CN108333347A - 抗核抗体靶抗原偶联物试剂、其制备方法、包含其的试剂盒及应用 - Google Patents

抗核抗体靶抗原偶联物试剂、其制备方法、包含其的试剂盒及应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种抗核抗体靶抗原偶联物试剂、其制备方法、包含其的试剂盒及应用。其中，抗核抗体靶抗原偶联物试剂包括抗原‑磁性微球偶联物，抗原‑磁性微球偶联物包括细胞提取物靶抗原包被磁性微球形成的第一偶联物以及纯化靶抗原包被磁性微球形成的第二偶联物。通过将自身免疫性疾病相关的多种纯化靶抗原包被磁性微球，并辅以包被细胞提取物的磁性微球，这样形成的抗核抗体靶抗原与磁球的偶联物，与单纯用混合的纯化靶抗原包被磁性微球的偶联物相比，具有更完整的抗原谱，能够提高阳性检出率，具有更好的临床检测灵敏度。与单纯包被细胞提取物的偶联物相比，能够极大地降低非特异性，提高检测特异性、灵敏度以及阳性检出率，同时减少假阳性。

Description

抗核抗体靶抗原偶联物试剂、其制备方法、包含其的试剂盒及 应用
技术领域
本发明涉及抗核抗体检测领域，具体而言，涉及一种抗核抗体靶抗原偶联物试剂、其制备方法、包含其的试剂盒及应用。
背景技术
抗核抗体(antinuclear antibody，ANA)又称抗核酸抗原抗体，是一组将自身真核细胞的各种成分脱氧核糖核蛋白(DNP)、DNA、可提取性核抗原(ENA)和RNA等作为靶抗原的自身抗体的总称。传统定义是将针对细胞核内成分的抗体称为ANA，广义定义是针对细胞内所有抗原成分的自身抗体的总称。现在对ANA靶抗原的理解不再仅仅局限于核成分，已从细胞核扩大到整个细胞，包括细胞核、细胞浆、细胞骨架等，一些ANA靶抗原成分(如SSA/RO、Jo-1、rRNP等)在核仁和胞浆内比核质内更丰富。ANA能与所有动物的细胞核发生反应，主要存在于血清中，也可存在于胸水、关节滑膜液和尿液中。抗核抗体的抗体主要为IgG型，也见于IgM、IgA，甚至LgD及LgE中。
自身抗体的产生是自身免疫性疾病的基本特征之一，因而，自身抗体本身就成为大多数自身免疫性疾病的血清学标志物。现阶段，研究发现与ANA相关的自身免疫性疾病主要包括系统性红斑狼疮、混合型结缔组织疾病、干燥综合征、局限性系统硬化症、弥散性系统硬化症、多肌炎、皮肌炎和原发性胆汁性肝硬化，其中研究比较清楚与上述疾病密切相关的主要包括Sm/RNP、Sm、SSA、SSB、Scl-70、Jo-1、CENP B、dsDNA、核小体、组蛋白抗原、核糖体P蛋白和线粒体等靶抗原对应的抗体，随着新的与疾病相关的抗核抗体被鉴定而不断完善。ANA靶抗原主要是通过Hep-2或HeLa细胞提取，猪心组织或小牛胸腺组织提取，或者重组表达获得。
由于细胞核中存在至少上百种ANA相对应的靶抗原，因此，ANA的检测非常复杂，在与ANA相关的自身免疫性疾病检测中，试剂的检测灵敏度和特异性对于临床疾病的诊断与判断具有重要意义。ANA的检测特异性与检测灵敏度与检测方法和核抗原的制备方法密切相关。
目前，临床检测抗核抗体的常见方法主要包括间接免疫荧光法、免疫印迹法、斑点免疫结合法、酶联免疫吸附法、化学发光法等。现阶段间接免疫荧光发依然是ANA筛查金标准，一般通过将鼠肝细胞或者Hep-2细胞切片固定在载玻片作为靶抗原，Hep-2细胞具有核抗原丰富、特异性强、含量高等特征。使用Hep-2细胞制备的抗原片可以检测出一些鼠肝(肾)切片呈阴性或反应弱的样本，较传统的鼠肝(肾)切片具有更好的检测灵敏度。但该方法还处于最开始的间接免疫荧光技术，很难定量检测，也容易出现假阳性，检测灵敏度和特异性还有待提高，另外难以标准化和自动化。
比如，现有技术有报道：通过显微图像灰度分析经过间接免疫荧光反应的Hep-2细胞核荧光片强度来表征人血清中均质性或斑点型抗核抗体的浓度。该方法能够很大程度上消除实验操作者判断的主观因素和检测仪器差异性带来的负面影响，从而使检测结果更精确和客观可行。但该方法使用间接免疫荧光技术，检测灵敏度和特异性还有待提高。
酶联免疫吸附法、免疫印记法和斑点免疫结合法近些年在ANA检测中越来越广泛，该方法基本都是将多种纯抗原包被于为微孔板或者纤维膜上，该方法可以避免细胞质各种干扰，较间接免疫荧光发特异性更好，但是同样存在操作繁琐，准确度和精密度较差，检测项目组合有限，难以实现自动化和高通量检测以及阳性检出率偏低的缺陷。
比如，现有技术还公开了一种利用免疫印迹法检测自身免疫性疾病相关抗核抗体谱的试剂盒及制备方法，该方法在硝酸纤维膜或尼龙膜条上平行固定15或17种天然或重组抗原，具有检测灵敏度高，特异性强，准确性好等优点。但是该方法膜条固定抗原并非完整抗原谱，因此，检测率会较较间接免疫荧光法低，临床检测灵敏度还有待提高。
综上可知，临床检测常用的间接免疫荧光法很难定量检测，检测灵敏度较低，也容易出现假阳性，存在检测时间长，结果判断难，也难以标准化和自动化。此外，虽然靶抗原为全抗原谱，但是无法解决Hep2细胞裂解物中部分靶抗原含量极低，从而导致漏检，也无法避免细胞裂解物中细胞质等一些物质的干扰，从而容易导致假阳性。临床检测灵敏度和特异性均有待提高。而酶联免疫吸附法、免疫印记法和斑点免疫结合法基本都是将多种天然或重组纯抗原包被于为微孔板或者纤维膜条上，这些方法可以避免细胞质各种干扰，相较间接免疫荧光发特异性更好，但是同样存在操作繁琐，准确度和精密度较差，难以自动化和高通量检测的缺陷。而且，还容易出现部分阳性样本漏检，因而临床检测灵敏度还有待提高。
发明内容
本发明的主要目的在于提供一种抗核抗体靶抗原偶联物试剂、其制备方法、包含其的试剂盒及应用，以解决现有技术中的抗核抗体检测灵敏度相对较低的问题。
为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种抗核抗体靶抗原偶联物试剂，该抗核抗体靶抗原偶联物试剂包括抗原-磁性微球偶联物，其中抗原-磁性微球偶联物包括：细胞提取物靶抗原包被磁性微球形成的第一偶联物，以及纯化靶抗原包被磁性微球形成的第二偶联物。
进一步地，第一偶联物中，细胞提取物靶抗原为HepG2细胞裂解抗原、Hep2细胞裂解抗原或Hela细胞裂解抗原中的任意一种；优选地，细胞提取物靶抗原与磁性微球的质量比为：70～200μg：1mg。
进一步地，第二偶联物中，纯化靶抗原为天然抗原、重组抗原或合成肽中的任意一种或多种；优选地，纯化靶抗原包括双链DNA抗原、组蛋白抗原、核糖体P蛋白抗原、核糖核蛋白抗原、Smith抗原、干燥综合征A抗原、干燥综合征B抗原、DNA拓扑异构酶-I抗原、组氨酰转运RNA合成酶抗原、着丝粒抗原、线粒体抗原及核小体抗原；更优选地，双链DNA抗原：组蛋白抗原：核糖体P蛋白抗原：核糖核蛋白抗原：Smith抗原：干燥综合征A抗原：干燥综合征B抗原：DNA拓扑异构酶-I抗原：组氨酰转运RNA合成酶抗原：着丝粒抗原：线粒体抗原：核小体抗原：磁性微球的质量比为0.5～0.7μg：0.4～0.6μg：0.7～0.9μg：0.9～1.1μg：0.9～1.1μg：1.6～2μg：1.2～1.4μg：0.9～1.1μg：1.6～2μg：1.4～1.6μg：0.9～1.1μg：0.3～0.5μg：1mg。
进一步地，抗原-磁性微球偶联物中，第一偶联物与第二偶联物的体积比为1:3～6。
进一步地，抗核抗体靶抗原偶联物试剂为悬浮液，悬浮液还包括磷酸盐缓冲液，优选磷酸盐缓冲液的pH值为7.5，更优选磷酸盐缓冲液与抗原-磁性微球偶联物的体积比为10～30:1。
进一步地，磁性微球为Fe2O3或Fe3O4磁性纳米粒子与有机高分子材料的复合体，优选磁性微球的粒径为0.1～5μm。
根据本发明的第二个方面，提供了一种抗核抗体检测试剂盒，该试剂盒包括抗核抗体靶抗原，其中，抗核抗体靶抗原为上述任一种抗核抗体靶抗原偶联物试剂。
进一步地，抗核抗体靶抗原偶联物试剂的浓度为0.5～2mg/mL；优选地，试剂盒还包括校准品、质控品、发光标记物标记的抗人免疫球蛋白抗体、试剂缓冲液以及样本稀释液中的任意一种或多种；更优选地，发光标记物为鲁米诺、异鲁米诺、异鲁米诺衍生物、辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶，抗人免疫球蛋白抗体为抗人IgA、抗人IgM、抗人IgG、抗人LgD或抗人LgE中的一种或多种；更优选地，试剂缓冲液为Tris-HCl缓冲液、磷酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液或硼酸盐缓冲液；更优选地，样本稀释液为磷酸盐缓冲液、Tris-HCl缓冲液、碳酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液或生理盐水。
根据本发明的第三个方面，提供了一种抗核抗体靶抗原偶联物试剂的制备方法，该制备方法包括：将细胞提取物靶抗原与第一部分磁性微球进行偶联，形成包被第一部分磁性微球的第一偶联物；以及将纯化靶抗原与第二部分磁性微球进行偶联，形成包被第二部分磁性微球的第二偶联物。
进一步地，细胞提取物靶抗原与第一部分磁性微球的质量比为：70～200μg：1mg；优选地，细胞提取物靶抗原为HepG2细胞裂解抗原、Hep2细胞裂解抗原或Hela细胞裂解抗原中的任意一种；优选地，纯化靶抗原为天然抗原、重组抗原或合成肽中的任意一种或多种；更优选，纯化靶抗原包括双链DNA抗原、组蛋白抗原、核糖体P蛋白抗原、核糖核蛋白抗原、Smith抗原、干燥综合征A抗原、干燥综合征B抗原、DNA拓扑异构酶-I抗原、组氨酰转运RNA合成酶抗原、着丝粒抗原、线粒体抗原及核小体抗原；进一步优选地，双链DNA抗原：组蛋白抗原：核糖体P蛋白抗原：核糖核蛋白抗原：Smith抗原：干燥综合征A抗原：干燥综合征B抗原：DNA拓扑异构酶-I抗原：组氨酰转运RNA合成酶抗原：着丝粒抗原：线粒体抗原：核小体抗原：第二部分磁性微球的质量比为0.5～0.7μg：0.4～0.6μg：0.7～0.9μg：0.9～1.1μg：0.9～1.1μg：1.6～2μg：1.2～1.4μg：0.9～1.1μg：1.6～2μg：1.4～1.6μg：0.9～1.1μg：0.3～0.5μg：1mg。
进一步地，在得到第一偶联物和第二偶联物之后，上述制备方法还包括：将第一偶联物与第二偶联物进行混合，得到混合物的步骤；优选地，第一偶联物与第二偶联物混合的体积比为1:3～6；更优选地，在得到混合物的步骤后，上述制备方法进一步包括：利用磷酸盐缓冲液将混合物制备成悬浮液的步骤；优选地，选磷酸盐缓冲液的pH值为7.5，更优选磷酸盐缓冲液与混合物的体积比为10～30:1。
进一步地，在进行偶联的步骤之前，上述制备方法还包括对磁性微球进行活化的步骤，优选对磁性微球进行活化的步骤包括：将磁性微球与N-羟基琥珀酰亚胺溶液在交联剂的作用下进行反应，得到活化的磁性微球；优选地，磁性微球、N-羟基琥珀酰亚胺溶液和交联剂溶液的用量比例为10～30mg：0.1～0.2mL：0.1～0.2mL；优选地，磁性微球为Fe2O3或Fe3O4磁性纳米粒子与有机高分子材料的复合体，更优选磁性微球的粒径为0.1～5μm，进一步优选磁性微球的浓度为10～30mg；优选地，交联剂为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺或1-环己基-3-(2-吗啉代乙基)-碳二亚胺对甲苯甲磺酸；更优选地，交联剂溶液的浓度为5～10mg/mL；更优选地，N-羟基琥珀酰亚胺溶液的浓度为5～10mg/mL。
根据本发明的第四个方面，提供了一种抗核抗体的检测方法，该检测方法包括利用抗核抗体靶抗原通过化学发光免疫法检测待测样品中的抗核抗体的浓度的步骤，其中，抗核抗体靶抗原采用上述任一种抗核抗体靶抗原偶联物试剂。
根据本发明的第五个方面，提供了上述任一种抗核抗体靶抗原偶联物试剂或上述任一种抗核抗体靶抗原偶联物试剂盒或由上述任一种抗核抗体靶抗原偶联物试剂的制备方法制备得到的抗核抗体靶抗原偶联物试剂在抗核抗体筛查临床检测中的应用。
进一步地，该应用包括对系统性红斑狼疮、混合性结缔组织疾病、干燥综合征、多肌炎、皮肌炎、系统性硬皮病以及原发性胆汁肝硬化中的任意一种或多种疾病的临床辅助诊断。
根据本发明的第六个方面，提供了上述任一种抗核抗体检测试剂盒在抗核抗体检测中的应用，该应用包括：将抗核抗体检测试剂盒应用于半自动免疫分析仪或全自动免疫分析仪。
应用本发明的技术方案，通过将自身免疫性疾病相关的多种纯化靶抗原包被磁性微球，另外辅以包被细胞提取物的磁性微球，这样所形成的抗核抗体靶抗原与磁球的偶联物与单纯用纯化抗原混合包被磁性微球的偶联物相比，具有更完整的抗原谱，能够一定程度上提高阳性检出率，具有更好的临床检测灵敏度；而与单纯包被细胞提取物的偶联物相比，能够极大的降低非特异，提高检测特异性以及检测灵敏度，提高阳性检出率，同时减少假阳性。
具体实施方式
需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将结合实施例来详细说明本发明。
本申请中的名词解释：
ANA：抗核抗体
靶抗原：与抗核抗体相对应的特异性抗原
dsDNA antigen：双链DNA抗原
Histones antigen：组蛋白抗原；
Ribosomal P antigen：核糖体P蛋白抗原；
Sm/RNP antigen：核糖核蛋白抗原；
Sm antigen：Smith抗原
SSA antigen：干燥综合征A抗原；
SSB antigen：干燥综合征B抗原；
Scl-70 antigen：DNA拓扑异构酶-I抗原；
Jo-1 antigen：组氨酰转运RNA合成酶抗原；
Centromeres antigen：着丝粒抗原；
Mitochondrial antigen：线粒体抗原；
Nucleosome antigen：核小体抗原；
自身免疫性疾病是由于免疫功能紊乱，机体产生针对自身抗原的病理性免疫应答反应而引起器官或系统损伤的一类疾病。目前，对于自身免疫性疾病的发病机制尚不完全清楚。一般认为自身免疫性疾病是遗传易感个体在环境因素如感染、紫外线、肿瘤及药物等多种因素共同作用下发生的。由于现有技术中，对上述自身免疫性疾病进行检测的方法多局限于采用细胞切片作为靶抗原，这种方法不仅难以定量，且检测灵敏度低，且易出现假阳性。尽管也有少量采用纯化抗原混合包被固相载体的报道，但均存在检测灵敏度低的缺陷。
针对上述缺陷，在本申请一种典型的实施方式中，提供了一种抗核抗体靶抗原偶联物试剂，该抗核抗体靶抗原偶联物试剂包括：抗原-磁性微球偶联物，该抗原-磁性微球偶联物包括：细胞提取物靶抗原包被磁性微球形成的第一偶联物，以及纯化靶抗原包被磁性微球形成的第二偶联物。
上述抗核抗体靶抗原偶联物试剂，通过将自身免疫性疾病相关的多种纯化靶抗原包被磁性微球，另外辅以包被细胞提取物的磁性微球，这样所形成的抗核抗体靶抗原的抗原谱，与单纯用纯化靶抗原混合包被磁性微球相比，具有更完整的抗原谱，能够一定程度上提高阳性检出率，具有更好的临床检测灵敏度；而与单纯包被细胞提取物相比，能够极大的降低非特异，提高检测特异性以及检测灵敏度，提高阳性检出率，同时减少假阳性。
上述抗核抗体靶抗原偶联物试剂中，细胞提取物靶抗原及纯化靶抗原可以是现有已知的细胞提取物及纯化靶抗原中的任意一种或多种。本申请中，细胞提取物靶抗原包括但不仅限于HepG2细胞裂解抗原、Hep2细胞裂解抗原或Hela细胞裂解抗原中的任意一种；纯化靶抗原为天然抗原、重组抗原或合成肽中的任意一种或多种。
上述抗核抗体靶抗原偶联物试剂的第一偶联物中，细胞提取物靶抗原与磁性微球的质量比根据阳性样本效价及阳性样本与阴性样本的区分度而定。在本申请一种优选的实施例中，细胞提取物靶抗原与磁性微球的质量比为：70～200μg：1mg。将两者的质量比控制在该范围内具有提高阳性检出率，同时降低非特异性吸附的有益效果。
上述纯化靶抗原可以是现有的与上述自身免疫性疾病相关的各种天然抗原、重组抗原或合成肽中的任意一种或多种。在本申请一种优选的实施例中，上述纯化靶抗原包括双链DNA抗原、组蛋白抗原、核糖体P蛋白抗原、核糖核蛋白抗原、Smith抗原、干燥综合征A抗原、干燥综合征B抗原、DNA拓扑异构酶-I抗原、组氨酰转运RNA合成酶抗原、着丝粒抗原、线粒体抗原及核小体抗原。
本申请的上述纯化靶抗原是目前研究得比较清楚，且与疾病密切相关的抗体对应的靶抗原，主要包括核小体、dsDNA、组蛋白抗原、核糖体P蛋白、Sm/RNP、Sm、SSA、SSB、Scl-70、Jo-1、CENP-B和Mitochondrial纯化靶抗原共12种天然或重组的纯化靶抗原。
上述多种纯化靶抗原包被磁性微球辅以包被细胞提取物的磁性微球所形成的抗核抗体靶抗原偶联物试剂，具有更完整的抗原谱，能够一定程度上提高阳性检出率，具有更好的临床检测灵敏度。为了进一步提高检测的灵敏度和特异性、降低假阳性，在本申请一种优选的实施例中，上述12种纯化靶抗原与磁性微球的质量比分别为：双链DNA抗原：组蛋白抗原：核糖体P蛋白抗原：核糖核蛋白抗原：Smith抗原：干燥综合征A抗原：干燥综合征B抗原：DNA拓扑异构酶-I抗原：组氨酰转运RNA合成酶抗原：着丝粒抗原：线粒体抗原：核小体抗原：磁性微球的质量比为0.5～0.7μg：0.4～0.6μg：0.7～0.9μg：0.9～1.1μg：0.9～1.1μg：1.6～2μg：1.2～1.4μg：0.9～1.1μg：1.6～2μg：1.4～1.6μg：0.9～1.1μg：0.3～0.5μg：1mg。
上述优选实施例，由于细胞提取物中各抗原组分含量存在差异，部分靶抗原含量极低，比如，Hep-2细胞提取物中组蛋白抗原含量及dsDNA含量极高，而其中SSA和jo-1抗原含量均较低，因此在多种纯化靶抗原混合过程中，组蛋白抗原和dsDNA抗原含量相对较低，而SSA和jo-1抗原含量相对较高。另外，为避免含量较高的抗原对应抗体呈强阴性时导致整体结果呈现弱阳性的现象，上述优选实施例将12种纯化靶抗原的效价调节为相对一致，有助于避免部分假阳性结果，从而提高临床检测特异性。
为了进一步降低检测的假阳性，在本申请一种优选的实施例中，上述抗原-磁性微球偶联物中，第一偶联物与第二偶联物的体积比为1:3～6。
在上述纯化靶抗原通过含量调整，使得抗原效价相对一致的情况下，降低了临床检测的假阳性，从而提高了临床检测的特异性。而上述优选实施例中进一步调整第一偶联物和第二偶联物的比例，使包被细胞提取物的磁性微球较包被多种纯化靶抗原的磁性微球的比例要低，进而降低了细胞提取物中存在的一些细胞质等干扰而导致的假阳性，进一步提高了临床检测的特异性。
为了提高检测和使用的方便性，在本申请一种优选的实施例中，上述抗核抗体靶抗原偶联物试剂为悬浮液，悬浮液还包括磷酸盐缓冲液，优选磷酸盐缓冲液的pH值为7.5，更优选磷酸盐缓冲液与抗原-磁性微球偶联物的体积比为10～30:1。
上述优选的实施例将抗核抗体靶抗原偶联物试剂制备成悬浮液，一方面便于保存，另一方面便于使用。采用常用的磷酸盐缓冲液将上述抗原-磁性微球偶联物制备成悬浮液即可。pH值为7.5的磷酸盐缓冲液整体呈中性，对抗原-磁性微球偶联物的物化性能无不良影响。具体稀释的倍数可以根据试剂性能评估分析确定。本申请所优选的10～30:1的稀释比例使抗原抗体结合效率高，检测灵敏度好的有益效果。
上述抗核抗体靶抗原偶联物试剂中，磁性微球采用常规的微球即可。为了提高磁性微球与抗核抗体靶抗原的偶联性能，本申请一种优选的实施例中，上述磁性微球是将纳米级的Fe2O3或Fe3O4磁性粒子和有机高分子材料进行复合，形成具有超顺磁性和极大量蛋白吸附容量的微米级的固相微球，具有在外加磁场作用下可迅速被磁化，在撤走磁场后剩磁为零的属性。采用该磁性微球，通过表面改性使磁球表面连接活性基团，不仅减少非特异性吸附，且增加体系的稳定性，不产生凝聚，同时显著提高结合率。具体的活性基团可以是羧基、羟基、氨基中的至少一种。
上述抗核抗体靶抗原偶联物试剂中，对磁性微球的粒径并无特别限定，只要能够实现与抗核抗体靶抗原的偶联即可。在本申请一种优选的实施例中，上述磁性微球的粒径为0.1～5μm。粒径在0.1～5μm范围内的磁性微球具有比表面积大，偶联活性更强，在体系中分散效果更佳的优势。
在本申请另一种典型的实施方式中，还提供了一种抗核抗体检测试剂盒，该试剂盒包括抗核抗体靶抗原，该抗核抗体靶抗原为上述任一种抗核抗体靶抗原偶联物试剂。本申请试剂盒中，由于抗核抗体靶抗原偶联物试剂既包含了纯化靶抗原包被磁性微球，还包含了包被细胞提取物的磁性微球，与单纯用纯化靶抗原混合包被磁性微球相比，具有更完整的抗原谱，能够一定程度上提高阳性检出率，具有更好的临床检测灵敏度。而与单纯包被细胞提取物相比，能够极大的降低非特异性，提高检测特异性以及检测灵敏度，提高阳性检出率，同时减少假阳性。
上述试剂盒中，对于抗核抗体靶抗原偶联物试剂的浓度无特殊要求，可以根据实际需要合理设置其浓度。在本申请一种优选的实施例中，抗核抗体靶抗原偶联物试剂的浓度为0.5～2mg/mL。抗核抗体靶抗原偶联物试剂的浓度在该范围内具有结合效率高，灵敏度好的有益效果。
上述试剂盒中，除了包括上述抗核抗体靶抗原偶联物试剂外，还包括方便检测所用的其他试剂，包括但不仅限于校准品、质控品、发光标记物标记的抗人免疫球蛋白抗体、试剂缓冲液以及样本稀释液中的任意一种或多种。校准品是用于对试剂内置主曲线进行校准为新的工作曲线。质控品是用于检验试剂是否能够正常使用。试剂缓冲液和样本稀释液液可以根据需要添加或者在实际检测时单独配置。
本申请中优选校准品包括两个浓度不同的第一校准品(即高点校准品)和第二校准品(即低点校准品)，更优选第一校准品的浓度为10AU/mL～20AU/mL，第二校准品的浓度为200AU/mL～250AU/mL；优选质控品包括第一质控品以及第二质控品，进一步优选第一质控品的浓度为14～26AU/mL，第二质控品的浓度为70～130AU/mL。
上述试剂盒中，发光标记物标记的抗人免疫球蛋白抗体的目的是将与抗原结合的抗体进行标记并显色或发光，从而根据显色程度或者发光强度来体现抗体的浓度高低。本申请的发光标记物标记的抗人免疫球蛋白抗体中的发光标记物优选为鲁米诺、异鲁米诺、异鲁米诺衍生物、辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶，抗人免疫球蛋白抗体为抗人IgA、抗人IgM、抗人IgG、抗人LgD或抗人LgE。优选的，异鲁米诺衍生物为N-(4-氨丁基)-N-乙基异鲁米诺(以下简称为ABEI)。
此外，上述试剂盒中包含的试剂缓冲液和样本稀释液采用常规的缓冲液即可。在本申请中试剂缓冲液包括但不仅限于碳酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液或Tris-HCl缓冲液；样本稀释液包括但不仅限于碳酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、Tris-HCl缓冲液或生理盐水。
根据本申请的第三方面，还提供了一种抗核抗体靶抗原偶联物试剂的制备方法，该制备方法包括：将细胞提取物靶抗原与第一部分磁性微球进行偶联，形成包被第一部分磁性微球的第一偶联物；将纯化靶抗原与第二部分磁性微球进行偶联，形成包被第二部分磁性微球的第二偶联物。
本申请的上述抗核抗体靶抗原偶联物试剂的制备方法，通过将细胞提取物靶抗原和纯化靶抗原分别各自包被磁性微球，形成包含两部分靶抗原的抗核抗体靶抗原偶联物试剂，与单纯用纯化靶抗原混合包被磁性微球相比，具有更完整的抗原谱，能够一定程度上提高阳性检出率，具有更好的临床检测灵敏度；而与单纯包被细胞提取物相比，能够极大的降低非特异，提高检测特异性以及检测灵敏度，提高阳性检出率，同时减少假阳性。
上述制备方法中，细胞提取物靶抗原与第一部分磁性微球偶联时的质量比可以根据偶联效率及磁性微球的活性进行合理调整。在本申请一种优选的实施例中，细胞提取物靶抗原与第一部分磁性微球的质量比为：70～100μg：1mg。将两者的质量比控制在该范围内具有提高阳性检出率，同时降低非特异性吸附的有益效果。
上述制备方法中，细胞提取物靶抗原采用现有已知的含有抗核抗体靶抗原的细胞提取物即可。本申请中包括但不仅限于HepG2细胞裂解抗原、Hep2细胞裂解抗原或Hela细胞裂解抗原中的任意一种。
同样地，上述纯化靶抗原为天然抗原、重组抗原或合成肽中的任意一种或多种；更优选，纯化靶抗原包括双链DNA抗原、组蛋白抗原、核糖体P蛋白抗原、核糖核蛋白抗原、Smith抗原、干燥综合征A抗原、干燥综合征B抗原、DNA拓扑异构酶-I抗原、组氨酰转运RNA合成酶抗原、着丝粒抗原、线粒体抗原及核小体抗原。这些纯化靶抗原是目前研究得比较清楚，且与疾病密切相关的抗体对应的靶抗原，主要包括核小体、dsDNA、组蛋白抗原、核糖体P蛋白、Sm/RNP、Sm、SSA、SSB、Scl-70、Jo-1、CENP-B和Mitochondrial纯化靶抗原共12种天然或重组的纯化靶抗原。这些抗原能够提高检测的特异性和灵敏度。
为了进一步提高检测的灵敏度和特异性、降低假阳性，在本申请一种优选的实施例中，上述12种纯化靶抗原与磁性微球的质量比分别为：双链DNA抗原：组蛋白抗原：核糖体P蛋白抗原：核糖核蛋白抗原：Smith抗原：干燥综合征A抗原：干燥综合征B抗原：DNA拓扑异构酶-I抗原：组氨酰转运RNA合成酶抗原：着丝粒抗原：线粒体抗原：核小体抗原：第二部分磁性微球的质量比为0.5～0.7μg：0.4～0.6μg：0.7～0.9μg：0.9～1.1μg：0.9～1.1μg：1.6～2μg：1.2～1.4μg：0.9～1.1μg：1.6～2μg：1.4～1.6μg：0.9～1.1μg：0.3～0.5μg：1mg。
由于细胞提取物中各抗原组分含量存在差异，部分靶抗原含量极低，比如，Hep-2细胞提取物中组蛋白抗原含量及dsDNA含量极高，而其中SSA和jo-1抗原含量均较低，因此上述优选实施例中，在将多种纯化靶抗原混合过程中，组蛋白抗原和dsDNA抗原含量相对较低，而SSA和jo-1抗原含量相对较高。另外，为避免含量较高的抗原对应抗体呈强阴性时导致整体结果呈现弱阳性的现象，上述优选实施例将12种纯化靶抗原的效价调节为相对一致，有助于避免部分假阳性结果，从而提高临床检测特异性。
上述制备方法中包括制备上述第一偶联物和第二偶联物的步骤，为了后续更方便地利用抗核抗体靶抗原，在本申请一种优选的实施例中，上述制备方法还包括：将第一偶联物与第二偶联物进行混合，得到混合物的步骤；优选地，第一偶联物与第二偶联物混合的体积比为1:3～6。
在上述纯化靶抗原通过含量调整，使得抗原效价相对一致的情况下，提高了临床检测的特异性。而上述优选实施例中进一步将第一偶联物和第二偶联物的混合比例控制在上述范围内，使包被细胞提取物的磁性微球较包被多种纯化靶抗原的磁性微球的比例要低，进而降低了细胞提取物中存在的一些细胞质等干扰而导致的假阳性，进一步提高了临床检测的特异性。
上述制备方法中，为了进一步提高抗核抗体靶抗原偶联物试剂的使用方便性，在本申请一种优选的实施例中，上述制备方法还包括：利用磷酸盐缓冲液将混合物制备成悬浮液的步骤，采用常用的磷酸盐缓冲液将上述抗原-磁性微球偶联物制备成悬浮液即可。更优选地，更优选磷酸盐缓冲液的pH值为7.5，更优选磷酸盐缓冲液与混合物的体积比为10～30:1。
上述优选实施例中，pH值为7.5的磷酸盐缓冲液整体呈中性，对抗原-磁性微球偶联物的物化性能无不良影响。具体稀释的倍数可以根据试剂性能评估分析确定。本申请所优选的10～30:1的稀释比例具抗原抗体结合效率高，检测灵敏度好的有益效果。
上述制备方法中，与细胞提取物靶抗原或纯化靶抗原偶联的磁性微球均是有活性的磁性微球，可以直接采用由活性的磁性微球进行偶联即可。为了进一步提高偶联效率，在本申请一种优选的实施例中，在进行偶联的步骤之前，该制备方法还包括：对磁性微球进行活化的步骤，优选对磁性微球进行活化的步骤包括：将磁性微球与N-羟基琥珀酰亚胺溶液在交联剂的作用下进行反应，得到活化的磁性微球；优选地，磁性微球、N-羟基琥珀酰亚胺溶液和交联剂溶液的用量比例为10～30mg：0.1～0.2mL：0.1～0.2mL；优选地，反应的时间为2～3小时，反应的温度为25℃～37℃；优选地，磁性微球为带有-COOH、-NH2或-OH基团的磁性微球，更优选磁性微球的粒径为0.5～5μm，进一步优选磁性微球的浓度为10～30mg；优选地，交联剂为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)或1-环己基-3-(2-吗啉代乙基)-碳二亚胺对甲苯甲磺酸(CMC)；更优选地，交联剂溶液的浓度为5～10mg/mL；更优选地，N-羟基琥珀酰亚胺溶液的浓度为5～10mg/mL。
上述优选实施例中，采用新鲜活化的磁性微球进行后续的偶联步骤能够提高偶联效率。反应时间和反应温度控制在上述范围内具有活性效率高、活性高的优势。上述磁性微球是将纳米级的Fe2O3或Fe3O4磁性粒子和有机高分子材料进行复合，形成具有超顺磁性和极大量蛋白吸附容量的微米级的固相微球，具有在外加磁场作用下可迅速被磁化，在撤走磁场后剩磁为零的属性。采用该磁性微球，通过表面改性使磁球表面连接活性基团，不仅减少非特异性吸附，且增加体系的稳定性，不产生凝聚，同时显著提高结合率。具体的活性基团可以是羧基、羟基、氨基中的至少一种。粒径在0.1～5μm范围内的磁性微球具有比表面积大，偶联活性更强，在体系中分散效果更佳的优势。
在本申请的第四个方面，还提供了一种抗核抗体的检测方法，该检测方法包括利用抗核抗体靶抗原通过化学发光免疫法检测待测样品中的抗核抗体的浓度的步骤，其中，抗核抗体靶抗原采用上述任一种抗核抗体靶抗原偶联物试剂。
本申请的上述抗核抗体的检测方法，由于待测样本中所使用的抗核抗体靶抗原偶联物试剂，既包含了纯化靶抗原包被的磁性微球，还包含了包被细胞提取物的磁性微球，与单纯用纯化靶抗原混合包被磁性微球相比，具有更完整的抗原谱，因而能够一定程度上提高阳性检出率，具有更好的临床检测灵敏度。而与单纯包被细胞提取物相比，能够极大的降低非特异性，提高检测特异性以及检测灵敏度，提高阳性检出率，同时减少假阳性。
在一种更优选的实施例中，上述检测方法包括:通过全自动化学发光免疫分析仪测量高低校准品得到相对光强度(RLU)从而校准内置于试剂盒芯片的十点主曲线，得到当前工作环境的工作曲线；将待测样本放到测试位置，并由全自动化学发光免疫分析仪检测得到相对光强度，仪器根据工作曲线自动计算得到待测样本的浓度值，其中，待测样本中可含有上述任一种或多种抗核抗原的抗体。
根据本申请的第五个方面，还提供了一种上述任一种抗核抗体靶抗原偶联物试剂、任一种抗核抗体靶抗原偶联物试剂盒以及任一种抗核抗体靶抗原偶联物试剂的制备方法制备得到的抗核抗体靶抗原偶联物试剂在抗核抗体筛查临床检测中的应用。进一步地，上述应用包括包括但不仅限于对系统性红斑狼疮、混合性结缔组织疾病、干燥综合征、多肌炎、皮肌炎、系统性硬皮病以及原发性胆汁肝硬化的任意一种或多种疾病的临床检测。本申请的应用中由于具有更完整的抗原谱，能够提高检测特异性以及检测灵敏度，提高阳性检出率，同时减少假阳性。
根据本申请的第六个方面，还提供了一种抗核抗体检测试剂盒在抗核抗体检测中的应用，该应用包括将上述任一种抗核抗体检测试剂盒应用于半自动免疫分析仪或全自动免疫分析仪中。此处将试剂盒应用于半自动或全自动免疫分析仪中是指将上述试剂盒中的相应试剂对样品进行处理后置于半自动免疫分析仪或全自动免疫分析仪中进行分析，从而得到检测结果。该应用能够实现试剂盒检测的自动化检测和高通量检测，在提高检测特异性、灵敏度以及阳性检出率的同时，提高检测通量和效率。
下面将结合具体的实施例来进一步说明本申请的有益效果。
需要说明的是，下列实施例中所用样本均为通过临床诊断及其他商业试剂筛查及单项检测试剂检测确诊的样本。
发明人将目前抗核抗体靶抗原与疾病的相关性及阳性率进行了总结，结果见表1。
表1：
具体的检测样本如下：
临床灵敏度评估样本：选取混合型结缔组织病(Mixedconnectivetissuediseases)患者42例、系统性红斑狼疮(Systemiclupuserythematosus)患者155例、多发性肌炎(Polymyositis)患者45例、皮肌炎(Dermatomyositis)患者25例、系统性硬皮病(Systemicsclerosis)患者48例、干燥综合征患者(Sjogren'ssyndrome)54例、原发性胆汁性肝硬化(Primarybiliarylivercirrhosis)患者36例，总计405例。
临床特异性评估样本：选取类风湿性关节炎(Rheumatoidarthritis)患者140例、麸质过敏症(celiacdisease)患者21例、韦格纳肉芽肿病(wegenergranulomatosis)患者19例、其他自身免疫性疾病患者(otherautoimmunediseases)86例、细菌/病毒感染(Bacrerial/viralinfections)患者44例，总共310例。
标本收集：受检者均于早晨空腹抽静脉血：3ml。分离血清，置于-20℃冰箱保存。
对比例1：
将1mL浓度为20mg/mL的磁性微球，采用pH7.2的磷酸盐缓冲液冲洗3次，加入0.15mL浓度为10mg/mL的N-羟基琥珀酰亚胺溶液和0.15mL浓度为10mg/mL的N-羟基琥珀酰亚胺溶液溶液混合，置于25℃中反应1小时，得到活化的磁性微球，采用pH7.2的磷酸盐缓冲液冲洗3次。
将活化的磁性微球与Hep-2细胞提取物靶抗原按1mg：100μg混合，在25℃条件下反应3小时，得到抗核抗体靶抗原与磁性微球的偶联物，偶联物中磁球终浓度为20mg/mL。
将上述的抗核抗体靶抗原与磁性微球的偶联物按照1:20的比例稀释到缓冲液中，并按照以下描述的ANA筛查检测试剂盒，利用深圳市新产业生物医学工程股份有限公司生产的全自动化学发光免疫分析仪Maglumi2000Plus检测上述临床灵敏度评估样品305例和上述临床特异性评估样本310例，评估其灵敏度和特异性；并通过检测健康人样本4例和12种纯化抗原来来验证本试剂性能。
上述ANA筛查检测试剂盒的主要成分如下：
a抗核抗体靶抗原包被的磁性微球，其中浓度为：1mg/mL；
b.低浓度校准品，浓度：14.5AU/mL；
c.高浓度校准品，浓度：230AU/mL；
d.质控品，浓度1：20AU/mL/、浓度2：100AU/mL；
d.ABEI标记抗人IgG浓度：2000μg/mL；
e.试剂缓冲液采用pH7.5的Tris-HCl缓冲液。
d.样本稀释液采用质量分数为0.9％的生理盐水。
具体检测步骤如下：
将体积分别为5uL和20uL的两个浓度不同的校准品放到全自动化学发光免疫分析仪的测试位置，得到拟合曲线；
将10uL和15uL的两个浓度不同的质控品放到上述测试位置，得到质控品的测试发光值以及根据上述拟合曲线拟合得到的质控品的浓度值；
将10uL包被有抗核抗体靶抗原的磁性微球和100uL样本稀释液混合加至检测管中，并放到上述测试位置，37±0.5℃溫育20min，进行磁分离，去上清；加入200uL清洗液至检测管中，混匀，进行磁分离，去上清，重复该步骤两次。然后向上述检测管中添加100uL抗人IgG结合物，混匀后，37±0.5℃溫育20min，进行磁分离，去上清；接着向上述检测管中加入200uL清洗液，混匀，进行磁分离，去上清，重复该步骤两次。最后向上述检测管中加入100uL化学发光底物，混匀，检测发光强度，仪器根据光强度自动计算浓度值，其中，化学发光底物为氢氧化钠和过氧化氢。
对比例1的检测结果见表2：
对比例1的灵敏度检测结果见表3：
样本 样本数量 阳性 灵敏度％
混合性结蹄组织疾病(MCTD) 42 40 95.24％
系统性红斑狼疮(SLE) 155 138 89.03％
多肌炎(PM) 45 7 15.56％
皮肌炎(DM) 25 4 16.00％
系统性硬皮病(Ssc) 48 27 56.25％
干燥综合征(SS) 54 25 46.30％
原发性胆汁性肝硬化(PBC) 36 32 88.89％
总计 405 273 67.41％
对比例1的特异性检测结果见表4：
对比例2：
对比例2与对比例1的唯一区别在于：将活化后的磁性微球与纯化抗原(dsDNA、Histones、Rib-P、Sm/RNP、Sm、SSA、SSB、Scl-70、Jo-1、Centromeres、Mitochondrial、Nucleosome)按1mg：1μg：1μg：1μg：1μg：1μg：1μg：1μg：1μg：1μg：1μg：1μg：1μg混合，在25℃条件下反应3小时，得到抗核抗体靶抗原与磁性微球的偶联物，偶联物中磁球终浓度为20mg/mL。
对比例2的检测结果见表5：
对比例2的灵敏度检测结果见表6：
样本 样本数量 阳性 灵敏度/％
混合性结蹄组织疾病(MCTD) 42 39 92.86％
系统性红斑狼疮(SLE) 155 136 87.74％
多肌炎(PM) 45 8 17.78％
皮肌炎(DM) 25 5 20.00％
系统性硬皮病(Ssc) 48 28 58.33％
干燥综合征(SS) 54 27 50.00％
原发性胆汁性肝硬化(PBC) 36 32 88.89％
总计 405 275 67.90％
对比例2的特异性检测结果见表7：
实施例1：
与对比例1的唯一区别在于：将活化的磁性微球与Hep-2细胞提取物靶抗原按1mg：100μg混合，在25℃条件下反应3小时，得到抗核抗体靶抗原与磁性微球的偶联物1，偶联物1中磁球终浓度为20mg/mL；将活化后的磁性微球与纯化抗原(dsDNA、Histones、Rib-P、Sm/RNP、Sm、SSA、SSB、Scl-70、Jo-1、Centromeres、Mitochondrial、Nucleosome)按1mg：0.5μg：0.4μg：0.7μg：0.9μg：0.9μg：1.6μg：1.2μg：0.9μg：1.6μg：1.4μg：0.9μg：0.3μg混合，在25℃条件下反应3小时，得到抗核抗体靶抗原与磁性微球的偶联物2，偶联物2中磁球终浓度为20mg/mL；制备得到的抗原-磁球偶联物1和抗原-磁球偶联物2按照1:3的比例混匀，得到最终抗核抗体靶抗原与磁性微球的偶联物。
实施例1的检测结果见表8：
抗原 浓度/RU/mL 试剂检测RLU
健康人样本1 - 5542
健康人样本2 - 4211
健康人样本3 - 6258
健康人样本4 - 5033
dsDNA纯化抗体 20 53147
Histones纯化抗体 20 54542
Ribosomal P纯化抗体 20 51639
Sm/RNP纯化抗体 20 52572
Sm纯化抗体 20 52519
SSA纯化抗体 20 48775
SSB纯化抗体 20 53366
Scl-70纯化抗体 20 54175
Jo-1纯化抗体 20 49754
Centromeres纯化抗体 20 51763
Mitochondrial纯化抗体 20 52247
Nucleosome纯化抗体 20 51357
实施例1的灵敏度检测结果见表9：
样本 样本数量 阳性 灵敏度/％
混合性结蹄组织疾病(MCTD) 42 41 97.62％
系统性红斑狼疮(SLE) 155 143 92.26％
多肌炎(PM) 45 13 28.89％
皮肌炎(DM) 25 8 32.00％
系统性硬皮病(Ssc) 48 29 60.42％
干燥综合征(SS) 54 37 68.52％
原发性胆汁性肝硬化(PBC) 36 33 91.67％
总计 405 304 75.06％
实施例1的特异性检测结果见表10：
实施例2：
与实施例1的唯一区别在于：将活化的磁性微球与Hep-2细胞提取物靶抗原按1mg：100μg混合，在25℃条件下反应3小时，得到抗核抗体靶抗原与磁性微球的偶联物1，偶联物1中磁球终浓度为20mg/mL；将活化后的磁性微球与纯化抗原(dsDNA、Histones、Rib-P、Sm/RNP、Sm、SSA、SSB、Scl-70、Jo-1、Centromeres、Mitochondrial、Nucleosome)按1mg：0.7μg：0.6μg：0.9μg：1.1μg：1.1μg：2.0μg：1.4μg：1.1μg：2.0μg：1.6μg：1.1μg：0.5μg混合，在25℃条件下反应3小时，得到抗核抗体靶抗原与磁性微球的偶联物2，偶联物2中磁球终浓度为20mg/mL；制备得到的抗原-磁球偶联物1和抗原-磁球偶联物2按照1:6的比例混匀，得到最终抗核抗体靶抗原与磁性微球的偶联物。
实施例2的检测结果见表11：
抗原 浓度/RU/mL 试剂检测RLU
健康人样本1 - 2145
健康人样本2 - 1765
健康人样本3 - 1925
健康人样本4 - 1645
dsDNA纯化抗体 20 63293
Histones纯化抗体 20 65023
Ribosomal P纯化抗体 20 61567
Sm/RNP纯化抗体 20 59854
Sm纯化抗体 20 57541
SSA纯化抗体 20 55025
SSB纯化抗体 20 62647
Scl-70纯化抗体 20 59158
Jo-1纯化抗体 20 54220
Centromeres纯化抗体 20 55983
Mitochondrial纯化抗体 20 61692
Nucleosome纯化抗体 20 58915
实施例2的灵敏度结果见表12：
实施例2的特异性检测结果见表13：
实施例3：
与实施例1的唯一区别在于：将活化的磁性微球与Hep-2细胞提取物靶抗原按1mg：100μg混合，在25℃条件下反应3小时，得到抗核抗体靶抗原与磁性微球的偶联物1，偶联物1中磁球终浓度为20mg/mL；将活化后的磁性微球与纯化抗原(dsDNA、Histones、Rib-P、Sm/RNP、Sm、SSA、SSB、Scl-70、Jo-1、Centromeres、Mitochondrial、Nucleosome)按1mg：0.6μg：0.5μg：0.8μg：1μg：1μg：1.8μg：1.3μg：1μg：1.8μg：1.5μg：1μg：0.4μg混合，在25℃条件下反应3小时，得到抗核抗体靶抗原与磁性微球的偶联物2，偶联物2中磁球终浓度为20mg/mL；制备得到的抗原-磁球偶联物1和抗原-磁球偶联物2按照1:5的比例混匀，得到最终抗核抗体靶抗原与磁性微球的偶联物。
实施例3的特异性检测结果见表14：
抗原 浓度/RU/mL 试剂检测RLU
健康人样本1 - 2527
健康人样本2 - 2124
健康人样本3 - 2423
健康人样本4 - 2015
dsDNA纯化抗体 20 55245
Histones纯化抗体 20 53065
Ribosomal P纯化抗体 20 57574
Sm/RNP纯化抗体 20 55838
Sm纯化抗体 20 56502
SSA纯化抗体 20 52085
SSB纯化抗体 20 53622
Scl-70纯化抗体 20 52179
Jo-1纯化抗体 20 52208
Centromeres纯化抗体 20 57986
Mitochondrial纯化抗体 20 58660
Nucleosome纯化抗体 20 54917
实施例3的灵敏度检测结果见表15：
样本 样本数量 阳性 灵敏度/％
混合性结蹄组织疾病(MCTD) 42 41 97.62％
系统性红斑狼疮(SLE) 155 144 92.90％
多肌炎(PM) 45 15 33.33％
皮肌炎(DM) 25 8 32.00％
系统性硬皮病(Ssc) 48 29 60.42％
干燥综合征(SS) 54 38 70.37％
原发性胆汁性肝硬化(PBC) 36 33 91.67％
总计 405 308 76.05％
实施例3的特异性检测结果见表16：
实施例4：
与实施例1的唯一区别在于：将活化的磁性微球与Hep-2细胞提取物靶抗原按1mg：100μg混合，在25℃条件下反应3小时，得到抗核抗体靶抗原与磁性微球的偶联物1，偶联物1中磁球终浓度为20mg/mL；将活化后的磁性微球与纯化抗原(dsDNA、Histones、Rib-P、Sm/RNP、Sm、SSA、SSB、Scl-70、Jo-1、Centromeres、Mitochondrial、Nucleosome)按1mg：0.55μg：0.55μg：0.9μg：1μg：1μg：1.9μg：1.4μg：1μg：1.8μg：1.4μg：1μg：0.45μg混合，在25℃条件下反应3小时，得到抗核抗体靶抗原与磁性微球的偶联物2，偶联物2中磁球终浓度为20mg/mL；制备得到的抗原-磁球偶联物1和抗原-磁球偶联物2按照1:5的比例混匀，得到最终抗核抗体靶抗原与磁性微球的偶联物。
实施例4的检测结果见表17：
实施例4的灵敏度检测结果见表18：
样本 样本数量 阳性 灵敏度/％
混合性结蹄组织疾病(MCTD) 42 41 97.62％
系统性红斑狼疮(SLE) 155 144 92.90％
多肌炎(PM) 45 15 33.33％
皮肌炎(DM) 25 8 32.00％
系统性硬皮病(Ssc) 48 29 60.42％
干燥综合征(SS) 54 38 70.37％
原发性胆汁性肝硬化(PBC) 36 33 91.67％
总计 405 308 76.05％
实施例4的特异性检测结果见表19：
实施例5
与实施例1的唯一区别在于：将活化的磁性微球与Hep-2细胞提取物靶抗原按1mg：68μg混合，在25℃条件下反应3小时，得到抗核抗体靶抗原与磁性微球的偶联物1，偶联物1中磁球终浓度为20mg/mL；将活化后的磁性微球与纯化抗原(dsDNA、Histones、Rib-P、Sm/RNP、Sm、SSA、SSB、Scl-70、Jo-1、Centromeres、Mitochondrial、Nucleosome)按1mg：0.75μg：0.65μg：0.95μg：1.2μg：1.2μg：2.1μg：1.5μg：1.2μg：2.1μg：1.7μg：1.2μg：0.55μg混合，在25℃条件下反应3小时，得到抗核抗体靶抗原与磁性微球的偶联物2，偶联物2中磁球终浓度为20mg/mL；制备得到的抗原-磁球偶联物1和抗原-磁球偶联物2按照1:5的比例混匀，得到最终抗核抗体靶抗原与磁性微球的偶联物。
实施例5的检测结果见表20：
抗原 浓度/RU/mL 试剂检测RLU
健康人样本1 - 2214
健康人样本2 - 1875
健康人样本3 - 2431
健康人样本4 - 1984
dsDNA纯化抗体 20 66251
Histones纯化抗体 20 68027
Ribosomal P纯化抗体 20 64538
Sm/RNP纯化抗体 20 64885
Sm纯化抗体 20 62574
SSA纯化抗体 20 60023
SSB纯化抗体 20 67677
Scl-70纯化抗体 20 64851
Jo-1纯化抗体 20 59294
Centromeres纯化抗体 20 60837
Mitochondrial纯化抗体 20 66269
Nucleosome纯化抗体 20 61643
实施例5的灵敏度检测结果见表21：
样本 样本数量 阳性 灵敏度/％
混合性结蹄组织疾病(MCTD) 42 39 92.86％
系统性红斑狼疮(SLE) 155 136 87.74％
多肌炎(PM) 45 14 31.11％
皮肌炎(DM) 25 8 32.00％
系统性硬皮病(Ssc) 48 28 58.33％
干燥综合征(SS) 54 35 64.81％
原发性胆汁性肝硬化(PBC) 36 32 88.89％
总计 405 292 72.10％
实施例5的特异性检测结果见表22：
从上述对比例1和2与实施例1～5的检测结果可以看出：
对比例1中正常人非特异性较高，说明细胞提取物中干扰物质较多，12种纯化抗体检测结果表明细胞提取物中各组分含量及效价存在较大差异。临床诊断灵敏度为67.41％，临床诊断特异性为88.06％。
对比例2中正常人非特异性较低，说明纯化抗原比Hep-2细胞提取物中干扰更少，12种纯化抗原均包被1μg，但是分子量差异较大，而且纯化抗原与样本中抗体亲和性也存在差异，所以光强度差异也较大。临床诊断灵敏度为67.90％，临床诊断特异性为93.23％。
实施例2、实施例3和实施例4中正常人非特异性均较低，实施例1中因含有较高浓度细胞提取物，因此正常人样本检测非特异性稍高。实施例1临床诊断灵敏度为75.06％，临床诊断特异性为94.52％，实施例2临床诊断灵敏度为75.31％，临床诊断特异性为97.10％，实施例3和实施例4临床诊断灵敏度为76.05％，临床诊断特异性为96.77％，与对比例1、对比例2相比均有明显提高。实施例5中尽管12种纯化抗原包被的量在本申请的优选范围外，但由其纯化抗原比例偏高，且纯化抗原比例相对一致，导致其特异性与实施例1～4无明显差别；而细胞提取物的包被含量偏低，导致其整体占比偏低，易造成漏检，因此，实施例5的灵敏度与实施例1～4相比较低。
实施例1～5中通过调整12种纯化抗原比例后包被磁性微球得到抗原-磁球偶联物2，将制备得到的抗原-磁球偶联物1和抗原-磁球偶联物2按照1:3-6的比例混匀，得到最终抗核抗体靶抗原与磁性微球的偶联物中既具有完整抗原谱，提高阳性检出率即临床检测灵敏度，另外将重要的目的靶抗原含量比例提高，从而降低细胞提取物中非特异性吸附而造成的假阳性影响，提高临床检测特异性，同时将各目的靶抗原比例调整，从而使12种纯化抗体在20AU/mL浓度时光强度一致，而12种纯化抗体在20AU/mL截断值浓度光强度一致时既能很好的降低组蛋白、核小体和双链DNA等含量和效价较高的靶抗原对应的强阴性样本造成整体结果弱阳性影响，提高临床检测特异性，也能防止SSA和Jo-1等含量和效价较低的抗原对应的弱阳性样本的漏检，从而提高临床检测灵敏度。
本申请的方案通过添加一定比例细胞提取物，调整不同抗原比例，一是具有完整的抗原谱，能够一定程度上减少漏检，二是降低细胞提取物在整体中的含量减少非特异性吸附，三是通过将各目的靶抗原比例调整，降低含量和效价高抗原强阴性样本造成整体结果弱阳性的影响，同时防止含量和效价较低的抗原对应的弱阳性样本的漏检。因此，本申请的方案在临床诊断灵敏度和临床诊断特异性均有极大提高。
以上仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (16)

1.一种抗核抗体靶抗原偶联物试剂，其特征在于，所述抗核抗体靶抗原偶联物试剂包括：抗原-磁性微球偶联物，所述抗原-磁性微球偶联物包括：
细胞提取物靶抗原包被磁性微球形成的第一偶联物，以及
纯化靶抗原包被磁性微球形成的第二偶联物。
2.根据权利要求1所述的抗核抗体靶抗原偶联物试剂，其特征在于，所述第一偶联物中，所述细胞提取物靶抗原为HepG2细胞裂解抗原、Hep2细胞裂解抗原或Hela细胞裂解抗原中的任意一种；优选地，所述细胞提取物靶抗原与所述磁性微球的质量比为：70～200μg：1mg。
3.根据权利要求1所述的抗核抗体靶抗原偶联物试剂，其特征在于，所述第二偶联物中，所述纯化靶抗原为天然抗原、重组抗原或合成肽中的任意一种或多种；
优选地，所述纯化靶抗原包括双链DNA抗原、组蛋白抗原、核糖体P蛋白抗原、核糖核蛋白抗原、Smith抗原、干燥综合征A抗原、干燥综合征B抗原、DNA拓扑异构酶-I抗原、组氨酰转运RNA合成酶抗原、着丝粒抗原、线粒体抗原及核小体抗原；
更优选地，所述双链DNA抗原：组蛋白抗原：核糖体P蛋白抗原：核糖核蛋白抗原：Smith抗原：干燥综合征A抗原：干燥综合征B抗原：DNA拓扑异构酶-I抗原：组氨酰转运RNA合成酶抗原：着丝粒抗原：线粒体抗原：核小体抗原：磁性微球的质量比为0.5～0.7μg：0.4～0.6μg：0.7～0.9μg：0.9～1.1μg：0.9～1.1μg：1.6～2μg：1.2～1.4μg：0.9～1.1μg：1.6～2μg：1.4～1.6μg：0.9～1.1μg：0.3～0.5μg：1mg。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的抗核抗体靶抗原偶联物试剂，其特征在于，所述抗原-磁性微球偶联物中，所述第一偶联物与所述第二偶联物的体积比为1:3～6。
5.根据权利要求4所述的抗核抗体靶抗原偶联物试剂，其特征在于，所述抗核抗体靶抗原偶联物试剂为悬浮液，所述悬浮液还包括磷酸盐缓冲液，优选所述磷酸盐缓冲液的pH值为7.5，更优选所述磷酸盐缓冲液与所述抗原-磁性微球偶联物的体积比为10～30:1。
6.根据权利要求1所述抗核抗体靶抗原偶联物试剂，其特征在于，所述磁性微球为Fe2O3或Fe3O4磁性纳米粒子与有机高分子材料的复合体，优选所述磁性微球的粒径为0.1～5μm。
7.一种抗核抗体检测试剂盒，所述试剂盒包括抗核抗体靶抗原，其特征在于，所述抗核抗体靶抗原为权利要求1至6中任一项所述的抗核抗体靶抗原偶联物试剂。
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述抗核抗体靶抗原偶联物试剂的浓度为0.5～2mg/mL；
优选地，所述试剂盒还包括校准品、质控品、发光标记物标记的抗人免疫球蛋白抗体、试剂缓冲液以及样本稀释液中的任意一种或多种；
更优选地，所述发光标记物为鲁米诺、异鲁米诺、异鲁米诺衍生物、辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶，所述抗人免疫球蛋白抗体为抗人IgA、抗人IgM、抗人IgG、抗人LgD或抗人LgE中的一种或多种；
更优选地，所述试剂缓冲液为Tris-HCl缓冲液、磷酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液或硼酸盐缓冲液；
更优选地，所述样本稀释液为磷酸盐缓冲液、Tris-HCl缓冲液、碳酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液或生理盐水。
9.一种抗核抗体靶抗原偶联物试剂的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：
将细胞提取物靶抗原与第一部分磁性微球进行偶联，形成包被所述第一部分磁性微球的第一偶联物；
将纯化靶抗原与第二部分磁性微球进行偶联，形成包被所述第二部分磁性微球的第二偶联物。
10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，
所述细胞提取物靶抗原与所述第一部分磁性微球的质量比为：70～200μg：1mg；
优选地，所述细胞提取物靶抗原为HepG2细胞裂解抗原、Hep2细胞裂解抗原或Hela细胞裂解抗原中的任意一种；
优选地，所述纯化靶抗原为天然抗原、重组抗原或合成肽中的任意一种或多种；更优选，所述纯化靶抗原包括双链DNA抗原、组蛋白抗原、核糖体P蛋白抗原、核糖核蛋白抗原、Smith抗原、干燥综合征A抗原、干燥综合征B抗原、DNA拓扑异构酶-I抗原、组氨酰转运RNA合成酶抗原、着丝粒抗原、线粒体抗原及核小体抗原；进一步优选地，双链DNA抗原：组蛋白抗原：核糖体P蛋白抗原：核糖核蛋白抗原：Smith抗原：干燥综合征A抗原：干燥综合征B抗原：DNA拓扑异构酶-I抗原：组氨酰转运RNA合成酶抗原：着丝粒抗原：线粒体抗原：核小体抗原：所述第二部分磁性微球的质量比为0.5～0.7μg：0.4～0.6μg：0.7～0.9μg：0.9～1.1μg：0.9～1.1μg：1.6～2μg：1.2～1.4μg：0.9～1.1μg：1.6～2μg：1.4～1.6μg：0.9～1.1μg：0.3～0.5μg：1mg。
11.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，在得到所述第一偶联物和所述第二偶联物之后，所述制备方法还包括：
将所述第一偶联物与所述第二偶联物进行混合，得到混合物的步骤；
优选地，所述第一偶联物与所述第二偶联物混合的体积比为1:3～6；
更优选地，在得到所述混合物的步骤后，所述制备方法进一步包括：
利用磷酸盐缓冲液将所述混合物制备成悬浮液的步骤；优选地，选所述磷酸盐缓冲液的pH值为7.5，更优选所述磷酸盐缓冲液与所述混合物的体积比为10～30:1。
12.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，在进行所述偶联的步骤之前，所述制备方法还包括：对磁性微球进行活化的步骤，优选对所述磁性微球进行活化的步骤包括：
将所述磁性微球与N-羟基琥珀酰亚胺溶液在交联剂的作用下进行反应，得到活化的磁性微球；
优选地，所述磁性微球、所述N-羟基琥珀酰亚胺溶液和所述交联剂溶液的用量比例为10～30mg：0.1～0.2mL：0.1～0.2mL；
优选地，所述磁性微球为Fe2O3或Fe3O4磁性纳米粒子与有机高分子材料的复合体，更优选所述磁性微球的粒径为0.1～5μm，进一步优选所述磁性微球的浓度为10～30mg；
优选地，所述交联剂为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺或1-环己基-3-(2-吗啉代乙基)-碳二亚胺对甲苯甲磺酸；更优选地，所述交联剂溶液的浓度为5～10mg/mL；
更优选地，所述N-羟基琥珀酰亚胺溶液的浓度为5～10mg/mL。
13.一种抗核抗体的检测方法，所述检测方法包括利用抗核抗体靶抗原通过化学发光免疫法检测待测样品中的抗核抗体的浓度的步骤，其特征在于，所述抗核抗体靶抗原采用权利要求1至6中任一项所述的抗核抗体靶抗原偶联物试剂。
14.权利要求1至6中任一项所述的抗核抗体靶抗原偶联物试剂或权利要求7或8所述的抗核抗体靶抗原偶联物试剂盒或由权利要求9至12中任一项所述的抗核抗体靶抗原偶联物试剂的制备方法制备得到的抗核抗体靶抗原偶联物试剂在抗核抗体筛查临床检测中的应用。
15.根据权利要求14所述的应用，其特征在于，所述应用包括对系统性红斑狼疮、混合性结缔组织疾病、干燥综合征、多肌炎、皮肌炎、系统性硬皮病以及原发性胆汁肝硬化中的任意一种或多种疾病的临床辅助诊断。
16.权利要求7或8所述的抗核抗体检测试剂盒在抗核抗体检测中的应用，其特征在于，所述应用包括：将所述抗核抗体检测试剂盒应用于半自动免疫分析仪或全自动免疫分析仪。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111272999A (zh) * 2020-02-17 2020-06-12 珠海丽珠试剂股份有限公司 抗原偶联磁微粒及其制备方法、抗U1-snRNP抗体的检测方法和试剂盒
CN111521777A (zh) * 2020-04-30 2020-08-11 四川携光生物技术有限公司 一种降低自身免疫抗体检测中非特异性吸附的处理方法及其试剂盒
CN114814203A (zh) * 2022-04-20 2022-07-29 北京胡曼智造科技有限责任公司 一种抗核抗体联合检测试剂盒

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0094603A1 (en) * 1982-05-14 1983-11-23 American Hoechst Corporation Enzyme/immunofluorescent assay for autoantibodies
CN102667483A (zh) * 2010-02-22 2012-09-12 Medipan有限公司 通过对结合合成底物和细胞底物的抗体同时检测而用于疾病诊断的方法和系统
CN102818890A (zh) * 2011-06-10 2012-12-12 苏州卫生职业技术学院 一种检测系统性红斑狼疮患者自身抗体的方法
CN102955030A (zh) * 2012-06-11 2013-03-06 郑州安图绿科生物工程有限公司 检测自身免疫性肝病相关抗体ana的试剂盒及其检测方法
CN106248943A (zh) * 2016-06-30 2016-12-21 深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司 抗核抗体化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0094603A1 (en) * 1982-05-14 1983-11-23 American Hoechst Corporation Enzyme/immunofluorescent assay for autoantibodies
CN102667483A (zh) * 2010-02-22 2012-09-12 Medipan有限公司 通过对结合合成底物和细胞底物的抗体同时检测而用于疾病诊断的方法和系统
CN102818890A (zh) * 2011-06-10 2012-12-12 苏州卫生职业技术学院 一种检测系统性红斑狼疮患者自身抗体的方法
CN102955030A (zh) * 2012-06-11 2013-03-06 郑州安图绿科生物工程有限公司 检测自身免疫性肝病相关抗体ana的试剂盒及其检测方法
CN106248943A (zh) * 2016-06-30 2016-12-21 深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司 抗核抗体化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BAYER PM等: "Multicenter evaluation study on a new HEp2 ANA screening enzyme immune assay", 《JOURNAL OF AUTOIMMUNITY》 *
HAYASHI N等: "Detection of antinuclear antibodies by use of an enzyme immunoassay with nuclear HEp-2 cell extract and recombinant antigens: comparison with immunofluorescence assay in 307 patients", 《CLINICAL CHEMISTRY》 *
SCHOLZ J等: "Second generation analysis of antinuclear antibody (ANA) by combination of screening and confirmatory testing", 《CLINICAL CHEMISTRY AND LABORATORY MEDICINE》 *
曾常茜，陶志华著: "《临床免疫学检验实验指导 第2版》", 28 February 2010, 中国医药科技出版社 *
林飞卿等主编: "《医学基础免疫学》", 30 June 1990, 上海医科大学出版社 *
胡朝军等: "间接免疫荧光法筛查抗核抗体与特异性抗体检测的相互关系", 《中华临床免疫和变态反应杂志》 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111272999A (zh) * 2020-02-17 2020-06-12 珠海丽珠试剂股份有限公司 抗原偶联磁微粒及其制备方法、抗U1-snRNP抗体的检测方法和试剂盒
CN111272999B (zh) * 2020-02-17 2022-11-22 珠海丽珠试剂股份有限公司 抗原偶联磁微粒及其制备方法、抗U1-snRNP抗体的检测方法和试剂盒
CN111521777A (zh) * 2020-04-30 2020-08-11 四川携光生物技术有限公司 一种降低自身免疫抗体检测中非特异性吸附的处理方法及其试剂盒
CN114814203A (zh) * 2022-04-20 2022-07-29 北京胡曼智造科技有限责任公司 一种抗核抗体联合检测试剂盒
CN114814203B (zh) * 2022-04-20 2023-09-15 北京胡曼智造科技有限责任公司 一种抗核抗体联合检测试剂盒

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