CN108300702A - 一株鸡源h9n2禽流感病毒冷适应株筛选方法及其应用 - Google Patents

一株鸡源h9n2禽流感病毒冷适应株筛选方法及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN108300702A
CN108300702A CN201810114995.2A CN201810114995A CN108300702A CN 108300702 A CN108300702 A CN 108300702A CN 201810114995 A CN201810114995 A CN 201810114995A CN 108300702 A CN108300702 A CN 108300702A
Authority
CN
China
Prior art keywords
chicken
strain
avian influenza
acclimatization
influenza virus
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201810114995.2A
Other languages
English (en)
Other versions
CN108300702B (zh
Inventor
许传田
鲁梅
崔宁
黄庆华
马鑫鑫
刘畅
徐敏丽
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Institute Animal Science and Veterinary Medicine of Shandong AAS
Original Assignee
Institute Animal Science and Veterinary Medicine of Shandong AAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Institute Animal Science and Veterinary Medicine of Shandong AAS filed Critical Institute Animal Science and Veterinary Medicine of Shandong AAS
Priority to CN201810114995.2A priority Critical patent/CN108300702B/zh
Publication of CN108300702A publication Critical patent/CN108300702A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108300702B publication Critical patent/CN108300702B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • A61K2039/541—Mucosal route
    • A61K2039/543—Mucosal route intranasal
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
    • A61K2039/552—Veterinary vaccine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
    • C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
    • C12N2760/16121—Viruses as such, e.g. new isolates, mutants or their genomic sequences
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
    • C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
    • C12N2760/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein

Abstract

本发明涉及动物病毒学领域，本发明提供了一株低温连续传代的鸡源H9N2禽流感病毒冷适应株（SD 165）制备方法及其生物学特性，以及其在生物学上的应用,其保藏号为CGMCC NO：14887；SD 165制成疫苗后，免疫1周龄SPF鸡，通过对同源和异源H9N2禽流感野毒株的保护效果分析，证明SD 165可以用作H9亚型禽流感活疫苗备用毒株。本发明为使用H9N2亚型禽流感冷适应株活疫苗防治禽流感爆发提供疫苗备用株，并且为如何筛选禽流感活疫苗株提供技术方案，具有重要公共卫生意义。

Description

一株鸡源H9N2禽流感病毒冷适应株筛选方法及其应用
技术领域
本发明涉及动物病毒学领域，本发明提供了一株鸡源H9N2禽流感病毒冷适应株(SD 165)的筛选方法及其生物学特性，以及其在生物学上特别是在SPF鸡免疫上的应用。
背景技术
禽流感病毒(AIV)隶属于正粘病毒科A型流感病毒属，基因组分为8个节段。核酸总长度约为13.6kb，编码至少11个病毒蛋白。由于AIV负链、分节段的RNA病毒性质，病毒很容易发生变异并不断的突破其感染宿主的种属障碍，引起新的流感流行。AIV据其致病性可分为高致病性AIV(Highly Pathogenic Avian Influenza virus，HPAlV)和低致病性AIV(LowPathogenic Avian Influenza virus,LPAIV)，感染家禽的HPAIV和LPAIV分别以H5和H9 亚型为主。
H9N2亚型流感属于低致病性流感病毒，但它的危害却不容忽视。H9N2AIV在世界范围内广泛存在，在北美，H9N2AIV主要存在于海鸟和野鸭体内(Kawaoka et al.1988；Sharpet al. 1993)。1966年，H9N2AIV开始在美国火鸡群中广泛暴发流行(Homme et al.1970)，1981 至1996年美国连续爆发过16次H9N2AIV感染火鸡群事件(Alexander 2000)。
H9N2亚型是目前我国鸡群中存在的AIV的主要亚型，占禽流感总发病率90％以上。H9N2亚型禽流感发病后虽然致死率不高(一般不超过30％)，但常导致呼吸道症状，蛋鸡的产蛋下降，并使鸡群易继发严重的呼吸道疾病，影响家禽生产性能；肉鸡感染后造成免疫抑制，容易造成继发感染和混合感染，从而给肉鸡养殖业造成巨大经济损失。众所周知，禽流感病毒变异非常快，因此及时的发现新的毒株研究其特性，并最终筛选出可以作为疫苗株的毒株是保证禽流感疫苗效果的最重要方式之一。
目前国内用来预防H9N2禽流感爆发的疫苗主要是灭活疫苗，由于灭活疫苗主要提供体液免疫，能够刺激机体产生抗体，但不能提供粘膜免疫保护，鸡群免疫后不能获得有效的细胞免疫，因此许多鸡场，免疫了H9疫苗，还是有零星发病。禽流感作为呼吸道疫病，病毒的入侵门户为上呼吸道；即使机体具有一定水平的血清抗体，如果上呼吸道没有粘膜抗体，鸡只照样能够感染病毒和发病，这是临床上高抗体水平鸡发病的主要原因之一。如果能够研发一种H9N2 禽流感活疫苗，免疫后将会诱导机体产生粘膜免疫，大大改善目前养殖企业对H9N2禽流感的防控效果。
发明内容
本发明的发明人提供了一株通过在10日龄的SPF鸡胚上连续低温传代，获得的 A/Chicken/Shandong/165/2013(H9N2)(简称SD 165)禽流感病毒冷适应株，并提供了该毒株的全基因组序列，阐明流感病毒主要抗原保护蛋白HA基因片段与国内近几年流行的H9N2流行毒株在一个进化分支之内。从而为筛选H9N2病毒活疫苗备用毒株的供分子流行病学基础；同时提供了该冷适应毒株作为流感活疫苗株的试验数据和指标，以明确其作为H9N2流感活疫苗备用毒株的可行性。
发明人对该毒株进行了生物保藏，保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；其保藏编号为：CGMCC NO：14887, 保藏日期为2017年11月21日，分类命名为N9H2亚型低致病性禽流感病毒冷适应株。
该病毒的全基因组序列测定表明，其HA基因隶属于H9-4.2.5.3like谱系，与近几年国内 H9N2流行株同属于一个进化分支，可以用来作为H9N2禽流感活疫苗株的候选毒株。
本发明的一方面，提供了H9N2冷适应株(SD165)的获得方法，发明人采用的H9N2冷适应株 (SD165)的获得方法如下：
低温条件下，在SPF鸡胚上通过有限稀释法连续传代：
A/Chicken/Shandong/165/2013(H9N2)(简称SD 165)是在9-10日龄SPF鸡胚上连续传三代纯化病毒。
把SD 165稀释1000-100000倍，在9-10日龄SPF鸡胚上连续传代，把第一代接种SD165的 20枚SPF鸡胚放到30-37℃温箱培养，60-80h后无菌收集尿囊液，选择有血凝性且血凝效价高于24的鸡胚尿囊液继续接种10日龄SPF鸡胚，培养箱温度降低为30-37℃。按照上面的程序，直到培养箱温度降低为20-30℃，收集血凝性最高的鸡胚尿囊液，在20-30℃连续传代 8-12代，最后鸡胚血凝效价维持在29。
优选的，把SD 165稀释10000倍，在10日龄SPF鸡胚上连续传代，把第一代接种SD165的 20枚SPF鸡胚放到35℃温箱培养，72h后无菌收集尿囊液，选择有血凝性且血凝效价高于24 的鸡胚尿囊液继续接种10日龄SPF鸡胚，培养箱温度降低为34.5℃。按照上面的程序，直到培养箱温度降低为25℃，收集血凝性最高的鸡胚尿囊液，在25℃连续传代10代，最后鸡胚血凝效价维持在29。
把鉴定好的病毒在，无菌收集尿囊液并且分装在冻存管中在负70℃冰箱保存备用。
本发明的另一方面，公开了鸡源H9N2禽流感病毒冷适应株在制备用作防控H9N2亚型禽流感爆发的活疫苗株方面的应用。
本发明的有益效果在于：筛选H9N2病毒活疫苗备用毒株的供分子流行病学基础；同时提供了该冷适应毒株作为流感活疫苗株的试验数据和指标，以明确其作为H9N2流感活疫苗备用毒株的可行性。
附图说明
图1：HA基因的系统进化树
图2SD165和SD165野生型病毒免疫后鸡群不同表现
具体实施例
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1：H9N2冷适应株(SD165)的获得方法
A/Chicken/Shandong/165/2013(H9N2)(简称SD 165)是在9-10日龄SPF鸡胚上连续传三代纯化病毒。
把SD 165稀释10000倍，在10日龄SPF鸡胚上连续传代，把第一代接种SD 165的20枚SPF 鸡胚放到35℃温箱培养，72h后无菌收集尿囊液，选择有血凝性且血凝效价高于24的鸡胚尿囊液继续接种10日龄SPF鸡胚，培养箱温度降低为34.5℃。按照上面的程序，直到培养箱温度降低为25℃，收集血凝性最高的鸡胚尿囊液，在25℃连续传代10代，最后鸡胚血凝效价维持在29。
实施例2：测定H9亚型AIV的性质及免疫效果
1.遗传演化分析：该病毒的全基因序列如说明书中所示，发明人参考已发表的H9亚型AIV序列资料，设计并合成了AIV基因组8个基因片段(PB2、PB1、PA、HA、NA、NP、M、NS)的RT-PCR引物。分别扩增H9亚型AIV各基因片段。该病毒的全基因组序列测定表明，其HA基因隶属于H9-4.2.5.2like谱系，与近几年国内H9N2流行株同属于一个进化分支，可以用来作为H9N2疫苗株的候选毒株之一，其具体的基因进化树见附图1，发明人分析是采用的分析软件是DNAstar7.0。
2.病毒在鸡胚中的生长特性25℃，该病毒在鸡胚中可高滴度生长，血凝效价稳定在29左右， SD165野生病毒不复制；在30℃，SD165血凝价可以达到28，SD165野生病毒血凝价可以达到24；37℃，冷适应株SD165不能复制，鸡胚尿囊液没有血凝性，SD165野生病毒可以很好复制，血凝效价稳定在29左右(表)1。
表1 SD165和SD165野生病毒在不同温度条件下在SPF鸡胚上的复制能力(lg2)
EID50测定：种毒按10倍倍比稀释，将各稀释度分别接种4枚SPF鸡胚，25℃继续孵化48h，通过测定感染鸡胚尿囊液的血凝活性来判断其是否感染，利用Reed-Muench法计算EID50 (Reed，et al,1938)。该病毒对鸡胚的半数感染量(EID50)为10-8.25/ml，结果表明该病毒在鸡胚上很容易增值，这是可以制作疫苗的条件之一。
3.SD165安全性检测：用含有106EID50的SD165和SD165野生病毒点眼滴鼻方式，分别免疫10只7日龄SPF鸡，连续观察10d。SD165免疫组，没有任何异常症状，SD165野生病毒免疫组，3d后有轻微呼吸道，没有死亡(表2)。免疫后3d，5d分别剖检每个组的3只，发现SD165野生病毒免疫组肺、气管、扁桃体和胸腺出现轻微出血(图2)，SD165免疫组和对照组没有任何异常病变。这说明，SD165免疫鸡是安全的。
表2 SD165和SD165野生病毒免疫后鸡群不同表现
4.SPF鸡体内产生较高抗体：用含有103.5EID50/50ul的SD165，通过点眼滴鼻方式，免疫7d SPF鸡，2周采集血清，检测血清H9抗体滴度，抗体在2周达到较高滴度，SD 165在免疫后第二周抗体就就达到了9(lg2)(表3)。所以SD 165冷适应病毒株制作油苗在SPF鸡上很容易引起免疫应答。
表3疫苗株免疫SPF鸡14天后采集血清检测抗体结果
5.该病毒制成疫苗后在SPF鸡上免疫保护效果分析：
SD165，先免疫7d SPF鸡，通过点眼滴鼻方式，免疫7d SPF鸡10只，对照组10只同样方式和剂量免疫PBS，2周后用同源和异源H9亚型野毒株进行攻毒，攻毒后第3天和第5天采集试验组和对照组鸡的鼻咽拭子和腔拭子，使用9-10日龄SPF鸡胚进行病毒滴定，结果表明，该疫苗株无论对同源还是异源野毒攻击，都能产生较好的免疫保护效果，同源野毒保护效果达到80-90％，异源保护效果达到70-90％(表4)。
表4 SD165对SPF鸡的免疫保护结果
注：CK/SD/WF1/2015是2015年从山东潍坊发病的商品肉鸡分离的一株H9N2禽流感病毒。其具体的基因组序列如说明书中所示，说明书中序列表按照PB2,PB1,PA,HA,NP,NA,M,NS的顺序顺次排列为1-8。
综上所述，通过该毒株生物学性质的测定可可以看出：25℃条件下，SD 165，在10日龄鸡胚中高滴度增殖，而且其血凝素蛋白(HA)抗原性好；该冷适应株对SPF鸡安全性好；SD 165 在SPF鸡体内产生较高抗体，免疫后，能够有效抵抗同源和异源H9禽流感野毒的攻击。因此 SD 165可以作为H9N2流感活疫苗侯选毒株。
实施例3：保藏信息
保藏时间：2017年12月21日
保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC
保藏编号：CGMCC NO：14887。
保藏单位地址：中国科学院微生物研究所
分类命名:H9N2流感病毒CK/SD/165/2013
A/Chicken/Shandong/165/2013
以上所述，仅为本发明专利较佳的实施例，但本发明专利的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明专利所公开的范围内，根据本发明专利的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都属于本发明专利的保护范围。

Claims (9)

1.一株鸡源H9N2禽流感病毒冷适应株(SD 165)，其保藏编号为：CGMCC NO：14887。
2.如权利要求1所述的鸡源H9N2禽流感病毒冷适应毒株，其特征在于：所述病毒冷适应毒株的HA基因隶属于H9-4.2.5.2like谱系。
3.如权利要求1所述的鸡源H9N2禽流感病毒冷适应毒株，其特征在于：所述病毒在25℃-30℃下鸡胚中高滴度增殖。
4.如权利要求1所述的鸡源H9N2禽流感病毒冷适应毒株，其特征在于：常温下(25℃)，在鸡胚中高滴度增殖，血凝素效价稳定在29；其鸡胚半数感染量(EID50)为10-8.25/ml。
5.如权利要求1所述的鸡源H9N2禽流感病毒冷适应株，其特征在于：该毒株制成活疫苗在SPF鸡上免疫2周后达到的H9抗体滴度为9(lg2)。
6.权利要求1所述的鸡源H9N2禽流感病毒冷适应株在制备用作防控H9N2亚型禽流感爆发的活疫苗株方面的应用。
7.权利要求1所述的鸡源H9N2禽流感病毒冷适应株的制备方法，其特征在于：所述病毒冷适应株是在低温条件下，在SPF鸡胚上通过有限稀释法连续传代获得的。
8.权利要求7所述的鸡源H9N2禽流感病毒冷适应株的制备方法，其特征在于：所述方法为：把SD 165稀释1000-100000倍，在9-10日龄SPF鸡胚上连续传代，把第一代接种SD 165的20枚SPF鸡胚放到30-37℃温箱培养，60-80h后无菌收集尿囊液，选择有血凝性且血凝效价高于24的鸡胚尿囊液继续接种10日龄SPF鸡胚，培养箱温度降低为30-37℃。按照上面的程序，直到培养箱温度降低为20-30℃，收集血凝性最高的鸡胚尿囊液，在20-30℃连续传代8-12代，最后鸡胚血凝效价维持在29。
9.权利要求8所述的鸡源H9N2禽流感病毒冷适应株的制备方法，其特征在于：所述方法为把SD 165稀释10000倍，在10日龄SPF鸡胚上连续传代，把第一代接种SD 165的20枚SPF鸡胚放到35℃温箱培养，72h后无菌收集尿囊液，选择有血凝性且血凝效价高于24的鸡胚尿囊液继续接种10日龄SPF鸡胚，培养箱温度降低为34.5℃。按照上面的程序，直到培养箱温度降低为25℃，收集血凝性最高的鸡胚尿囊液，在25℃连续传代10代，最后鸡胚血凝效价维持在29。
CN201810114995.2A 2018-02-05 2018-02-05 一株鸡源h9n2禽流感病毒冷适应株筛选方法及其应用 Expired - Fee Related CN108300702B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810114995.2A CN108300702B (zh) 2018-02-05 2018-02-05 一株鸡源h9n2禽流感病毒冷适应株筛选方法及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810114995.2A CN108300702B (zh) 2018-02-05 2018-02-05 一株鸡源h9n2禽流感病毒冷适应株筛选方法及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108300702A true CN108300702A (zh) 2018-07-20
CN108300702B CN108300702B (zh) 2021-09-14

Family

ID=62864574

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810114995.2A Expired - Fee Related CN108300702B (zh) 2018-02-05 2018-02-05 一株鸡源h9n2禽流感病毒冷适应株筛选方法及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108300702B (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114836390A (zh) * 2022-06-13 2022-08-02 华南农业大学 一株h9n2亚型禽流感病毒mdck细胞冷适应减毒活疫苗株及其培育方法和应用
CN115960842A (zh) * 2022-11-26 2023-04-14 哈尔滨维科生物技术有限公司 一种提高重组禽流感病毒感染鸡胚能力的方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102399754A (zh) * 2011-05-27 2012-04-04 山东省农业科学院畜牧兽医研究所 一株h9n2禽流感病毒疫苗株及其在免疫保护上的应用
CN105039270A (zh) * 2015-08-11 2015-11-11 中国农业大学 H9n2亚型禽流感冷适应减毒株及其应用
CN107312755A (zh) * 2017-05-27 2017-11-03 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 欧亚类禽型h1n1亚型猪流感冷适应致弱株及其应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102399754A (zh) * 2011-05-27 2012-04-04 山东省农业科学院畜牧兽医研究所 一株h9n2禽流感病毒疫苗株及其在免疫保护上的应用
CN105039270A (zh) * 2015-08-11 2015-11-11 中国农业大学 H9n2亚型禽流感冷适应减毒株及其应用
CN107312755A (zh) * 2017-05-27 2017-11-03 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 欧亚类禽型h1n1亚型猪流感冷适应致弱株及其应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
YANDI WEI等: "Generation and protective efficacy of a cold-adapted attenuated avian H9N2 influenza vaccine.", 《SCIENTIFIC REPORTS》 *
许传田等: "Ｈ９Ｎ２亚型禽流感疫苗株的筛选及其免疫效果评价", 《中国兽医学报》 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114836390A (zh) * 2022-06-13 2022-08-02 华南农业大学 一株h9n2亚型禽流感病毒mdck细胞冷适应减毒活疫苗株及其培育方法和应用
CN114836390B (zh) * 2022-06-13 2023-05-02 华南农业大学 一株h9n2亚型禽流感病毒mdck细胞冷适应减毒活疫苗株及其应用
CN115960842A (zh) * 2022-11-26 2023-04-14 哈尔滨维科生物技术有限公司 一种提高重组禽流感病毒感染鸡胚能力的方法
CN115960842B (zh) * 2022-11-26 2023-09-01 哈尔滨维科生物技术有限公司 一种提高重组禽流感病毒感染鸡胚能力的方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN108300702B (zh) 2021-09-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102399754B (zh) 一株h9n2禽流感病毒疫苗株及其在免疫保护上的应用
Xu et al. Phylogenetic classification of hemagglutinin gene of H9N2 avian influenza viruses isolated in China during 2012–2016 and evaluation of selected candidate vaccine strains
Kilany et al. Isolation of highly pathogenic avian influenza H5N1 from table eggs after vaccinal break in commercial layer flock
Chen et al. Molecular and antigenic characteristics of Massachusetts genotype infectious bronchitis coronavirus in China
CN105543180B (zh) 一株基因vii型鸡新城疫病毒毒株的分离鉴定和纯化方法及其应用
CN104232594B (zh) 重组类禽型h1n1流感病毒灭活疫苗株(js40/pr8)及其制备方法和应用
Lee et al. Isolation and characterization of a novel H9N2 influenza virus in Korean native chicken farm
CN103468651A (zh) 表达传染性支气管炎病毒S1蛋白的重组新城疫疫苗株rAI4-S1及其构建方法
CN104250637A (zh) 一株禽流感h9n2亚型病毒株及其应用
CN108300702A (zh) 一株鸡源h9n2禽流感病毒冷适应株筛选方法及其应用
CN104830811B (zh) H9n2亚型禽流感病毒ns1基因缺失减毒活疫苗候选株及其构建方法和应用
Carrasco et al. Experimental infection with Brazilian Newcastle disease virus strain in pigeons and chickens
CN103937753B (zh) H9n2亚型禽流感病毒毒株及其灭活疫苗和应用
CN104073470A (zh) 一种h9n2亚型禽流感病毒的转瓶培养方法
Li et al. Characterisation and haemagglutinin gene epitope mapping of a variant strain of H5N1 subtype avian influenza virus
Wang et al. Isolation of a reassortant H1N2 swine Flu strain of type “Swine-Human-Avian” and its genetic variability analysis
CN104130981A (zh) 鸡传染性支气管炎病毒疫苗株及其在制备灭活疫苗中的应用
CN111057682A (zh) 一株禽源h9n2亚型禽流感毒株分离鉴定及应用
Sharshov et al. First detection of a G1-like H9N2 virus in Russia, 2018
CN105087502B (zh) H9n2亚型禽流感病毒温度敏感性减毒活疫苗候选株ca‑28（ah）及其应用
CN103789273B (zh) 一种禽流感h9n2亚型病毒毒株及其应用
Fazel et al. Evaluation of the viral interference between lentogenic Newcastle disease virus (Lasota) and avian influenza virus (H9N2) using real-time reverse transcription polymerase chain reaction in SPF chicken
Mai et al. Protection efficacy of the H1 and H3 bivalent virus-like particle vaccine against swine influenza virus infection
CN100467591C (zh) 重组禽流感病毒毒株、其制备方法及由其制得的疫苗
CN106754744B (zh) 一种血清4型的ⅰ群禽腺病毒毒株及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20210914

Termination date: 20220205

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee