CN108330109A

CN108330109A - 禽脑脊髓炎弱毒活疫苗GDt29株

Info

Publication number: CN108330109A
Application number: CN201711459154.7A
Authority: CN
Inventors: 谢青梅; 陆飘飘; 陈�峰; 李鸿鑫; 蔺文成
Original assignee: South China Agricultural University
Current assignee: South China Agricultural University
Priority date: 2017-12-28
Filing date: 2017-12-28
Publication date: 2018-07-27

Abstract

本发明提供了一种禽脑脊髓炎弱毒活疫苗GDt29株，在2017年11月27保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:V201765，保藏地址为：中国，武汉，武汉大学；全基因序列提交Genebank，Accession No：MF620096。本发明还提供一种多聚蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示，提供编码多聚蛋白的核苷酸序列序列如SEQ ID NO：1所示。所述弱毒株对各种鸡只均安全，且无副反应，将所述弱毒株制成疫苗安全有效，可保护同源强毒的攻毒，具有实际和广泛的应用价值。

Description

禽脑脊髓炎弱毒活疫苗GDt29株

技术领域

本发明涉及一种弱毒活疫苗，具体是一种禽脑脊髓炎弱毒活疫苗GDt29 株，属于生物技术领域。

背景技术

禽脑脊髓炎(Avian Encephalomyelitis，AE)又称鸡传染性脑脊髓炎 (Chickeninfections encephalomyelitis)，是由禽脑脊髓炎病毒(Avian Encephalomyelitisvirus，AEV)引起的一种高度接触的全球性传染病，可使鸡、鹌鹑、火鸡等鸟类感染，但主要感染4周龄以下的雏鸡，侵害雏鸡中枢神经系统，引起雏鸡头颈震颤、共济失调和两腿麻痹不能站立等神经症状以及非化脓性脑炎等病理变化，此病一旦在雏鸡群感染，就具有很高的发病率和死亡率，严重时发病率为100％，死亡率可达95％，是目前危害养禽业的重要传染病之一。禽脑脊髓炎最早是美国人Jones等发现的，我国于1980年报道首例，目前在世界各地广泛传播。此病毒可垂直传播，也可以通过接触水平传播；垂直传播主要影响2周龄内的雏鸡，一般是种鸡开产前后感染AEV，所产蛋孵化的雏鸡发病，潜伏期为1～7d；而2周龄以上雏鸡发病，主要是由水平传播引起，潜伏期为10～30d，实验室条件下脑内接种1日龄雏鸡，其潜伏期为5～10d，本病无季节性，四季均可发生。

研究表明，禽脑脊髓炎病毒只有一个血清型，但不同毒株具有不同的致病性及对组织的趋向性。目前所有的AEV毒株可分为两种病理型：一种是嗜肠型病毒，主要通过口服途径感染鸡群，在肠道中增殖，并通过粪便散毒，对鸡胚没有致病性，自然的AEV野毒株一般是嗜肠型；另一种是嗜神经型病毒，通过非肠道途径感染鸡群，如经脑内接种或皮下和肌肉接种，在感染鸡的肠道内并不能有效繁殖生长，可适应鸡胚，对鸡胚有致病性，感染鸡群发病时有明显的神经症状。嗜神经型AEV毒株对鸡群有明显的日龄易感性，成年鸡感染后一般不表现出明显的AE临床症状，会产生一过性病毒血症，如产蛋鸡会有一过性产蛋下降，以此蛋孵化的雏鸡高度携带AE 病毒，出壳后1～2周发病，并在2～4周龄为死亡高峰。AE病毒对环境有较强的抵抗性，能快速感染其他未发病雏鸡，引起雏鸡群的全面感染。近年来我国各省陆续报道了AE的发生，其造成的经济损失在逐年增大，而目前国内对AE活疫苗的研究并不多。

一直以来由禽脑脊髓炎病毒引发的疾病，没有很好的医治药物，因此只能通过有效的防护措施或疫苗来抵御AEV对鸡群的感染和侵害。目前我国养禽业以1961年Calnek等分离的Calnek-1143株所研制疫苗应用最为普遍，所使用的Calnek-1143株具有低嗜神经毒力和高免疫性，有比较好的防护效果。但是目前国内尚无有效的该弱毒疫苗生产，市场需要主要依赖进口，而进口疫苗价格昂贵，因此研制具有良好免疫原性，免疫效力强的AE弱毒疫苗，对我国养禽业禽脑脊髓炎的防制有重要的现实意义。

本发明选择分离鉴定的禽脑脊髓炎病毒GDt29株作为疫苗研制的毒株，为研究GDt29株的毒力和致病性，利用鸡胚对AEV GDt29进行传代，传代至第13代，记为GDt29-13，测定GDt29株和GDt29-13的病毒EID₅₀，毒株稳定在10^5.5EID₅₀。本发明将田间分离的AEV毒株GD-S-29，与GDt29、GDt29-13 进行动物攻毒试验，通过雏鸡发病状况、发病率、剖解观察和病理切片分析，发现GD-S-29对雏鸡有较强的致病性，可导致90％(9/10)的雏鸡发生明显的禽脑脊髓炎症状，GDt29和GDt29-13对雏鸡致病性较低，1EID₅₀的病毒量脑内接种1日龄雏鸡饲养观察21d，均无发病现象，毒力测定及致病性分析结果显示，GD-S-29株为强毒株，能引发雏鸡发病，产生明显的AE症状，GDt29和GDt29-13对1日龄雏鸡毒力较弱且无致病性，其传代至第13 代并未见毒力返强，判定GDt29为一株稳定的弱毒株。

发明内容

本发明的目的是针对目前流行毒株缺乏弱毒疫苗或灭活疫苗，而提供一种禽脑脊髓炎弱毒活疫苗GDt29株，全基因序列提交Genebank，Accession No：MF620096，不仅能够有效控制禽脑脊髓炎的发生，而且具有很大的经济效益和良好的社会效益。

本发明的第二个目的是提供禽脑脊髓炎弱毒活疫苗GDt29株的应用。

本发明的第三个目的是提供含有禽脑脊髓炎弱毒活疫苗GDt29株的药物。

GDt29株的生物学特征如下：在分类上属于小RNA病毒中的单股正链病毒科，肠道病毒属；不具有吸附禽类和哺乳类红细胞的特性，不能引起红细胞凝集，原因是禽脑脊髓炎病毒无囊膜，没有包裹血凝素的机会，且病毒包膜上也无血凝素存在；只有一种血清型。

本发明的目的是通过以下技术方案予以实现的：

禽脑脊髓炎弱毒活疫苗GDt29株，于2017年11月27保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:V201765，保藏地址为：中国，武汉，武汉大学；全基因序列提交Genebank，Accession No：MF620096。

本发明还提供一种多聚蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

本发明还提供编码所述多聚蛋白的核苷酸序列，所述序列如SEQ ID NO： 1所示。

经测序和分析，所述疫苗GDt29株的基因编码的多聚蛋白如SEQ ID NO： 2所示；所述疫苗GDt29株的基因的核苷酸序列为SEQ ID NO：1所示，或者在SEQ ID NO：1所述序列基础上经替换、缺失和/或添加一个或多个核苷酸且编码SEQ ID NO：2所述蛋白同等功能的基因序列。

本发明还提供所述禽脑脊髓炎弱毒活疫苗GDt29株在制备治疗禽脑脊髓炎的药物中的应用。

本发明还提供含有所述禽脑脊髓炎弱毒活疫苗GDt29株的药物；具体

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明提供了一种禽脑脊髓炎弱毒活疫苗GDt29株，在2017年11月27保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:V201765，分类命名Avian Encephalomyelitis Virus,AEV GDt29，保藏地址为：中国，武汉，武汉大学；所述弱毒株对各种鸡只均安全，且无副反应，将所述弱毒株制成疫苗安全有效，可保护同源强毒的攻毒，具有实际和广泛的应用价值。

附图说明

附图：为1日齢空白对照组、GDt29组、GDt29-13组和Calnek-1143 组子代雏鸡母源AE抗体水平检测。

具体实施方式

下面通过具体实施例及附图对本发明做进一步具体描述。本发明的设计思想或同类物质的简单替代属于本发明的保护范围，下述所使用的实验方法若无特殊说明，均为本技术领域现有常规的方法，所使用的配料或材料，如无特殊说明，均为通过商业途径可得到的配料或材料。

实施例一：病毒的传代扩增与病毒序列分析

a.禽脑脊髓炎病毒传代扩增

禽脑脊髓炎病毒采用鸡胚卵黄囊接种法来传代扩增AE病毒，将GDt29 病毒接种于6日龄的SPF鸡胚，0.2mL/胚，弃去48h内死亡的胚，其余胚继续孵化至16日龄收毒：吸取胚液，观察胚体变化，无菌收集胚脑、胃肠，用胚液作为稀释液(不足用生理盐水补)按1:5稀释研磨，加入青链霉素 (双抗)，2 000IU/mL，反复冻融后10000rpm离心5min，收上清液即为传代毒GDt29，菌检合格后再接种下一代鸡胚，保存各代病毒于-80℃。

b.传代病毒的序列分析

对传代过程中发生鸡胚适应性的鸡胚，分别收集胚脑、胃肠等，用胚液作为稀释液(不足用生理盐水补)按1:5稀释研磨，加入青链霉素(双抗)， 2000IU/mL，反复冻融后10000rpm离心5min，收上清液，将上清液做样本，抽取RNA经反转录，分段进行全基因PCR扩增，扩增引物见表1。PCR 产物经1.5％琼脂糖凝胶电泳，目的条带清晰无杂带，连T载扩摇后测序，序列拼接整理后，GDt29的全基因组序列除了Poly(A)尾外的总长度为 7032nt，包括一个含6402个核苷酸的开放阅读框(ORF)，5’端非编码区的494个核苷酸以及3’端非编码区136个核苷酸，GDt29株全基因序列提交Genebank，Accession No：MF620096，遗传进化分析结果显示，GDt29 株与疫苗株Calnek-1143株同属一个分支，有较高的同源性，与目前分离的L2Z株有较近的亲缘关系，与Calnek-1143株、L2Z株序列相比，没有核苷酸的插入和缺失，根据AEV的主要免疫原蛋白序列VP1进行遗传进化分析，结果显示，GDt29与YL、L2Z、Calnek-1143和SX的亲缘关系较近，氨基酸同源性比较分析结果显示，同源性在97.8％～98.2％，VP1的氨基酸之间差异较小。

表1 AEV全基因序列的分段扩增引物

实施例二：禽脑脊髓炎弱毒活疫苗研制

a.GDt29株病毒毒力测定

a.1 EID₅₀的测定

取GDt29病毒液用生理盐水作10倍递减稀释为10^-3～10^-7，按2000IU/mL 加入青链霉素(双抗)，卵黄囊接种6日龄SPF鸡胚，每个稀释度接5～10 枚胚；0.2mL/枚，另取相同鸡胚10枚作对照不接种，接种组与对照组鸡胚分别在各自孵化箱内同时继续孵育，弃去48h内的死亡胚，对照胚孵化率大于75％试验有效，在正常出壳时间的3d内，观察并统计各组未孵出胚以及出现死亡、麻痹和运动失调的雏鸡总数作为病毒感染鸡胚(雏鸡)，结果见表2。按Reed-Muench法计算EID₅₀，结果为GDt29的EID₅₀为10^-5.5，即接种的0.2mL的GDt29病毒液中含10^5.5EID₅₀。

表2 GDt29病毒EID₅₀测定

注：发病数包括正常出壳时间未出壳的鸡胚数。

a.2 GDt29毒种的稳定性测定

将实验室分离保存的GDt29株通过连续鸡胚传代，传代后的第一代毒称为传代毒GDt29-1，记为F1代，菌检合格后再接种下一代鸡胚，收上清液即为传代毒GDt29-2(F2)，GDt29株连续传代至第13代，记为GDt29-13；传至GDt29-13代有出现接种SPF鸡胚胚体发生病变，测GDt29-13的病毒 EID₅₀，结果见表3。用Reed-Muench法计算GDt29-13EID₅₀为10^-5.55，与GDt29 的EID₅₀比较，差异不显著(P>0.05)，且各代词病毒EID₅₀均无显著差异。此外，1个EID₅₀剂量GDt29-13脑内接种1日龄SPF雏鸡，饲养观察21d，并未发现雏鸡发病现象，由此表明，GDt29在传代过程中毒力并未返强，则表明GDt29在传代过程中比较稳定，作为疫苗株毒种较稳定；

表3 GDt29-13病毒EID₅₀测定

注：发病数包括正常出壳时间未出壳的鸡胚数。

a.3病毒对易感鸡的毒力

分别以100EID₅₀、10EID₅₀、1EID₅₀的GDt29株病毒液，经脑内接种1 日龄SPF雏鸡各10只，隔离器中饲养观察21d，每日记录出现AE症状的鸡数(病雏症状有：发育不良，精神不振，半蹲姿势，重者头颈震颤，瘫痪等)，结果显示：3个接种剂量接种雏鸡后在1～10天内均无发病现象，在第 11天接种100EID₅₀的组出现1只雏鸡精神不振，头低垂，不愿走动等，紧接着在第11天以后，均出现有雏鸡发病现象，而1EID₅₀组在观察的21天内均未出现雏鸡发病现象，10EID₅₀组在第12天出现2只雏鸡精神不振症状；

a.4 GDt29病毒对鸡胚的毒力

GD-S-29毒株于2015年从广西省南宁市某养禽场病鸡体内分离得到的 AE田间毒株，设置为阳性对照组。GDt29、GD-S-29病毒10倍稀释后，卵黄囊接种6日龄SPF鸡胚各3个，并设置阴性的空白对照组，至16日龄开胚，观察鸡胚胚体的情况，与空白对照组相比，接种GDt29病毒液后，鸡胚胚体没有发生明显的变化，发育正常，并未见AE症状；而GD-S-29株对鸡胚有致病性，使鸡胚产生AE症状，出现胚体发育不良，胚体缩小，爪弯曲，脑积水等病理现象，分别称取3组鸡胚胚体及大脑重，计算出平均脑系数，结果显示，GDt29的平均脑系数为4.0％(脑重0.33g，胚体重8.15 g)，GD-S-29为3.5％(脑重0.25g，胚体重7.12g)，对照组的平均脑系数为4.2％(脑重0.35，胚体重8.3)，GD-S-29株明显较阴性对照和GDt29 组平均脑系数更低，而GDt29组与对照组没有显著的差别；

b.病毒纯净性检查

b.1无菌和支原体检测

分别将GDt29各代病毒按照现行《中华人民共和国兽药典》附录进行无菌和支原体检验，各代次检测结果均为阴性；

b.2分别将GDt29各代病毒按照现行《中华人民共和国兽药典》附录进行外源病毒检测，各代次检测结果均为阴性；

c.对易感鸡的安全性试验

分别进行GDt29与GDt29-13代病毒的安全性试验，通过口服途径接种 8周龄的SPF鸡，10羽份/只，(每羽份接种病毒含量至少有10^3.5EID₅₀)分别隔离饲养，21d内未发现实验组鸡产生病变，与空白对照组相比，安全实验组鸡只采食、生长状况等均未发生异常，实验表明GDt29、GDt29-13 通过口服途径，对8周龄鸡无致病性；

d.GDt29的免疫原性试验

d.1 GDt29免疫后AEV抗体水平检测

通过口服途径免疫8周龄SPF鸡10只，在免疫后第1周至鸡开产前两周(第8周)，各阶段翅静脉采血，分离血清，采用IDEXX禽脑脊髓炎病毒 ELISA抗体检测试剂盒检测免疫鸡血清抗体水平，口服免疫各免疫组鸡后，在免疫后第2周鸡群陆续产生AE抗体，血清抗体检测呈阳性，直至第6周抗体水平达最高且保持稳定，最高AE抗体效价GDt29组为3.38，GDt29-13 组为3.26，商品疫苗Calnek-1143组为3.32，三组间抗体效价在稳定后差异不显著(P>0.05)，与不接种疫苗的空白组相比差异极显著(P<0.05)；

d.2混养感染试验组ELISA抗体水平检测

将10只8周龄健康不接受疫苗的SPF鸡，分别5只一组混养于口服 GDt29疫苗与GDt29-13疫苗组，于疫苗免疫后第1、2、3、4、5、6、7、8 周采血测各组混养不免疫鸡的AE抗体水平，试验结果显示，混养感染组较疫苗组抗体产生晚1周，其后混养鸡只的AE抗体水平随疫苗组AE抗体水平升高而升高，直至疫苗免疫后第7周抗体达到稳定水平，稳定后与接受疫苗免疫组相比，其抗体效价差异不显著(P>0.05)，表明自制的弱毒疫苗可感染混养鸡群，达到鸡群的完全免疫，(样品的S/P值大于0.20，判断为阳性)；

实施例三GDt29弱毒疫苗制备

a.GDt29病毒液的制备

采用实例一AE扩增方法，收集100枚SPF鸡胚病毒液，分别取样进行检验，置于-20℃保存备用；

b.GDt29毒液的检验

收获的病毒液按现行《中国兽药典》附录方法逐瓶纯净性检测，并抽样一份测定病毒含量(EID₅₀)，结果收获的病毒液的细菌、霉菌、支原体、外源病毒、类似症状病毒病检测均为阴性，每0.2mL的GDt29病毒含量10^5.5 EID₅₀以上；

c.配苗与分装

按10％脱脂乳、5％蔗糖、85％蒸馏水的比例配制稳定剂溶液，充分溶解后高压10min，放4℃保存备用，将检验合格的病毒液用4层灭菌纱布滤过，混合于同一容器内，加入等量的5％蔗糖脱脂奶作稳定剂，同时按每毫升1000 单位加入青链霉素，充分摇匀，定量分装，使每羽份病毒含量10^3.5EID₅₀，每瓶1000羽份；

d.冷冻干燥，压盖贴签，-15℃以下保存；

e.疫苗的安全性试验

以10倍免疫剂量分别免疫GDt29与GDt29-13做试验组，检验疫苗的安全性，通过口服途径免疫8周龄的SPF鸡各10只，10羽份/只，(每羽份疫苗病毒含量至少有10^3.5EID₅₀)分别隔离饲养，21d内未发现实验组鸡产生病变，与空白对照组相比，安全实验组鸡只采食、生长状况等均未发生异常，实验GDt29疫苗通过口服途径，对8周龄鸡无致病性，疫苗安全，且多次传代后GDt29-13株做疫苗免疫同样是无致病性，安全的；

f.疫苗的效力试验

通过检测GDt29免疫后对子代雏鸡免疫保护力评价疫苗的效力， Calnek-1143株为常用疫苗株，设置为阳性对照组，收集空白对照组、GDt29 组、GDt29-13组和Calnek-1143组受精蛋，每组至少10枚胚，恒温孵化21天后，受精率在90％以上，(各组分别落盘，落盘后带上各组翅标统一后续试验)；统一在全部雏鸡完全孵化出壳，羽毛整洁干燥后记为1日龄雏鸡，经雏鸡翅静脉采血分离血清，检测各组雏鸡所带母源AE抗体水平，与空白对照组(NC组)相比，GDt29组、GDt29-13组和Calnek-1143组子代雏鸡有较高的母源抗体，差异极显著(P<0.05)，且子代雏鸡母源抗体GDt29 组与GDt29-13组均高于Calnek-1143组；对各组1日龄雏鸡脑内接种0.1mL GD-S-29病毒液，分别饲养在4个隔离器，观察统计各组雏鸡发病数，(淘汰攻毒后即刻死亡的雏鸡)计算疫苗保护力，结果显示：1日龄雏鸡脑内接种GD-S-29病毒液，剂量为10^3.5EID₅₀/只，未带有AE母源抗体的空白对照组在接种GD-S-29后4天内陆陆续续开始发病，各组雏鸡攻毒后雏鸡发病状况如表4所示，免疫组雏鸡脑内攻毒GD-S-29后，均未发生异常状况，死亡率为0，计算保护力均未100％，实验表明自制疫苗GDt29安全有效，可以有效保护雏鸡不受AE病毒的侵害。

表4雏鸡攻毒后保护力测定

基因序列表

SEQ ID NO：1(GDt29的开放阅读框核苷酸序列)

ATGAGCAAACTATTTTCTACTGTAGGCAAGACTGTTGATGAGGTTTTATCTGTGCTTAACGATGAGAATACTGAATCTTATGCTGGCCCTGATCGTACTGCAGTAGTTGGCGGAGGATTTCTGACAACGGTAGACCAGAGTTCAGTTAGTACGGCTACAATGGGAAGTTTACAGGATGTACAGTACAGAACTGCAGTCGACATCCTTGGTTCTAGAGTGACACAAGGTGAGAGGTTTTTCCTTATTGATCAGCGTGAGTGGAACTCAACACAGAGTGAATGGCAGTTATTGGGCAAGATTGACATAGTAAAAGAGTTGCTTGATCAGTCATATGCTGTTGATGGCCTTTTGAAATACCATTCTTATGCGAGGTTTGGCTTGGACGTCATTGTTCAGATTAATCCAACATCATTCCAGGCAGGGGGTCTCATAGCAGCCCTTGTACCTTATGACCAGGTTGATATTGAATCAATTGCTGCCATGACTACTTATTGCCATGGCAAGTTGAATTGCAACATAAACAACGTTGTAAGAATGAAGGTGCCATACATATACAGTCGAGGTTGTTACAACCTTAGGAACTCAGCATACTCCATTTGGATGCTTGTAATAAGAGTGTGGTCACAGCTGCAGTTGGGATCCGGCACTTCAACACAGATTACTGTCACCACCTTGGCTAGGTTTGTGGATTTGGAACTACATGGACTTAGCCCTTTGGTCGCACAGATGATGCGCAACGAATTTCGACTGTCGTCATCTAGCAACATTGTCAATTTGGCTAATTATGAGGATGCAAGAGCCAAAGTGTCTCTAGCGCTGGGACAAGAAGAGTTTTCCAGAGACTCGTCAAGTACCGGGGGGGAATTGTTGCATCATTTTTCACAGTGGACGTCGATTCCGTGCCTTGCCTTCACTTTTACATTCCCCGGCACGGTAGGGCCAGGCACTCAGATCTGGTCAACCACGGTGGACCCTTTTTCCTGTAACTTGAGGGCGTCTAGCACTGTGCACCCCACTAACTTGAGCTCGATTGCGGGTATGTTCTGTTTTTGGAGAGGCGACATTGTATTTGAGTTTCAAGTCTTTTGCACCAAGTATCATTCCGGCAGGTTGATGTTTGTGTATGTGCCTGGCGATGAAAACACAAAAATCAGCACCTTAACTGCAAAACAAGCATCTAGTGGTCTTACTGCTGTTTTTGATATCAATGGTGTAAATTCAACACTGGTGTTTAGATGCCCTTTCATCTCTGACACACCTTACAGGGTGAATCCAACGACTCATAAGTCCCTCTGGCCTTATGCAACTGGCAAGCTTGTGTGCTATGTGTACAATAGACTGAACGCACCTGCCAGTGTATCACCAAACGTGTCCATTAATGTGTACAAAAGTGCTGTGGATTTGGAGTTGTATGCACCTGTTTATGGGGTTTCTCCCACCAACACCTCAGTTTTTGCTCAAGGGAAAGAGGATGAAGGAGGATTTTCCAGTGTGCCTGAAGTGGAGCAACATGTTGTTGAGGATAAGGAACCACAGGGACCTTTGCACGTGACACCTTTTGGCGCTGTTAAAGCTATGGAGGACCCCCAATTGGCCAGGAAAACACCTGGCACATTCCCTGAATTAGCTCCTGGTAAACCTCGACATACAGTGGACCACATGGATCTGTATAAGTTCATGGGGCGTGCCCATTACTTGTGGGGACATGAATTCACCAAAACTGACATGCAGTACACATTCCAGATACCATTAAGTCCCATTAAAGAGGATTTTGTGACGGGTACACTTAGGTGGTTTTTAAGTCTTTTCCAACTGTATCGTGGTTCTCTCGACATTACCATGACATTTGCAGGAAAAACTAATGTGGATGGCATTGTGTACTTTGTGCCTGAGGGTGTTGCGATAGAGACTGAGAGGAAGGAGCAGACCCCTTTGCTCACATTGAACTATAAAACATCGGTAGGTGCCATTAGGTTTAATACTGGACAAACTACGAATGTCCAGTTTAGGATCCCTTTCTACACGCCACTgGAACACATCGCAACCCATTCTAAAAaTACGATGGATTCAGTCTtgGGGGCAATCACAACCCAGATCACTAACTATAGCGCTCAGGATGAGTATTTGCAGGTTACCTACTACATCAGTTTCAATGAAGATTCACAGTTTTCTGTTCCCAGAGCGGTGCCAGTGGTCAGCTCATTCACTGACACATCTAGCAAAATAGTGATGAATACATATTGGCTTGATGATGACGAGTTGGTGGAAGAGTCCTCCCATTCTAGTTTCGACGAAATTGAGGAGGCCCAATGTTCGAAATGTAAAATGGATTTGGGGGACATTGTGAGCTGTAGTGGAGAGAAGGCAAAACACTTTGGTGTGTATGTTGGAGATGGTGTTGTACATGTGGATCCAGAAGGCAATGCCACTAACTGGTTTATGAAGCGAAAAGCTACAGTCAAGAAGAGCAAAAATCTGGACAAATGGTGCTTTGCCTTGTCTCCACGCATAGATAGGACACTCATATGTGAGACAGCCAACCTGATGGTGGGACGCGAGGTTGAGTATGATATCTTTGTGAAGAATTGTGAGACATATGCTCGGGGTATTGCATCAGGCGACTATGGGACAAAAGAAGGAGAAAAATGGAAGACCTTACTTTCTGCTGTGGGTGTAGCCGCCATGACCACAACGATGATGGCTATGAGACACGAATTATTGGACACATCGCTCACCAAATTGCCACAAAAAGTTGGGGAAGTTACCAATGAGGTACGCAAGATTCTTGAGGATACGAGTGCAGGTGTTAGAGAGTTTAAGGAAAAAGTCTCTAGCATACTCAGGAAGACTTGGCCCGGGAAGACATCAATAAAAATAATGAAGTGGACTTGCAGGATTGTGAAGATGTGTGTTGGTGTGGGTCTGTGCTACGCACRTGGATGGGACCCAAAGACTGTGACTGCTGTGGTCACAATGTTTTCCATGGATTTTCTTGATTTGGTGATAGACGGTATAGAGATAGGGCGCATGATAATTGATGAGCTCACAACCCCAAAAGCTCAAGGACTTTCTGAGATAAACCAAGTCTTGTCCATTGCAAAAAATGCCAAAGACGTCATCAAGATGTTGATAGAGATTTTCTGTAAAGTTATTGAAAGGATCACTGGTGAACATGGTAAGAAAATCCAGTGGGCCCAGGACAAGAAGGAGGAAATCATGAATGTCTTGGAGAGAGCTGAAAAGTGGATTACAACTAGTGATGACCATTCAGAGGGTATTGAGTGCTTGAAGTTAGTTAGGTCAATACAGTCAGTCATTAGGGGTGAAGAATCTCTTAAAGAATTGGCAGGTGAGTTGCGTGCTGTTGGTACGCATGTTCTGAATAAGTTGGGTAGACTAGACAAACCAAATGCGCCTATTTTAGTCAGGGCTGAGCCCACGGTTTTGTATCTTTATGGCAACAGAGGAGGGGGCAAGAGTTTGGCTTCAATGGCGATTGCTGTGAAATTGTGCAAGGAGTTAGGAATCTCGCATGTGGAAGGCATTTACACGAAACCCATCATGTCGGACTTCTGGGATGGATATGCTGGTCAGCCAGTAGTGATAATGGATGACTTAGGACAATCTACATCAGATGAAGATTGGACAAATTTTTGCCAGTTGGTGTCCTCCTGCCCTTTACGGTTAAATATGGCCAATTTGGAGAAGAAAGGGACACAGTTCAACTCACCATTCATTATAGCATCTTCTAATCTTTCCCATCCTTGTCCGAAGACAGTGTACTGTACAGATGCCATCGCTAGGAGGTTGCATATTAAGGTCAAGGTTAGCCCGAAAGAAGAATTCTCTACTCATGCCATGCTTGACGTGGCAAAGGCCAAGAAAGCAGGTGCTTATTGCAACCTTGACTGTTTGGACTTCCAGAAGATCAGTGACCTCGCATCCACACCAGTTAGTGTCCAAGATATAGTGCTGGAGATGtTGCATACCAATGTTGACAAGCAAAcCCTGATGGGGGACATCATACAGTATTGGGCGCAGTCCAACCCTCGAGAGGtTTTTGACACAATGGCTGAGGGAAAGAATTCTGGTAAATATTTATGGTTGTTTGAGAAAATCAAGACATCTAAATGGTATATATTAGGATGTGTGGGAGCAGTTCTATCAGTGTCTGCCTTGGGTGTGTTTGCGTATCACATGATTAAAAACCATTTCAGAGACCAACAACATGATCAGTCTGCTTACTCTGCCGCGATCAAGCCCCTCAGAGTTGTTCGCTTAGAaCAATCAGATGCGCAATCAGTTGTGGATATATCCAATGTGGTGCATGGCAATCTGGTTAGAGTGGGAGTAGGGCCTAATGAAGCTAGGATTCACTGGTTGTATAATGGTTTGGGTGTTTATGACACCTATATTCTGATGCCATATCATGGCATAAAAGATGCTGATGTTGATGAAGATCTATACATTGAGAGAGCAGGGACCATTTACTCGACCAACATGAAGATGGTCCAAGTTTTGTTCTTGGAGTCCCGTGAAGGTGATCTGGTGTTGATAAATGTCCCTCGTTTGCCTAAATTTAGGGACATACGCAATCACTTTTCTACTGAGGAGAACATACGCAGGGCAGAAGGCATGCCAGGGACTTTGTGCACTTTGGACCATGAGAGGTTCACCCTTGTTACTGAGAGCGACCTTAAGATGGTGGAGGCAGCTACATATGTCTGCGAAGATGACAAGGGTGTGCGCACTGATATTAGTGTTGGGCGCAGTTGGAAGGCGAAGGCTTGTACGGTCGCAGGGATGTGTGGTGGTGCCTTGGTCACTTCTAACAACAAAATGCAGAATGCGATTGTAGGTATTCATGTTGCTGGAGGGGCGCACGCAATTTCTAGAGTGATCACAAAAGAGATGATAGAGGAGATGCTCAAGACACGAGCACAATGTAGTAGGATATGGAAGACTGAGTTTGTGGAAGAGAAGATATCTGTGGGGTCTAAAACGAAGTACCACAAGTCCCCTTTATATGATTTTTGTCCACAGGAGGTTATTAAATGTCCCACTAAGTTGTTCTATCAAGGAGAAATTGATGTTATGCAAGTCATGTTGGCCAAATATTCGTCTCCGATTGTTAGTGAGCCCTTAGGGTACGCCACCGTCGTGGAGGCTTATACCAACCGTATGGTCAGTTTCTTTTCTGAGCCTCGTCAGTTGACCTATGACGAGTGCATAAATGGTATTGAAGGTCTTGATGCTATAGATTTGAAGACGTCAGCTGGCTTTCCGTACAACACTCTAGGTCTCAGGAAGAGTGATTTGATCATTAATGGCAAGATGGCACAACGTCTGCAGCAGGACGTCGAGAAGATGGAAGAAGACTTGCACATGAATCGATCCATTCAAGTGGTATTTACCACGTGTGCCAAAGACGAATTGCGTCCTCTAAGTAAGGTTATGCTGGGCAAGACCAGAGCCATAGAGGCTTGCCCCGTTTCGTTCACCATCCTATTTCGCAGGTATTTGGGATACGCTTTGGCGCAGATTCAGAGCCACCCTGGTTTTCACACAGGGATAGCAGTGGGCGTGGACCCTGACCAAGATTGGCACTGTATGTGGTACAGTATTGTTACTCAATGCGACCTTGTTGTTGGTCTTGACTTTTCCAACTATGATGCTAGTCTGTCCCCGTTTATGATATACCATGCTGGGAGGGTTCTGGGCCAAATTTGTGGTTTGGACCCAAGGTTGGTGGATAGAATAATGGAGCCTATTGTCAATTCCGTTCATCAGTTGGGCTCCATGAGATACTATGTCCATGGTTCTATGCCATCTGGCACACCTGCTACATCGGTGCTCAATTCTATAATTAATGTTGTGAACATCTGCCATGTGTTGTGTGCATTGGAGAAAATAAGTGTATTTGAGGTTTTCAAATTATTCAAGATCCTCACTTATGGCGATGACGTATTACTTTGTATAAAGAAGGAGTACCTAGACCAGAAGAGTTTCCCGCTATCTAGTTTTGTTCAGGGGCTGGAAGAGCTGGGACTGAGCCCCACTGGTGCTGATAAGATGGAAGTCAAGGTCACGCCAGTGCATAAGATGAGTTTCCTAAAGAGAACATTCTATGTGGATGAGTGGTCCATCTGTCATCCGCGTATTTCTGAGGAGACTGTTTATTCGATGCTGGCTTGGAAGAGCGACAATGCATCCATGAAGGATCTGATAGAAACGAGTATATGGTTTATGTTCCATCATGGCCCCCGGAAGTATGTTAGATTCTGTACTTGGCTGCGCGGTGTTCTGTGCCGTGTGGGTATTGGGCTCTACATTCCAACTTACAAAGAGCTGGAGGTGAGGTATGATAGGCTTGTCAAGTATAGGTTCATAGATGATAGCTTTTAG

SEQ ID NO：2(SEQ ID NO：1编码的氨基酸序列)

MSKLFSTVGKTVDEVLSVLNDENTESYAGPDRTAVVGGGFLTTVDQSSVSTATMGSLQDVQYRTAVDILGSRVTQGERFFLIDQREWNSTQSEWQLLGKIDIVKELLDQSYAVDGLLKYHSYARFGLDVIVQINPTSFQAGGLIAALVPYDQVDIESIAAMTTYCHGKLNCNINNVVRMKVPYIYSRGCYNLRNSAYSIWMLVIRVWSQLQLGSGTSTQITVTTLARFVDLELHGLSPLVAQMMRNEFRLSSSSNIVNLANYEDARAKVSLALGQEEFSRDSSSTGGELLHHFSQWTSIPCLAFTFTFPGTVGPGTQIWSTTVDPFSCNLRASSTVHPTNLSSIAGMFCFWRGDIVFEFQVFCTKYHSGRLMFVYVPGDENTKISTLTAKQASSGLTAVFDINGVNSTLVFRCPFISDTPYRVNPTTHKSLWPYATGKLVCYVYNRLNAPASVSPNVSINVYKSAVDLELYAPVYGVSPTNTSVFAQGKEDEGGFSSVPEVEQHVVEDKEPQGPLHVTPFGAVKAMEDPQLARKTPGTFPELAPGKPRHTVDHMDLYKFMGRAHYLWGHEFTKTDMQYTFQIPLSPIKEDFVTGTLRWFLSLFQLYRGSLDITMTFAGKTNVDGIVYFVPEGVAIETERKEQTPLLTLNYKTSVGAIRFNTGQTTNVQFRIPFYTPLEHIATHSKNTMDSVLGAITTQITNYSAQDEYLQVTYYISFNEDSQFSVPRAVPVVSSFTDTSSKIVMNTYWLDDDELVEESSHSSFDEIEEAQCSKCKMDLGDIVSCSGEKAKHFGVYVGDGVVHVDPEGNATNWFMKRKATVKKSKNLDKWCFALSPRIDRTLICETANLMVGREVEYDIFVKNCETYARGIASGDYGTKEGEKWKTLLSAVGVAAMTTTMMAMRHELLDTSLTKLPQKVGEVTNEVRKILEDTSAGVREFKEKVSSILRKTWPGKTSIKIMKWTCRIVKMCVGVGLCYAXGWDPKTVTAVVTMFSMDFLDLVIDGIEIGRMIIDELTTPKAQGLSEINQVLSIAKNAKDVIKMLIEIFCKVIERITGEHGKKIQWAQDKKEEIMNVLERAEKWITTSDDHSEGIECLKLVRSIQSVIRGEESLKELAGELRAVGTHVLNKLGRLDKPNAPILVRAEPTVLYLYGNRGGGKSLASMAIAVKLCKELGISHVEGIYTKPIMSDFWDGYAGQPVVIMDDLGQSTSDEDWTNFCQLVSSCPLRLNMANLEKKGTQFNSPFIIASSNLSHPCPKTVYCTDAIARRLHIKVKVSPKEEFSTHAMLDVAKAKKAGAYCNLDCLDFQKISDLASTPVSVQDIVLEMLHTNVDKQTLMGDIIQYWAQSNPREVFDTMAEGKNSGKYLWLFEKIKTSKWYILGCVGAVLSVSALGVFAYHMIKNHFRDQQHDQSAYSAAIKPLRVVRLEQSDAQSVVDISNVVHGNLVRVGVGPNEARIHWLYNGLGVYDTYILMPYHGIKDADVDEDLYIERAGTIYSTNMKMVQVLFLESREGDLVLINVPRLPKFRDIRNHFSTEENIRRAEGMPGTLCTLDHERFTLVTESDLKMVEAATYVCEDDKGVRTDISVGRSWKAKACTVAGMCGGALVTSNNKMQNAIVGIHVAGGAHAISRVITKEMIEEMLKTRAQCSRIWKTEFVEEKISVGSKTKYHKSPLYDFCPQEVIKCPTKLFYQGEIDVMQVMLAKYSSPIVSEPLGYATVVEAYTNRMVSFFSEPRQLTYDECINGIEGLDAIDLKTSAGFPYNTLGLRKSDLIINGKMAQRLQQDVEKMEEDLHMNRSIQVVFTTCAKDELRPLSKVMLGKTRAIEACPVSFTILFRRYLGYALAQIQSHPGFHTGIAVGVDPDQDWHCMWYSIVTQCDLVVGLDFSNYDASLSPFMIYHAGRVLGQICGLDPRLVDRIMEPIVNSVHQLGSMRYYVHGSMPSGTPATSVLNSIINVVNICHVLCALEKISVFEVFKLFKILTYGDDVLLCIKKEYLDQKSFPLSSFVQGLEELGLSPTGADKMEVKVTPVHKMSFLKRTFYVDEWSICHPRISEETVYSMLAWKSDNASMKDLIETSIWFMFHHGPRKYVRFCTWLRGVLCRVGIGLYIPTYKELEVRYDRLVKYRFIDDSF

序列表

<110> 华南农业大学

<120> 禽脑脊髓炎弱毒活疫苗GDt29株

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 6404

<212> DNA

<213> 禽脑脊髓炎病毒AEV GDt29株(Avian Encephalomyelitis virus, AEV GDt29)

<400> 1

atgagcaaac tattttctac tgtaggcaag actgttgatg aggttttatc tgtgcttaac 60

gatgagaata ctgaatctta tgctggccct gatcgtactg cagtagttgg cggaggattt 120

ctgacaacgg tagaccagag ttcagttagt acggctacaa tgggaagttt acaggatgta 180

cagtacagaa ctgcagtcga catccttggt tctagagtga cacaaggtga gaggtttttc 240

cttattgatc agcgtgagtg gaactcaaca cagagtgaat ggcagttatt gggcaagatt 300

gacatagtaa aagagttgct tgatcagtca tatgctgttg atggcctttt gaaataccat 360

tcttatgcga ggtttggctt ggacgtcatt gttcagatta atccaacatc attccaggca 420

gggggtctca tagcagccct tgtaccttat gaccaggttg atattgaatc aattgctgcc 480

atgactactt attgccatgg caagttgaat tgcaacataa acaacgttgt aagaatgaag 540

gtgccataca tatacagtcg aggttgttac aaccttagga actcagcata ctccatttgg 600

atgcttgtaa taagagtgtg gtcacagctg cagttgggat ccggcacttc aacacagatt 660

actgtcacca ccttggctag gtttgtggat ttggaactac atggacttag ccctttggtc 720

gcacagatga tgcgcaacga atttcgactg tcgtcatcta gcaacattgt caatttggct 780

aattatgagg atgcaagagc caaagtgtct ctagcgctgg gacaagaaga gttttccaga 840

gactcgtcaa gtaccggggg ggaattgttg catcattttt cacagtggac gtcgattccg 900

tgccttgcct tcacttttac attccccggc acggtagggc caggcactca gatctggtca 960

accacggtgg accctttttc ctgtaacttg agggcgtcta gcactgtgca ccccactaac 1020

ttgagctcga ttgcgggtat gttctgtttt tggagaggcg acattgtatt tgagtttcaa 1080

gtcttttgca ccaagtatca ttccggcagg ttgatgtttg tgtatgtgcc tggcgatgaa 1140

aacacaaaaa tcagcacctt aactgcaaaa caagcatcta gtggtcttac tgctgttttt 1200

gatatcaatg gtgtaaattc aacactggtg tttagatgcc ctttcatctc tgacacacct 1260

tacagggtga atccaacgac tcataagtcc ctctggcctt atgcaactgg caagcttgtg 1320

tgctatgtgt acaatagact gaacgcacct gccagtgtat caccaaacgt gtccattaat 1380

gtgtacaaaa gtgctgtgga tttggagttg tatgcacctg tttatggggt ttctcccacc 1440

aacacctcag tttttgctca agggaaagag gatgaaggag gattttccag tgtgcctgaa 1500

gtggagcaac atgttgttga ggataaggaa ccacagggac ctttgcacgt gacacctttt 1560

ggcgctgtta aagctatgga ggacccccaa ttggccagga aaacacctgg cacattccct 1620

gaattagctc ctggtaaacc tcgacataca gtggaccaca tggatctgta taagttcatg 1680

gggcgtgccc attacttgtg gggacatgaa ttcaccaaaa ctgacatgca gtacacattc 1740

cagataccat taagtcccat taaagaggat tttgtgacgg gtacacttag gtggttttta 1800

agtcttttcc aactgtatcg tggttctctc gacattacca tgacatttgc aggaaaaact 1860

aatgtggatg gcattgtgta ctttgtgcct gagggtgttg cgatagagac tgagaggaag 1920

gagcagaccc ctttgctcac attgaactat aaaacatcgg taggtgccat taggtttaat 1980

actggacaaa ctacgaatgt ccagtttagg atccctttct acacgccact ggaacacatc 2040

gcaacccatt ctaaaaatac gatggattca gtcttggggg caatcacaac ccagatcact 2100

aactatagcg ctcaggatga gtatttgcag gttacctact acatcagttt caatgaagat 2160

tcacagtttt ctgttcccag agcggtgcca gtggtcagct cattcactga cacatctagc 2220

aaaatagtga tgaatacata ttggcttgat gatgacgagt tggtggaaga gtcctcccat 2280

tctagtttcg acgaaattga ggaggcccaa tgttcgaaat gtaaaatgga tttgggggac 2340

attgtgagct gtagtggaga gaaggcaaaa cactttggtg tgtatgttgg agatggtgtt 2400

gtacatgtgg atccagaagg caatgccact aactggttta tgaagcgaaa agctacagtc 2460

aagaagagca aaaatctgga caaatggtgc tttgccttgt ctccacgcat agataggaca 2520

ctcatatgtg agacagccaa cctgatggtg ggacgcgagg ttgagtatga tatctttgtg 2580

aagaattgtg agacatatgc tcggggtatt gcatcaggcg actatgggac aaaagaagga 2640

gaaaaatgga agaccttact ttctgctgtg ggtgtagccg ccatgaccac aacgatgatg 2700

gctatgagac acgaattatt ggacacatcg ctcaccaaat tgccacaaaa agttggggaa 2760

gttaccaatg aggtacgcaa gattcttgag gatacgagtg caggtgttag agagtttaag 2820

gaaaaagtct ctagcatact caggaagact tggcccggga agacatcaat aaaaataatg 2880

aagtggactt gcaggattgt gaagatgtgt gttggtgtgg gtctgtgcta cgcactggat 2940

gggacccaaa gactgtgact gctgtggtca caatgttttc catggatttt cttgatttgg 3000

tgatagacgg tatagagata gggcgcatga taattgatga gctcacaacc ccaaaagctc 3060

aaggactttc tgagataaac caagtcttgt ccattgcaaa aaatgccaaa gacgtcatca 3120

agatgttgat agagattttc tgtaaagtta ttgaaaggat cactggtgaa catggtaaga 3180

aaatccagtg ggcccaggac aagaaggagg aaatcatgaa tgtcttggag agagctgaaa 3240

agtggattac aactagtgat gaccattcag agggtattga gtgcttgaag ttagttaggt 3300

caatacagtc agtcattagg ggtgaagaat ctcttaaaga attggcaggt gagttgcgtg 3360

ctgttggtac gcatgttctg aataagttgg gtagactaga caaaccaaat gcgcctattt 3420

tagtcagggc tgagcccacg gttttgtatc tttatggcaa cagaggaggg ggcaagagtt 3480

tggcttcaat ggcgattgct gtgaaattgt gcaaggagtt aggaatctcg catgtggaag 3540

gcatttacac gaaacccatc atgtcggact tctgggatgg atatgctggt cagccagtag 3600

tgataatgga tgacttagga caatctacat cagatgaaga ttggacaaat ttttgccagt 3660

tggtgtcctc ctgcccttta cggttaaata tggccaattt ggagaagaaa gggacacagt 3720

tcaactcacc attcattata gcatcttcta atctttccca tccttgtccg aagacagtgt 3780

actgtacaga tgccatcgct aggaggttgc atattaaggt caaggttagc ccgaaagaag 3840

aattctctac tcatgccatg cttgacgtgg caaaggccaa gaaagcaggt gcttattgca 3900

accttgactg tttggacttc cagaagatca gtgacctcgc atccacacca gttagtgtcc 3960

aagatatagt gctggagatg ttgcatacca atgttgacaa gcaaaccctg atgggggaca 4020

tcatacagta ttgggcgcag tccaaccctc gagaggtttt tgacacaatg gctgagggaa 4080

agaattctgg taaatattta tggttgtttg agaaaatcaa gacatctaaa tggtatatat 4140

taggatgtgt gggagcagtt ctatcagtgt ctgccttggg tgtgtttgcg tatcacatga 4200

ttaaaaacca tttcagagac caacaacatg atcagtctgc ttactctgcc gcgatcaagc 4260

ccctcagagt tgttcgctta gaacaatcag atgcgcaatc agttgtggat atatccaatg 4320

tggtgcatgg caatctggtt agagtgggag tagggcctaa tgaagctagg attcactggt 4380

tgtataatgg tttgggtgtt tatgacacct atattctgat gccatatcat ggcataaaag 4440

atgctgatgt tgatgaagat ctatacattg agagagcagg gaccatttac tcgaccaaca 4500

tgaagatggt ccaagttttg ttcttggagt cccgtgaagg tgatctggtg ttgataaatg 4560

tccctcgttt gcctaaattt agggacatac gcaatcactt ttctactgag gagaacatac 4620

gcagggcaga aggcatgcca gggactttgt gcactttgga ccatgagagg ttcacccttg 4680

ttactgagag cgaccttaag atggtggagg cagctacata tgtctgcgaa gatgacaagg 4740

gtgtgcgcac tgatattagt gttgggcgca gttggaaggc gaaggcttgt acggtcgcag 4800

ggatgtgtgg tggtgccttg gtcacttcta acaacaaaat gcagaatgcg attgtaggta 4860

ttcatgttgc tggaggggcg cacgcaattt ctagagtgat cacaaaagag atgatagagg 4920

agatgctcaa gacacgagca caatgtagta ggatatggaa gactgagttt gtggaagaga 4980

agatatctgt ggggtctaaa acgaagtacc acaagtcccc tttatatgat ttttgtccac 5040

aggaggttat taaatgtccc actaagttgt tctatcaagg agaaattgat gttatgcaag 5100

tcatgttggc caaatattcg tctccgattg ttagtgagcc cttagggtac gccaccgtcg 5160

tggaggctta taccaaccgt atggtcagtt tcttttctga gcctcgtcag ttgacctatg 5220

acgagtgcat aaatggtatt gaaggtcttg atgctataga tttgaagacg tcagctggct 5280

ttccgtacaa cactctaggt ctcaggaaga gtgatttgat cattaatggc aagatggcac 5340

aacgtctgca gcaggacgtc gagaagatgg aagaagactt gcacatgaat cgatccattc 5400

aagtggtatt taccacgtgt gccaaagacg aattgcgtcc tctaagtaag gttatgctgg 5460

gcaagaccag agccatagag gcttgccccg tttcgttcac catcctattt cgcaggtatt 5520

tgggatacgc tttggcgcag attcagagcc accctggttt tcacacaggg atagcagtgg 5580

gcgtggaccc tgaccaagat tggcactgta tgtggtacag tattgttact caatgcgacc 5640

ttgttgttgg tcttgacttt tccaactatg atgctagtct gtccccgttt atgatatacc 5700

atgctgggag ggttctgggc caaatttgtg gtttggaccc aaggttggtg gatagaataa 5760

tggagcctat tgtcaattcc gttcatcagt tgggctccat gagatactat gtccatggtt 5820

ctatgccatc tggcacacct gctacatcgg tgctcaattc tataattaat gttgtgaaca 5880

tctgccatgt gttgtgtgca ttggagaaaa taagtgtatt tgaggttttc aaattattca 5940

agatcctcac ttatggcgat gacgtattac tttgtataaa gaaggagtac ctagaccaga 6000

agagtttccc gctatctagt tttgttcagg ggctggaaga gctgggactg agccccactg 6060

gtgctgataa gatggaagtc aaggtcacgc cagtgcataa gatgagtttc ctaaagagaa 6120

cattctatgt ggatgagtgg tccatctgtc atccgcgtat ttctgaggag actgtttatt 6180

cgatgctggc ttggaagagc gacaatgcat ccatgaagga tctgatagaa acgagtatat 6240

ggtttatgtt ccatcatggc ccccggaagt atgttagatt ctgtacttgg ctgcgcggtg 6300

ttctgtgccg tgtgggtatt gggctctaca ttccaactta caaagagctg gaggtgaggt 6360

atgataggct tgtcaagtat aggttcatag atgatagctt ttag 6404

Claims

1.禽脑脊髓炎弱毒活疫苗GDt29株，其特征在于，禽脑脊髓炎弱毒活疫苗GDt29株，在2017年11月27保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:V201765，保藏地址为：中国，武汉，武汉大学；全基因序列提交Genebank，Accession No：MF620096。

2.根据权利要求1所述禽脑脊髓炎弱毒活疫苗GDt29株，其特征在于，还提供一种多聚蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

3.根据权利要求1所述禽脑脊髓炎弱毒活疫苗GDt29株，其特征在于，还提供编码所述多聚蛋白的核苷酸序列，所述序列如SEQ ID NO：1所示。

4.根据权利要求1或2或3所述鸭腺病毒3型灭活疫苗CH-GD-12-2014株，其特征在于，所述疫苗GDt29株的基因编码的多聚蛋白如SEQ ID NO：2所示；所述疫苗GDt29株的基因的核苷酸序列为SEQ ID NO：1所示，或者在SEQ ID NO：1所述序列基础上经替换、缺失和/或添加一个或多个核苷酸且编码SEQ ID NO：2所述蛋白同等功能的基因序列。

5.根据权利要求1所述禽脑脊髓炎弱毒活疫苗GDt29株，其特征在于，还提供禽脑脊髓炎弱毒活疫苗GDt29株在制备治疗禽脑脊髓炎的药物中的应用。

6.根据权利要求1所述禽脑脊髓炎弱毒活疫苗GDt29株，其特征在于，还提供含有禽脑脊髓炎弱毒活疫苗GDt29株的药物；具体地可以是疫苗。

7.根据权利要求1或6所述鸭腺病毒3型灭活疫苗CH-GD-12-2014株，其特征在于，所述疫苗包括鸡传染性支气管炎弱毒活疫苗YX10 D90株和药学上可以接受的冻干保护剂。