMT；Pdgfclacz/lacz小鼠的肿瘤片段。与我们在转基因环境中的发现相一致，与Pdgfc-完整型肿瘤相比，移植的Pdgfc缺陷肿瘤显示显著阻碍的生长(图2h)。此外，原位移植到wt或Pdgfc缺陷型小鼠的乳房脂肪垫之后，尽管从wt MMTV-PyMT小鼠分离的细胞系容易产生指数生长的肿瘤，来自MMTV-PyMT；Pdgfclacz/lacz小鼠肿瘤两个独立分离的细胞系不能建立可触及的肿瘤(图2i，数据未显示)。
对Pdgfc的缺乏导致肿瘤微环境中纤维化和血管生成反应迟钝
组织学分析显示MMTV-PyMT；Pdgfc+/+和MMTV-PyMT；Pdgfclacz/lacz小鼠肿瘤结构的显著差异。肿瘤切片的Masson三染色显示Pdgfc缺陷型肿瘤基质中肿瘤内胶原沉积严重降低，这与PDGF-CC在乳肿瘤微环境中募集和/或激活基质成纤维细胞的观点一致(图3a)。另外，MMTV-PyMT；Pdgfclacz/lacz小鼠严重出血(图3b)并表现出显著更多的缺氧，如通过对HIF-1α的免疫染色所证明的(图3c)。相应地，定量PCR分析显示在不存在PDGF-CC的情况下，低65％的VEGF-A表达(图3d)。为了研究PDGF-CC的药理学靶向作为单一疗法是否影响乳肿瘤生长或血管生成，我们用PDGF-CC抗体、A3B6或对照抗体每周两次治疗原位植入有MDA-MB-231肿瘤(基底型亚型)的SCID小鼠。PDGF-CC信号传导的药理学阻断，虽然有统计学显著性，最低限度地削弱治疗4周后的肿瘤生长和血管生成(图3e-f)。综上所述，我们证明Pdgfc缺陷导致肿瘤微环境中纤维化和血管生成反应的迟钝。
乳肿瘤中PDGF-CC的表达与基底型分子亚型相关
为了阐明Pdgfc缺陷的分子重要性，我们使用定量PCR阵列对源自MMTV-PyMT；Pdgfc+/+和MMTV-PyMT；Pdgfclacz/lacz小鼠的肿瘤进行了转录分析，所述阵列设计用于分析基因表达对乳肿瘤发展和进展的重要性。分析显示最为差异调节的基因是Foxa1，发现与wt小鼠相比，在来自Pdgfc缺陷型小鼠全肿瘤裂解物中的表达平均高8.9倍(图4a)。在从MMTV-PyMT；Pdgfclacz/lacz小鼠分离的肿瘤细胞系中也发现Foxa1的表达显著升高(图4b)。人乳癌可分为不同的分子亚型，包括ER阳性乳癌(例如正常型、管腔A、管腔B、HER2+)和ER阴性乳癌(例如基底型肿瘤)。Cancer Genome Atlas项目收集的乳肿瘤转录谱分析显示，Foxa1的表达与非基底型分子亚型高度相关(图4c)，证实了以前的研究(参考文献)。实际上，从50个乳肿瘤细胞系的组(panel)中挖掘的转录数据揭示，Foxa1的表达是管腔亚型肿瘤的特异性特征(图4d)。如使用激素受体(雌激素受体-α(ER)和孕酮受体(PR))表达作为代表所鉴定的，人乳肿瘤标本群的免疫染色确认了Foxa1与管腔亚型之间的相关性(图4e)。鉴于在PDGF-CC不存在的情况下Foxa1在肿瘤裂解物中上调，我们调查了乳癌中Foxa1和PDGF-CC之间的相关性。首先，仅在基底型亚型的乳肿瘤细胞系中观察到PDGF-CC的表达，但在管腔亚型起源的细胞中不表达(图4f)。其次，在50个乳肿瘤细胞系的组中，发现Foxa1和PDGF-CC表达呈负相关(图4g)。第三，通过免疫染色分析890个人乳肿瘤群中基底型标志物(细胞角蛋白5/6)的表达，进一步建立PDGF-CC表达与乳癌基底型亚型的相关性。令人惊讶的是，PDGF-CC与细胞角蛋白5/6表达高度相关，而PDGF-CC的低表达或无表达指示着表达Foxa1、ER和PR的管腔亚型肿瘤。
由PDGF-CC建立的基质成纤维细胞中的旁分泌信号传导通路决定乳肿瘤细胞的分子亚型
根据转录分析，发现管腔亚型标记物FoxA1和ERα蛋白在来自Pdgfc缺陷型小鼠的肿瘤蛋白裂解物中更丰富(图5a)。为了阐明由上皮衍生PDGF-CC引起的旁分泌信号传导诱导(elicite)乳肿瘤基底型特征的机制，我们用PDGF-CC刺激永生化的乳癌相关成纤维细胞系CAF2。在全基因表达分析之后，我们集中于编码分泌蛋白的基因，并通过定量PCR验证其中的3种，斯钙素(STC)-1、肝细胞生长因子(HGF)和胰岛素生长因子结合蛋白3(IGFBP3)，以确保PDGF-CC的诱导(图5b)。接下来，利用管腔型亚型标记物FoxA1、ERα和GATA3的表达，我们评估用STC-1、HGF和IGFBP3刺激MMTV-PyMT；Pdgfclacz/lacz小鼠肿瘤分离的原发性乳癌细胞是否挽救wt MMTV-PyMT小鼠肿瘤细胞的基底型表型。实际上，虽然单独的每个因子都有不同的作用，但STC-1、HGF和IGFBP3的协同作用基本上抑制了Pdgfc缺陷型乳癌细胞的管腔型特征(图5c-e)。重要的是，改变的ERα表达具有功能意义，因为用STC-1、HGF和IGFBP3预治疗管腔乳癌细胞降低它们对他莫昔芬诱导的生长停滞的敏感性(图5f)。另外，来自基质成纤维细胞的条件化介质可以替代三种旁分泌PDGF-CC诱导的因子(图5g)。通过免疫染色确认MMTV-PyMT小鼠肿瘤的肿瘤基质中存在STC-1、HGF和IGFBP3(图5h)。
遗传或药理学靶向PDGF-CC使基底型乳肿瘤对激素疗法敏感
临床上管腔亚型乳肿瘤最重要区别特征是ERα的表达，其赋予对激素疗法(如他莫昔芬)的敏感性。我们接下来着手调查靶向PDGF-CC是否将对激素疗法的敏感性传递给先前难治型基底亚型的ER阴性乳肿瘤。携带来自MMTV-PyMT；Pdgfc+/+或MMTV-PyMT；Pdgfclacz/lacz小鼠原位移植肿瘤的非转基因小鼠，从x周龄开始每天用他莫昔芬治疗。正如预期的，他莫昔芬治疗小鼠的wt肿瘤继续以与未治疗小鼠的肿瘤相似的速率生长(图6a)。与之形成鲜明对比且与它们是ER阳性一致(图5a)的是，Pdgfc缺陷型小鼠的肿瘤用他莫昔芬治疗后严重生长迟缓(图6b)。在试验结束时，缺少旁分泌PDGF-CC信号传导的经他莫昔芬治疗的小鼠其肿瘤体积降低，而未治疗的小鼠呈现已经生长的肿瘤，显然揭示了Pdgfc缺陷型肿瘤微环境对乳肿瘤内ERα信号传导的功能敏感化。组织学上，显示了他莫昔芬治疗小鼠的肿瘤。最后，为了确定地证明靶向PDGF-CC的药剂使基底型亚型乳肿瘤对他莫昔芬的作用敏感的治疗用途，我们将MDA-MB-231细胞原位移植到SCID小鼠中。用他莫昔芬与对照抗体一起治疗不能影响完全建立的MDA-MB-231肿瘤的生长(图6c)。引人注目的是，他莫昔芬和PDGF-CC抗体A3B6联合施用导致MDA-MB-231肿瘤的显著生长迟缓(图6d)。实际上，最初不表达有意义水平ERα的基底型亚型肿瘤，在用单克隆抗PDGF-CC抗体A3B6治疗时，显著上调ERα的表达，证实PDGF-CC的旁分泌信号传导在建立基底型亚型乳肿瘤ERα缺失中的作用(图6e)。有趣的是，PDGF-CC的信号传导阻断后MDA-MB-231肿瘤中ERα表达的上调不均匀，而是发生在恶性细胞的分化巢中(图6f)。
不受理论约束，提出了在乳肿瘤微环境中所展现的旁分泌信号传导网络，其中上皮衍生的PDGF-CC通过与表达STC-1、HGF和IGFBP3的癌症相关成纤维细胞相互作用将基底型亚型的描述(specification)协调组织起来(图6g)。重要的是，通过遗传或药理手段阻断PDGF-CC发挥作用，使得先前难治型基底型亚型乳肿瘤对他莫昔芬的激素疗法作用敏感(图6g)。
实施例2.抗PDGF-CC和芳香酶抑制剂
对于治疗性研究，2×106人MDA-MB-231细胞原位接种在SCID小鼠中的第四乳房脂肪垫。在活的镇静动物中，用卡尺监测和测量肿瘤生长，每周一次。在肿瘤接种前将小鼠随机分配，以便接受抗PDGF-C(小鼠单克隆抗体克隆A3B6)抗体或IgG2a同种型对照抗体(BioX Cell)的治疗，从肿瘤建立当天开始，其每周两次(每周300μg)通过i.p.注射递送。对于涉及内分泌疗法的治疗试验，当肿瘤可触及(最长直径>3mm)时，将小鼠交替分配到治疗组中，其中小鼠用加热至55℃溶于乙醇和玉米油(Sigma)载体的来曲唑(每天1mg/剂量，经口灌胃，Sigma)或仅用载体进行治疗。所有治疗性施用都是非盲的。
统计学上，A3B6+来曲唑组显著小于所有其它组(p<0.01相对于对照，p<0.05相对于A3B6，p<0.001相对于来曲唑，学生氏非配对，假设方差相同的双侧t检验)；没有其它差异有统计学显著性(图7)。
结论：中和PDGF-CC使先前难治型的基底型/三阴性乳肿瘤对芳香酶抑制剂形式的内分泌疗法作用敏感。
实施例3.PDGF-R的抑制剂和雌激素拮抗剂
对于治疗性研究，2×106人MDA-MB-231细胞原位接种在SCID小鼠中的第四乳房脂肪垫。在活的镇静动物中，用卡尺监测和测量肿瘤生长，每周一次。在肿瘤接种前将小鼠随机分配，以便接受PFGF-R抑制剂伊马替尼或安慰剂的治疗，从肿瘤建立当天开始，其每周两次(每周300μg)通过i.p.注射递送。对于涉及内分泌疗法的治疗试验，当肿瘤可触及(最长直径>3mm)时，将小鼠交替分配到治疗组中，其中小鼠用加热至55℃溶于乙醇和玉米油(Sigma)载体的他莫昔芬(每天1mg/剂量，经口灌胃，Sigma)或仅用载体进行治疗。所有治疗性施用都是非盲的。
统计学上，伊马替尼+他莫昔芬组显著小于所有其它组(p<0.01相对于对照，p<0.05相对于A3B6，p<0.01相对于来曲唑，学生氏非配对，假设方差相同的双侧t检验)；没有其它差异有统计学显著性(图8)。
结论：抑制PDGFR酪氨酸激酶使先前难治型的基底型/三阴性乳肿瘤对他莫昔芬形式的内分泌疗法作用敏感。
参考文献
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序列表
<110> 帕拉卡林治疗公司
<120> 阴性基底型乳癌的治疗
<130> P3809PC00
<160> 9
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 345
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 1
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1 5 10 15
Arg Gln Gly Thr Gln Ala Glu Ser Asn Leu Ser Ser Lys Phe Gln Phe
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Ser Ser Asn Lys Glu Gln Asn Gly Val Gln Asp Pro Gln His Glu Arg
35 40 45
Ile Ile Thr Val Ser Thr Asn Gly Ser Ile His Ser Pro Arg Phe Pro
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65 70 75 80
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Val Ser Asp Glu Tyr Phe Pro Ser Glu Pro Gly Phe Cys Ile His Tyr
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340 345
<210> 2
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Articifial Sequence)
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<400> 7
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<220>
<221> PEPTIDE
<222> (1)..(1089)
<223> PDGF-Rα同种型1
<400> 8
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Gly Leu Ser Leu Ile Leu Cys Gln Leu Ser Leu Pro Ser Ile Leu Pro
20 25 30
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Cys Phe Gly Glu Ser Glu Val Ser Trp Gln Tyr Pro Met Ser Glu Glu
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65 70 75 80
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405 410 415
Ile Leu Asp Leu Val Asp Asp His His Gly Ser Thr Gly Gly Gln Thr
420 425 430
Val Arg Cys Thr Ala Glu Gly Thr Pro Leu Pro Asp Ile Glu Trp Met
435 440 445
Ile Cys Lys Asp Ile Lys Lys Cys Asn Asn Glu Thr Ser Trp Thr Ile
450 455 460
Leu Ala Asn Asn Val Ser Asn Ile Ile Thr Glu Ile His Ser Arg Asp
465 470 475 480
Arg Ser Thr Val Glu Gly Arg Val Thr Phe Ala Lys Val Glu Glu Thr
485 490 495
Ile Ala Val Arg Cys Leu Ala Lys Asn Leu Leu Gly Ala Glu Asn Arg
500 505 510
Glu Leu Lys Leu Val Ala Pro Thr Leu Arg Ser Glu Leu Thr Val Ala
515 520 525
Ala Ala Val Leu Val Leu Leu Val Ile Val Ile Ile Ser Leu Ile Val
530 535 540
Leu Val Val Ile Trp Lys Gln Lys Pro Arg Tyr Glu Ile Arg Trp Arg
545 550 555 560
Val Ile Glu Ser Ile Ser Pro Asp Gly His Glu Tyr Ile Tyr Val Asp
565 570 575
Pro Met Gln Leu Pro Tyr Asp Ser Arg Trp Glu Phe Pro Arg Asp Gly
580 585 590
Leu Val Leu Gly Arg Val Leu Gly Ser Gly Ala Phe Gly Lys Val Val
595 600 605
Glu Gly Thr Ala Tyr Gly Leu Ser Arg Ser Gln Pro Val Met Lys Val
610 615 620
Ala Val Lys Met Leu Lys Pro Thr Ala Arg Ser Ser Glu Lys Gln Ala
625 630 635 640
Leu Met Ser Glu Leu Lys Ile Met Thr His Leu Gly Pro His Leu Asn
645 650 655
Ile Val Asn Leu Leu Gly Ala Cys Thr Lys Ser Gly Pro Ile Tyr Ile
660 665 670
Ile Thr Glu Tyr Cys Phe Tyr Gly Asp Leu Val Asn Tyr Leu His Lys
675 680 685
Asn Arg Asp Ser Phe Leu Ser His His Pro Glu Lys Pro Lys Lys Glu
690 695 700
Leu Asp Ile Phe Gly Leu Asn Pro Ala Asp Glu Ser Thr Arg Ser Tyr
705 710 715 720
Val Ile Leu Ser Phe Glu Asn Asn Gly Asp Tyr Met Asp Met Lys Gln
725 730 735
Ala Asp Thr Thr Gln Tyr Val Pro Met Leu Glu Arg Lys Glu Val Ser
740 745 750
Lys Tyr Ser Asp Ile Gln Arg Ser Leu Tyr Asp Arg Pro Ala Ser Tyr
755 760 765
Lys Lys Lys Ser Met Leu Asp Ser Glu Val Lys Asn Leu Leu Ser Asp
770 775 780
Asp Asn Ser Glu Gly Leu Thr Leu Leu Asp Leu Leu Ser Phe Thr Tyr
785 790 795 800
Gln Val Ala Arg Gly Met Glu Phe Leu Ala Ser Lys Asn Cys Val His
805 810 815
Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Val Leu Leu Ala Gln Gly Lys Ile Val
820 825 830
Lys Ile Cys Asp Phe Gly Leu Ala Arg Asp Ile Met His Asp Ser Asn
835 840 845
Tyr Val Ser Lys Gly Ser Thr Phe Leu Pro Val Lys Trp Met Ala Pro
850 855 860
Glu Ser Ile Phe Asp Asn Leu Tyr Thr Thr Leu Ser Asp Val Trp Ser
865 870 875 880
Tyr Gly Ile Leu Leu Trp Glu Ile Phe Ser Leu Gly Gly Thr Pro Tyr
885 890 895
Pro Gly Met Met Val Asp Ser Thr Phe Tyr Asn Lys Ile Lys Ser Gly
900 905 910
Tyr Arg Met Ala Lys Pro Asp His Ala Thr Ser Glu Val Tyr Glu Ile
915 920 925
Met Val Lys Cys Trp Asn Ser Glu Pro Glu Lys Arg Pro Ser Phe Tyr
930 935 940
His Leu Ser Glu Ile Val Glu Asn Leu Leu Pro Gly Gln Tyr Lys Lys
945 950 955 960
Ser Tyr Glu Lys Ile His Leu Asp Phe Leu Lys Ser Asp His Pro Ala
965 970 975
Val Ala Arg Met Arg Val Asp Ser Asp Asn Ala Tyr Ile Gly Val Thr
980 985 990
Tyr Lys Asn Glu Glu Asp Lys Leu Lys Asp Trp Glu Gly Gly Leu Asp
995 1000 1005
Glu Gln Arg Leu Ser Ala Asp Ser Gly Tyr Ile Ile Pro Leu Pro Asp
1010 1015 1020
Ile Asp Pro Val Pro Glu Glu Glu Asp Leu Gly Lys Arg Asn Arg His
1025 1030 1035 1040
Ser Ser Gln Thr Ser Glu Glu Ser Ala Ile Glu Thr Gly Ser Ser Ser
1045 1050 1055
Ser Thr Phe Ile Lys Arg Glu Asp Glu Thr Ile Glu Asp Ile Asp Met
1060 1065 1070
Met Asp Asp Ile Gly Ile Asp Ser Ser Asp Leu Val Glu Asp Ser Phe
1075 1080 1085
Leu
<210> 9
<211> 1106
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<220>
<221> PEPTIDE
<222> (1)..(1106)
<223> PDGF-Rβ同种型1
<400> 9
Met Arg Leu Pro Gly Ala Met Pro Ala Leu Ala Leu Lys Gly Glu Leu
1 5 10 15
Leu Leu Leu Ser Leu Leu Leu Leu Leu Glu Pro Gln Ile Ser Gln Gly
20 25 30
Leu Val Val Thr Pro Pro Gly Pro Glu Leu Val Leu Asn Val Ser Ser
35 40 45
Thr Phe Val Leu Thr Cys Ser Gly Ser Ala Pro Val Val Trp Glu Arg
50 55 60
Met Ser Gln Glu Pro Pro Gln Glu Met Ala Lys Ala Gln Asp Gly Thr
65 70 75 80
Phe Ser Ser Val Leu Thr Leu Thr Asn Leu Thr Gly Leu Asp Thr Gly
85 90 95
Glu Tyr Phe Cys Thr His Asn Asp Ser Arg Gly Leu Glu Thr Asp Glu
100 105 110
Arg Lys Arg Leu Tyr Ile Phe Val Pro Asp Pro Thr Val Gly Phe Leu
115 120 125
Pro Asn Asp Ala Glu Glu Leu Phe Ile Phe Leu Thr Glu Ile Thr Glu
130 135 140
Ile Thr Ile Pro Cys Arg Val Thr Asp Pro Gln Leu Val Val Thr Leu
145 150 155 160
His Glu Lys Lys Gly Asp Val Ala Leu Pro Val Pro Tyr Asp His Gln
165 170 175
Arg Gly Phe Ser Gly Ile Phe Glu Asp Arg Ser Tyr Ile Cys Lys Thr
180 185 190
Thr Ile Gly Asp Arg Glu Val Asp Ser Asp Ala Tyr Tyr Val Tyr Arg
195 200 205
Leu Gln Val Ser Ser Ile Asn Val Ser Val Asn Ala Val Gln Thr Val
210 215 220
Val Arg Gln Gly Glu Asn Ile Thr Leu Met Cys Ile Val Ile Gly Asn
225 230 235 240
Glu Val Val Asn Phe Glu Trp Thr Tyr Pro Arg Lys Glu Ser Gly Arg
245 250 255
Leu Val Glu Pro Val Thr Asp Phe Leu Leu Asp Met Pro Tyr His Ile
260 265 270
Arg Ser Ile Leu His Ile Pro Ser Ala Glu Leu Glu Asp Ser Gly Thr
275 280 285
Tyr Thr Cys Asn Val Thr Glu Ser Val Asn Asp His Gln Asp Glu Lys
290 295 300
Ala Ile Asn Ile Thr Val Val Glu Ser Gly Tyr Val Arg Leu Leu Gly
305 310 315 320
Glu Val Gly Thr Leu Gln Phe Ala Glu Leu His Arg Ser Arg Thr Leu
325 330 335
Gln Val Val Phe Glu Ala Tyr Pro Pro Pro Thr Val Leu Trp Phe Lys
340 345 350
Asp Asn Arg Thr Leu Gly Asp Ser Ser Ala Gly Glu Ile Ala Leu Ser
355 360 365
Thr Arg Asn Val Ser Glu Thr Arg Tyr Val Ser Glu Leu Thr Leu Val
370 375 380
Arg Val Lys Val Ala Glu Ala Gly His Tyr Thr Met Arg Ala Phe His
385 390 395 400
Glu Asp Ala Glu Val Gln Leu Ser Phe Gln Leu Gln Ile Asn Val Pro
405 410 415
Val Arg Val Leu Glu Leu Ser Glu Ser His Pro Asp Ser Gly Glu Gln
420 425 430
Thr Val Arg Cys Arg Gly Arg Gly Met Pro Gln Pro Asn Ile Ile Trp
435 440 445
Ser Ala Cys Arg Asp Leu Lys Arg Cys Pro Arg Glu Leu Pro Pro Thr
450 455 460
Leu Leu Gly Asn Ser Ser Glu Glu Glu Ser Gln Leu Glu Thr Asn Val
465 470 475 480
Thr Tyr Trp Glu Glu Glu Gln Glu Phe Glu Val Val Ser Thr Leu Arg
485 490 495
Leu Gln His Val Asp Arg Pro Leu Ser Val Arg Cys Thr Leu Arg Asn
500 505 510
Ala Val Gly Gln Asp Thr Gln Glu Val Ile Val Val Pro His Ser Leu
515 520 525
Pro Phe Lys Val Val Val Ile Ser Ala Ile Leu Ala Leu Val Val Leu
530 535 540
Thr Ile Ile Ser Leu Ile Ile Leu Ile Met Leu Trp Gln Lys Lys Pro
545 550 555 560
Arg Tyr Glu Ile Arg Trp Lys Val Ile Glu Ser Val Ser Ser Asp Gly
565 570 575
His Glu Tyr Ile Tyr Val Asp Pro Met Gln Leu Pro Tyr Asp Ser Thr
580 585 590
Trp Glu Leu Pro Arg Asp Gln Leu Val Leu Gly Arg Thr Leu Gly Ser
595 600 605
Gly Ala Phe Gly Gln Val Val Glu Ala Thr Ala His Gly Leu Ser His
610 615 620
Ser Gln Ala Thr Met Lys Val Ala Val Lys Met Leu Lys Ser Thr Ala
625 630 635 640
Arg Ser Ser Glu Lys Gln Ala Leu Met Ser Glu Leu Lys Ile Met Ser
645 650 655
His Leu Gly Pro His Leu Asn Val Val Asn Leu Leu Gly Ala Cys Thr
660 665 670
Lys Gly Gly Pro Ile Tyr Ile Ile Thr Glu Tyr Cys Arg Tyr Gly Asp
675 680 685
Leu Val Asp Tyr Leu His Arg Asn Lys His Thr Phe Leu Gln His His
690 695 700
Ser Asp Lys Arg Arg Pro Pro Ser Ala Glu Leu Tyr Ser Asn Ala Leu
705 710 715 720
Pro Val Gly Leu Pro Leu Pro Ser His Val Ser Leu Thr Gly Glu Ser
725 730 735
Asp Gly Gly Tyr Met Asp Met Ser Lys Asp Glu Ser Val Asp Tyr Val
740 745 750
Pro Met Leu Asp Met Lys Gly Asp Val Lys Tyr Ala Asp Ile Glu Ser
755 760 765
Ser Asn Tyr Met Ala Pro Tyr Asp Asn Tyr Val Pro Ser Ala Pro Glu
770 775 780
Arg Thr Cys Arg Ala Thr Leu Ile Asn Glu Ser Pro Val Leu Ser Tyr
785 790 795 800
Met Asp Leu Val Gly Phe Ser Tyr Gln Val Ala Asn Gly Met Glu Phe
805 810 815
Leu Ala Ser Lys Asn Cys Val His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Val
820 825 830
Leu Ile Cys Glu Gly Lys Leu Val Lys Ile Cys Asp Phe Gly Leu Ala
835 840 845
Arg Asp Ile Met Arg Asp Ser Asn Tyr Ile Ser Lys Gly Ser Thr Phe
850 855 860
Leu Pro Leu Lys Trp Met Ala Pro Glu Ser Ile Phe Asn Ser Leu Tyr
865 870 875 880
Thr Thr Leu Ser Asp Val Trp Ser Phe Gly Ile Leu Leu Trp Glu Ile
885 890 895
Phe Thr Leu Gly Gly Thr Pro Tyr Pro Glu Leu Pro Met Asn Glu Gln
900 905 910
Phe Tyr Asn Ala Ile Lys Arg Gly Tyr Arg Met Ala Gln Pro Ala His
915 920 925
Ala Ser Asp Glu Ile Tyr Glu Ile Met Gln Lys Cys Trp Glu Glu Lys
930 935 940
Phe Glu Ile Arg Pro Pro Phe Ser Gln Leu Val Leu Leu Leu Glu Arg
945 950 955 960
Leu Leu Gly Glu Gly Tyr Lys Lys Lys Tyr Gln Gln Val Asp Glu Glu
965 970 975
Phe Leu Arg Ser Asp His Pro Ala Ile Leu Arg Ser Gln Ala Arg Leu
980 985 990
Pro Gly Phe His Gly Leu Arg Ser Pro Leu Asp Thr Ser Ser Val Leu
995 1000 1005
Tyr Thr Ala Val Gln Pro Asn Glu Gly Asp Asn Asp Tyr Ile Ile Pro
1010 1015 1020
Leu Pro Asp Pro Lys Pro Glu Val Ala Asp Glu Gly Pro Leu Glu Gly
1025 1030 1035 1040
Ser Pro Ser Leu Ala Ser Ser Thr Leu Asn Glu Val Asn Thr Ser Ser
1045 1050 1055
Thr Ile Ser Cys Asp Ser Pro Leu Glu Pro Gln Asp Glu Pro Glu Pro
1060 1065 1070
Glu Pro Gln Leu Glu Leu Gln Val Glu Pro Glu Pro Glu Leu Glu Gln
1075 1080 1085
Leu Pro Asp Ser Gly Cys Pro Ala Pro Arg Ala Glu Ala Glu Asp Ser
1090 1095 1100
Phe Leu
1105

Claims (22)

1.一种多组件药盒在制备用于在有需求的个体中治疗ER阴性乳癌的药物中的用途，所述多组件药盒包含：
a.抗PDGF-CC抗体和抗雌激素，其中所述抗雌激素选自他莫昔芬、来曲唑、氟维司群、阿那曲唑、依西美坦和托瑞米芬，或者
b.PDGF-R的抑制剂和抗雌激素，其中所述PDGF-R的抑制剂是伊马替尼，并且其中所述抗雌激素是他莫昔芬。
2.根据权利要求1所述的多组件药盒在制备用于治疗ER阴性乳癌的药物中的用途，其中所述的治疗包括步骤：
a.向有需求的个体施用抗PDGF-CC抗体或PDGF-R的抑制剂；
b.随后施用抗雌激素。
3.根据权利要求1所述的多组件药盒的用途，其中所述个体患有ER阴性乳癌，并且其中所述个体的所述乳癌已通过手术得以治疗。
4.根据权利要求1所述的多组件药盒的用途，其中所述抗PDGF-CC抗体是特异性结合PDGF-CC的单克隆抗体。
5.根据权利要求1所述的多组件药盒的用途，其中所述抗PDGF-CC抗体是特异性结合PDGF-CC的人类单克隆抗体。
6.根据权利要求1所述的多组件药盒的用途，其中所述抗PDGF-CC抗体是人源化抗体。
7.根据权利要求1所述的多组件药盒的用途，其中所述抗PDGF-CC抗体是中和性PDGF-CC的抗体。
8.根据权利要求1所述的多组件药盒的用途，其中所述抗PDGF-CC抗体是能够通过结合PDGF-CC抑制PDGF-CC的蛋白水解切割。
9.根据权利要求1所述的多组件药盒的用途，其中所述抗PDGF-CC抗体能够结合人PDGF-CC。
10.根据权利要求1所述的多组件药盒的用途，其中所述抗PDGF-CC抗体能够抑制PDGF-CC活性。
11.根据权利要求1所述的多组件药盒的用途，其中所述抗PDGF-CC抗体能够抑制PDGF-CC与PDGFRα同二聚体和/或PDGFRα/β异二聚体的结合。
12.根据权利要求1所述的多组件药盒的用途，其中所述抗PDGF-CC抗体能够抑制PDGFRα同二聚体和/或PDGFRα/β异二聚体的激活。
13.根据权利要求1所述的多组件药盒的用途，其中所述抗PDGF-CC抗体能够抑制PDGF-CC的蛋白酶解加工。
14.根据权利要求1所述的多组件药盒的用途，其中所述抗PDGF-CC抗体能够结合表位，所述表位位于、包含或由以下组成：
a.SEQ ID NO：1的氨基酸230至250；
b.SEQ ID NO：1的氨基酸228至238；
c.SEQ ID NO：1的氨基酸308至322；
d.SEQ ID NO：1的氨基酸242至254；
e.SEQ ID NO：1的氨基酸288至308；
f.SEQ ID NO：1的氨基酸325至345；
g.SEQ ID NO：1的氨基酸256至274；
h.SEQ ID NO：1的氨基酸256至264；和/或
i.SEQ ID NO：1的氨基酸256至260。
15.根据权利要求1所述的多组件药盒的用途，其中所述抗PDGF-CC抗体能够结合位于SEQ ID NO：1的氨基酸230至250内的表位。
16.根据权利要求1所述的多组件药盒的用途，其中权利要求1的a.项中的所述抗雌激素选自他莫昔芬、氟维司群和托瑞米芬。
17.根据权利要求14所述的多组件药盒的用途，其中权利要求1的a.项中的所述抗雌激素选自他莫昔芬、氟维司群和托瑞米芬。
18.根据权利要求17所述的多组件药盒的用途，其中所述抗雌激素是他莫昔芬。
19.根据权利要求1所述的多组件药盒的用途，其中权利要求1的a.项中的所述抗雌激素选自来曲唑、阿那曲唑和依西美坦。
20.根据权利要求1-19中任一项所述的多组件药盒的用途，其中所述ER阴性乳癌是三阴性乳癌。
21.根据权利要求1所述的多组件药盒的用途，其中所述ER阴性乳癌是基底型乳癌。
22.根据权利要求1所述的多组件药盒的用途，其中所述ER阴性乳癌是其中原发性肿瘤呈ER阴性的乳癌。
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