CN108338160A - 一种毛囊保存液及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种毛囊保存液及其制备方法,包括步骤:1)取20~40g琥珀酰明胶、100~120mmol钾盐、20~50mmol磷酸二氢钾、0~12mmol氢氧化钠、0~60mmol糖、5~10mg维生素B2、50~100mg维生素B6、1~3g维生素C作为溶质;2)将上述溶质加入蒸馏水中配置成总体积1000mL的溶剂;3)将上述溶剂经灭菌达医用级即得所述毛囊保存液;本发明的保存液能够明显延长毛囊的离体存活时间,为大数量毛发移植提供了科学有效的技术支持。
Description
技术领域
本发明涉及医疗技术领域,尤其涉及一种毛囊保存液及其制备方法。
背景技术
1897年人类首次成功将头皮组织移植到外伤导致颅骨裸露部位,这被认定为最初的毛囊移植。自此毛发移植经历了从皮瓣移植到单个毛囊移植的过程,期间手术技术及理念已有很大进步。毛囊移植数量越来越大且手术时间越来越长,但目前临床工作中毛囊离体后仍然放在生理盐水或低温生理盐水中保存,保存理念仍然停留在皮肤移植状态,已经不能满足目前临床手术需要。这种方法保存毛囊局限性较大,保存时间短(临床中不能超过6小时),不利于大数量毛囊单位移植的开展(目前毛囊移植数量往往超过3000FU,手术时间超过6小时),不利于移植术后成活率的提高。因此,临床上就需要一种专门的有效的毛囊保存液为现代毛囊移植术保驾护航。
发明内容
本发明的目的在于针对目前临床现有毛囊保存技术的不足,提供一种专门有效的毛囊保存液,该保存液延长了毛囊单位的离体时间,为临床医生争取了宝贵的手术时间,为大数量毛发移植的开展提供了科学有效的技术支持,使该类手术能够在一个宽松安全的环境下顺利完成,进一步提高离体毛囊移植后的成活率。
本发明的技术方案是:
一种毛囊保存液,包括下列浓度的骨架主干组分:
作为上述技术方案的改进,所述毛囊保存液,还包括下列浓度的辅助部分组分:
维生素B2 5~10 mg/L、
维生素B6 50~100mg/L、
维生素C 1~3g/L。
作为优选的技术方案,所述钾盐为氯化钾、葡萄糖酸钾或海藻糖酸钾中的一种。
作为优选的技术方案,所述糖为葡萄糖或海藻糖中的一种。
作为优选的技术方案,所述毛囊保存液PH值为7.0±0.2。
作为优选的技术方案,所述毛囊保存液渗透压为310mmol/L±20mmol/L。
本发明还提供一种制备所述毛囊保存液的方法,包括步骤:
1)取20~40g琥珀酰明胶、100~120mmol钾盐、20~50mmol磷酸二氢钾、0~12mmol氢氧化钠、0~60mmol糖、5~10mg维生素B2、50~100mg维生素B6、1~3g维生素C作为溶质;
2)将上述溶质加入蒸馏水中配置成总体积1000mL的溶剂;
3)将上述溶剂经灭菌达医用级即得所述毛囊保存液。
作为优选的技术方案,所述钾盐为氯化钾、葡萄糖酸钾或海藻糖酸钾中的一种。
作为优选的技术方案,所述糖为葡萄糖或海藻糖中的一种。
本发明组分中:
琥珀酰明胶、钾盐、磷酸二氢钾、糖,分别提供不同大小分子量的渗透压,减少低温保存导致的细胞内水肿,防止灌注保存过程中细胞间肿胀。
磷酸二氢钾,氢氧化钠,起到缓冲对的作用,调节酸碱平衡,调节PH值,防止细胞酸化。
维生素B6、维生素B2、维生素C,起到防止氧自由基损伤的作用。
合理的钾离子、钠离子浓度加上合理的渗透压浓度以及合理的PH值为细胞内环境的稳定提供了必要条件。
低温保存降低了细胞的能耗,延长毛囊保存时间,但会加剧细胞内水肿(细胞内水肿较细胞间水肿对细胞损伤大),本方案合理的物质组合及合理的浓度配比能明显减轻细胞内水肿和细胞间水肿,反复多组电子显微镜下观察得到证明,临床中上千个毛囊自体移植证明有效。
本发明的毛囊保存液具有以下优点:
(1)减少低温保存导致的细胞内水肿;
(2)防止细胞酸化;
(3)防止灌注保存过程中细胞间肿胀;
(4)防止氧自由基的损伤;
(5)保持细胞内环境的稳定。
相对于现有技术中的毛囊保存液(常温生理盐水,应用温度18-22摄氏度;低温生理盐水,应用温度4-8摄氏度);本发明的保存液能够明显延长毛囊的离体存活时间,为大数量毛发移植科学提供有效的技术支持。
由于采用了上述技术方案,一种毛囊保存液及其制备方法,包括步骤:1)取20~40g琥珀酰明胶、100~120mmol钾盐、20~50mmol磷酸二氢钾、0~12mmol氢氧化钠、0~60mmol糖、5~10mg维生素B2、50~100mg维生素B6、1~3g维生素C作为溶质;2)将上述溶质加入蒸馏水中配置成总体积1000mL的溶剂;3)将上述溶剂经灭菌达医用级即得所述毛囊保存液;本发明的保存液能够明显延长毛囊的离体存活时间,为大数量毛发移植科学有效的技术支持。
附图说明
为了更清楚地说明本发明,下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动性的前提下,还可以如这些附图获得其它的附图。
图1是本发明电镜下所见:A组为本发明毛囊保存液(基础方案),保存条件温度4-8℃;B组为常温生理盐水,保存条件温度18-22℃;C组为低温生理盐水,保存条件温度4-8℃;毛囊在三组保存液中分别于4小时、8小时、12小时、24小时取样固定送电子显微镜下观察的观察图;
图2是本发明(毛囊保存液基础方案)的甲、乙、丙、丁、戊各衍生方案,保存条件温度4-8℃;毛囊在五组保存液分别于4小时、8小时、12小时、24小时取样固定送电子显微镜下观察的观察图。
具体实施方式
一种毛囊保存液,包括下列浓度的骨架主干组分:
所述毛囊保存液,还包括下列浓度的辅助部分组分:
维生素B2 5~10mg/L、
维生素B6 50~100 mg/L、
维生素C 1~3g/L。
所述钾盐为氯化钾、葡萄糖酸钾或海藻糖酸钾中的一种。
所述糖为葡萄糖或海藻糖中的一种。
所述毛囊保存液PH值为7.0±0.2。
所述毛囊保存液渗透压为310mmol/L±20mmol/L。
本发明还提供一种制备所述毛囊保存液的方法,包括步骤:
1)取20~40g琥珀酰明胶、100~120mmol钾盐、20~50mmol磷酸二氢钾、0~12mmol氢氧化钠、0~60mmol糖、5~10mg维生素B2、50~100mg维生素B6、1~3g维生素C作为溶质;
2)将上述溶质加入蒸馏水中配置成总体积1000mL的溶剂;
3)将上述溶剂经灭菌达医用级即得所述毛囊保存液。
所述钾盐为氯化钾、葡萄糖酸钾或海藻糖酸钾中的一种。
所述糖为葡萄糖或海藻糖中的一种。
实施例一:
基础方案:
上述溶质用注射用水(蒸馏水)为溶剂配制成总体积:1000mL;PH值:7.0±0.2;渗透压:310mmol/L±20mmol/L;应用温度为4-8摄氏度;配方液经灭菌达医用级。
优点:经济、有效、可行。
缺点:高糖、高氯。
实施例二:
甲型衍生方案:
上述溶质用注射用水(即蒸馏水、纯净水)为溶剂配制成总体积:1000mL;PH值:7.0±0.2;渗透压:310mmol/L±20mmol/L;应用温度为4-8摄氏度;配方液经灭菌达医用级
优点:有效、可行、不含氯。
缺点:高糖。
实施例三:
乙型衍生方案:
上述溶质用注射用水(即蒸馏水、纯净水)为溶剂配制成总体积:1000mL;PH值:7.0±0.2;渗透压:310mmol/L±20mmol/L;应用温度为4-8摄氏度;配方液经灭菌达医用级。
优点:有效、可行、效果好。
缺点:高糖、经济成本偏高。
实施例四:
丙型衍生方案:
上述溶质用注射用水(即蒸馏水、纯净水)为溶剂配制成总体积:1000mL;PH值:7.0±0.2;渗透压:310mmol/L±20mmol/L;应用温度为4-8摄氏度;配方液经灭菌达医用级。
优点:有效、可行、不含葡萄糖。
缺点:高氯、经济成本偏高。
实施例五:
丁型衍生方案:
上述溶质用注射用水(即蒸馏水、纯净水)为溶剂配制成总体积:1000mL;PH值:7.0±0.2;渗透压:310mmol/L±20mmol/L;应用温度为4-8摄氏度;配方液经灭菌达医用级。
优点:有效、可行、效果好。
缺点:高糖、经济成本偏高。
实施例六:
戊型衍生方案:
上述溶质用注射用水(即蒸馏水、纯净水)为溶剂配制成总体积:1000mL;PH值:7.0±0.2;渗透压:310mmol/L±20mmol/L;应用温度为4-8摄氏度;配方液经灭菌达医用级。
优点:有效、可行、效果好。
缺点:经济成本高。
下面分别从实验室观察和临床实践两方面来证明本申请技术优越性。
实验室观察:
电镜下不同毛囊保存液对毛囊保存效果的观察。
目的:设计一种专门针对毛囊具有有效保护作用的保存液。
方法:通过电镜观察人毛囊离体后分别在三种不同保存液(ABC三组)中不同时间点毛囊组织细胞形态学变化,比较哪种保存方法较优。
结果:B组(常温生理盐水)和C组(低温生理盐水)在毛囊离体8小时后毛囊组织细胞形态学发生明显变化,出现细胞崩解坏死。而A组(毛囊保存液基础方案)在毛囊离体12小时没有出现细胞崩解坏死,24小时后出现细胞崩解坏死。A组保存效果明显优于B组和C组。
结论:目前临床上用生理盐水或低温生理盐水保存离体毛囊,但是这两种方法保存时间较短局限性较大,不利于大数量毛囊单位移植,更是不利于术后毛囊成活。A组毛囊保存液能明显延长毛囊离体时间,减轻毛囊组织细胞水肿,提高术后成活率,是一种有效的离体毛囊保存液。
材料和方法:
(1)人离体毛囊制备:志愿者,男性28岁,诊断:雄性脱发3级。选取后枕部优势供区内毛囊为供体毛囊,采用FUE技术(毛囊单位提取术)提取,毛囊离体后分别放入相应保存液中保存备用。
(2)分组:A组为本申请毛囊保存液(毛囊保存液基础方案),保存条件温度4-8℃;B组为常温生理盐水,保存条件温度18-22℃;C组为低温生理盐水,保存条件温度4-8℃。离体毛囊在三组保存液中分别于4小时、8小时、12小时、24小时取样固定送电子显微镜下观察。
(3)透射样品制样:分别于三组保存液中不同时间点提取离体毛囊→3.5%戊二醛,前固定→1%饿酸后固定→酒精→丙酮逐级梯度脱水→Epon-618渗透→包埋→半薄切片→光镜选区定位→修块→Leica-R型超薄切片机切片→柠檬酸铅,醋酸铀双染色→JEM-1011透射电镜观察→摄片。
(4)取样切片部位:切片取样为毛囊中上1/3部,相当于立毛肌附着处。
表一(JEM-1011透射电镜所见)
临床实践:
不同毛囊保存液对毛囊保存效果的临床观察。
目的:通过临床实践观察,对比三种毛囊保存液的临床保存效果。
方法:通过临床实践观察对比毛囊在三种保存液(ABC三组)中保存一段时间后行自体毛囊移植,观察移植后不同时间段移植毛发生长情况,比较哪种保存方法较优。
分组情况:
B1毛囊(常温生理盐水,应用温度为18-22摄氏度)保存4小时后行自体毛发移植移植;
C1毛囊(低温生理盐水,应用温度为4-8摄氏度)保存4小时后行自体毛发移植移植;
A1毛囊(本申请毛囊保存液基础方案,应用温度为4-8摄氏度)保存12小时后行自体毛发移植移植;
备注:B组、C组在临床运用中保存时间不超过6小时,一般在4小时以内,安全起见选定为4小时。A组已有实验室证据支持,选定12时是安全的,同时已经能充分说明其保存效果的优越性与否。
结果:在移植术后12月内,不管是术后一周、术后脱落期、术后休止期、术后生长期、术后12个月终点观察时点,三组移植物生长情况无明显差别。
结论:目前临床上用生理盐水或低温生理盐水保存离体毛囊,但是这两种方法保存时间较短(临床中不能超过6小时),局限性较大,不利于大数量毛囊单位移植,更是不利于术后毛囊成活。A组毛囊保存液能明显延长毛囊离体时间,提高术后成活率,是一种有效的离体毛囊保存液。
材料和方法:
(1)人离体毛囊制备:志愿者,男性28岁,诊断:雄性脱发3级。选取后枕部优势供区内毛囊为供体毛囊,采用FUE技术(毛囊单位提取术)提取,毛囊离体后分别放入相应保存液中保存备用。
(2)分组:
B1毛囊离体(常温生理盐水)保存4小时后行自体毛发移植移植,种植于左侧额角;
C1毛囊离体(低温生理盐水)保存4小时后行自体毛发移植移植,种植于前核心区;
A1毛囊离体(本申请毛囊保存液基础方案)保存12小时后行自体毛发移植移植,种植于右侧额角;
观察术后12月内不同时期移植毛发生长情况。
自体毛发移植术后可以分为以下几个时期:
(1)围手术期:术后一周左右,移植物建立新的血供,种植区可以清点移植发数量;
(2)术后脱落期:移植术后2周后开始,持续3个月左右,移植发陆续脱落,但患者不同脱落期表现不尽相同,在此时期清点移植发数量无可比性;
(3)术后休止期:在术后3-6月,移植物生长慢或进入休止状态,在此时期清点移植发数量无可比性;
(4)术后生长期:一般情况下移植发在术后6月后开始明显生长,但因患者个体差异有所不同,在此时期清点移植发数量亦无可比性;
(5)观察终点:自体毛发移植术后从术后脱落期到术后生长期因患者个体差异临床表现有所不同,但术后12月可以看到自体毛发移植的最终效果并可以清点移植发数量,量化移植效果,故以术后12月为观察终点,
取离体毛囊分三组,A1组488个毛囊,B1组468个毛囊,C1组256个毛囊,分别用不同方法保存,离体一段时间后作为供体行自体毛囊移植术。
具体如下:
A1毛囊离体(本申请毛囊保存液基础方案,应用温度为4-8摄氏度)保存12小时后行自体毛发移植移植;
B1毛囊离体(常温生理盐水,应用温度为18-22摄氏度)保存4小时后行自体毛发移植移植;
C1毛囊离体(低温生理盐水,应用温度为4-8摄氏度)保存4小时后行自体毛发移植移植;
A1组种植在右侧额角脱发区;B1组种植在左侧额角脱发区;C1组种植在前核心区脱发区。
观察术后不同时段:术后一周,术后脱落期,术后休止期,术后生长期,术后12个月观察终点。
表二
统计学方法:采用Spss11.5统计软件,多组比较采用x2检验,P>0.05差别无意义;P<0.05差别有意义。
表三
组别 | 未成活量(个) | 成活数量(个) | 总种植量(个) | 成活率(%) |
A1组 | 17 | 471 | 488 | 0.965 |
B1组 | 15 | 443 | 458 | 0.967 |
C1组 | 11 | 245 | 256 | 0.957 |
合计 | 33 | 1159 | 1202 | 0.963 |
统计结果:P>0.05(三组成活率差别无意义)
通过一年的临床观察可以看到:常温生理盐水或低温生理盐水保存离体毛囊4小时和本申请毛囊保存液保存12小时,移植后临床效果无明显区别。毛囊保存液基础方案保存离体毛囊12小时可以跟常温生理盐水或低温生理盐水保存离体毛囊4小时,移植后临床效果媲美。
临床观察结果:在移植术后12月内,不管是术后一周,术后脱落期,术后休止期,术后生长期,术后12个月终点观察时点,三组移植物生长情况无明显差别,从而说明毛囊保存液基础方案保存毛囊效果明显好于其他两组。
结论:目前临床上毛发移植手术以FUE手术为主,手术技术及理念较之前已有很大进步。毛囊移植数量越来越大且手术时间越来越长,但目前临床工作中毛囊离体后仍然放在生理盐水或低温生理盐水中保存,保存理念仍然停留在皮肤移植状态,已经不能满足目前临床手术需要。这种方法保存毛囊局限性较大,保存时间短(临床中不能超过6小时),不利于大数量毛囊单位移植的开展(目前毛囊移植数量往往超过3000FU,手术时间超过6小时),不利于移植术后成活率的提高。因此,临床上就需要一种专门的有效的毛囊保存液为现代毛囊移植术保驾护航。毛囊保存液的出现能明显延长毛囊离体时间,充分满足目前毛发移植临床需要,弥补了目前毛发移植临床工作中的短板,是一种有效可行的毛囊保存液。
上述为横向对比(不同保存液间比较)。
下述为纵向对比(同一系列内不同方案比较)。
方法如下:
比较同一系列方案内不同子方案保存毛囊效果是否有明显差异。
目的:通过临床毛发移植观察毛囊保存液同一系列不同方案保存效果有何不同
方法:六组临床自体毛发移植术以不同保存方案保存毛囊12小时后行移植手术,观察术后12月成活率差别是否有意义。
统计学方法:采用Spss11.5统计软件,多组比较采用x2检验,P>0.05差别无意义;P<0.05差别有意义。
基础方案组分别与衍生方案甲、乙、丙、丁、戊组比较:
分组 | 种植总数量(个) | 成活数量(个) | 未成活量(个) | 成活率(%) |
基础方案 | 1560 | 1502 | 58 | 0.962 |
衍生方案甲 | 2208 | 2118 | 90 | 0.959 |
衍生方案乙 | 2510 | 2413 | 97 | 0.961 |
衍生方案丙 | 1855 | 1787 | 68 | 0.963 |
衍生方案丁 | 2357 | 2260 | 97 | 0.958 |
衍生方案戊 | 2550 | 2449 | 101 | 0.960 |
合计 | 13040 | 12529 | 511 | 0.960 |
结果:
(1)基础方案组分别与衍生方案甲、乙、丙、丁、戊组比较:
基础方案与衍生方案甲两两比较:P>0.05差别无意义;
基础方案与衍生方案乙两两比较:P>0.05差别无意义;
基础方案与衍生方案丙两两比较:P>0.05差别无意义;
基础方案与衍生方案丁两两比较:P>0.05差别无意义;
基础方案与衍生方案戊两两比较:P>0.05差别无意义。
(2)6组方案间比较:P>0.05差别无意义。
结论:通过纵向对比(同一系列内不同方案间比较)可以肯定:基于基础方案衍生出甲乙丙丁戊五组方案,它们保存毛囊12小时效果好且各组效果差异不大,都很有效。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征及本发明的优点。本行业的技术人员应该了解,本发明不受上述实施例的限制,上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理,在不脱离本发明精神和范围的前提下,本发明还会有各种变化和改进,这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
Claims (9)
1.一种毛囊保存液,其特征在于,包括下列浓度的骨架主干组分:
2.如权利要求1所述的毛囊保存液,其特征在于,还包括下列浓度的辅助部分组分:
维生素B2 5~10mg/L、
维生素B6 50~100mg/L、
维生素C 1~3g/L。
3.如权利要求1所述的毛囊保存液,其特征在于:所述钾盐为氯化钾、葡萄糖酸钾或海藻糖酸钾中的一种。
4.如权利要求1所述的毛囊保存液,其特征在于:所述糖为葡萄糖或海藻糖中的一种。
5.如权利要求1所述的毛囊保存液,其特征在于:所述毛囊保存液PH值为7.0±0.2。
6.如权利要求1所述的毛囊保存液,其特征在于:所述毛囊保存液渗透压为310mmol/L±20mmol/L。
7.一种制备如权利要求1至6任意一项所述的毛囊保存液的方法,其特征在于,包括步骤:
1)取20~40g琥珀酰明胶、100~120mmol钾盐、20~50mmol磷酸二氢钾、0~12mmol氢氧化钠、0~60mmol糖、5~10mg维生素B2、50~100mg维生素B6、1~3g维生素C作为溶质;
2)将上述溶质加入蒸馏水中配置成总体积1000mL的溶剂;
3)将上述溶剂经灭菌达医用级即得所述毛囊保存液。
8.如权利要求8所述的制备毛囊保存液的方法,其特征在于:所述钾盐为氯化钾、葡萄糖酸钾或海藻糖酸钾中的一种。
9.如权利要求8所述的制备毛囊保存液的方法,其特征在于:所述糖为葡萄糖或海藻糖中的一种。
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2018
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