CN108330098A - 一种冻存细胞复苏的方法 - Google Patents
一种冻存细胞复苏的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108330098A CN108330098A CN201810128819.4A CN201810128819A CN108330098A CN 108330098 A CN108330098 A CN 108330098A CN 201810128819 A CN201810128819 A CN 201810128819A CN 108330098 A CN108330098 A CN 108330098A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cell
- freeze
- added
- transferred
- freezing liquid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
Landscapes
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明提供一种冻存细胞复苏的方法，包括以下步骤：(1)清洗液的准备：准备第一离心管，加入DMEM无血清培养基和胎牛血清(FBS)，混匀后，放入水浴锅中预热；(2)冻存细胞的融化：从液氮中迅速取出细胞冻存管，迅速转移至水浴锅中使完全融化；(3)转移：将细胞冷冻液从冻存管中吸出，转移至第二离心管中，然后吸取适量清洗液逐滴加入到细胞冷冻液中，前期每次一滴，轻摇管身，使清洗液缓慢融入冷冻液中，加入1‑2ml清洗液后，可逐渐加快加液速度；(4)离心：将加入清洗液后的细胞冷冻液进行离心；(5)孵育：转移至T‑175培养瓶，温度为35‑40℃，CO2为3‑7％环境下孵育。本发明的优点在于：显著提高细胞的活率。
Description
技术领域
本发明涉及细胞生物学技术领域，尤其涉及一种提高冻存细胞复苏率的复苏方法。
背景技术
目前常用的细胞冻存方法是以适量甘油或二甲亚砜作为保护剂，梯度降温进行下的慢速冷冻方法，采用甘油或二甲基亚砜作保护剂，是因为这两种物质分子量小，溶解度大，易穿透细胞，可以使冰点下降，提高细胞膜对水的通透性，且对细胞无明显毒性。而慢速冷冻方法可使细胞内的水分渗出细胞外，减少胞内形成冰结晶的机会，从而减少冰晶对细胞的损伤。
而复苏细胞一般采用快速融化法。以保证细胞外结晶快速融化，以避免慢速融化水分渗入细胞内，再次形成胞内结晶损伤细胞，
目前，对于常见冻存细胞的复苏方法已经较成熟，但是通过对冷冻前后细胞活率的观察，我们发现在复苏过程，快速融化后的细胞冷冻液与清洗液的混合顺序与混合速度对细胞活力和回收率影响颇大。
发明内容
本发明所要解决的技术问题之一在于，提供了一种冻存细胞复苏的方法，可以显著提高细胞的活率至95％以上。
本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题的：一种冻存细胞复苏的方法，包括以下步骤：
(1)清洗液的准备：准备第一离心管，加入10ml的改良杜氏伊格尔培养基(DMEM)无血清培养基，加入10-30％胎牛血清FBS，上下颠倒混匀后，放入水浴锅中预热；
(2)冻存细胞的融化：从液氮中迅速取出细胞冻存管，在30-60s内转移至水浴锅中，2次/s晃动冻存管，控制1min内细胞完全融化；
(3)转移：准备第二离心管，将细胞冷冻液从冻存管中吸出，转移至第二离心管中，然后吸取所有的清洗液逐渐加入到细胞冷冻液中，前期每次一滴，轻摇管身，使清洗液缓慢融入冷冻液中，加入1-2ml清洗液后，逐渐加快加液速度；
(4)离心：将加入清洗液后的细胞冷冻液进行离心；
(5)孵育：离心结束后，取出第二离心管，倒净上清，转移至T-175培养瓶，温度为35-40℃，CO2为3-7％环境下孵育。
作为本发明的优选方式之一，改良杜氏伊格尔培养基(DMEM)的具体成分如下：
作为本发明的优选方式之一，步骤(1)和步骤(2)中水浴锅的温度为35-40℃。
作为本发明的优选方式之一，步骤(1)和步骤(2)中水浴锅的温度为37℃。
作为本发明的优选方式之一，第一离心管和第二离心管为12-18ml。
作为本发明的优选方式之一，步骤(4)中，离心使用的离心机温度设置为35-40℃，离心力400-600g，离心时间3-7min。
作为本发明的优选方式之一，步骤(5)中，温度为37℃，CO2为5％孵育。
作为本发明的优选方式之一，一种冻存细胞复苏的方法，其具体步骤如下：
步骤1：清洗液的准备：准备12ml第一离心管一支，加入10ml的DMEM无血清培养基，加入10％胎牛血清(FBS)，上下颠倒混匀后，放入35℃水浴锅中预热；
步骤2：冻存细胞的融化：从液氮中取出细胞冻存管，30s转移至35℃水浴锅中，2次/s晃动冻存管，控制40s内细胞完全融化；
步骤3：转移：准备12ml第二离心管一支，将细胞冷冻液从冻存管中吸出，转移至第二离心管中，然后吸取全部清洗液逐滴加入到细胞冷冻液中，前期每次一滴，轻摇管身，使清洗液缓慢融入冷冻液中，加入1ml清洗液后，可逐渐加快加液速度；
步骤4：离心：将加入清洗液后的细胞冷冻液进行离心,离心机温度设置为35℃，离心力400g，离心时间3min；
步骤5：孵育：离心结束后，取出离心管，倒净上清，转移至T-175培养瓶，温度为35℃，CO2为3％环境下孵育。
作为本发明的优选方式之一，一种冻存细胞复苏的方法，具体步骤如下：
步骤1：清洗液的准备：准备15ml第一离心管一支，加入10ml的DMEM无血清培养基，加入20％胎牛血清(FBS)，上下颠倒混匀后，放入37℃水浴锅中预热；
步骤2：冻存细胞的融化：从液氮中迅速取出细胞冻存管，45s内迅速转移至35℃水浴锅中，2次/s晃动冻存管，控制50s内细胞完全融化；
步骤3：转移：准备15ml第二离心管一支，将细胞冷冻液从冻存管中吸出，转移至第二离心管中，然后吸取全部清洗液逐滴加入到细胞冷冻液中，前期每次一滴，轻摇管身，使清洗液缓慢融入冷冻液中，加入1.5ml清洗液后，可逐渐加快加液速度；
步骤4：离心：将加入清洗液后的细胞冷冻液进行离心,离心机温度设置为37℃，离心力500g，离心时间5min；
步骤5：孵育：离心结束后，取出离心管，倒净上清，转移至T-175培养瓶，温度为37℃，CO2为5％环境下孵育。
作为本发明的优选方式之一，一种冻存细胞复苏的方法，具体步骤如下：
步骤1：清洗液的准备：准备18ml第一离心管一支，加入10ml的DMEM无血清培养基，加入30％胎牛血清(FBS)，上下颠倒混匀后，放入40℃水浴锅中预热；
步骤2：冻存细胞的融化：从液氮中迅速取出细胞冻存管，60s内转移至40℃水浴锅中，2次/s晃动冻存管，控制1min内细胞完全融化；
步骤3：转移：准备18ml第二离心管一支，将细胞冷冻液从冻存管中吸出，转移至第二离心管中，然后吸取全部清洗液逐滴加入到细胞冷冻液中，前期每次一滴，轻摇管身，使清洗液缓慢融入冷冻液中，加入2ml清洗液后，可逐渐加快加液速度；
步骤4：离心：将加入清洗液后的细胞冷冻液进行离心,离心机温度设置为40℃，离心力600g，离心时间7min；
步骤5：孵育：离心结束后，取出离心管，倒净上清，转移至T-175培养瓶，温度为40℃，CO2为7％环境下孵育。
本发明相比现有技术的优点在于：细胞冷冻液与清洗液的混合顺序与混合速度的控制，可以显著提高细胞的活率至95％以上。
附图说明
图1是本发明实施例中的一种冻存细胞复苏的方法与现有复苏方法的细胞活率比较。
具体实施方式
下面对本发明的实施例作详细说明，本实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
实施例1
如图1所示，本发明提供的一种冻存细胞复苏的方法和以现有常规方法复苏的细胞细胞活率的比较。
以常规方法复苏的细胞的细胞活率偏低，分别为：人皮肤成纤维细胞约76.33％、人宫颈癌细胞约86.00％、人胚肾T细胞72.67％、非洲绿猴肾细胞约77.00％，以本发明提供的复苏方法复苏细胞的活率分别为：人皮肤成纤维细胞约95.43％、人宫颈癌细胞约96.77％、人胚肾T细胞93.53％、非洲绿猴肾细胞约96.30％，本发明提供的复苏方法复苏细胞的活率高于常规复苏方法。
实施例2
一种冻存细胞复苏的方法,其具体步骤如下：
步骤1：清洗液的准备：准备12ml第一离心管一支，加入10ml的DMEM无血清培养基，加入10％胎牛血清(FBS)，上下颠倒混匀后，放入35℃水浴锅中预热；
步骤2：冻存细胞的融化：从液氮中取出细胞冻存管，30s转移至35℃水浴锅中，2次/s晃动冻存管，控制40s内细胞完全融化；
步骤3：转移：准备12ml第二离心管一支，将细胞冷冻液从冻存管中吸出，转移至第二离心管中，然后吸取全部清洗液逐滴加入到细胞冷冻液中，前期每次一滴，轻摇管身，使清洗液缓慢融入冷冻液中，加入1ml清洗液后，可逐渐加快加液速度；
步骤4：离心：将加入清洗液后的细胞冷冻液进行离心,离心机温度设置为35℃，离心力400g，离心时间3min；
步骤5：孵育：离心结束后，取出离心管，倒净上清，转移至T-175培养瓶，温度为35℃，CO2为3％环境下孵育。
实施例3
一种冻存细胞复苏的方法,其具体步骤如下：
步骤1：清洗液的准备：准备15ml第一离心管一支，加入10ml的DMEM无血清培养基，加入20％胎牛血清(FBS)，上下颠倒混匀后，放入37℃水浴锅中预热；
步骤2：冻存细胞的融化：从液氮中迅速取出细胞冻存管，45s内迅速转移至35℃水浴锅中，2次/s晃动冻存管，控制50s内细胞完全融化；
步骤3：转移：准备15ml第二离心管一支，将细胞冷冻液从冻存管中吸出，转移至第二离心管中，然后吸取全部清洗液逐滴加入到细胞冷冻液中，前期每次一滴，轻摇管身，使清洗液缓慢融入冷冻液中，加入1.5ml清洗液后，可逐渐加快加液速度；
步骤4：离心：将加入清洗液后的细胞冷冻液进行离心,离心机温度设置为37℃，离心力500g，离心时间5min；
步骤5：孵育：离心结束后，取出离心管，倒净上清，转移至T-175培养瓶，温度为37℃，CO2为5％环境下孵育。
实施例4
一种冻存细胞复苏的方法,其具体步骤如下：
步骤1：清洗液的准备：准备18ml第一离心管一支，加入10ml的DMEM无血清培养基，加入30％胎牛血清(FBS)，上下颠倒混匀后，放入40℃水浴锅中预热；
步骤2：冻存细胞的融化：从液氮中迅速取出细胞冻存管，60s内转移至40℃水浴锅中，2次/s晃动冻存管，控制1min内细胞完全融化；
步骤3：转移：准备18ml第二离心管一支，将细胞冷冻液从冻存管中吸出，转移至第二离心管中，然后吸取全部清洗液逐滴加入到细胞冷冻液中，前期每次一滴，轻摇管身，使清洗液缓慢融入冷冻液中，加入2ml清洗液后，可逐渐加快加液速度；
步骤4：离心：将加入清洗液后的细胞冷冻液进行离心,离心机温度设置为40℃，离心力600g，离心时间7min；
步骤5：孵育：离心结束后，取出离心管，倒净上清，转移至T-175培养瓶，温度为40℃，CO2为7％环境下孵育。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种冻存细胞复苏的方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)清洗液的准备：准备第一离心管，加入10ml的改良杜氏伊格尔培养基无血清培养基，加入10-30％胎牛血清，上下颠倒混匀后，放入水浴锅中预热；
(2)冻存细胞的融化：从液氮中迅速取出细胞冻存管，在30-60s内转移至水浴锅中，2次/s晃动冻存管，控制1min内细胞完全融化；
(3)转移：准备第二离心管，将细胞冷冻液从冻存管中吸出，转移至第二离心管中，然后吸取所有的清洗液逐渐加入到细胞冷冻液中，前期每次一滴，轻摇管身，使清洗液缓慢融入冷冻液中，加入1-2ml清洗液后，逐渐加快加液速度；
(4)离心：将加入清洗液后的细胞冷冻液进行离心；
(5)孵育：离心结束后，取出第二离心管，倒净上清，转移至T-175培养瓶，温度为35-40℃，CO2为3-7％环境下孵育。
2.根据权利要求1所述的一种冻存细胞复苏的方法，其特征在于：改良杜氏伊格尔培养基的具体成分如下：
3.根据权利要求1所述的一种冻存细胞复苏的方法，其特征在于：步骤(1)和步骤(2)中水浴锅的温度为35-40℃。
4.根据权利要求2所述的一种冻存细胞复苏的方法，其特征在于：步骤(1)和步骤(2)中水浴锅的温度为37℃。
5.根据权利要求1所述的一种冻存细胞复苏的方法，其特征在于：第一离心管和第二离心管为12-18ml。
6.根据权利要求1所述的一种冻存细胞复苏的方法，其特征在于：步骤(4)中，离心使用的离心机温度设置为35-40℃，离心力400-600g，离心时间3-7min。
7.根据权利要求1所述的一种冻存细胞复苏的方法，其特征在于：步骤(5)中，温度为37℃，CO2为5％孵育。
8.根据权利要求1所述的一种冻存细胞复苏的方法，其特征在于：其具体步骤如下：
步骤1：清洗液的准备：准备12ml第一离心管一支，加入10ml的DMEM无血清培养基，加入10％胎牛血清FBS，上下颠倒混匀后，放入35℃水浴锅中预热；
步骤2：冻存细胞的融化：从液氮中取出细胞冻存管，30s转移至35℃水浴锅中，2次/s晃动冻存管，控制40s内细胞完全融化；
步骤3：转移：准备12ml第二离心管一支，将细胞冷冻液从冻存管中吸出，转移至第二离心管中，然后吸取全部清洗液逐滴加入到细胞冷冻液中，前期每次一滴，轻摇管身，使清洗液缓慢融入冷冻液中，加入1ml清洗液后，可逐渐加快加液速度；
步骤4：离心：将加入清洗液后的细胞冷冻液进行离心,离心机温度设置为35℃，离心力400g，离心时间3min；
步骤5：孵育：离心结束后，取出离心管，倒净上清，转移至T-175培养瓶，温度为35℃，CO2为3％环境下孵育。
9.根据权利要求1所述的一种冻存细胞复苏的方法，其特征在于：具体步骤如下：
步骤1：清洗液的准备：准备15ml第一离心管一支，加入10ml的DMEM无血清培养基，加入20％胎牛血清FBS，上下颠倒混匀后，放入37℃水浴锅中预热；
步骤2：冻存细胞的融化：从液氮中迅速取出细胞冻存管，45s内迅速转移至35℃水浴锅中，2次/s晃动冻存管，控制50s内细胞完全融化；
步骤3：转移：准备15ml第二离心管一支，将细胞冷冻液从冻存管中吸出，转移至第二离心管中，然后吸取全部清洗液逐滴加入到细胞冷冻液中，前期每次一滴，轻摇管身，使清洗液缓慢融入冷冻液中，加入1.5ml清洗液后，可逐渐加快加液速度；
步骤4：离心：将加入清洗液后的细胞冷冻液进行离心,离心机温度设置为37℃，离心力500g，离心时间5min；
步骤5：孵育：离心结束后，取出离心管，倒净上清，转移至T-175培养瓶，温度为37℃，CO2为5％环境下孵育。
10.根据权利要求1所述的一种冻存细胞复苏的方法，其特征在于：具体步骤如下：
步骤1：清洗液的准备：准备18ml第一离心管一支，加入10ml的DMEM无血清培养基，加入30％胎牛血清FBS，上下颠倒混匀后，放入40℃水浴锅中预热；
步骤2：冻存细胞的融化：从液氮中迅速取出细胞冻存管，60s内转移至40℃水浴锅中，2次/s晃动冻存管，控制1min内细胞完全融化；
步骤3：转移：准备18ml第二离心管一支，将细胞冷冻液从冻存管中吸出，转移至第二离心管中，然后吸取全部清洗液逐滴加入到细胞冷冻液中，前期每次一滴，轻摇管身，使清洗液缓慢融入冷冻液中，加入2ml清洗液后，可逐渐加快加液速度；
步骤4：离心：将加入清洗液后的细胞冷冻液进行离心,离心机温度设置为40℃，离心力600g，离心时间7min；
步骤5：孵育：离心结束后，取出离心管，倒净上清，转移至T-175培养瓶，温度为40℃，CO2为7％环境下孵育。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810128819.4A CN108330098A (zh) | 2018-02-08 | 2018-02-08 | 一种冻存细胞复苏的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810128819.4A CN108330098A (zh) | 2018-02-08 | 2018-02-08 | 一种冻存细胞复苏的方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN108330098A true CN108330098A (zh) | 2018-07-27 |
Family
ID=62927249
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201810128819.4A Pending CN108330098A (zh) | 2018-02-08 | 2018-02-08 | 一种冻存细胞复苏的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN108330098A (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110904027A (zh) * | 2019-11-28 | 2020-03-24 | 郑州伊美诺生物技术有限公司 | 适用于哺乳动物细胞悬浮培养复苏的方法 |
| CN112899221A (zh) * | 2019-12-03 | 2021-06-04 | 上海益诺思生物技术股份有限公司 | 一种用于实时细胞分析技术的疾病型hiPSC-CM细胞的处理方法 |
| CN115161284A (zh) * | 2022-07-04 | 2022-10-11 | 无锡多宁生物科技有限公司 | 一种lmh悬浮细胞复苏培养方法及其应用 |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1981866A (zh) * | 2006-04-30 | 2007-06-20 | 解放军三○二医院生物治疗研究中心 | 新型慢性乙肝治疗性dc疫苗 |
| CN102140433A (zh) * | 2010-12-28 | 2011-08-03 | 北京民海生物科技有限公司 | 一种细胞冻存方法 |
| CN102559573A (zh) * | 2012-01-09 | 2012-07-11 | 北京大北农科技集团股份有限公司 | 一种提高传代细胞系冻存细胞复苏率的复苏方法 |
| CN105994255A (zh) * | 2016-08-11 | 2016-10-12 | 哈尔滨市疾病预防控制中心 | Mdck细胞的冻存和复苏 |
| CN106635952A (zh) * | 2016-09-26 | 2017-05-10 | 北京焕生汇生物技术研究院 | 一种新型的细胞复苏试剂 |
| CN107034195A (zh) * | 2017-05-18 | 2017-08-11 | 北京焕生汇生物技术研究院 | 一种人类诱导性多能干细胞专用的复苏试剂及复苏方法 |
| CN107384857A (zh) * | 2017-08-02 | 2017-11-24 | 广州中科博雅干细胞科技有限公司 | 自体脂肪间充质干细胞的培养方法和使用的培养基 |
-
2018
- 2018-02-08 CN CN201810128819.4A patent/CN108330098A/zh active Pending
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1981866A (zh) * | 2006-04-30 | 2007-06-20 | 解放军三○二医院生物治疗研究中心 | 新型慢性乙肝治疗性dc疫苗 |
| CN102140433A (zh) * | 2010-12-28 | 2011-08-03 | 北京民海生物科技有限公司 | 一种细胞冻存方法 |
| CN102559573A (zh) * | 2012-01-09 | 2012-07-11 | 北京大北农科技集团股份有限公司 | 一种提高传代细胞系冻存细胞复苏率的复苏方法 |
| CN105994255A (zh) * | 2016-08-11 | 2016-10-12 | 哈尔滨市疾病预防控制中心 | Mdck细胞的冻存和复苏 |
| CN106635952A (zh) * | 2016-09-26 | 2017-05-10 | 北京焕生汇生物技术研究院 | 一种新型的细胞复苏试剂 |
| CN107034195A (zh) * | 2017-05-18 | 2017-08-11 | 北京焕生汇生物技术研究院 | 一种人类诱导性多能干细胞专用的复苏试剂及复苏方法 |
| CN107384857A (zh) * | 2017-08-02 | 2017-11-24 | 广州中科博雅干细胞科技有限公司 | 自体脂肪间充质干细胞的培养方法和使用的培养基 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| HOLDEN T MAECKER: "Impact of cryopreservation on tetramer, cytokine flow cytometry,", 《BMC IMMUNOLOGY》 * |
| 杨新建: "《动物细胞培养技术》", 31 August 2013, 中国农业大学出版社 * |
| 金岩: "《组织工程学原理与技术》", 1 July 2004, 第四军医大学出版社 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110904027A (zh) * | 2019-11-28 | 2020-03-24 | 郑州伊美诺生物技术有限公司 | 适用于哺乳动物细胞悬浮培养复苏的方法 |
| CN112899221A (zh) * | 2019-12-03 | 2021-06-04 | 上海益诺思生物技术股份有限公司 | 一种用于实时细胞分析技术的疾病型hiPSC-CM细胞的处理方法 |
| CN115161284A (zh) * | 2022-07-04 | 2022-10-11 | 无锡多宁生物科技有限公司 | 一种lmh悬浮细胞复苏培养方法及其应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN108330098A (zh) | 一种冻存细胞复苏的方法 | |
| US20100323446A1 (en) | Method of collecting placental cells | |
| CN109744227A (zh) | 一种细胞冻存液及其应用 | |
| CN104162314B (zh) | 一种植物有效成分的提取工艺及其应用 | |
| Zheng et al. | On-chip loading and unloading of cryoprotectants facilitate cell cryopreservation by rapid freezing | |
| CN106801109A (zh) | 一种猪非典型瘟病毒rt‑pcr检测特异性引物、试剂盒及检测方法 | |
| CN106973889A (zh) | 一种白血病治疗用的细胞冻存液 | |
| CN113854280B (zh) | 一种低温保存液及其制备方法和应用 | |
| Jansing et al. | Isolation of rat and mouse alveolar type II epithelial cells | |
| CN103820512B (zh) | 一种抗冻性k-卡拉胶寡糖的制备方法及应用 | |
| US20150259643A1 (en) | Cell Preparation Method | |
| Romal et al. | Generation, maintenance and HBV infection of human liver organoids | |
| CN106282415A (zh) | 一种利用分子标记快速检测西葫芦病毒病的方法 | |
| CN102440234B (zh) | 人体唾液保存固定液及其制备与应用 | |
| CN106942202A (zh) | 一种用于mdbk细胞的无血清冻存培养基 | |
| Garza et al. | Transfer of caprine blastocysts vitrified by the open pulled straw (OPS) or the solid surface procedure and warmed in sucrose-free medium | |
| CN106635952A (zh) | 一种新型的细胞复苏试剂 | |
| CN203474805U (zh) | 一种流感病毒分离检测试剂盒 | |
| CN107267467A (zh) | 一种猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离方法 | |
| CN105963675B (zh) | 纤维连接蛋白抑制剂-四肽rgds在制备抗ev71病毒药物的用途 | |
| CN108293981A (zh) | 一种贴壁肿瘤细胞冻存方法及改良冻存液配方 | |
| CN109439631A (zh) | 一种过表达ccr2的间质干细胞用于治疗急性缺血性脑卒中及其制备方法 | |
| CN104387425B (zh) | 从楸树内生真菌发酵液中浓缩分离楸灵素的方法及其应用 | |
| CN108707694A (zh) | 棘胸蛙虹彩病毒一种raa诊断技术方法 | |
| CN108588154A (zh) | 一种热处理去除PCV2 VLPs中非VLPs蛋白的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20180727 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |