CN108342398A - 一种原野库蠓的特异基因及其分子鉴定方法 - Google Patents

一种原野库蠓的特异基因及其分子鉴定方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种原野库蠓的特异基因及其分子鉴定方法，其特征在于采用分子生物学方法获取该库蠓的COI基因序列，通过基因序列相似性的比对，对该库蠓进行种类鉴定。本发明提供的原野库蠓分子鉴定方法，有利于实现原野库蠓准确、快速的鉴定。

Description

一种原野库蠓的特异基因及其分子鉴定方法
技术领域
本发明涉及本发明涉及物种鉴定领域，特别涉及原野库蠓的特异基因及其分子鉴定方法。
背景技术
吸血库蠓是一类微小型昆虫，可传播和携带蓝舌病、丝虫病、奥罗普切病毒、西尼罗河病病原体，是重要的医学昆虫之一。近年来，随着全球气候变暖，在一定程度上使库蠓传播虫媒病病毒的能力提高，也使媒介库蠓的分布范围向地球两极和高海拔地区扩大，库蠓种群传播虫媒病毒给动物群的能力增加，一些传统的“非媒介”库蠓种类具有了传播疫病的能力。由库蠓传播的虫媒病如蓝舌病、鹿流行性出血病、水泡性口炎、施马伦贝格病等，在全球一些国家或地区的传播和流行，造成了巨大的经济损失，对畜牧业发展构成了严重威胁。
同时据相关文献记载，全世界已知蠓科有125属5360种。蠓科中的吸血蠓类是蠓科昆虫中能叮刺人和畜等动物种类的总称，是医学昆虫的重要类群之一，其种类在全世界已知有4属1503种，4个属包括库蠓属(Culicoides)、蠛蠓属(Lasiohlea)、细蠓属(Leptoconops)和澳蠓属(Austroconops)。其中库蠓属是蠓科中最大的一个属，也是四大吸血蠓属中分布最广、蠓种最多、与人畜关系最密切的一个属，兼吸人和动物血液，传播疾病，危害人体健康，对畜牧业发展影响极大。现知库蠓有1247种，占世界已知蠓科的23.3％，占已知4个吸血蠓属的83％。据群落多样性分析结果表明，我国库蠓优势种由南向北渐趋突出，而多样性指数则南方高于北方。在华南热带雨林地区发现的库蠓种类有133种。
可见对吸血库蠓的准确鉴定是控制蠓传疾病的重要基础，也是疾病预防控制的核心前提。但是由于吸血蠓体型微小，形态学鉴定比较复杂，同时多种种间存在许多具有相似特征的隐种(Cryptic species)组成的复合体(Complex)或种团(group)，仅有少部分经验丰富的分类学专家才能有效的鉴定其种类。而且形态学鉴定的成败还需通过制作完整的玻片标本来完成，标本制作过程步骤繁琐，周期长，难度大。因此对于吸血库蠓迫切需要一种新的方法，以弥补传统分类方法的缺陷，提高分类的效率和准确度。其中，库蠓属中分布范围最广的是原野库蠓(Culicoides homotomus)，分布于除西藏外的其他各省区，是刺叮家畜的主要吸血蠓种，成虫多见于牛舍，嗜吸牛、猪、马、狗、羊、驴、兔、山羊、绵羊及猴等动物血液，亦吸人血，孳生于多有机物之湿地、小水沟、稻田、河边浮泥中。为我国南方厩舍中众多的蠓种，应予重视。因此，建立一种针对原野库蠓的新鉴别方法，快速准确鉴定和区分出原野库蠓，将有助于潜在媒介的调查研究，以便弄清媒介库蠓的分布数量动态、生活习性，并掌握其各期在各种条件下的活动规律，进行有效防制，为我国媒介传播性疾病的控制提供理论依据。
分子分类技术是以遗传物质DNA序列分析为依据来阐明物种间的差别从分子水平上快速而准确地鉴别物种，它是分子生物学、计算机科学与传统分类学相结合的产物，作为一种崭新的分类学技术极大弥补了传统形态学鉴定的缺陷。其中，DNA条形码技术(DNABarcoding)是通过对一个标准目的基因的DNA序列进行分析，从而快速、准确地进行物种鉴定的技术。近几年来，DNA条形码技术已被证明是一个行之有效的生物鉴定手段，不仅可对传统鉴定方法作强有力的补充，而且因为其更客观、准确，突破以往对经验的过度依赖，能帮助鉴定物种、发现新种和隐种、重建物种和高级阶元的演化关系等。
作为DNA条形码的标准目的基因，一方面必须足够保守，便于利用通用引物进行大范围的扩增；另一方面，要有足够的变异来区分不同的物种。因此，鉴定不同的物种类群需要选择有效的目的基因。目前，在系统发育研究中广泛应用的标志基因是核糖体12S和16S基因，但因其存在大量的插入和缺失现象，不宜用作条形码基因。线粒体基因组中存在的13个蛋白编码基因中仅细胞色素氧化酶亚基I(CytochromeOxidaseSubunitI，COI)、线粒体细胞色素b(Cytb)、ND4、ND5这4个基因满足基因插入和缺失现象较少、长度在900bp左右这两个条件，但ND4、ND5进化太快，不可能设计出通用引物，限制了它们作为全面DNA鉴定系统的目标基因。因此，人们最终选定COI基因中的一个片段作为DNA条形码基因。
目前，该方法在库蠓分子鉴定中的应用仅局限在少数库蠓，例如专利CN105483261A涉及蓝腹库蠓的特异基因及其分子鉴定方法，CN105543249A涉及一种美丽库蠓特异基因及其分子鉴定方法，CN105543364A一种泰国库蠓的特异基因及其分子鉴定方法。目前现有技术中还未建立对原野库蠓的相关方法，本申请创新之处在于采用基于COI基因的DNA条形码技术对吸血库蠓，尤其是原野库蠓进行分子鉴定。该方法可以与传统的形态学鉴定方法同时使用，相互佐证，不仅可解决形态学鉴定中存在的标本制作难，标本残缺不全无法鉴定，存在隐种鉴定错误的问题，而且有利于实现原野库蠓的快速鉴定。
Genbank中也仅有少数库蠓的COI基因序列，但至今尚无原野库蠓的相关基因序列。本发明另一个创新之处在于通过该方法已获得原野库蠓的COI基因序列。本发明提供的原野库蠓特异基因序列有利于实现原野库蠓的快速鉴定，提高鉴定准确度和效率。
发明内容
在阅读了优选实施方案和所附权利要求的详细描述后，本发明的这些和其他目的、优点和用途将对本领域技术人员显示出来。本发明的目的在于提供一种原野库蠓的特异基因序列及其分子鉴定方法。通过分子生物学方法获取原野库蠓(Culicoideshomotomus)特异基因-COI基因序列，通过基因序列相似性的比对，可准确、快速地鉴定原野库蠓。
为实现上述目的，本发明通过如下技术方案实现：
采用小型昆虫微量DNA模板植被方法，通过改进的PCR反应条件，合成引物扩增原野库蠓的COI基因，扩增后的PCR产物送专业生物公司测定并进行序列的拼接。测序结果通过手工校对，并在NCBI中Blast相似性搜索，确保所得序列为目标序列。本发明所述的原野库蠓特异基因为COI基因，所述库蠓的COI基因序列如SEQ ID No.1所示。
所述的原野库蠓COI基因的PCR引物，其特征在于PCR引物序列为：
正向引物5’-GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-3’
反向引物5’-TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-3’。
本发明所述的原野库蠓的分子鉴定方法，包括：
1)从待测的库蠓组织中分离提取DNA；
2)以该DNA为模板，对COI基因采用的引物为：
正向引物5’-GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-3’
反向引物5’-TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-3’
通过聚合酶链式反应(PCR)扩增出原野库蠓COI基因；
3)取适量步骤2)扩增后的COI基因产物用琼脂糖电泳分离，经溴乙锭(EB)染色后在凝胶成像系统下观察，根据扩增产物的大小判定结果，如果能特异性扩增出大小约为677bp的条带，送生物公司进行测序；
4)根据测序结果，如果相应COI基因序列与SEQID No.1的相似性在98％以上，即可判断所述的待测昆虫组织为原野库蠓。
原野库蠓的种类鉴定依靠形态学鉴定所实现，并经权威专家复核，保证了鉴定结果的准确和可靠性。本发明可用琼脂糖凝胶电泳检测方法检测PCR扩增结果。
本发明的优点为：
1)本发明采用传统的形态学鉴定与分子分类鉴定相结合的方法，对所述吸血库蠓进行鉴定，可确保物种鉴定的准确性和可靠性。
2)与传统的形态学鉴定方法相比，本发明建立的原野库蠓的分子鉴定方法可有效提高原野库蠓的鉴定时间和准确性。
附图说明
图1为原野库蠓COI基因PCR扩增结果电泳鉴定图，编号说明如下：泳道1为阴性对照，泳道2为原野库蠓雌虫的COI基因，检出大小约为677bp的条带，M为DM2000的DNAMarker；
图2为未知库蠓COI基因PCR扩增结果电泳鉴定图，编号说明如下：泳道1为阴性对照，泳道2为未知库蠓雌虫的COI基因，检出大小约为677bp的条带，M为DM2000的DNAMarker。
具体实施方式
需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将结合实施例来详细说明本发明。
实施例1原野库蠓(Culicoides homotomus)COI基因序列的获取
1.原野库蠓标本的获取
原野库蠓为野外诱蚊灯采集获得的标本，标本经冷冻处死后直接保存于95％的酒精中。标本经制成玻片标本后经权威专家鉴定，确保鉴定结果的准确性。标本制作前，挑取原野库蠓的胸部和足用于DNA的提取。
2.玻片标本的制作
参照蠓科昆虫标本制作方法(虞以新主编，《中国蠓科昆虫》，北京，军事医学科学出版社，2006，pp1682-1683)
3.DNA模板的制备
采用小型昆虫微量DNA模板制备方法提取原野库蠓DNA(文礼章主编，《昆虫学研究方法与技术导论》，北京：科学出版社，2010.pp：278-286)，提取的DNA样品保存于-20℃备用。
4.引物合成
本实施所用引物如下：正向引物5’-GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-3’，反向引物5’-TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-3’
5.PCR扩增
本实施例的PCR反应体系如表1所示。
表1.原野库蠓COl基因PCR反应体系(50μL体系)
成分 体积(μL)
模板 5
混合引物(引物1和引物2) 2.5
2×PCR Master Mix 25
ddH2O 17.5
反应程序如表2所示，PCR产物存于4℃保存备用。
表2原野库蠓COI基因PCR反应程序
步骤 反应温度(℃) 时间 循环数
预变性 94 3min -
变性 94 45s 35
退火 50 45s 35
延伸 72 60s 35
延伸 72 10min -
6.PCR产物扩增检测
取5μLPCR扩增产物，用1％的琼脂糖凝胶电泳(150V电压，75mA电流，30min)。溴乙锭染色，凝胶成像系统检测，电泳图谱参见图1。
7.基因序列测定
选取5-10个电泳检测效果较好的PCR扩增产物送由专业测序生物公司纯化后双向测序(测序所用引物与PCR引物相同)，所得拼接基因序列经校正后即为原野库蠓的COI基因序列-SEQ ID No.1。
实施例2未知库蠓的鉴定
1.标本的采集与保存
现场采用灯诱法，晚挂晨收进行诱集，采获得标本经冷冻处死后直接保存于95％酒精中。
2.DNA模板的制备
采用小型昆虫微量DNA模板制备方法提取原野库蠓DNA，具体方法同实施例1，提取的DNA样品保存于-20℃备用。
3.目的基因序列的获取
3.1引物合成
以获得的未知库蠓DNA为模板，合成引物，所用引物序列如下：
正向引物5’-GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-3’
反向引物5’-TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-3’
3.2.PCR扩增
本实施例的PCR反应体系如表3所示。
表3.未知原野库蠓COI基因PCR反应体系(50μL体系)
本实施例的反应程序如表4所示，PCR产物保存于4℃备用。
表4原野库蠓COI基因PCR反应程序
步骤 反应温度(℃) 时间 循环数
预变性 94 3min -
变性 94 45s 35
退火 50 45s 35
延伸 72 60s 35
延伸 72 10min -
3.3PCR扩增产物检测与基因序列测定
取5μLPCR扩增产物，用1％的琼脂糖凝胶电泳(150V电压，75mA电流，30min)。溴乙锭染色，凝胶成像系统检测，电泳图谱参见图2。由图2看出实施例2的未知库蠓也能特异性扩增出大小约为677bp的产物，将此产物送专业生物测序公司测序，结果显示与基因序列SEQ ID No.1的相似性为99.9％，因而可判定该未知库蠓为原野库蠓。
虽然本发明已作了详细描述，但对本领域技术人员来说，在本发明精神和范围内的修改将是显而易见的。此外，应当理解的是，本发明记载的各方面、不同具体实施方式的各部分、和列举的各种特征可被组合或全部或部分互换。在上述的各个具体实施方式中，那些参考另一个具体实施方式的实施方式可适当地与其它实施方式组合，这是将由本领域技术人员所能理解的。此外，本领域技术人员将会理解，前面的描述仅是示例的方式，并不旨在限制本发明。
序列表
<110> 南昌市疾病预防控制中心
<120> 一种原野库蠓的特异基因及其分子鉴定方法
<130> 2018
<160> 3
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 677
<212> DNA
<213> 库蠓（Culicoides morisitai）
<400> 1
gatattggaa ctttatattt tatttttgga gcttgagcag gaatagtagg tacttctcta 60
agtattttaa ttcgtgctga attaggacac ccaggagctt taattggaaa tgatcaaatt 120
tataatgtca ttgtaacagc ccatgctttt attataattt tttttatagt tatacctatt 180
ataattggag gatttggtaa ctgattagtt cctttaatat taggagcccc agacatagct 240
ttccctcgta taaataatat aagattttga atacttcccc cttcactatc tttattactt 300
attagaagtt tagtagaaaa tggggcagga actggatgaa ctgtttaccc tcctttgtca 360
gctaatgttt cgcatgcagg agcttctgta gatttagcaa ttttttcttt acatttagct 420
ggtatttctt caatcttagg ggctattaac ttcattacta caattattaa tatacgatct 480
aacggtattt ctttcgaccg aataccttta tttgtttggt ctgtttttat tacagccatt 540
ttattattat tatcattacc tgtattagca ggagcaatca caatactttt aacagatcgt 600
aatattaata catctttttt tgaccctgct ggaggaggag accctattct ttaccaacat 660
ttattttgat tttttgg 677
<210> 2
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
ggtcaacaaa tcataaagat attgg 25
<210> 3
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
taaacttcag ggtgaccaaa aaatca 26

Claims (5)

1.一种原野库蠓特异基因，其特征在于，所述基因为COI基因，其具有如SEQ ID No.1所示的序列。
2.权利要求1所述的库蠓的COI基因的PCR引物。
3.权利要求2所述的库蠓的COI基因的PCR引物，其特征在于，优选的，PCR引物序列分别为：
正向引物5’-GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-3’
反向引物5’-TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-3’。
4.一种原野库蠓的分子鉴定方法，其特征在于，包括如下步骤：
4.1 从待测的库蠓组织中分离提取DNA；
4.2 以该DNA为模板，对COI基因采用的引物为：
正向引物5’-GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-3’，
反向引物5’-TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-3’，通过聚合酶链式反应(PCR)扩增出原野库蠓COI基因；
4.3 取适量步骤4.2扩增后的COI基因产物用琼脂糖电泳分离，经溴乙锭染色后在凝胶成像系统下观察，根据扩增产物的大小判定结果，如果能特异性扩增出大小约为677bp的条带，测序；
4.4 根据测序结果，如果相应COI基因序列与SEQID No.1的相似性在98％以上，即可判断所述的待测昆虫组织为原野库蠓。
5.一种原野库蠓的分子鉴定方法，其特征在于，包括如下步骤：
5.1.标本的采集与保存
现场采用灯诱法，晚挂晨收进行诱集，采获得标本经冷冻处死后直接保存于95％酒精中；
5.2.DNA模板的制备
采用小型昆虫微量DNA模板制备方法提取原野库蠓DNA，提取的DNA样品保存于-20℃备用；
5.3.目的基因序列的获取
引物合成：以获得的未知库蠓DNA为模板，合成引物，所用引物序列如下：
正向引物5’-GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-3’
反向引物5’-TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-3’
PCR扩增：PCR反应50μL体系如下：模板5μL、正向引物和反向引物混合2.5μL、2×PCRMaster Mix 25μL、ddH2O 17.5μL；PCR产物保存于4℃备用；
5.4 PCR扩增产物检测与基因序列测定
取5μLPCR扩增产物，用1％的琼脂糖凝胶电泳，150V电压，75mA电流，30min；溴乙锭染色，凝胶成像系统检测，如果特异性扩增出大小约为677bp的产物，测序，结果显示与基因序列SEQ ID No.1的相似性为99.9％，则可判定为原野库蠓。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107988232A (zh) * 2018-01-25 2018-05-04 遵义医学院 一种原野库蠓的dna条形码标准序列及其分子鉴定方法
CN109517909A (zh) * 2019-01-25 2019-03-26 河北国际旅行卫生保健中心 一种鉴定琉球库蠓的试剂盒及方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105483261A (zh) * 2016-01-08 2016-04-13 中国检验检疫科学研究院 一种蓝腹库蠓的特异基因及其分子鉴定方法
CN105543249A (zh) * 2016-01-08 2016-05-04 福建国际旅行卫生保健中心 一种美丽库蠓特异基因及其分子鉴定方法
CN106834467A (zh) * 2014-04-21 2017-06-13 牡丹江友搏药业有限责任公司 一种地龙的dna条形码分子鉴定方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106834467A (zh) * 2014-04-21 2017-06-13 牡丹江友搏药业有限责任公司 一种地龙的dna条形码分子鉴定方法
CN105483261A (zh) * 2016-01-08 2016-04-13 中国检验检疫科学研究院 一种蓝腹库蠓的特异基因及其分子鉴定方法
CN105543249A (zh) * 2016-01-08 2016-05-04 福建国际旅行卫生保健中心 一种美丽库蠓特异基因及其分子鉴定方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
HOPKEN M W等: "KY707884.1", 《NCBI GENBANK》 *
于志超等: "内蒙古阿拉善骆驼生活环境水生双翅目昆虫种类调查", 《昆虫学报》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107988232A (zh) * 2018-01-25 2018-05-04 遵义医学院 一种原野库蠓的dna条形码标准序列及其分子鉴定方法
CN109517909A (zh) * 2019-01-25 2019-03-26 河北国际旅行卫生保健中心 一种鉴定琉球库蠓的试剂盒及方法

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