CN108486121B - 一种刺螫库蠓的特异dna序列及其分子鉴定方法 - Google Patents

一种刺螫库蠓的特异dna序列及其分子鉴定方法 Download PDF

Info

Publication number
CN108486121B
CN108486121B CN201810071863.6A CN201810071863A CN108486121B CN 108486121 B CN108486121 B CN 108486121B CN 201810071863 A CN201810071863 A CN 201810071863A CN 108486121 B CN108486121 B CN 108486121B
Authority
CN
China
Prior art keywords
culicoides
cytb
dna
cuicoides
gene
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN201810071863.6A
Other languages
English (en)
Other versions
CN108486121A (zh
Inventor
侯晓晖
岑常活
韩晓静
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zunyi Medical University
Original Assignee
Zunyi Medical University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zunyi Medical University filed Critical Zunyi Medical University
Priority to CN201810071863.6A priority Critical patent/CN108486121B/zh
Publication of CN108486121A publication Critical patent/CN108486121A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108486121B publication Critical patent/CN108486121B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6869—Methods for sequencing
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开一种刺螫库蠓的特异DNA序列及其分子鉴定方法，其特征在于采用分子生物学DNA测序的方法获取该库蠓的Cytb基因序列，再通过基因序列相似性比对，从而根据比对结果对该库蠓进行种类鉴定。本发明提供的刺螫库蠓分子鉴定方法，有利于实现刺螫库蠓快速、准确的鉴定。

Description

一种刺螫库蠓的特异DNA序列及其分子鉴定方法
技术领域
本发明涉及昆虫物种鉴定领域，具体涉及刺螫库蠓的特异DNA序列及其分子鉴定方法。
背景技术
刺螫库蠓（Culicoides punctatus Meigen,1804) 隶属于昆虫纲（Insecta）双翅目（diptera）蠓科（Ceratopogonidae）库蠓属（Culicoides Latreille, 1809），其体型微小，在世界范围内广泛分布。刺螫库蠓是一种吸血蠓，可刺吸人和动物血液带来直接骚扰，也可携带病原体进而传播人畜疾病，如蓝舌病病毒(BTV)等。由于蓝舌病等一旦爆发流行将带来巨大的经济损失，而对吸血蠓的研究有助于切断虫媒疾病的传播途径，故其在医学与兽医学领域具有重要的研究意义。因此，准确鉴定疾病媒介是对蠓传疾病进行监测、防治的关键一步。
由于蠓虫体型微小、形态特征稀少等原因，传统形态学分类鉴定存在以下不足：（1）卵、幼虫和蛹等早期发育阶段的形态结构和肢体残缺的虫体均难以辩认；（2）传统形态学鉴定的操作过程较为繁琐且需具备较强的专业知识和丰富是实践经验；（3）受限于库蠓性别，如雄性非吸血蠓通过外生殖器和尾器等形态特征易于鉴别，而雌性吸血蠓却难以鉴别；（4）库蠓表型的可塑性和遗传的可变性等也容易导致误判。因此，亟需寻求一种快速、稳定的方法，以实现蠓虫如刺螫库蠓等媒介的准确鉴定。
随着分子生物学和生物信息学的快速发展，以DNA序列分析为依据的分子鉴定已成为物种鉴定的常用技术手段，极大地弥补了传统分类学鉴定的不足。一般来说，昆虫的DNA分子标记会选择一段标准的、有足够变异和一定保守性的、且相对较短易扩增的DNA片段。因此，昆虫的线粒体DNA包含多个基因如ND1-6、ND4L、CO I-CO III、ATPase6、ATPase8、Cytb等，非常适合作为分子鉴定的分子标记。目前，应用较多的分子标记是CO I、CO II、Cytb、12S rRNA、16S rRNA、ND4、ND5等。12S rRNA和16S rRNA因其存在大量的插入和缺失现象，且基因高度保守，进化较慢，故不宜用做条形编码基因。ND4和ND5进化太快，难以设计出通用引物，限制了它们作为全面DNA 鉴定系统的目标基因。Cytb基因大小和结构较为保守，包含信息量大，能够保证足够变异的同时又容易被通用引物扩增，在物种内不同个体之间的差异应小于2%，而近缘种间的差异远大于同种不同个体间，是使用较为广泛的分子标记。
迄今为止，已有诸多研究证明Cytb基因适用于昆虫、鸟类、鱼类、哺乳类等类群的分类鉴定。因此，可采用基于Cytb基因的特异DNA序列对吸血蠓进行分子鉴定。该方法与传统形态学分类方法互为佐证，不仅可实现吸血蠓的快速、准确鉴定，而且可帮助发现库蠓属中的隐存种或新种。目前，通过该方法已获得多种吸血蠓的Cytb基因序列并上传至GenBank中，但至今尚无刺螫库蠓的Cytb基因序列。本发明提供刺螫库蠓的特异DNA序列有利于实现其快速、准确鉴定，缩短物种鉴定周期。
发明内容
本发明的目的在于提供一种刺螫库蠓的特异DNA序列及其分子鉴定方法。通过分子生物学DNA测序的方法获取刺螫库蠓的特异DNA序列—Cytb基因序列，通过基因序列相似性的比对，实现刺螫库蠓的快速、准确鉴定。
为实现上述目的，本发明通过如下技术方案实现：
通过DNA模板制备和PCR反应，由合成的引物扩增刺螫库蠓的Cytb基因，经扩增后PCR产物可用琼脂糖凝胶电泳检测扩增结果，并将特异性扩增出大小约为500bp的条带序列送生物公司测序。测序结果通过手工校对、序列拼接，并在NCBI中进行Blast相似性搜索，确保所得序列为目标基因序列，同时刺螫库蠓的种类鉴定依靠形态学鉴定所实现，并经权威专家复核，从而保证了结果的可靠性。本发明所述的刺螫库蠓的特异DNA序列为Cytb基因序列，所述刺螫库蠓的Cytb基因序列如SEQ ID No .1 所示：
tactttttat tcgcttatgc tattcttcga tctatcccca ataaattagg aggagtaatt 60
gccttagtca tatcaattgc aattcttttt attttacctt ttacccacaa aagaaacttt 120
cgaactttaa aattctaccc attaaataaa attttatttt gaaacttttt tattatcgta 180
ctattactaa cttgaattgg agcccgacct gtagaagacc cgtatatttt aaccggacaa 240
attttaacag ttttatattt tttctactac ttattaaatc cccttactat aaaaatatga 300
gataaaataa tttattaatc aatgagcttg aataagcata tgttttgaaa acataagata 360
aaataatttt tattgatttt tactaaaaat taatcatata attaaaataa aaattaataa 420
tttaagacta acaaataaaa ttaaaaaaca taaagaaaaa gataaataac tttttcaagc 480
taagtatatt aatttatcat 500
所述的刺螫库蠓的特异DNA序列的PCR引物分别为：
正向引物：5’CAYATTCAACCWGAATGATA 3’。
反向引物：5’GGTAYWTTGCCTCGAWTTCGWTATGA 3’。
本发明的刺螫库蠓的分子鉴定方法，步骤包括：
1）从待测的蠓组织中分离提取DNA；
2）以该DNA为模板，采用的引物为：正向引物：5’CAYATTCAACCWGAATGATA 3’，反向引物：5’GGTAYWTTGCCTCGAWTTCGWTATGA 3’，通过聚合酶链式反应扩增出刺螫库蠓Cytb基因；
3）然后取适量步骤2）的聚合酶链式反应产物用琼脂糖凝胶电泳分离，根据电泳条带判断是否为目的条带，如果能特异性扩增出大小约为500bp的条带，则将PCR产物切胶纯化，-20℃保存；
4）聚合酶链式反应扩增出该库蠓Cytb基因与p EASY-T1载体连接转化进Trans1-T1感受态细胞中进行克隆，根据蓝白斑筛选出阳性克隆后扩增，再将含阳性克隆的菌液用60%甘油保存送至生物公司进行双向测序；
5）通过测序结果的比对分析，如果相应Cytb基因序列与SEQ ID No .1的相似性在98%以上，即可判断所述的待测组织为刺螫库蠓。
采用上述技术方案的有益效果是：
1）本发明联合了传统的形态学鉴定与分子鉴定方法，对所述库蠓进行鉴定，可确保物种鉴定的准确性和可靠性。
2）本发明与传统的形态学鉴定方法相比，所建立的刺螫库蠓分子鉴定方法可大大缩短刺螫库蠓的鉴定时间。
3）本发明填补了刺螫库蠓Cytb基因序列在GenBank数据库中的空白。
附图说明
图1 为本发明的技术流程图。
图2为刺螫库蠓Cytb基因PCR扩增结果的电泳图谱。编号说明如下：泳道1-3为刺螫库蠓雌虫的Cytb基因，检出大小约为500bp的条带。M为250bp DNA Ladder Marker。
图3为未知库蠓雌虫Cytb基因PCR扩增结果的电泳图谱。编号说明如下：泳道1未知库蠓雌虫的Cytb基因，检出大小约为500bp的条带。M为250bp DNA Ladder Marker。
具体实施方式
实施例1 刺螫库蠓Cytb基因序列的获取
1、刺螫库蠓标本的采集与保存
刺螫库蠓标本均通过网扫法和灯诱法采集于贵州的野外栖息地，并保存于95%酒精中。用解剖针在体视镜下进行解剖，除胸部外其余均制成永久装片，经权威专家鉴定，确保鉴定结果的准确性。将刺螫库蠓胸部单独标号后进行分子实验。
2、基因组DNA提取
将保存的刺螫库蠓胸部研磨后，按照QIAGEN DNeasy Blood& Tissue Kit说明书进行单只库蠓基因组DNA提取，并保存至-20℃备用。
3、引物合成
本实施例所用引物如下：
正向引物：5’CAYATTCAACCWGAATGATA 3’。其中，Y处的碱基为C或T，W处的碱基为A或T，Y或W的设立是用来扩增未知碱基的。
反向引物：5’GGTAYWTTGCCTCGAWTTCGWTATGA 3’。 其中，Y处的碱基为C或T，W处的碱基为A或T，Y或W的设立是用来扩增未知碱基的。
4、PCR扩增
DNA模板 1.5uL
上游引物（10uM） 1uL
下游引物（10uM） 1uL
2×PCR MasterMix 12.5uL
ddH2O 9uL
总体系 25uL
PCR反应条件：94℃预变性3 min；94℃变性30s，40℃退火60s，68℃延伸60s，循环5次；94℃变性60s，44℃退火60s，68℃延伸60s，循环35次；最后68℃延伸10min。
5、PCR产物回收
PCR产物用1%琼脂糖凝胶经120V恒压电泳25min后，在凝胶成像系统下观察电泳条带判断是否为目的条带，电泳图谱参见附图2。对扩增效果良好的PCR产物按照琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒说明书进行PCR产物切胶纯化，-20℃保存。
6、PCR回收产物克隆和测序
PCR回收产物与p EASY-T1载体连接转化进Trans1-T1感受态细胞中进行克隆，根据蓝白斑筛选出阳性克隆后扩增，再将含阳性克隆的菌液用60%甘油保存送至生物公司进行双向测序。
本实施例的克隆反应体系如下：
DNA 0.5-4uL
p EASY-T1 Cloning Vector 1uL
ddH2O 0-3.5uL
总体系 5uL
克隆反应条件：反应体系轻轻混合，室温（20℃-37℃）反应5-10min。
7、Cytb基因序列测定
通过人工校对及生物信息学软件对刺螫库蠓Cytb基因序列进行比对、编辑和拼接后即为SEQ ID No .1。
实施例2 未知库蠓的鉴定
1、蠓标本的采集与保存
蠓标本通过网扫法和灯诱法采集于野外栖息地，并保存于95%酒精中。用解剖针在体视镜下进行解剖，除胸部外其余均制成永久装片用于形态鉴定。将蠓胸部单独标号后进行分子实验。
2、基因组DNA提取
将保存的蠓胸部研磨后，按照QIAGEN DNeasy Blood& Tissue Kit说明书进行单只未知蠓基因组DNA提取，并保存至-20℃备用。
3、引物合成
本实施例所用引物如下：
正向引物：5’CAYATTCAACCWGAATGATA 3’。
反向引物：5’GGTAYWTTGCCTCGAWTTCGWTATGA 3’。
4、PCR扩增
本实施例的PCR反应体系如下：
DNA模板 1.5uL
上游引物（10uM） 1uL
下游引物（10uM） 1uL
2×PCR MasterMix 12.5uL
ddH2O 9uL
总体系 25uL
PCR反应条件：94℃预变性3 min；94℃变性30s，40℃退火60s，68℃延伸60s，循环5次；94℃变性60s，44℃退火60s，68℃延伸60s，循环35次；最后68℃延伸10min。
5、PCR产物回收
PCR产物用1%琼脂糖凝胶经120V恒压电泳25min后，在凝胶成像系统下观察电泳条带判断是否为目的条带，电泳图谱参见附图3。附图3显示实施例2的未知库蠓也能通过PCR特异性扩增出大小约为500bp的产物。对扩增效果良好的PCR产物按照琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒说明书进行PCR产物切胶纯化，-20℃保存。
6、PCR回收产物克隆和测序
PCR回收产物与p EASY-T1载体连接转化进Trans1-T1感受态细胞中进行克隆，根据蓝白斑筛选出阳性克隆后扩增，再将含阳性克隆的菌液用60%甘油保存送至生物公司进行双向测序。
本实施例的克隆反应体系如下：
DNA 0.5-4uL
p EASY-T1 Cloning Vector 1uL
ddH2O 0-3.5uL
总体系 5uL
克隆反应条件：反应体系轻轻混合，室温（20℃-37℃）反应5-10min。
7、Cytb基因序列测定
通过人工校对及生物信息学软件对未知库蠓Cytb基因序列进行比对、编辑和拼接后与SEQ ID No .1进行相似性比对，结果显示其与基因序列SEQ ID NO . 1的相似性大于98%，因而可判定该未知库蠓为刺螫库蠓。
序列表
<110> 遵义医学院
<120> 一种刺螫库蠓的特异DNA序列及其分子鉴定方法
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 500
<212> DNA
<213> 刺螫库蠓Cytb基因
<400> 1
tactttttat tcgcttatgc tattcttcga tctatcccca ataaattagg aggagtaatt 60
gccttagtca tatcaattgc aattcttttt attttacctt ttacccacaa aagaaacttt 120
cgaactttaa aattctaccc attaaataaa attttatttt gaaacttttt tattatcgta 180
ctattactaa cttgaattgg agcccgacct gtagaagacc cgtatatttt aaccggacaa 240
attttaacag ttttatattt tttctactac ttattaaatc cccttactat aaaaatatga 300
gataaaataa tttattaatc aatgagcttg aataagcata tgttttgaaa acataagata 360
aaataatttt tattgatttt tactaaaaat taatcatata attaaaataa aaattaataa 420
tttaagacta acaaataaaa ttaaaaaaca taaagaaaaa gataaataac tttttcaagc 480
taagtatatt aatttatcat 500
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 正向引物
<400> 2
cayattcaac cwgaatgata 20
<210> 3
<211> 26
<212> DNA
<213> 反向引物
<400> 3
ggtaywttgc ctcgawttcg wtatga 26

Claims (2)

1.一种刺螫库蠓的特异DNA分子，其特征在于，其序列为如下Cytb基因序列：
tactttttat tcgcttatgc tattcttcga tctatcccca ataaattagg aggagtaatt 60
gccttagtca tatcaattgc aattcttttt attttacctt ttacccacaa aagaaacttt 120
cgaactttaa aattctaccc attaaataaa attttatttt gaaacttttt tattatcgta 180
ctattactaa cttgaattgg agcccgacct gtagaagacc cgtatatttt aaccggacaa 240
attttaacag ttttatattt tttctactac ttattaaatc cccttactat aaaaatatga 300
gataaaataa tttattaatc aatgagcttg aataagcata tgttttgaaa acataagata 360
aaataatttt tattgatttt tactaaaaat taatcatata attaaaataa aaattaataa 420
tttaagacta acaaataaaa ttaaaaaaca taaagaaaaa gataaataac tttttcaagc 480
taagtatatt aatttatcat 500。
2.一种刺螫库蠓的分子鉴定方法，步骤包括：
1）从待测的蠓组织中分离提取DNA；
2）以该DNA为模板，采用的引物为：正向引物：5’CAYATTCAACCWGAATGATA 3’，反向引物：5’GGTAYWTTGCCTCGAWTTCGWTATGA 3’，通过聚合酶链式反应扩增出刺螫库蠓Cytb基因；
3）然后取适量步骤2）的聚合酶链式反应产物用琼脂糖凝胶电泳分离，根据电泳条带判断是否为目的条带，如果能特异性扩增出大小为500bp的条带，则将PCR产物切胶纯化，-20℃保存；
4）聚合酶链式反应扩增出该库蠓Cytb基因与p EASY-T1载体连接转化进Trans1-T1感受态细胞中进行克隆，根据蓝白斑筛选出阳性克隆后扩增，再将含阳性克隆的菌液用60%甘油保存送至生物公司进行双向测序；
5）通过测序结果的比对分析，如果相应Cytb基因序列与SEQ ID No .1的相似性在98%以上，即可判断所述的待测组织为刺螫库蠓。
CN201810071863.6A 2018-01-25 2018-01-25 一种刺螫库蠓的特异dna序列及其分子鉴定方法 Expired - Fee Related CN108486121B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810071863.6A CN108486121B (zh) 2018-01-25 2018-01-25 一种刺螫库蠓的特异dna序列及其分子鉴定方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810071863.6A CN108486121B (zh) 2018-01-25 2018-01-25 一种刺螫库蠓的特异dna序列及其分子鉴定方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108486121A CN108486121A (zh) 2018-09-04
CN108486121B true CN108486121B (zh) 2020-02-11

Family

ID=63343964

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810071863.6A Expired - Fee Related CN108486121B (zh) 2018-01-25 2018-01-25 一种刺螫库蠓的特异dna序列及其分子鉴定方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108486121B (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109706251B (zh) * 2019-03-13 2022-03-11 河北国际旅行卫生保健中心 一种鉴定趋黄库蠓的试剂盒及方法
CN111378764A (zh) * 2020-04-14 2020-07-07 遵义医科大学 基于物种coi基因的七种蓝舌病毒媒介库蠓物种鉴定方法

Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102687706A (zh) * 2012-05-16 2012-09-26 福建国际旅行卫生保健中心 一种毛蠓新种及其特异dna序列
CN102690829A (zh) * 2012-05-16 2012-09-26 福建国际旅行卫生保健中心 一种台湾蠛蠓dna条形码标准基因序列
CN103805609A (zh) * 2014-03-03 2014-05-21 福建国际旅行卫生保健中心 一种台湾蠛蠓分子鉴定方法
CN103952420A (zh) * 2014-01-29 2014-07-30 福建国际旅行卫生保健中心 一种毛蠓特异基因序列
CN105420399A (zh) * 2016-01-08 2016-03-23 福建国际旅行卫生保健中心 一种亚棕裸蠓的特异基因及其分子鉴定方法
CN105483261A (zh) * 2016-01-08 2016-04-13 中国检验检疫科学研究院 一种蓝腹库蠓的特异基因及其分子鉴定方法
CN105505942A (zh) * 2016-01-08 2016-04-20 福建国际旅行卫生保健中心 一种安宁铗蠓的特异基因及其分子鉴定方法
CN105543364A (zh) * 2016-01-08 2016-05-04 福建国际旅行卫生保健中心 一种泰国库蠓的特异基因及其分子鉴定方法
CN105543249A (zh) * 2016-01-08 2016-05-04 福建国际旅行卫生保健中心 一种美丽库蠓特异基因及其分子鉴定方法

Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102687706A (zh) * 2012-05-16 2012-09-26 福建国际旅行卫生保健中心 一种毛蠓新种及其特异dna序列
CN102690829A (zh) * 2012-05-16 2012-09-26 福建国际旅行卫生保健中心 一种台湾蠛蠓dna条形码标准基因序列
CN103952420A (zh) * 2014-01-29 2014-07-30 福建国际旅行卫生保健中心 一种毛蠓特异基因序列
CN103805609A (zh) * 2014-03-03 2014-05-21 福建国际旅行卫生保健中心 一种台湾蠛蠓分子鉴定方法
CN105420399A (zh) * 2016-01-08 2016-03-23 福建国际旅行卫生保健中心 一种亚棕裸蠓的特异基因及其分子鉴定方法
CN105483261A (zh) * 2016-01-08 2016-04-13 中国检验检疫科学研究院 一种蓝腹库蠓的特异基因及其分子鉴定方法
CN105505942A (zh) * 2016-01-08 2016-04-20 福建国际旅行卫生保健中心 一种安宁铗蠓的特异基因及其分子鉴定方法
CN105543364A (zh) * 2016-01-08 2016-05-04 福建国际旅行卫生保健中心 一种泰国库蠓的特异基因及其分子鉴定方法
CN105543249A (zh) * 2016-01-08 2016-05-04 福建国际旅行卫生保健中心 一种美丽库蠓特异基因及其分子鉴定方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Fano Jose＇Randrianambinintsoa等.Paraphyly of the Subgenus Sintonius (Diptera, Psychodidae, Sergentomyia): Status of the Malagasy Species. Creation of a New Subgenus and Description of a New Species.《PLOS ONE》.2014,第9卷(第6期), *
Mitochondrial haplotypes and phylogeography of Phlebotomus vectors of Leishmania major;S. Esseghir等;《Insect Molecular Biology》;19971231;第6卷(第3期);第211-225页 *
基于线粒体细胞色素 b 基因序列进行库蠓二囊亚属近缘种的分子鉴定;徐宗意等;《环境昆虫学报》;20181231;第40卷(第6期);第1210-1218页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN108486121A (zh) 2018-09-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105483261B (zh) 一种蓝腹库蠓的特异基因及其分子鉴定方法
CN105543249B (zh) 一种美丽库蠓特异基因及其分子鉴定方法
CN110607359A (zh) 一种虾夷扇贝雌性特异性标记组合及应用
CN108034733B (zh) 一种库蠓近缘种的dna条形码标准序列及其分子鉴定方法
CN108486121B (zh) 一种刺螫库蠓的特异dna序列及其分子鉴定方法
CN112159852B (zh) 一种黄姑鱼性染色体特异分子标记、检测引物和试剂盒，及其用途
CN109880893A (zh) 用于丝尾鱯性别鉴定的特异性dna片段及应用
CN112746070A (zh) 用于鸡早期性别鉴定的引物对、试剂盒以及它们的应用
CN110541035A (zh) 一种中华倒刺鲃dna条形码序列及其应用
CN108486122A (zh) 一种南山库蠓的dna条形码标准序列及其分子鉴定方法
CN114438222B (zh) 一种中华绒螯蟹的性别鉴定特异性dna序列及性别鉴定方法
CN107988232A (zh) 一种原野库蠓的dna条形码标准序列及其分子鉴定方法
CN112695101A (zh) 一种鹌鹑早期性别鉴定的方法以及配套试剂盒和专用引物对
CN113637766A (zh) 与大口黑鲈遗传性别鉴定相关的InDel分子标记及其应用
CN111172298B (zh) 一种基于物种coi基因的吸血蠓寄主鉴定方法
CN107523577B (zh) 一种鉴定疖蝙蛾的特异性dna序列
CN109706251B (zh) 一种鉴定趋黄库蠓的试剂盒及方法
CN110878308A (zh) 端斑库蠓的特异基因及其双分子标记鉴定方法
CN113604582B (zh) 一种淡足侧沟茧蜂dna条形码序列及其应用
CN110004232A (zh) 东方库蠓的特异基因、鉴定东方库蠓的试剂盒及方法
CN118028484B (zh) 用于中华鲟遗传性别鉴定的dna片段、引物组、试剂盒及应用
Rajgopal et al. Molecular identification of fly maggots recovered from corpses during death scene investigation in Malaysia
KR100992989B1 (ko) 신규 프라이머 세트 및 이를 이용한 한우 판별방법
KR100974644B1 (ko) 신규 프라이머 세트 및 이를 이용한 한우 판별방법
KR100974645B1 (ko) 신규 프라이머 세트 및 이를 이용한 한우 판별방법

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20200211

Termination date: 20220125