CN108295323A - 富血小板凝胶的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种富血小板凝胶的制备方法，包括以下步骤：(1)取采血联袋做采血准备；(2)通过采血器采集献血员的全血；(3)对全血袋进行离心，离心后静置并形成位于上层的血浆层、位于中层的PRP层及位于下层的红细胞层；(4)将血浆层中的血浆依次经过导管Ⅰ、导流器及导管Ⅲ流进血浆转移袋，然后经过亚甲蓝释放器进入血浆转移光照袋，从而制备成血浆；(5)将PRP层中的PRP依次经过导管Ⅰ、导流器及导管Ⅱ流进PRP袋，然后将激活剂袋中的激活剂加入PRP袋，从而制备成富血小板凝胶；本发明的制备方法与采血相结合，制备量大，降低血液污染的可能性，制备程序简单，节省工作人员的时间。

Description

富血小板凝胶的制备方法
技术领域
本发明涉及一种生物制剂制备方法，特别涉及一种富血小板凝胶的制备方法。
背景技术
富血小板血浆(Platelet Rich Plasma，简称PRP)，是人体全血通过离心而得到的含高浓度血小板的血浆；PRP中含高浓度血小板，血小板中含有大量的生长因子，如血小板衍生生长因子(PDGF)、转化生长因子-β(TGF-β)、胰岛素样生长因子(IGF)、表皮生长因子(EGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)等，这些生长因子能精确地定位到损伤部位，控制炎症，从不同方面对细胞和组织再生起到促进作用，从而加速损伤组织的修复作用，极大程度减轻术后疤痕的形成。
富血小板血浆的制备原理主要是利用血液中各种成分沉降速度不同，通过离心使血液分层，从而获取含血小板的血浆，并利用离心进一步浓缩以获得高浓度的血小板血浆。富血小板凝胶则需要由富血小板血浆与一定比例的激活剂混合凝固而成。目前在分离提取富血小板血浆过程中要用到一整套由若干试管、注射器等部件组成的装置，需经过多次注射、离心、抽取，操作相对复杂，一次制备量小，且若干部件是分开依次使用的，容易引起污染。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种富血小板凝胶的制备方法，与采血相结合，制备量大，降低血液污染的可能性，制备程序简单，节省工作人员的时间。
本发明的富血小板凝胶的制备方法，包括以下步骤：
(1)取采血联袋做采血准备；所述采血联袋包括采血器、全血袋及导流器，所述采血器包括针头和针管，所述全血袋的进液口通过针管与针头相连；所述全血袋的出液口连接导管Ⅰ；所述导流器设有一个进口及三个出口，所述进口与三个出口中的一个导通且可切换，所述进口与导管Ⅰ相连通，三个所述出口分别与导管Ⅱ、导管Ⅲ及导管Ⅳ相连通；所述导管Ⅱ的末端连接一PRP袋，所述PRP袋通过导管Ⅴ与一储存有激活剂的激活剂袋相连；所述导管Ⅳ的末端连接一滤后转移袋，所述导管Ⅳ上设有白细胞过滤器；所述滤后转移袋通过导管组依次串连有血浆转移袋、血浆转移光照袋和贮血袋，所述血浆转移袋和血浆转移光照袋之间的导管上连接一亚甲蓝释放器，所述血浆转移光照袋和贮血袋之间的导管上连接一吸附滤器，所述吸附滤器通过三通并联一带开关卡子的导管Ⅵ；所述导管Ⅲ的末端连接血浆转移袋；
(2)通过采血器采集献血员的全血，采集的血液流进盛有抗凝剂的全血袋；
(3)对全血袋进行离心，离心后静置并形成位于上层的血浆层、位于中层的PRP层及位于下层的红细胞层；
(4)将血浆层中的血浆依次经过导管Ⅰ、导流器及导管Ⅲ流进血浆转移袋，然后经过亚甲蓝释放器进入血浆转移光照袋，从而制备成血浆；
(5)将PRP层中的PRP依次经过导管Ⅰ、导流器及导管Ⅱ流进PRP袋，然后将激活剂袋中的激活剂加入PRP袋，从而制备成富血小板凝胶；
(6)将红细胞层中的红细胞依次经过导管Ⅰ、导流器及导管Ⅳ流入白细胞过滤器并在过滤后流入滤后转移袋，然后将血浆储存袋中盛有的红细胞保存液挤入滤后转移袋，从而制备成悬浮红细胞；
(7)将步骤(4)中制备的血浆挤入血浆储存袋中储存。
进一步，所述激活剂为葡萄糖酸钙-凝血酶混合物。
进一步，所述葡萄糖酸钙-凝血酶混合物中，葡萄糖酸钙浓度为0.1g/ml,凝血酶浓度为1000U/ml，溶剂为无菌水。
进一步，在步骤(5)中，按照PRP与激活剂10:1的体积比将激活剂加入PRP袋。
进一步，在步骤(5)中，往PRP袋加入激活剂前对PRP袋中的PRP进行二次离心，以除去残留的红细胞；二次离心的离心速度为600rpm，离心时间为10min，离心温度为22-24℃。
进一步，所述全血袋、PRP袋及激活剂袋的表面设有用于显示液体体积的刻度层。
进一步，所述滤后转移袋、血浆转移袋、血浆转移光照袋及贮血袋的表面设有用于显示液体体积的刻度层。
进一步，在步骤(3)中，离心速度为2000-2800rpm，离心时间为10-20min，离心温度为20-24℃。
进一步，所述采血器还包括一前端为曲面的护套，所述护套套在针管与针头上，且所述护套可沿针头轴向移动以调节针头露出护套的长度。
进一步，所述亚甲蓝释放器设有一管状壳体，管状壳体内装有含有亚甲蓝溶液的药物载体；所述药物载体为圆柱形并由聚酯纤维或多孔聚丙烯材料制作而成，所述药物载体过盈配合安装在管状壳体内。
本发明的有益效果：
本发明的富血小板凝胶的制备方法，利用采血器采血，获得全血储存于全血袋，对全血袋进行离心、静置，通过导流器使导管Ⅰ分别与导管Ⅱ、导管Ⅲ及导管Ⅳ相连通，血浆、PRP及红细胞分别经过三条不同途径分别制备成血浆产品、富血小板凝胶及悬浮红细胞；袋装结构的制备量大，且由于行程密闭系统，降低了血液污染的可能性，整个制备流程与采血结合，制备程序简单，节省工作人员的时间。
附图说明
下面结合附图和实施例对本发明作进一步描述：
图1为本发明的采血联袋的结构示意图；
图2为图1中A处放大图。
具体实施方式
如图所示：本实施例的富血小板凝胶的制备方法，包括以下步骤：
(1)取采血联袋做采血准备；
所述采血联袋包括采血器、全血袋21和导流器4，所述采血器包括针头11和针管12，所述全血袋21的进液口通过针管12与针头11相连；所述全血袋21的出液口连接导管Ⅰ31；所述导流器4设有一个进口4a及三个出口4b，所述进口4a与三个出口4b中的一个导通且可切换，所述进口4a与导管Ⅰ31相连通，三个所述出口4b分别与导管Ⅱ32、导管Ⅲ33及导管Ⅳ34相连通；所述导管Ⅱ32的末端连接一PRP袋22，所述PRP袋22通过导管Ⅴ35与一储存有激活剂的激活剂袋23相连；导管Ⅰ31上可设置过滤滴斗；导流器4为四通结构，从全血袋21流出的血液可从导流器4的其中一个出口4b流出；导流器4例如可为现有的四通阀门，通过机械或者电子的方式选择与进口4a连通的出口4b，当进口4a与导管Ⅱ32所在的出口4b相连通时，采血联袋即进入富血小板凝胶制备状态，当进口4a与导管Ⅲ33或导管Ⅳ34所在的出口4b相连通时，采血联袋即进入常规的采血处理状态。
所述导管Ⅳ34的末端连联一滤后转移袋24，所述导管Ⅳ34上设有白细胞过滤器5；当需要对血液进行白细胞的过滤时，使进口4a与导管Ⅳ34所在的出口4b相连通即可。
所述滤后转移袋24通过导管组依次串连有血浆转移袋25、血浆转移光照袋26和血浆储存袋27，所述血浆转移袋25和血浆转移光照袋26之间的导管上连接一亚甲蓝释放器6，所述血浆转移光照袋26和贮血袋27之间的导管上连接一吸附滤器7，所述吸附滤器7通过三通7a并联一带开关卡子7b的导管Ⅵ36；；所述导管Ⅲ33的末端连接血浆转移袋25。
所述全血袋21、PRP袋22及激活剂袋23的表面设有用于显示液体体积的刻度层2a；有利于医护人员对液体体积的控制，在能够保证在制备富血小板凝胶时混合的精确度，以提高富血小板凝胶的有效性。
所述护套13与针管12之间通过螺纹副相连；护套13内壁设有内螺纹，针管12外壁设有外螺纹，内螺纹与外螺纹配合，通过旋转护套13即可实现护套13的移动，使用方便，调节精度高，以达到安全防护的效果。
所述全血袋21、PRP袋22、激活剂袋23、滤后转移袋24、血浆转移袋25、血浆转移光照袋26及贮血袋27外包装均采用医用PVC材料制成软包装；可以与血液一起经受高速离心，同时不会损伤其他部件；同时，所述滤后转移袋24、血浆转移袋25、血浆转移光照袋26及贮血袋27的表面设有用于显示液体体积的刻度层2a，以提高采集的精确度；各袋体与各导管之间均为可拆卸式连接(例如螺接)，各袋体可脱离导管而单独拿出处理。
所述亚甲蓝释放器6设有一管状壳体61，管状壳体61内装有含有亚甲蓝溶液的药物载体；所述药物载体为圆柱形并由聚酯纤维或多孔聚丙烯材料制作而成，所述药物载体过盈配合安装在管状壳体61内；药物载体为圆柱形，由聚酯纤维或多孔聚丙烯材料制作，过盈配合安装在管状壳体内；管状壳体61两端接头分别与导管连接，连接简单可靠；管状壳体61本身可以为普通导管的一截；这样的亚甲蓝释放器6结构简单，所用材料成本低，避免了由于亚甲蓝释放器6上下壳的接口处出现破裂，导致血袋离心破袋的现象，提高了离心分离的安全性，亚甲蓝释放也更加稳定可靠。
(2)通过采血器采集献血员(健康人体，自体或同种异体均可)的全血，采集的血液流进盛有抗凝剂的全血袋21；采集时间不超过10分钟，采集后于22-24℃环境中放置；所述采血器还包括一前端为曲面的护套13，所述护套13套在针管12与针头11上，且所述护套13可沿针头11轴向移动以调节针头11露出护套13的长度；护套13可沿针头11轴向移动以调节针头11露出护套13的长度，在采血后将护套13推向针头11，针头11逐渐置于护套13内部，从而屏蔽针头11，避免因针头11外露而刺伤采血工作人员，防止职业暴露，同时也防止针头11刺破血袋，防止血液报废。
(3)对全血袋21进行离心，离心后静置并形成位于上层的血浆层、位于中层的PRP层及位于下层的红细胞层；其中，离心速度为2000-2800rpm，离心时间为10-20min，离心温度为20-24℃；在静置后可将全血袋21放于分离夹中，按照白膜法进行分离(分离后热合断离)；例如，对于200ml全血，要求离心转速为2000rpm、离心时间13min、离心温度22℃-24℃；对于400ml全血，要求要求离心转速为2600rpm、离心时间15min、离心温度22℃-24℃。
(4)将血浆层中的血浆依次经过导管Ⅰ31、导流器4及导管Ⅲ33流进血浆转移袋25，然后经过亚甲蓝释放器6进入血浆转移光照袋26，从而制备成血浆；亚甲蓝释放器6用于病毒灭活；该结构使得白细胞过滤和病毒灭活结合到一起，整个血液采集、去白细胞、分离、亚甲蓝添加和亚甲蓝滤除，均是在一个密闭的环境下进行，可减少到无菌间操作的过程，降低了细菌污染的机会，能有效提高血液制品的安全性。
(5)将PRP层中的PRP依次经过导管Ⅰ31、导流器4及导管Ⅱ32流进PRP袋22，然后将激活剂袋23中的激活剂加入PRP袋22，从而制备成富血小板凝胶；往PRP袋加入激活剂前对PRP袋中的PRP进行二次离心，以除去残留的红细胞；二次离心的离心速度为600rpm，离心时间为10min，离心温度为22-24℃；激活剂优选为葡萄糖酸钙-凝血酶混合物；所述葡萄糖酸钙-凝血酶混合物中，葡萄糖酸钙浓度为0.1g/ml,凝血酶浓度为1000U/ml，溶剂为无菌水；其中，按照PRP与激活剂10:1的体积比将激活剂加入PRP袋22。
(6)将红细胞层中的红细胞依次经过导管Ⅰ31、导流器4及导管Ⅳ34流入白细胞过滤器5并在过滤后流入滤后转移袋24，然后将血浆储存袋27中盛有的红细胞保存液挤入滤后转移袋24，从而制备成悬浮红细胞。
(7)将步骤(4)中制备的血浆挤入血浆储存袋27中储存；血浆储存袋27在储存血浆前盛装有红细胞保存液，在盛装血浆前，里面装有的红细胞保存液转移到滤后转移袋24中成为悬浮红细胞。
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (10)

1.一种富血小板凝胶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取采血联袋做采血准备；所述采血联袋包括采血器、全血袋及导流器，所述采血器包括针头和针管，所述全血袋的进液口通过针管与针头相连；所述全血袋的出液口连接导管Ⅰ；所述导流器设有一个进口及三个出口，所述进口与三个出口中的一个导通且可切换，所述进口与导管Ⅰ相连通，三个所述出口分别与导管Ⅱ、导管Ⅲ及导管Ⅳ相连通；所述导管Ⅱ的末端连接一PRP袋，所述PRP袋通过导管Ⅴ与一储存有激活剂的激活剂袋相连；所述导管Ⅳ的末端连接一滤后转移袋，所述导管Ⅳ上设有白细胞过滤器；所述滤后转移袋通过导管组依次串连有血浆转移袋、血浆转移光照袋和贮血袋，所述血浆转移袋和血浆转移光照袋之间的导管上连接一亚甲蓝释放器，所述血浆转移光照袋和贮血袋之间的导管上连接一吸附滤器，所述吸附滤器通过三通并联一带开关卡子的导管Ⅵ；所述导管Ⅲ的末端连接血浆转移袋；
(2)通过采血器采集献血员的全血，采集的血液流进盛有抗凝剂的全血袋；
(3)对全血袋进行离心，离心后静置并形成位于上层的血浆层、位于中层的PRP层及位于下层的红细胞层；
(4)将血浆层中的血浆依次经过导管Ⅰ、导流器及导管Ⅲ流进血浆转移袋，然后经过亚甲蓝释放器进入血浆转移光照袋，从而制备成血浆；
(5)将PRP层中的PRP依次经过导管Ⅰ、导流器及导管Ⅱ流进PRP袋，然后将激活剂袋中的激活剂加入PRP袋，从而制备成富血小板凝胶；
(6)将红细胞层中的红细胞依次经过导管Ⅰ、导流器及导管Ⅳ流入白细胞过滤器并在过滤后流入滤后转移袋，然后将血浆储存袋中盛有的红细胞保存液挤入滤后转移袋，从而制备成悬浮红细胞；
(7)将步骤(4)中制备的血浆挤入血浆储存袋中储存。
2.根据权利要求1所述的富血小板凝胶的制备方法，其特征在于：所述激活剂为葡萄糖酸钙-凝血酶混合物。
3.根据权利要求2所述的富血小板凝胶的制备方法，其特征在于：所述葡萄糖酸钙-凝血酶混合物中，葡萄糖酸钙浓度为0.1g/ml,凝血酶浓度为1000U/ml，溶剂为无菌水。
4.根据权利要求2所述的富血小板凝胶的制备方法，其特征在于：在步骤(5)中，按照PRP与激活剂10:1的体积比将激活剂加入PRP袋。
5.根据权利要求1所述的富血小板凝胶的制备方法，其特征在于：在步骤(5)中，往PRP袋加入激活剂前对PRP袋中的PRP进行二次离心，以除去残留的红细胞；二次离心的离心速度为600rpm，离心时间为10min，离心温度为22-24℃。
6.根据权利要求1所述的富血小板凝胶的制备方法，其特征在于：所述全血袋、PRP袋及激活剂袋的表面设有用于显示液体体积的刻度层。
7.根据权利要求1所述的富血小板凝胶的制备方法，其特征在于：所述滤后转移袋、血浆转移袋、血浆转移光照袋及贮血袋的表面设有用于显示液体体积的刻度层。
8.根据权利要求1所述的富血小板凝胶的制备方法，其特征在于：在步骤(3)中，离心速度为2000-2800rpm，离心时间为10-20min，离心温度为20-24℃。
9.根据权利要求1所述的富血小板凝胶的制备方法，其特征在于：所述采血器还包括一前端为曲面的护套，所述护套套在针管与针头上，且所述护套可沿针头轴向移动以调节针头露出护套的长度。
10.根据权利要求1所述的富血小板凝胶的制备方法，其特征在于：所述亚甲蓝释放器设有一管状壳体，管状壳体内装有含有亚甲蓝溶液的药物载体；所述药物载体为圆柱形并由聚酯纤维或多孔聚丙烯材料制作而成，所述药物载体过盈配合安装在管状壳体内。
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