CN108314705A - 具有dpp-iv抑制功能的羊乳清蛋白肽、其制备方法及其应用 - Google Patents

具有dpp-iv抑制功能的羊乳清蛋白肽、其制备方法及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种具有DPP‑IV抑制功能的羊乳清蛋白肽，包括混合肽，所述混合肽由氨基酸序列为Ile‑Pro‑Ala‑Val‑Phe‑Lys‑Ile‑Asp的肽、氨基酸序列为Pro‑Pro‑Ala‑Ser‑Glu‑Val‑Val‑Lys‑Pro的肽以及氨基酸序列为Val‑Val‑Pro‑Pro‑Phe‑Leu‑Gln的肽混合而成。本发明还提供一种上述具有DPP‑IV抑制功能的羊乳清蛋白肽的制备方法，本发明制备方法过程简单，整个加工过程中没有添加酸或碱进行pH的调整，产品保持较好的功能特性，较易实现产业化生产。本发明还公开一种上述具有DPP‑IV抑制功能的羊乳清蛋白肽的应用，用于制备食品、保健食品以及药物中的至少一种，应用广泛。

Description

具有DPP-IV抑制功能的羊乳清蛋白肽、其制备方法及其应用
技术领域
本发明涉及食品技术领域，特别地，涉及一种具有DPP-IV抑制功能的羊乳清蛋白肽、其制备方法及其应用。
背景技术
降血糖功能因子是指能降低糖尿病患者血糖浓度以及改善其症状的生物活性成分。目前研究较多的天然产物类降糖因子、矿物质类降糖因子、维生素类降糖因子，其作用机理各不相同。天然产物类降糖因子按化学结构可分为黄酮类、活性多糖类、生物碱类、皂甙类、萜类、多肽类等。自人工合成胰岛素以来，磺脲类药物、双胍类、胰岛素增敏剂、糖抑制剂等各种口服或注射的药物相继问世，然而化学药物常产生一定的毒副作用，天然降血糖成分具有作用温和而持久，性质稳定，几乎无毒性反应，还可多种降糖成分并存，综合起作用等优点，备受患者以及和医学界的青睐，也成为了降血糖功能因子的主要研究方向。
DPP IV二肽基肽酶(一种负责降解GLP1的酶)：其作用是使GLP-1分裂，降解，DPPIV是一种能使促胰岛素激素GLP-1迅速失活的酶。抑制DPP-IV 能提高GLP-1及其他生物活性肽的激素活性，从而刺激胰岛素的释放，减少胰高血糖素的分泌，有利于2型糖尿病患者血糖高水平的调节。
现有技术中关于DPP IV抑制肽开发的报道，主要是通过酶解的方法从蛋白源获得，酶解过程通常都需要通过添加酸或碱来调节体系的pH值，这无疑影响了获得的DPP IV抑制肽产品的功能特性，且增加了操作的繁琐程度，这些方法均不同程度地增加了操作步骤和生产成本，制约了产业化规模化的生产及蛋白肽的得率。
因此，开发一种具有DPP-IV抑制功能的羊乳清蛋白肽以及其制备方法具有重要意义。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种具有DPP-IV抑制功能的羊乳清蛋白肽，此种羊乳清蛋白肽利用羊乳清蛋白粉为原料，原料易得；此种羊乳清蛋白肽具有特定降血糖功能，具有DPP-IV抑制功能。具体技术方案是：
一种具有DPP-IV抑制功能的羊乳清蛋白肽，包括混合肽，所述混合肽由氨基酸序列为Ile-Pro-Ala-Val-Phe-Lys-Ile-Asp的肽、氨基酸序列为 Pro-Pro-Ala-Ser-Glu-Val-Val-Lys-Pro的肽以及氨基酸序列为Val-Val-Pro-Pro- Phe-Leu-Gln的肽混合而成。
以上技术方案中优选的，所述混合肽在所述羊乳清蛋白肽中的质量百分数为 82-90％；
所述氨基酸序列为Ile-Pro-Ala-Val-Phe-Lys-Ile-Asp的肽所占质量百分数为20-26％；
所述氨基酸序列为Pro-Pro-Ala-Ser-Glu-Val-Val-Lys-Pro的肽所占质量百分数为 26-35％；
所述氨基酸序列为Val-Val-Pro-Pro-Phe-Leu-Gln的肽所占质量百分数为29-37％。
本发明还提供一种上述具有DPP-IV抑制功能的羊乳清蛋白肽的制备方法，包括以下步骤：
第一步、羊乳清蛋白粉加水，先在一定温度下搅拌，再经动态超高压微射流处理，最后得到羊乳清蛋白液；
第二步、将第一步所得羊乳清蛋白液进行超声处理，得到蛋白液；
第三步、向第二步所得蛋白液中加入复合蛋白酶进行酶解，一定温度下保温，冷却后，过滤分离，收集分离液；
第四步、将第三步所得分离液通过二步超滤法处理，收集滤液；
第五步、将第四步所得滤液过柱分离，收集洗脱峰，即得具有DPP-IV抑制功能的羊乳清蛋白肽。
以上技术方案中优选的，所述第一步中：所述羊乳清蛋白粉的质量与水的质量配比为12-15：1；一定温度下处理具体是：在温度为40℃-55℃条件下搅拌30-80分钟。
以上技术方案中优选的，所述第二步中超声处理具体是：将第一步所得羊乳清蛋白液升温至65℃-75℃，在超声频率为60-100kH条件下处理15-25分钟。
以上技术方案中优选的，所述第三步中：所述复合蛋白酶的重量为蛋白液中乳清蛋白总重量的0.6-1.2％；所述复合蛋白酶由碱性蛋白酶、中性蛋白酶和风味蛋白酶组成，所述碱性蛋白酶、中性蛋白酶和风味蛋白酶的质量配比为1-2：1：1；所述酶解具体是：在温度为50℃-65℃条件下酶解1.0-4.0小时；一定温度下保温具体是：在温度为90℃-100℃条件下保温10-20分钟；冷却至65℃-75℃；过滤分离具体是通过硅藻土进行过滤分离。
以上技术方案中优选的，所述第四步中二步超滤法处理具体是：先将分离液用孔径为5000D的膜超滤，再用孔径为2000D的膜超滤，最后得到滤液，滤液包括分子量小于2000D的蛋白肽。
以上技术方案中优选的，所述第五步具体是：将滤液过柱分离，洗脱液为去离子水，洗脱峰在280nm下进行检测，收集第2个洗脱峰，浓缩、冷冻干燥得到羊乳清蛋白肽；再用RP-HPLC反相高效液相色谱进行分离，收集经过RP-HPLC反相高效液相色谱分离中第11-12分钟洗脱出来的肽液，进一步纯化，得到具有DPP-IV抑制功能的羊乳清蛋白肽。
采用本发明的制备方法，效果是：
1、本发明方法制备过程简单，整个加工过程中没有添加酸或碱进行pH的调整，产品保持较好的功能特性，较易实现产业化生产。
2、本发明将羊乳清蛋白液温度调至65℃-75℃，在超声频率为60-100kH条件下进行超声处理，能够较好地改变羊乳清蛋白的组织结构，使下面酶解步骤缩短酶解时间和使用较少的酶量，能够获得优质的蛋白肽。
3、本发明利用动态超高压微射流处理和特定频率超声波技术处理的羊乳清蛋白液，可以明显改善羊乳清蛋白对酶的敏感性，降低酶的使用量。
4、本发明采用多种食品级复合蛋白酶(碱性蛋白酶、中性蛋白酶和风味蛋白酶)，经在温和条件下，经过适度酶解获得特定分子量和肽组成的羊乳清蛋白肽，不加任何添加剂，为100％羊乳清蛋白肽。
5、本发明采用二步超滤法处理结合过柱分离，蛋白肽中分子量小于1500 的肽的比例为90％以上，具有非常明确的肽的组成。
6、本发明所得羊乳清蛋白肽具有很好的DPP-Ⅳ抑制功能，制得的羊乳清蛋白肽DPP-IV抑制活性(IC50值)低于172μg/mL，开发的羊乳清蛋白VVPPFLQ 肽DPP-IV抑制活性(IC50值)为96μg/mL。
本发明还公开一种上述具有DPP-IV抑制功能的羊乳清蛋白肽的应用，用于制备食品、保健食品以及药物中的至少一种。本发明所得的羊乳清蛋白肽具有良好的风味和色泽，能广泛应用于食品、保健食品以及药物等领域。
除了上面所描述的目的、特征和优点之外，本发明还有其它的目的、特征和优点。下面将参照实施例，对本发明作进一步详细的说明。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明的技术方案进行详细说明，但是本发明可以根据权利要求限定和覆盖的多种不同方式实施。
除非另有定义，下文中所使用的所有专业术语与本领域技术人员通常理解的含义相同。本文中所使用的专业术语只是为了描述具体实施例的目的，并不是旨在限制本发明的保护范围。
除有特别说明，本发明中用到的各种试剂、原料均为可以从市场上购买的商品或者可以通过公知的方法制得的产品。以下实施例的％均指质量百分比。羊乳清蛋白肽购自澳优乳业(中国)有限公司，中性蛋白酶、碱性蛋白酶、风味蛋白酶均购自诺维信(中国)投资有限公司。
实施例1：
一种具有DPP-IV抑制功能的羊乳清蛋白肽，其包括混合肽，所述混合肽由氨基酸序列为Ile-Pro-Ala-Val-Phe-Lys-Ile-Asp的肽、氨基酸序列为 Pro-Pro-Ala-Ser-Glu-Val-Val-Lys-Pro的肽以及氨基酸序列为Val-Val-Pro-Pro- Phe-Leu-Gln的肽混合而成，具体是：所述混合肽在所述羊乳清蛋白肽中的质量百分数为85％，其中：所述氨基酸序列为Ile-Pro-Ala-Val-Phe-Lys-Ile-Asp(IPAVFKID，详序列表SEQ ID NO.1)的肽所占质量百分数为23％，所述氨基酸序列为 Pro-Pro-Ala-Ser-Glu-Val-Val-Lys-Pro(PPASEVVKP，详序列表SEQ ID NO.2)的肽所占质量百分数为30％，所述氨基酸序列为Val-Val-Pro-Pro-Phe-Leu-Gln (VVPPFLQ，详序列表SEQ ID NO.3)的肽所占质量百分数为32％。
上述具有DPP-IV抑制功能的羊乳清蛋白肽的制备方法如下：
第一步、羊乳清蛋白粉加水，先在一定温度下搅拌，再经动态超高压微射流处理，最后得到羊乳清蛋白液，其中：羊乳清蛋白粉100克，水的重量为羊乳清蛋白粉重量的12倍；先在45℃条件下搅拌(搅拌速率是120转/分钟)1小时，再经过动态超高压微射流处理3次；
第二步、先将第一步所得羊乳清蛋白液升温至65℃，利用超声波发生器经频率为60kH的超声波处理20分钟，得到蛋白液；
第三步、向第二步所得蛋白液中加入复合蛋白酶进行酶解，一定温度下保温，冷却后，过滤分离，收集分离液，其中：所述复合蛋白酶的重量为蛋白液中乳清蛋白总重量的0.6％，复合蛋白酶由碱性蛋白酶、中性蛋白酶以及风味蛋白酶按照质量比为2： 1：1的比例组成；在温度为55℃的条件下进行酶解反应4.0小时；在温度为95℃的条件下保温10分钟，冷却至75℃，通过硅藻土进行过滤分离；
第四步、将第三步所得分离液通过二步超滤法处理，收集滤液，其中：二步超滤法处理具体是：先利用孔径为5000道尔顿的陶瓷膜超滤，将分子量小于5000道尔顿的蛋白和多肽分离出来，再用孔径为2000道尔顿的膜，将分子量小于2000道尔顿的蛋白肽分离出来；
第五步、将第四步所得滤液过柱分离，收集洗脱峰，即得具有DPP-IV抑制功能的羊乳清蛋白肽，其中：滤液取分子量为小于2000的蛋白肽液，再经过Sephadex G-15 凝胶分离，洗脱液为去离子水，洗脱峰在280nm下进行检测，收集第2个洗脱峰；通过浓缩、冷冻干燥，得到羊乳清蛋白肽；再用RP-HPLC反相高效液相色谱进行分离，收集经过RP-HPLC反相高效液相色谱分离中第11-12分钟洗脱出来的肽液，经浓缩、冷冻干燥，具有DPP-IV抑制功能的羊乳清蛋白肽。
本实施例所得具有DPP-IV抑制功能的羊乳清蛋白肽通过LC-MS/MS对其主要成分进行测定。
实施例2：
具有DPP-IV抑制功能的羊乳清蛋白肽，其包括混合肽，所述混合肽由氨基酸序列为Ile-Pro-Ala-Val-Phe-Lys-Ile-Asp的肽、氨基酸序列为 Pro-Pro-Ala-Ser-Glu-Val-Val-Lys-Pro的肽以及氨基酸序列为Val-Val-Pro-Pro- Phe-Leu-Gln的肽混合而成，具体是：所述混合肽在所述羊乳清蛋白肽中的质量百分数为87％，其中：所述氨基酸序列为Ile-Pro-Ala-Val-Phe-Lys-Ile-Asp(IPAVFKID)的肽所占质量百分数为23％，所述氨基酸序列为Pro-Pro-Ala-Ser-Glu-Val-Val-Lys-Pro (PPASEVVKP)的肽所占质量百分数为31％，所述氨基酸序列为Val-Val-Pro-Pro- Phe-Leu-Gln(VVPPFLQ)的肽所占质量百分数为33％。
上述具有DPP-IV抑制功能的羊乳清蛋白肽的制备方法如下：
第一步、羊乳清蛋白粉加水，先在一定温度下搅拌，再经动态超高压微射流处理，最后得到羊乳清蛋白液，其中：羊乳清蛋白粉500克，水的重量为羊乳清蛋白粉重量的15倍；先在50℃条件下搅拌(搅拌速率是120转/分钟)1小时，再经过动态超高压微射流处理3次；
第二步、先将第一步所得羊乳清蛋白液升温至75℃，利用超声波发生器经频率为80kH的超声波处理15分钟，得到蛋白液；
第三步、向第二步所得蛋白液中加入复合蛋白酶进行酶解，一定温度下保温，冷却后，过滤分离，收集分离液，其中：复合蛋白酶的重量为蛋白液重量的1.2％，复合蛋白酶由碱性蛋白酶、中性蛋白酶以及风味蛋白酶按照质量比为1：1：1的比例组成；在温度为60℃的条件下进行酶解反应2.0小时；在温度为95℃的条件下保温10分钟，冷却至75℃，通过硅藻土进行过滤分离；
第四步、将第三步所得分离液通过二步超滤法处理，收集滤液，其中：二步超滤法处理具体是：先利用孔径为5000道尔顿的陶瓷膜超滤，将分子量小于5000道尔顿的蛋白和多肽分离出来，再用孔径为2000道尔顿的膜，将分子量小于2000道尔顿的蛋白肽分离出来；
第五步、将第四步所得滤液过柱分离，收集洗脱峰，即得具有DPP-IV抑制功能的羊乳清蛋白肽，其中：滤液取分子量为小于2000的蛋白肽液，再经过Sephadex G-15 凝胶分离，洗脱液为去离子水，洗脱峰在280nm下进行检测，收集第2个洗脱峰；通过浓缩、冷冻干燥，得到羊乳清蛋白肽；再用RP-HPLC反相高效液相色谱进行分离，收集经过RP-HPLC反相高效液相色谱分离中第11-12分钟洗脱出来的肽液，经浓缩、冷冻干燥，具有DPP-IV抑制功能的羊乳清蛋白肽。
本实施例所得具有DPP-IV抑制功能的羊乳清蛋白肽通过LC-MS/MS对其主要成分进行测定。
实施例3：
具有DPP-IV抑制功能的羊乳清蛋白肽，其包括混合肽，所述混合肽由氨基酸序列为Ile-Pro-Ala-Val-Phe-Lys-Ile-Asp的肽、氨基酸序列为 Pro-Pro-Ala-Ser-Glu-Val-Val-Lys-Pro的肽以及氨基酸序列为Val-Val-Pro-Pro- Phe-Leu-Gln的肽混合而成，具体是：所述混合肽在所述羊乳清蛋白肽中的质量百分数为86％，其中：所述氨基酸序列为Ile-Pro-Ala-Val-Phe-Lys-Ile-Asp(IPAVFKID)的肽所占质量百分数为23％，所述氨基酸序列为Pro-Pro-Ala-Ser-Glu-Val-Val-Lys-Pro (PPASEVVKP)的肽所占质量百分数为31％，所述氨基酸序列为Val-Val-Pro-Pro- Phe-Leu-Gln(VVPPFLQ)的肽所占质量百分数为32％。
上述具有DPP-IV抑制功能的羊乳清蛋白肽的制备方法如下：
第一步、羊乳清蛋白粉加水，先在一定温度下搅拌，再经动态超高压微射流处理，最后得到羊乳清蛋白液，其中：羊乳清蛋白粉1000克，水的重量为羊乳清蛋白粉重量的15倍；先在50℃条件下搅拌(搅拌速率是120转/分钟)1小时，再经过动态超高压微射流处理3次；
第二步、先将第一步所得羊乳清蛋白液升温至65℃，利用超声波发生器经频率为100kH的超声波处理25分钟，得到蛋白液；
第三步、向第二步所得蛋白液中加入复合蛋白酶进行酶解，一定温度下保温，冷却后，过滤分离，收集分离液，其中：复合蛋白酶的重量为蛋白液重量的1.2％，复合蛋白酶由碱性蛋白酶、中性蛋白酶以及风味蛋白酶按照质量比为2：1：1的比例组成；在温度为55℃的条件下进行酶解反应1.0小时；在温度为95℃的条件下保温10分钟，冷却至75℃，通过硅藻土进行过滤分离；
第四步、将第三步所得分离液通过二步超滤法处理，收集滤液，其中：二步超滤法处理具体是：先利用孔径为5000道尔顿的陶瓷膜超滤，将分子量小于5000道尔顿的蛋白和多肽分离出来，再用孔径为2000道尔顿的膜，将分子量小于2000道尔顿的蛋白肽分离出来；
第五步、将第四步所得滤液过柱分离，收集洗脱峰，即得具有DPP-IV抑制功能的羊乳清蛋白肽，其中：滤液取分子量为小于2000的蛋白肽液，再经过Sephadex G-15 凝胶分离，洗脱液为去离子水，洗脱峰在280nm下进行检测，收集第2个洗脱峰；通过浓缩、冷冻干燥，得到羊乳清蛋白肽；再用RP-HPLC反相高效液相色谱进行分离，收集经过RP-HPLC反相高效液相色谱分离中第11-12分钟洗脱出来的肽液，经浓缩、冷冻干燥，具有DPP-IV抑制功能的羊乳清蛋白肽。
本实施例所得具有DPP-IV抑制功能的羊乳清蛋白肽通过LC-MS/MS对其主要成分进行测定。
采用实施例1-3所得具有DPP-IV抑制功能的羊乳清蛋白肽进行DPP-Ⅳ抑制能力的测定试验，详情如下：
1、试验分组：
样品一：采用实施例1所得具有DPP-IV抑制功能的羊乳清蛋白肽；
样品二：采用实施例2所得具有DPP-IV抑制功能的羊乳清蛋白肽；
样品三：采用实施例3所得具有DPP-IV抑制功能的羊乳清蛋白肽；
样品四：采用实施例1中的羊乳清蛋白粉。
2、试验方法：
将样品用100mmol/L的Tris-HCL(pH8.0)缓冲液稀释至合适的浓度，吸取25μL样品稀释液与25μL底物(浓度为1.6mmol/L)混合，加入到96孔酶标板中。在37℃下孵育10min后，加入50μL DPP-IV酶液(酶活力为8U/L)，混匀后在37℃下精确孵育60min，立即加入100μL1mol/L的醋酸-醋酸钠(pH 4.0)缓冲液终止反应，于405nm下测吸光值A，并根据下列公式计算样品的 DPP-IV抑制率。
DPP-IV抑制率％＝{1-(样品吸光值A-样品空白对照吸光值B)/(阴性对照吸光值C-阴性空白对照吸光值D)}×100
其中：样品吸光值A：为样品反应液在405nm处的吸光值；样品空白对照吸光值B：以Tris-HCL缓冲液代替DPP-IV酶液作为样品空白对照在405nm处的吸光值；阴性对照吸光值C：以Tris-HCL缓冲液代替样品作为阴性对照在 405nm处的吸光值；阴性空白对照吸光值D：以Tris-HCL缓冲液代替DPP-IV 酶液和样品作为阴性空白对照在405nm处的吸光值。
DPP-IV抑制的IC50值测定：测定样品在不同浓度下的DPP-IV抑制率，以多肽浓度的对数值与抑制率做回归曲线，得到回归方程，由此计算IC50，即50％的 DPP-IV酶活性抑制是肽的浓度。结果见表1：
表1样品一至样品四以及几种合成肽的DPP-IV抑制能力统计表
产品蛋白肽 100ug/mL样品的DPP-IV抑制率(％) DPP-IV抑制活性(IC50值)μg/mL
样品一 75.2％ 167.5
样品二 74.0％ 170.4
样品三 73.6％ 171.8
样品四 14.7％ 3342.5
IPAVFKID(合成肽) 65.2％ 190.3
PPASEVVKP(合成肽) 68.2％ 189.8
VVPPFLQ(合成肽) 90.3％ 95.8
由表1可知：本发明羊乳清蛋白肽具有很好的DPP-IV抑制能力，DPP-IV抑制活性(IC50值)低于172μg/mL，显著低于同类复合蛋白肽的IC50值，其中VVPPFLQ肽具有很好的DPP-IV抑制能力，DPP-IV抑制活性(IC50值)为96μg/mL。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 海普诺凯营养品有限公司, 澳优海普诺凯（荷兰）乳业公司
<120> 具有DPP-IV抑制功能的羊乳清蛋白肽、其制备方法及其应用
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 8
<212> PRT
<213> 羊乳清蛋白肽(2 Ambystoma laterale x Ambystoma jeffersonianum)
<400> 1
Ile Pro Ala Val Phe Lys Ile Asp
1 5
<210> 2
<211> 9
<212> PRT
<213> 羊乳清蛋白肽(2 Ambystoma laterale x Ambystoma jeffersonianum)
<400> 2
Pro Pro Ala Ser Glu Val Val Lys Pro
1 5
<210> 3
<211> 7
<212> PRT
<213> 羊乳清蛋白肽(2 Ambystoma laterale x Ambystoma jeffersonianum)
<400> 3
Val Val Pro Pro Phe Leu Gln
1 5

Claims (9)

1.一种具有DPP-IV抑制功能的羊乳清蛋白肽，其特征在于：包括混合肽，所述混合肽由氨基酸序列为Ile-Pro-Ala-Val-Phe-Lys-Ile-Asp的肽、氨基酸序列为Pro-Pro-Ala-Ser-Glu-Val-Val-Lys-Pro的肽以及氨基酸序列为Val-Val-Pro-Pro-Phe-Leu-Gln的肽混合而成。
2.根据权利要求1所述的具有DPP-IV抑制功能的羊乳清蛋白肽，其特征在于：所述混合肽在所述羊乳清蛋白肽中的质量百分数为82-90％；
所述氨基酸序列为Ile-Pro-Ala-Val-Phe-Lys-Ile-Asp的肽所占质量百分数为20-26％；
所述氨基酸序列为Pro-Pro-Ala-Ser-Glu-Val-Val-Lys-Pro的肽所占质量百分数为26-35％；
所述氨基酸序列为Val-Val-Pro-Pro-Phe-Leu-Gln的肽所占质量百分数为29-37％。
3.一种如权利要求1-2任意一项所述的具有DPP-IV抑制功能的羊乳清蛋白肽的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
第一步、羊乳清蛋白粉加水，先在一定温度下搅拌，再经动态超高压微射流处理，最后得到羊乳清蛋白液；
第二步、将第一步所得羊乳清蛋白液进行超声处理，得到蛋白液；
第三步、向第二步所得蛋白液中加入复合蛋白酶进行酶解，一定温度下保温，冷却后，过滤分离，收集分离液；
第四步、将第三步所得分离液通过二步超滤法处理，收集滤液；
第五步、将第四步所得滤液过柱分离，收集洗脱峰，即得具有DPP-IV抑制功能的羊乳清蛋白肽。
4.根据权利要求3所述的具有DPP-IV抑制功能的羊乳清蛋白肽的制备方法，其特征在于：所述第一步中：所述羊乳清蛋白粉的质量与水的质量配比为12-15：1；一定温度下处理具体是：在温度为40℃-55℃条件下搅拌30-80分钟。
5.根据权利要求3所述的具有DPP-IV抑制功能的羊乳清蛋白肽的制备方法，其特征在于：所述第二步中超声处理具体是：将第一步所得羊乳清蛋白液升温至65℃-75℃，在超声频率为60-100kH条件下处理15-25分钟。
6.根据权利要求3所述的具有DPP-IV抑制功能的羊乳清蛋白肽的制备方法，其特征在于：所述第三步中：
所述复合蛋白酶的重量为蛋白液中乳清蛋白总重量的0.6-1.2％；所述复合蛋白酶由碱性蛋白酶、中性蛋白酶和风味蛋白酶组成，所述碱性蛋白酶、中性蛋白酶和风味蛋白酶的质量配比为1-2：1：1；
所述酶解具体是：在温度为50℃-65℃条件下酶解1.0-4.0小时；
一定温度下保温具体是：在温度为90℃-100℃条件下保温10-20分钟；
冷却至65℃-75℃；
过滤分离具体是通过硅藻土进行过滤分离。
7.根据权利要求3所述的具有DPP-IV抑制功能的羊乳清蛋白肽的制备方法，其特征在于：所述第四步中二步超滤法处理具体是：先将分离液用孔径为5000D的膜超滤，再用孔径为2000D的膜超滤，最后得到滤液，滤液包括分子量小于2000D的蛋白肽。
8.根据权利要求3所述的具有DPP-IV抑制功能的羊乳清蛋白肽的制备方法，其特征在于：所述第五步具体是：将滤液过柱分离，洗脱液为去离子水，洗脱峰在280nm下进行检测，收集第2个洗脱峰，浓缩、冷冻干燥得到羊乳清蛋白肽；再用RP-HPLC反相高效液相色谱进行分离，收集经过RP-HPLC反相高效液相色谱分离中第11-12分钟洗脱出来的肽液，进一步纯化，得到具有DPP-IV抑制功能的羊乳清蛋白肽。
9.一种如权利要求1-2任意一项所述的具有DPP-IV抑制功能的羊乳清蛋白肽的应用，其特征在于：用于制备食品、保健食品以及药物中的至少一种。
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