CN108333152B - 基于基因重组藻蓝蛋白mac和氧化石墨烯量子点的生物素化抗体传感器及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
一种基于基因重组藻蓝蛋白MAC和氧化石墨烯量子点的生物素化抗体传感器的制备方法，包括以下步骤：构建表达质粒pMAC；将表达质粒pMAC转入大肠杆菌中，得到工程菌株BMAC；将工程菌株BMAC接种培养后诱导表达，收集菌液体；纯化菌液体得到纯化的蛋白MAC；采用低分子量壳聚糖对氧化石墨烯量子点进行修饰，得到氧化石墨烯量子点‑壳聚糖复合物复合物，将生物素化抗体溶液加入至蛋白MAC溶液中后室温孵育，然后加入氧化石墨烯量子点‑壳聚糖复合物溶液再室温孵育，然后用600～620nm光激发，得到基于基因重组藻蓝蛋白MAC和氧化石墨烯量子点的生物素化抗体的生物传感器。上述生物素化抗体传感器灵敏度高较好。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种基于基因重组藻蓝蛋白MAC和氧化石墨烯量子点的生物素化抗体传感器及其制备方法。
背景技术
20世纪60年代初发现了生物素(biotin)和亲和素(SA)，其亲和力至少比抗原/抗体结合力高万倍。由于抗体(包括抗原、酶等蛋白质)可偶联多个生物素，而不影响前者的生物活性，因此生物素是理想的标记剂。生物素/亲合素系统迅速发展为一种新型生物反应放大系统，由于它们可与荧光素、酶、同位素等免疫标记技术结合使用，因此可以提高各种示踪免疫分析的特异性和灵敏度。生物素/亲合素系统目前已经广泛应用于生物医学实验研究的各个领域，既可用于微量抗原、抗体及受体的定量、定性检测及定位观察研究，亦可制成亲和介质用于各类反应体系中反应物的分离、纯化。
发明内容
基于此，有必要提供一种灵敏度高较好的基于基因重组藻蓝蛋白MAC和氧化石墨烯量子点的生物素化抗体传感器及其制备方法。
一种基于基因重组藻蓝蛋白MAC和氧化石墨烯量子点的生物素传感器的制备方法，包括以下步骤：
将麦芽糖结合蛋白基因(MBP)、组氨酸标签(His6)、藻蓝蛋白类脱辅基蛋白亚基基因(cpcA)、核心链霉亲和素基因、藻蓝蛋白裂合异构酶E(cpcE)和F编码基因(cpcF)克隆至同一启动子下；将血红素加氧酶1基因(hox1)、藻蓝素铁氧还蛋白还原酶基因(pcyA)置于另一启动子下，构建表达质粒pMAC；
将所述表达质粒pMAC转入大肠杆菌中，得到工程菌株BMAC；
将所述工程菌株BMAC接种于LB培养基中，过夜培养形成饱和菌液，将所述饱和菌液转接至含壮观霉素的LB培养基中，加入诱导剂，避光诱导表达，收集菌液体；
将所述菌液体在冰浴下超声波破碎，离心后，取上清液，通过亲和层析柱纯化，得到纯化的蛋白MAC，将所述蛋白MAC配置成蛋白MAC溶液；
采用低分子量壳聚糖(CS)对氧化石墨烯量子点(GOQDs)进行修饰，得到氧化石墨烯量子点-壳聚糖(GOQDs-CS)复合物，将所述GOQDs-CS复合物配置成GOQDs-CS复合物溶液；
制备生物素化抗体溶液；
将所述生物素化抗体溶液加入至所述蛋白MAC溶液中后室温孵育，然后加入所述GOQDs-CS复合物溶液再室温孵育，然后用600nm光源激发，得到基于基因重组藻蓝蛋白MAC和氧化石墨烯量子点的生物素化抗体传感器。
在其中一个实施例中，所述GOQDs-CS复合物的合成方法为：取尺寸<10nm的GOQDs，溶解于含有芳香基团的非离子表面活性剂的pH为6的Tris/HCl缓冲液中，然后超声分散，得到浓度为0.5～1mg/ml的GOQDs溶液；
将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC，CAS号：25952-53-8)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS，CAS号：25952-53-8)加入到所述GOQDs溶液中，室温下搅拌小时，然后加入所述壳聚糖(CS，脱乙酰度>75％，CAS：9012-76-4)搅拌过夜；采用半透膜透析去除多余的小分子1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N-羟基琥珀酰亚胺和壳聚糖，获得GOQDs-CS复合物溶液。
在其中一个实施例中，所述生物素化抗体溶液的合成方法为：取20mg/mL的抗体(分子量为160kDa)溶液0.5ml加入至60kDa超滤管中，12000×g离心10min，加入10mmol/L活化的生物素(NH2-Reactive Biotin)150μl，混匀，放入37℃恒温箱中避光温育30min，12000×g离心20min，加入0.1mol/L pH＝7的PBS缓冲液，将溶液体积补充至0.5ml，将超滤管倒转放置于另一个离心管中，6000×g离心10min。收集离心管中的溶液，即得到生物素化的抗体溶液。
在其中一个实施例中，所述通过亲和层析柱纯化为：采用镍离子柱进行纯化，用5倍柱体积的缓冲液冲洗所述镍离子柱后，用洗脱液洗脱，洗脱后的液体经millipore蛋白浓缩柱脱盐浓缩后得到脱盐蛋白，通过Superdex 200凝胶色谱柱，用50mM磷酸钾缓冲液洗脱所述脱盐蛋白，收集检出最大峰值时的流出液，得到所述纯化的蛋白MAC。
在其中一个实施例中，所述将所述饱和菌液转接至含壮观霉素的LB培养基中，加入IPTG诱导剂，避光诱导表达的条件为：在温度37℃、培养至OD600＝0.5时，加入所述IPTG诱导剂，然后在温度为20℃～37℃条件下，避光诱导表达12h。
在其中一个实施例中，所述超声波破碎条件为：在功率为200W条件下破碎3s，然后间歇6s，继续破碎，破碎次数为200次。
在其中一个实施例中，所述缓冲液为20mmol/L磷酸钠、0.5mol/L氯化钠、50mmol/L咪唑的混合液，所述缓冲液的pH为7.4；
所述洗脱液为20mmol/L磷酸钠、0.5mol/L氯化钠、400mmol/L咪唑的混合液，所述洗脱液pH的7.0。
在其中一个实施例中，所述所述蛋白MAC溶液及所述GOQDs-CS复合物溶液的质量浓度比为：1:10。
在其中一个实施例中，用50mM磷酸钾缓冲液洗脱所述脱盐蛋白时，所述磷酸钾缓冲液的pH为7.0，洗脱速度为10mL/h。
一种根据上述的制备方法获得的基于基因重组藻蓝蛋白MAC和氧化石墨烯量子点的生物素化抗体传感器。
在上述基于基因重组藻蓝蛋白MAC和氧化石墨烯量子点的生物素传感器及其制备方法中，首先使用低分子量壳聚糖(CS)对氧化石墨烯量子点(GOQDs)进行修饰，得到GOQDs-CS复合物，GOQDs-CS表面上含有大量的羧基，羟基，和环氧基团，使GOQDs-CS具有更好的水溶性，也使其更易于与其它分子形成共价键。MAC的MBP标签和His6标签可以通过特异性吸附和π-π作用，分别与GOQDs-CS的CS和GOQDs相结合，形成GOQDs-CS-MAC复合物。这种GO-CS-MAC复合物在体外可以引起MAC的荧光淬灭。然后在生物素化抗体存在的条件下，链霉亲和素可以高度特异性地与生物素结合，这种亲和力要远远高于MBP-CS和His6-GOQDs的亲和力，由于抗体巨大的空间位阻作用，造成MAC的MBP和His6标签无法再与GOQDs-CS结合，仅能形成生物素化抗体-MAC复合物，使得GOQDs-CS无法靠近MAC，MAC荧光不再被猝灭，根据最终检测荧光信号强度，即可对生物素化抗体进行定性、定量分析。上述传感器具有灵敏度高、反应快速、操作简单、特异性强的优点。
附图说明
图1为一实施方式的基于基因重组藻蓝蛋白MAC和氧化石墨烯量子点的生物素化抗体传感器的制备方法的流程图；
图2为一实施方式的MAC SDS-PAGE凝胶电泳图谱；
图3为一实施方式的MAC的吸收光谱；
图4为一实施方式的600nm波长激发时，MAC的荧光光谱；
图5为一实施方式的GOQDs-CS-MAC传感器体系对生物素化抗体的检测。
具体实施方式
下面结合实施方式及附图，对基于基因重组藻蓝蛋白MAC和氧化石墨烯量子点的生物素化抗体传感器及其制备方法作进一步的详细说明。
一种基于基因重组藻蓝蛋白MAC和氧化石墨烯量子点的生物素化抗体传感器的制备方法，包括以下步骤：
S110、将麦芽糖结合蛋白基因(MBP)、组氨酸标签(His6)、藻蓝蛋白类脱辅基蛋白亚基基因(cpcA)、核心链霉亲和素基因、藻蓝蛋白裂合异构酶E(cpcE)和F编码基因(cpcF)克隆至同一启动子下；将血红素加氧酶1基因(hox1)、藻蓝素铁氧还蛋白还原酶基因(pcyA)置于另一启动子下，构建表达质粒pMAC。
S120、将所述表达质粒pMAC转入大肠杆菌中，得到工程菌株BMAC。
S130、将所述工程菌株BMAC接种于LB培养基中，过夜培养形成饱和菌液，将所述饱和菌液转接至含壮观霉素的LB培养基中，加入诱导剂，避光诱导表达，收集菌液体。
诱导剂可以为：异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导剂或者乳糖诱导剂。
在一实施方式中，将所述饱和菌液转接至含壮观霉素的LB培养基中，加入IPTG诱导剂，避光诱导表达的条件为：将饱和菌液转接1mL至含壮观霉素的250mL LB培养基中，在温度37℃、培养至OD600＝0.5时，加入所述IPTG诱导剂，然后在温度为20℃～37℃条件下，避光诱导表达12h。
S140、将所述菌液体在冰浴下超声波破碎，离心后，取上清液，通过亲和层析柱纯化，得到纯化的蛋白MAC，将所述蛋白MAC配置成蛋白MAC溶液。
在一实施方式中，通过亲和层析柱纯化为：采用镍离子柱进行纯化，用5倍柱体积的缓冲液冲洗所述镍离子柱后，用洗脱液洗脱，洗脱后得到的液体经millipore蛋白浓缩柱脱盐浓缩后得到脱盐蛋白，通过Superdex 200凝胶色谱柱，用50mM磷酸钾缓冲液洗脱所述脱盐蛋白，收集检出最大峰值时的流出液，得到所述纯化的蛋白MAC。
在一实施方式中，所述超声波破碎条件为：在功率为200W条件下破碎3s，然后间歇6s，继续破碎，破碎次数为200次。
在一实施方式中，缓冲液为20mmol/L磷酸钠、0.5mol/L氯化钠、50mmol/L咪唑的混合液，所述缓冲液的pH为7.4。
在一实施方式中，洗脱液为20mmol/L磷酸钠、0.5mol/L氯化钠、400mmol/L咪唑的混合液，所述洗脱液pH的7.0。
在一实施方式中，用50mM磷酸钾缓冲液洗脱所述脱盐蛋白时，所述磷酸钾缓冲液的pH为7.0，洗脱速度为10ml/h。
S150、采用低分子量壳聚糖(CS)对氧化石墨烯量子点(GOQDs)进行修饰，得到GOQDs-CS复合物，将所述GOQDs-CS复合物配置成GOQDs-CS复合物溶液。
在一实施方式中，GOQDs-CS复合物的合成方法为：取尺寸<10nm的GOQDs0.5～1mg，溶解于含有芳香基团的非离子表面活性剂的pH为6的Tris/HCl缓冲液100mL中，然后超声分散，得到浓度为1mg/ml的GOQDs溶液；
将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS，加入到所述GOQDs溶液中，室温下搅拌小时，然后加入所述壳聚糖，搅拌过夜；采用半透膜透析去除多余的小分子EDC、NHS和CS，获得GOQDs-CS复合物溶液。
S160、制备生物素化抗体溶液。
在一实施方式中，生物素化抗体溶液的制备方法为：取20mg/mL的羊抗兔IgG抗体溶液1ml加入至60kDa超滤管中，12000×g离心10min，加入10mmol/L活化的生物素(NH2-Reactive Biotin)150μl，混匀，放入37℃恒温箱中避光温育30min，12000×g离心20min，加入0.1mol/L pH＝7的PBS缓冲液，将溶液体积补充至1ml，将超滤管倒转放置于另一个离心管中，6000×g离心10min。收集离心管中的溶液，即得到生物素化羊抗兔IgG抗体溶液。
在一实施方式中，羊抗兔IgG抗体也可采用驴抗人IgG抗体代替。
S170、将生物素化抗体溶液加入至所述蛋白MAC溶液中室温孵育15min，然后加入所述GOQDs-CS复合物溶液再室温孵育5min，然后用600nm光源激发，得到基于基因重组藻蓝蛋白MAC和氧化石墨烯量子点(GOQDs-CS-MAC)的生物素化抗体传感器。
在一实施方式中，所述蛋白MAC溶液及所述GOQDs-CS复合物溶液的质量浓度比为：1:10～1:20。
一种根据上述制备方法获得的基于基因重组藻蓝蛋白MAC和氧化石墨烯量子点的生物素化抗体传感器。
在上述基于基因重组藻蓝蛋白MAC和氧化石墨烯量子点的生物素化抗体传感器及其制备方法中，首先使用壳聚糖(CS)对氧化石墨烯量子点(GOQDs)进行修饰，得到GOQDs-CS复合物，GOQDs-CS表面上含有大量的羧基，羟基，和环氧基团，使GOQDs-CS具有更好的水溶性，也使其更易于与其它分子形成共价键。MAC的MBP标签和His6标签可以通过特异性吸附和π-π作用，分别与GOQDs-CS的CS和GOQDs相结合，形成GOQDs-CS-MAC复合物。这种GO-CS-MAC复合物在体外可以引起MAC的荧光淬灭。然后在生物素化抗体存在的条件下，链霉亲和素可以高度特异性地与生物素结合，这种亲和力要远远高于MBP-CS和His6-GOQDs的亲和力，由于抗体巨大的空间位阻作用，造成MAC的MBP和His标签无法再与GOQDs-CS结合，仅能形成生物素化抗体-MAC复合物，使得GOQDs-CS无法靠近MAC，MAC不会产生荧光猝灭，根据最终检测荧光信号强度，即可对生物素化抗体进行定性、定量分析。上述传感器具有灵敏度高、反应快速、操作简单、特异性强的优点。
实施例
实施例1
(1)GOQDs-CS复合物的合成：取尺寸<10nm的GOQDs 1mg,溶解于含有芳香基团的非离子表面活性剂的pH 6的Tris/HCl缓冲液100mL中，然后超声使其充分溶解，即得到1mg/mL的GOQDs溶液。
将2mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC，CAS号：25952-53-8)和4mg N-羟基琥珀酰亚胺(NHS，CAS号：25952-53-8)加入到10mL GOQDs溶液中，室温下搅拌2h，然后将1mg的低分子量(9×103)壳聚糖(CS，脱乙酰度>75％，CAS：9012-76-4)加入到上述溶液中，搅拌过夜。最后，用半透膜透析去除多余的小分子EDC、NHS和CS，获得GOQDs-CS复合物溶液。
(2)MAC的制备：将麦芽糖结合蛋白基因(MBP)、组氨酸标签(His6)、藻蓝蛋白类脱辅基蛋白亚基基因(cpcA)、核心链霉亲和素基因、藻蓝蛋白裂合异构酶E(cpcE)和F编码基因(cpcF)克隆至同一启动子下；将血红素加氧酶1基因(hox1)、藻蓝素铁氧还蛋白还原酶基因(pcyA)置于另一启动子下，构建表达质粒pMAC，所述的表达质粒pMAC转入大肠杆菌中，得到工程菌株BMAC。
将含有BMAC菌株接种于LB培养基中，培养9h后，将种子菌液转接1mL至含壮观霉素的250mL发酵培养基中，37℃、培养至OD600＝0.4～0.5时，加入IPTG诱导剂，20℃～37℃，避光诱导表达12h，收集菌液体，在冰浴下，用超声波破碎细胞(功率200W，工作4s，间歇6s，破碎200次)，10000×g离心20min，弃沉淀，取含有MAC的上清液，使用镍离子柱进行纯化，用5倍柱体积的缓冲液(20mmol/L磷酸钠，0.5mol/L氯化钠，50mmol/L咪唑，pH 7.4)冲洗色谱柱后，用洗脱缓冲液(20mmol/L磷酸钠，0.5mol/L氯化钠，400mmol/L咪唑，pH 7.0)洗脱，洗脱液经millipore蛋白浓缩柱脱盐浓缩后即得到脱盐蛋白。通过Superdex 200凝胶色谱柱，用50mM磷酸钾缓冲液(pH7.0)洗脱，洗脱速度为10ml/h，收集检出最大峰值时的流出液，为目的蛋白MAC。纯化的蛋白MAC用SDS-PAGE，吸收光谱，荧光光谱进行表征(分别参见图2、3、4)。
(3)羊抗兔IgG抗体溶液制备方法为：取20mg/ml的羊抗兔IgG抗体溶液1ml加入至60kDa超滤管中，12000×g离心10min，加入10mmol/L活化的生物素(NH2-Reactive Biotin)150μL，混匀，放入37℃恒温箱中避光温育30min，12000×g离心20min，加入0.1mol/L pH＝7的PBS缓冲液，将溶液体积补充至1mL，将超滤管倒转放置于另一个离心管中，6000×g离心10min。收集离心管中的溶液，即得到生物素化羊抗兔IgG抗体溶液。
(4)GOQDs-CS-MAC生物素化抗体传感器构建
将不同浓度的羊抗兔IgG抗体溶液50μL加入到5μg/mL的蛋白MAC溶液900μL中，室温孵育15min，然后加入所得的GOQDs-CS复合物溶液50μl，孵育5min，最后用600nm的激发光进行激发，测定溶液的荧光发射光谱，以实现对样品中羊抗兔IgG抗体含量的检测(参见图5)。
实施例2
与1不同之处在于
(2)MAC的制备：将含有BMAC菌株接种于LB培养基中，培养9h后，将种子菌液转接100mL至含壮观霉素的10L的发酵培养基中，37℃、培养至OD600＝0.4～0.5时，加入乳糖诱导剂，20℃～37℃，避光诱导表达12h，收集菌液体，避光保存4h，使目标蛋白继续表达。然后收集菌体，在冰浴下，用超声波破碎细胞(功率200W，工作2s，间歇8s，破碎150次)，12000×g离心20min，弃沉淀，取含有MAC的上清液，使用镍离子柱进行纯化，纯化后的MAC蛋白使用10kDa超滤管进行超滤浓缩。
实施例3
与1不同之处在于
(3)驴抗人IgG抗体溶液制备方法为：取1mg待标记抗体于Filtration tube中，加入0.1mol/L pH为7的PBS缓冲液0.5mL，配成终浓度为2mg/mL的IgG溶液，12000×g离心10min，加入10mmol/L活化的生物素(NH2-Reactive Biotin)13.3μL，混匀，放入37℃恒温箱中避光温育30min，12000×g离心10min，加入适量0.1mol/L pH＝7的PBS缓冲液，将溶液体积补充至0.5mL，混匀，重复离心一次，加入0.1mol/L pH＝7的PBS缓冲液0.2mL，混匀，将滤芯倒转放置于另一个离心管中，6000×g离心10min。收集离心管中的溶液，即得到生物素化驴抗人IgG抗体溶液。
实施例4
与1不同之处在于
将GOQDs-CS复合物溶液50μl加入到5μg/mL的蛋白MAC溶液900μL中，孵育15min，用600nm的激发光进行激发，测定溶液的荧光发射光谱，然后加入羊抗兔IgG抗体溶液50μL，室温孵育15min，用600nm的激发光进行激发，测定溶液的荧光发射光谱。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (10)
1.一种基于基因重组藻蓝蛋白MAC和氧化石墨烯量子点的生物素化抗体传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
将麦芽糖结合蛋白基因、组氨酸标签、藻蓝蛋白类脱辅基蛋白亚基基因、核心链霉亲和素基因、藻蓝蛋白裂合异构酶E和F编码基因克隆至同一启动子下；将血红素加氧酶1基因、藻蓝素铁氧还蛋白还原酶基因置于另一启动子下，构建表达质粒pMAC；
将所述表达质粒pMAC转入大肠杆菌中，得到工程菌株BMAC；
将所述工程菌株BMAC接种于LB培养基中，过夜培养形成饱和菌液，将所述饱和菌液转接至含壮观霉素的LB培养基中，加入异丙基硫代半乳糖苷诱导剂，避光诱导表达，收集菌液体；
将所述菌液体在冰浴下超声波破碎，离心后，取上清液，通过亲和层析柱纯化，得到纯化的蛋白MAC，将所述蛋白MAC配置成蛋白MAC溶液；
采用壳聚糖对氧化石墨烯量子点进行修饰，得到氧化石墨烯量子点-壳聚糖复合物，将所述氧化石墨烯量子点-壳聚糖复合物配置成氧化石墨烯量子点-壳聚糖复合物溶液；
制备生物素化抗体溶液；
将所述生物素化抗体溶液加入至所述蛋白MAC溶液中后室温孵育，然后加入所述氧化石墨烯量子点-壳聚糖复合物溶液再室温孵育，然后用激光激发，得到基于基因重组藻蓝蛋白MAC和氧化石墨烯量子点的生物素化抗体传感器。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述氧化石墨烯量子点-壳聚糖复合物的合成方法为：取尺寸<10nm的氧化石墨烯量子点，溶解于含有芳香基团的非离子表面活性剂的pH为5.5～6.5的Tris/HCl缓冲液中，然后超声分散，得到浓度为0.5～1mg/ml的氧化石墨烯量子点溶液；
将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺加入到所述氧化石墨烯量子点溶液中，室温下搅拌2小时，然后加入所述壳聚糖，搅拌过夜；采用半透膜透析去除多余的小分子1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、N-羟基琥珀酰亚胺和壳聚糖，获得氧化石墨烯量子点-壳聚糖复合物溶液。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述生物素化抗体溶液的合成方法为：取抗体溶液1mL加入至10～60kDa超滤管中，12000×g离心10min，加入活化的生物素NH2-Reactive Biotin 150μL，使用生物素和抗体的分子比为15:1～20:1，混匀，放入37℃恒温箱中避光温育15～30min，12000×g离心20min，加入0.1mol/L pH＝7的PBS缓冲液，将溶液体积补充至1mL，将超滤管倒转放置于另一个离心管中，6000×g离心10min，收集所述离心管中的溶液，即得到生物素化抗体溶液。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述通过亲和层析柱纯化为：采用镍离子柱进行纯化，用5倍柱体积的缓冲液冲洗所述镍离子柱后，用洗脱液洗脱，洗脱后的液体经millipore蛋白浓缩柱脱盐浓缩后得到脱盐蛋白，通过Superdex 200凝胶色谱柱，用50mM磷酸钾缓冲液洗脱所述脱盐蛋白，收集检出最大峰值时的流出液，得到所述纯化的蛋白MAC。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述将所述饱和菌液转接至含壮观霉素的LB培养基中，加入异丙基硫代半乳糖苷诱导剂，避光诱导表达的条件为：在温度37℃、培养至OD600＝0.4～0.5时，加入所述异丙基硫代半乳糖苷或者乳糖作为诱导剂，然后在温度为20℃～37℃条件下，避光诱导表达12h。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述超声波破碎条件为：在功率为200W条件下破碎3s，然后间歇6s，继续破碎，破碎次数为200次。
7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述缓冲液为20mmol/L磷酸钠、0.5mol/L氯化钠、50mmol/L咪唑的混合液，所述缓冲液的pH为7.4；
所述洗脱液为20mmol/L磷酸钠、0.5mol/L氯化钠、400mmol/L咪唑的混合液，所述洗脱液pH的7.0。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述蛋白MAC溶液及所述氧化石墨烯量子点-壳聚糖复合物溶液的质量浓度比为1:10～1:20。
9.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，用50mM磷酸钾缓冲液洗脱所述脱盐蛋白时，所述磷酸钾缓冲液的pH为7.0，洗脱速度为10mL/h。
10.一种根据权利要求1-9任意一项权利要求所述的制备方法获得的基于基因重组藻蓝蛋白MAC和氧化石墨烯量子点的生物素化抗体传感器。
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Application publication date: 20180727 Assignee: Nantong Zhongke Binmei Biotechnology Co.,Ltd. Assignor: YANTAI INSTITUTE OF COASTAL ZONE RESEARCH, CHINESE ACADEMY OF SCIENCES Contract record no.: X2024210000063 Denomination of invention: Biotinylated antibody sensor based on recombinant phycocyanin MAC and graphene oxide quantum dots and its preparation method Granted publication date: 20201222 License type: Common License Record date: 20240925 |